再生蛋白质组学研究进展的力作——介绍《动物组织器官再生的比较蛋白组学研究》

由郑州大学出版社出版发行的《动物组织器官再生的比较蛋白质组学研究》一书是国家新闻出版广电总局“十三五”规划重点项目,获得国家出版基金资助。全书以大鼠肝再生以及分布于我国的蝾螈(Orientalis)断肢再生、三角涡虫(Japonica)头尾再生为研究对象,检测和分析了再生相关蛋白在动物组织器官中再生的生理、生化作用,包括细胞生长、细胞发育、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、细胞的物质运输、细胞迁移、糖类代谢、脂类代谢、氨基酸代谢、蛋白质代谢、核酸代谢、有机酸代谢、维生素、辅助因子代谢、激素代谢、一氧化碳代谢、生物氧化及活性氧代谢,论述了细胞内环境的稳定、对刺激的反应、免疫反应、凝血反应、炎症反应、自噬反应等,以及调节这些生理生化活动的信号通路活性。

神经纤毛蛋白1、2在大肠癌组织中的表达及意义

目的探讨神经纤毛蛋白(NRP)-1、2在大肠癌组织中的表达及其与微血管密度(MVD)的相关性,以揭示NRP-1、2与肿瘤血管生成的关系。方法采用免疫组织化学方法检测66例大肠癌患者的癌组织、癌旁组织及正常组织中NRP-1、2的表达情况,以CD105标记肿瘤新生血管内皮细胞,计数MVD值。结果 (1)NRP-1、NRP-2在大肠癌组织、癌旁组织、正常组织中的表达阳性率分别为71.2%、25.8%、0,及80.3%、15.2%、0,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)MVD在大肠癌组织、癌旁组织及正常组织中的计数分别为35.682±5.542、14.485±3.301、6.864±1.771,各组相比差异有统计学意义(F=986.654,P<0.01)。(3)不同年龄、性别、肿瘤的部位及分化程度的患者NRP-1、2的表达差异无统计学意义。肿瘤>5 cm的患者NRP-1阳性表达率较高,肿瘤侵及浆膜及以外、有淋巴结转移的患者NRP-1、2的阳性表达率均较高,不同的Dukes分期患者NRP-1、2阳性表达差异亦有统计学意义(P<0.05)。(4)大肠癌患者不同性别、年龄及肿瘤大小、部位和组织分化程度MVD的表达差异无统计学意义,而浸润到浆膜及以外、有淋巴结转移、Dukes分期高的患者相关MVD的表达增加(P<0.01)。(5)大肠癌组织中NRP-1(r=0.599,P<0.01)、NRP-2(r=0.484,P<0.01)的表达与MVD计数均呈正相关关系。结论 NRP-1、2在大肠癌的血管新生中起重要作用,并且与大肠癌侵袭和转移关系密切。

肺癌组织神经生长导向因子Slit2蛋白表达及其临床意义的研究

目的:研究肺癌组织中神经迁移导向因子Slit2蛋白的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学法检测56例肺癌组织中Slit2蛋白的表达及微血管密度(microvessal density,MVD)。结果:56例肺癌标本中,Slit2阳性率为76.8%,且其表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织分化程度及临床TNM分期密切相关,P<0.01;而与患者性别和病理类型无关,P>0.05。Slit2蛋白表达与肺癌组织中MVD呈显著正相关,r=0.732,P<0.001。结论:肺癌组织中Slit2表达在肺癌生长和血管生成中起重要作用,其有可能成为反映肺癌进展的指标和抗肿瘤治疗的重要靶点。

神经调节蛋白4与代谢疾病关系的研究进展

随着现代生活水平的提高,代谢性疾病病人数量呈逐年增加的趋势,代谢性疾病已经成为目前世界上最受关注的疾病之一,其相关研究非常广泛。神经调节蛋白4属于细胞外配体的表皮生长因子家族,是组织生长因子,在棕色脂肪组织中含量丰富,在控制能量平衡、增加胰岛素敏感性和减少脂肪肝的产生等方面有重要作用。本文对神经调节蛋白4与代谢性疾病的关系进行综述。

化学发光技术在蛋白质组学研究中的应用

目的:探讨在蛋白质组学研究中应用化学发光技术分析鉴定蛋白质的方法和价值。方法:采用细胞培养、双向电泳及银染等技术建立小鼠神经元蛋白质组图谱,再用PDQuest 2D分析软件和免疫印迹持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元蛋白质-PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果:三种蛋白质的双向电泳化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点,信号强,背景低。结论:利用化学发光技术鉴定蛋白质简单、实用、灵敏、高效,可为蛋白质组学的研究提供有力的技术支持。

