板栗堆肥理化性质与微生物种类鉴定

为提高资源利用效率,实现栗园的可持续管理,本研究通过对栗园废弃物(栗树枝木屑、落叶、栗花、绿色杂物)分别添加鹿粪和尿素进行好氧堆肥,分析堆肥的理化性质、对堆肥过程中及堆肥结束微生物种类进行分离鉴定,分析堆肥对大豆发芽率的影响。研究发现,添加鹿粪和尿素的堆肥pH值偏碱性且2种堆肥均已充分腐熟,达到应用标准;在2种处理中检测到的微生物分别为35种和39种,其中有益微生物分别有13种和10种,其中共有的微生物为6种,分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、深绿木霉(Trichoderma atroviride),均为有益菌,能够促进植物生长或抵抗病原菌。此外,堆肥浸提液对大豆种子萌发无明显抑制现象,可施用于田间实现资源利用。因此,本研究中尿素及鹿粪堆肥均已达到腐熟,含有多种有益菌,可以施用于田间以提高板栗废弃物的利用,实现栗园的可持续管理。该试验为栗园废弃物堆肥技术的改良和有益微生物的发掘奠定了基础。

柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫感染情况调查与种类鉴定

[目的]掌握新疆维吾尔自治区阿克苏地区柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染情况和种类分布情况。[方法]从柯坪县4个乡(镇)6个规模化双峰驼养殖场共收集516份粪便样本,全部提取DNA样本,基于隐孢子虫(Cryptosporidium)SSU rDNA序列进行PCR检测,序列比对分析后进行隐孢子虫种类鉴定;采用χ^(2)检验法比较不同规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率差异;将被鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.parvum)阳性的DNA样本,基于gp60基因序列进行PCR检测,序列比对分析后进行微小隐孢子虫亚型鉴定。[结果]516份双峰驼粪便DNA样本中检测出34份隐孢子虫阳性,总体感染率为6.59%(34/516),以阿恰勒镇养殖场2的双峰驼隐孢子虫感染率最高,为9.57%(9/94);不同养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率统计学差异显著(χ^(2)=5.497,P<0.05)。基于SSU rDNA序列,34条隐孢子虫序列经比对分析,鉴定出3种隐孢子虫,分别为安氏隐孢子虫(n=29)、隐孢子虫大鼠基因型Ⅳ(n=1)和微小隐孢子虫(n=4);基于gp60基因序列,4条微小隐孢子虫序列经比对分析,均鉴定为Ⅰd-like-A21亚型,具有独特的遗传进化特点。[结论]柯坪县双峰驼隐孢子虫感染率较低,其感染的微小隐孢子虫具有独特亚型。研究结果为我国双峰驼源隐孢子虫种类分布特征和遗传进化提供了基础数据。

六堡茶虫茶的茶虫种类鉴定

六堡茶虫茶是经由茶虫幼虫取食六堡茶叶之后,茶虫排泄粪粒的干制品,其气味独特,似药香。迄今为止未见有对六堡茶虫茶中的昆虫种类作研究鉴定的报道。本文介绍六堡茶茶虫的取样、饲养、鉴定过程及结果,鉴定结果表明六堡茶虫茶的茶虫有米黑虫(Aglossa dimidiata)、粉斑螟(Ephestia cautella)、米织蛾(Anchonoma xeraula)等3种,并描述了其形态特征、分布、生活习性等,这为六堡茶虫茶的产业化、规范化发展提供参考。

环境DNA条形码技术在水生生物种类鉴定中的简化应用分析

为有效保护地球生物多样性,推动生态环境可持续性发展,我国相关部门大力开展生物技术研发工作,逐步开创了环境DNA条形码技术(eDNA),借此来对生物种类进行鉴定,为生态环境保护事业作出贡献。对比传统分子生物学方法,环境DNA条形码技术(eDNA)无论是操作方式、还是在成本支出方面都更为精简高效,也可有效缩减样品提取量,为水生生物种类鉴定工作提供良好支持和帮助。相关工作人员可从不同方面对环境DNA条形码技术进行分析,从而明确水生生物种类鉴定过程中环境DNA条形码技术简化应用策略。