大鼠全脑缺血时钙与单胺类神经递质代谢变化的初步探讨

本文利用高效液相色谱法及原子分光光度计系列地测定了对照组、缺血及再灌流期大鼠脑内各种单胺类神经递质及其前体及主要代谢产物的含量、脑与线粒体中钙含量,并观察了钙拮抗剂尼莫地平的治疗作用。发现单胺类神经递质和钙的代谢紊乱参与了缺血再灌流的全过程。钙可影响单胺类神经递质的合成与释放,而单胺类神经递质还有其自身的变化规律。

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响(英文)

背景:天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3是一种促进细胞凋亡的半胱氨酸蛋白酶,睫状神经营养因子具有多种生物活性,能保护损伤后多种神经元特别是运动神经元,减少神经细胞损伤的发生。目的:观察睫状神经营养因子对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中的表达以及在不同年龄阶段的变化规律和调控特点。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第三军医大学野战外科研究所大坪医院超声科、第五研究室。材料:实验于2000-04/2001-12在解放军第三军医大学野战外科研究所完成。Wistar大鼠,体质量30～100g的幼年大鼠(鼠龄20d)、200～350g的成年大鼠(鼠龄4个月)、400～800g的老年大鼠(鼠龄18～24个月)各270只,雌雄不限,共810只。方法:①实验动物分组:各年龄组大鼠随机分为正常组(n=18)、睫状神经营养因子组(n=126)和生理盐水组(n=126),睫状神经营养因子组和生理盐水组分为术后1d、3d、1周、2周、4周、8周、12周组。②动物模型制作:睫状神经营养因子组和生理盐水组切除2mm右侧坐骨神经,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室,睫状神经营养因子组再生小室内注入25mg/L重组睫状神经营养因子15μL,生理盐水组再生小室内注入生理盐水15μL。③待测标本的制作及检测:分别取各组动物6只,取脊髓L3～5节段,进行天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3免疫组织化学检测、天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性检测和Westernblotting检测。主要观察指标:①免疫组织化学检测的各组大鼠脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的表达。②Westernblotting检测脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的分布与表达强度变化。③天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性变化。结果:810只大鼠进入结果分析。①免疫组织化学检测各组大鼠脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的表达:损伤后各年龄组生理盐水组伤侧神经元天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3染色表达增强,伤后2周、4周明显增多、增强,8周、12周较少神经元表达阳性;睫状神经营养因子组损伤后各年龄组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达增强,伤后2周、4周最为明显。②Westernblotting检测脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3的分布与表达强度变化:各年龄正常组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达差异无显著性意义(P>0.05)。与同龄正常组及对侧未伤侧比较,各年龄组生理盐水组及睫状神经营养因子组损伤后1周、2周、4周天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3表达增强,差异有显著性意义(P<0.05～0.01);睫状神经营养因子组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3幼年于损伤后1周、2周、4周,成年于2周、4周,老年于4周表达较生理盐水组减弱,差异有显著性意义(P<0.05～0.01)。各组对侧未伤侧与正常组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性变化:幼年、成年、老年生理盐水组伤侧脊髓天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性升高,各时相点幼年大鼠天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性高于老年组及成年组(P<0.05～0.01),幼年、成年、老年组睫状神经营养因子组天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性低于生理盐水组(P<0.05～0.01)。损伤后生理盐水组及睫状神经营养因子组对侧未伤侧天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3活性,除幼年伤后12周较正常组低外(P<0.05),其余各组与正常组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:坐骨神经损伤后不同鼠龄大鼠脊髓组织中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达及活性增高,外源性睫状神经营养因子可减少脊髓神经元中天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达及活性,起保护脊髓神经细胞的作用,其作用在幼年组、成年组及老年组依次减弱。

NaCl浓度改变对人类神经元钙传感蛋白结构的影响:来自分子动力学模拟证据

背景:人类神经元钙传感蛋白是一个含有高电荷的蛋白,对溶液温度极其敏感,但溶液中离子浓度的变化是否能够改变蛋白结构,进而影响其正常功能的发挥,尚未发现相关研究。目的:探讨溶液中NaCl浓度的微小改变对人类神经元钙传感蛋白结构动力学影响的分子机制。方法:采用全原子计算机动力学模拟的方法,将蛋白质数据库中ID为2LCP的人类神经元钙传感蛋白前两个能量最低的结构作为初始结构,能量最小化后,将蛋白置于NaCl浓度分别为0.1,0.3和1 mol/L的水溶液中,以高速摄像速度(ps,10-12s)记录蛋白在模拟体系中的运行和变化情况。结果与结论:溶液中NaCl浓度升高,(1)人类神经元钙传感蛋白柔性增加,整体结构和局部的疏水口袋体积增大;(2)蛋白C端尾部L3蜷缩,首尾氨基酸D176和V190之间的次联系路径数量明显减少,导致两者之间的联系减弱;(3)蛋白N段和C段氨基酸之间的联系削弱,但两段段内氨基酸联系明显增强;(4)蛋白正负电荷间形成的盐桥数量和百分比均降低,尤其在0.3 mol/L NaCl水溶液中的减少更为明显。(5)结果说明,人类神经元钙传感蛋白对溶液NaCl浓度的改变非常敏感,NaCl浓度的微小变化能够引起蛋白关键结构的改变,从原子-分子的视角,为人类神经元钙传感蛋白在不同溶液环境中的结构变化提供理论参考。