辽宁东部地区梢斑螟种类鉴定及防治试验

为明确辽宁东部地区危害红松的梢斑螟种类及发生规律,有效解决梢斑螟防治药剂少、难度大等问题,通过形态特征比对和DNA条形码分子技术对梢斑螟种类进行鉴定,并选用8%噻虫胺微囊悬浮剂(CS)、3%高效氯氰菊酯CS、5%杀铃脲悬浮剂(SC)、5%氟啶脲乳油(EC)进行无人机防治试验。结果表明:在辽宁东部地区发生的梢斑螟种类主要为微红梢斑螟Dioryctria rubella、冷杉梢斑螟D.abietella和芽梢斑螟D.yiai;微红梢斑螟在宽甸1 a发生1代,以老熟幼虫越冬,次年4月初越冬幼虫开始活动,5月中旬开始化蛹,6月中下旬为羽化高峰期;4种杀虫剂不同处理组的防治效果差异较大,药剂量600 mL/hm2的8%噻虫胺CS和橙皮精油助剂混用的效果最好,防治效果达93.62%。

刀鲚和凤鲚的分子鉴定及其在仔鱼种类鉴定中的应用

使用mtDNA Cyt b基因序列作为分子标记,基于400 bp左右的序列分析长颌鲚、短颌鲚及凤鲚成鱼的遗传关系。结果显示长颌鲚和短颌鲚间的遗传距离在0—0.5%之间;凤鲚与长颌鲚、短颌鲚的遗传距离分别在7.9%—8.9%和7.7%—8.6%之间。用Kimura双参数模型构建的NJ分子系统树显示,长颌鲚和短颌鲚不能形成彼此独立的分支,而是混合聚在一起形成一个分支;凤鲚则形成另一个分支。对长江口沿岸区域的鲚属仔鱼Cyt b基因片段序列分析发现,仔鱼个体之间的遗传距离为0—0.7%,仔鱼与长颌鲚、短颌鲚的遗传距离在0.1%—0.5%之间,而与凤鲚的遗传距离为8.3%—8.8%。在Kimura双参数模型构建的NJ分子系统树中,仔鱼与长颌鲚、短颌鲚聚为一类,而与凤鲚分开,表明分析的仔鱼样品不包括凤鲚个体。由于长江口一般没有短颌鲚分布,这些仔鱼应该都是长颌鲚。

鸵鸟源隐孢子虫的种类鉴定及其生物学特性研究

【目的】掌握鸵鸟隐孢子虫病的流行范围和流行动态,以及研究鸵鸟源隐孢子虫的生物学特性。【方法】应用饱和蔗糖溶液漂浮法检查鸵鸟新鲜粪样404份,详细观察、测量卵囊形态大小;收集纯化阳性样品中的隐孢子虫卵囊,分别人工经口感染幼鸵鸟、雏鸡和小白鼠并利用组织病理学试验技术研究其生物学特性。【结果】检测到阳性样品10份,总阳性率为2.48%(10/404),且感染率与鸵鸟日龄有一定的关系。其卵囊平均大小为5.43×4.38μm(4.0～6.0×3.7～5.0μm),形状指数1.24(长/宽),(n=50)。分离到的卵囊能成功感染雏鸡和幼鸵鸟,但不能感染小白鼠。受试雏鸡具有明显的呼吸道症状,而幼龄鸵鸟呼吸道症状较轻微。此外,在两种动物体内的排卵囊规律差别较大,在鸵鸟体内出现多个排卵囊高峰。虫体主要寄生于雏鸡和幼鸵鸟的泄殖腔和法氏囊,引起法氏囊萎缩、微绒毛大量脱落等病理变化。【结论】根据其卵囊形态、宿主范围和虫体寄生部位等生物学特性,结合文献报道,笔者在国内发现并初步鉴定出鸵鸟源隐孢子虫为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)。

灰葡萄孢拮抗细菌的种类鉴定及生长条件研究

经形态和生理生化鉴定,对灰葡萄孢(BotrytiscinereaPers.)拮抗能力强、防病效果好的3株细菌进行分类,W10为地衣芽孢杆菌[Bacilluslicheniformis(Weigmann)Chester],W3和Y2 11 1为多粘类芽孢杆菌[Paenibacilluspolymyxa(Praz mowski)Ashetal]。这2种对蔬菜灰霉病的高效拮抗菌为中国首次报道和应用。3株拮抗细菌的生长条件基本一致。最适培养时间为24～72h,最适生长温度是27～30℃,最适培养液pH值为7～8。