应用微透析技术研究低温、过度换气和巴比妥类药物对脑组织能量代谢的影响

微透析是一种连续的活体内生化采样技术 ,已成为神经科学基础和临床研究领域的重要手段。文章针对应用该技术研究的低温、过度换气和巴比妥类药物对脑组织能量代谢的影响进行综述。

神经丝蛋白AD7c-NTP在阿尔茨海默病临床诊断中的应用

目的探讨阿尔茨海默病(AD)相关性神经丝蛋白(AD7c-NTP)在AD早期诊断中的临床应用价值。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法对AD患者、血管性痴呆(VD)患者及健康者(对照组)进行尿AD7c-NTP水平检测。结果 AD组、VD组与对照组尿AD7c-NTP水平分别为(1.504±1.766)、(1.463±1.422)、(0.479±0.285)ng/mL,AD组、VD组均高于对照组(P<0.05)。当尿AD7c-NTP水平为0.585ng/mL时,对AD的诊断灵敏度为65.0%,特异度为77.6%。结论尿AD7c-NTP定量检测在AD早期诊断和病情评估中有一定的临床参考价值。

非小细胞肺癌组织中Skp2的表达及其与p27^(kip1)和Ki-67蛋白表达的关系

目的:探讨Skp2的表达在非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer,NSCLC)发生发展中的作用,及其与p27kip1和Ki67蛋白表达的关系。方法:应用免疫组化SP法检测Skp2、p27kip1和Ki67三种蛋白在60例NSCLC和20例正常支气管黏膜上皮组织中的表达。结果:NSCLC组织中Skp2蛋白表达的阳性率为48.33%(29/60),显著高于正常支气管黏膜上皮组织中的表达,P=0.000。Skp2的表达与肿瘤的组织学类型、肿瘤细胞的分化程度、TNM分期、淋巴结转移和患者吸烟与否显著相关,P值分别为0.038、0.005、0.019、0.010和0.002,但与患者的年龄及性别无关,P值分别为0.833和0.281。NSCLC组织中Skp2表达与p27kip1表达呈显著负相关,P=0.001;而与Ki67表达呈显著正相关,P=0.027。结论:Skp2在NSCLC组织中表达是上调的,可能是通过作用于细胞周期调控蛋白p27kip1,加速了对p27kip1泛素化依赖的蛋白降解,使其表达及代谢发生异常,导致细胞周期失控并促进细胞异常增殖,从而参与了NSCLC的发生和发展。

肺神经内分泌癌FHIT蛋白表达及其临床病理意义的研究

目的:探讨脆性三联组氨酸(FHIT)蛋白在肺神经内分泌癌中的表达及其临床病理意义。方法:采用二步法非生物素免疫组化技术检测90例肺神经内分泌癌组织中FHIT蛋白表达并分析其与各临床病理指标的关系。结果:FHIT蛋白表达定位于癌细胞质;并与组织学类型(P=0.006)、临床分期(P=0.003)、性别(P=0.031)、肿瘤大小(P=0.010)、淋巴结转移(P=0.000)以及预后(P=0.000)相关;与患者年龄(P=0.408)、大体类型无关,P=0.528;FHIT表达为肺神经内分泌癌的独立预后因子,P=0.000。结论:FHIT蛋白在肺神经内分泌癌的发生、演进过程中起着重要作用,并可作为分子指标检测患者预后。

胶质细胞源性神经营养因子对神经组织缺血性损伤的保护作用及其在脊髓损伤修复中的应用前景(英文)

目的:总结胶质细胞源性神经营养因子对神经组织缺血性损伤的影响,以及微囊化技术发展情况,探讨该种营养因子用于脊髓损伤修复的可能性。资料来源:检索Medline1996-01/2000-10与胶质细胞源性神经营养因子和神经组织缺血性损伤、脊髓损伤及其与微囊化技术相关的文章熏检索词“glialcellline-derivedneurotrophicfactor熏ischemiadamagetonervetissue熏spinalcordinjury”熏并限定文章语言种类为English。检索万方数据库2001-01/2004-10胶质细胞源性神经营养因子与神经组织缺血性损伤、脊髓损伤关系及其与微囊化技术相关熏限定文章语言种类为中文熏检索词“胶质细胞源性神经营养因子,神经组织缺血性损伤,脊髓损伤,微囊化技术”。资料选择:对资料进行初审,选取包括处理组和对照组的文献,根据数据库文献摘要提供的信息,筛除明显不随机的研究,对剩余的文献开始查找全文。纳入标准为①随机对照研究;②实验或临床研究包含平行对照组。排除标准:重复性研究。资料提炼:共收集到300篇关于胶质细胞源性神经营养因子与缺血性损伤和脊髓损伤的随机和未随机研究文章,15个实验或临床研究符合纳入标准。排除的285篇文章中,264篇为未随机研究或重复性研究,21篇为综述类文章。资料综合:胶质细胞源性神经营养因子对大鼠中脑多巴胺能神经元有营养支持作用;可使多巴胺神经元细胞死亡减少,轴突再生。胶质细胞源性神经营养因子可使脑梗死大鼠大脑半球免于自由基、钙超载等缺血性损伤,阻止缺血后一氧化氮的产生及再灌注损伤,是对抗缺血性损伤的有效保护因子。微囊化技术在内分泌疾病和神经系统疾病等治疗方面,显示出良好前景,营养因子可能在微囊化技术中发展重要作用。结论:胶质细胞源性神经营养因子对神经组织缺血性损伤起到保护作用,微囊化技术的发展促进该种营养因子发挥作用;胶质细胞源性神经营养因子在临床脊髓修复方面具有良好前景。

小鼠、大鼠颌下腺颗粒曲管细胞内神经肽的免疫组织化学研究

小鼠、大鼠颌下腺颗粒曲管细胞内神经肽的免疫组织化学研究贾雪梅贾友苏王惠珠齐威琴（安徽医科大学组织学与胚胎学教研室）近年来，人们已从小鼠、大鼠等啮齿类动物的颌下腺中发现或分离出近３０种肽类、蛋白质类及单胺类等生物活性物质，它们主要分布于颗粒曲管（ＧＣＴ...

胃癌组织P27、MMP-9和PEDF蛋白表达及意义

目的:探讨P27、MMP-9和PEDF蛋白表达在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学法检测82例人体胃癌组织标本中胃癌细胞内P27、MMP-9和PEDF的表达;统计学分析上述各分子标记物与胃癌临床病理因素间的关系。结果:(1)82例正常胃黏膜均有P27、PEDF表达,在胃癌组织中的表达率分别为48%和43%。MMP-9在胃癌中表达率为70%,正常胃黏膜呈阴性表达。(2)P27低表达与胃癌组织学分级和远处转移有关(P<0.05);MMP-9高表达与浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05);PEDF低表达与组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)。结论:胃黏膜上皮细胞在癌变过程中P27和PEDF表达降低,而MMP-9表达升高;MMP-9在胃癌侵袭转移中起促进作用,P27和PEDF可抑制胃癌的进展。

神经型钙黏蛋白在肝门部胆管癌中的表达及意义

目的研究神经型钙黏蛋白(N-cadherin)在肝门部胆管癌组织中的表达及临床意义。方法免疫组化检测26例肝门部胆管癌与癌旁及5例正常胆管组织中N-cadherin表达差异。Western blot对比N-cadherin在肝门部胆管癌组织中与癌旁中差异。结果免疫组化示26例肝门部胆管癌癌组织中有14例N-cadherin表达阳性,癌旁组织中6例阳性(P<0.05)。正常胆管阳性表达0例。N-cadherin在低分化癌组阳性表达率高于中、高分化癌组。Western blot示N-cadherin在肝门部胆管癌组织中的表达高于癌旁组织(0.88±0.12 vs 0.43±0.09,P<0.05)。结论 N-cadherin可能参与肝门部胆管癌的发生发展。

SY及S-100蛋白对肠神经发育不良症诊断的价值

①目的 探讨SY ,S 1 0 0蛋白对肠神经发育不良症 (IND)的诊断价值。②方法 对 4 5例慢性肠梗阻病儿结肠根治手术标本进行SY ,S 1 0 0蛋白免疫组织化学观察。③结果 1 6例IND病儿肠黏膜下神经丛过度增生并有巨神经节 ,其中 1 4例有异位神经节 ,1 0例固有层和黏膜肌的染色增强 ,与正常对照组比较差异有显著性 (P =0 .0 0 0～0 .0 0 2 )。④结论 SY ,S 1 0 0蛋白免疫组化可清晰显示肠壁神经丛发育 。