毒杀南方根结线虫的木霉种类鉴定及活性研究

木霉是国际上研究与应用非常普遍的生防真菌之一,具有重要的科研价值和广阔的应用前景。本研究采用形态学鉴定、ITS和β-tubulin序列分析法对4株具有杀线虫活性的木霉菌株进行种类鉴定,结果显示FT311和FT312为绿色木霉（Trichoderma viride）,FT1937和FT85为哈茨木霉（T.harzianum）。利用贝氏皿浸没法测定,4株木霉发酵滤液均能显著降低南方根结线虫卵的孵化和2龄幼虫（J2）的活性,其中FT1937和FT85对卵孵化抑制率和J2致死率均达到85%~92%,而FT311能够达到80%~85%,但FT312毒性较低,仅达40%~60%;2株哈茨木霉的活性好于2株绿色木霉;同时观察到发酵液对线虫卵和幼虫体壁有消解作用、抑制和延迟卵孵化,并使幼虫体内空泡化。本研究为根结线虫病害的生防防治提供了更多的木霉资源信息。

辽宁花生病虫发生危害及种类鉴定

近年来辽宁花生产业迅猛发展,病虫害发生日趋严重。2011年对辽宁花生主产区系统调查发现病虫害共27种,其中病害10种,虫害17种。危害较严重的病虫害分别是花生网斑病、褐斑病、疮痂病、蛴螬、双斑长跗萤叶甲、尺蠖。

辽宁省北苍术病害调查及种类鉴定

北苍术（Atractylodes chinensis）为我国传统药用植物,具有较高的经济价值和药用价值,近年来在辽宁省东部山区大面积人工种植。为明确辽宁省北苍术主要病害种类及发生危害情况,降低人工驯化栽培可能面临的病害风险,本研究于2011-2015年对辽宁省抚顺、清原和新宾等7个主要北苍术种植区进行了系统调查。结果表明,危害辽宁北苍术生产的主要病害有3种,为苍术叶斑病、苍术炭疽病和苍术菌核病。苍术菌核病多发生于早春,病株率相对较低,约为4.8%～9.9%,但病株死亡率高,达90%以上。苍术叶斑病和炭疽病为辽宁省新发生病害,其中苍术叶斑病分布十分广泛且危害严重,各调查种植区均有分布,以清原地区发病较为严重,病株率约为15.1%～100.0%,病叶率为35.2%～91.8%。苍术炭疽病仅在抚顺、本溪和沈阳发生,抚顺地区发病相对较重,病株率约为25.0%～40.4%,病叶率约为14.9%～54.1%。

甘肃省保护地蔬菜根结线虫种类鉴定及其rDNA-ITS序列分析

为明确甘肃省保护地蔬菜根结线虫的种类,采用rDNA-ITS-PCR方法结合其2龄幼虫、雌虫会阴花纹等形态学特征对采自甘肃省9个市的主要蔬菜生产基地保护地蔬菜根结线虫的11个种群样本进行了种类鉴定,并对其ITS区域进行序列测定及分析比对。结果表明:11个根结线虫种群的ITS区域序列与GenBank数据库已知南方根结线虫(Meloidogyne incognita)ITS区域序列的相似性达到99%,其ITS片段大小介于690～695bp之间,表明甘肃省保护地中蔬菜根结线虫为南方根结线虫。

油菜菌核病菌拮抗海洋细菌GM-1菌株的种类鉴定及抑菌作用研究

从连云港海域分离到1株对油菜菌核病菌有显著抑制作用的海洋细菌菌株GM-1,对其进行种类鉴定、抗菌作用测定及盆栽防病效果测定。通过形态特征观察、生理生化试验及16SrDNA序列、gyrB基因序列分析,将该菌株鉴定为芽胞杆菌属(Bacillus)的解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。抑菌作用测定结果表明:GM-1菌株和无菌发酵液对油菜菌核病菌菌丝的生长具有明显的抑制作用,培养7d的抑菌带宽度分别达到30mm和16mm,GM-1菌株和无菌发酵液对菌丝细胞结构有明显的破坏作用,导致菌丝细胞壁变厚、膨大;同时对菌核的萌发有明显的抑制作用,菌液较无菌发酵液的抑制作用更显著。盆栽防病效果测定表明:该菌株菌液对油菜菌核病具有明显的防治作用,防治效果达68%,同时能够促进油菜种子萌发,显示出良好的开发应用前景。

新疆主要农作物疫霉菌种类鉴定

1993～1995 年,对侵染新疆主要农作物的疫霉菌进行了较全面的调查研究,共从 9 个地区的28 种作物上采集表现根腐、根颈腐、果腐症状(包括病土)的病样 1531 个,结果从其中 17 种作物上分离到452 个疫霉菌株。根据形态特征、生理生化特性、致病性和菌体可溶性蛋白电泳测定,鉴定为7 个种:辣椒疫霉(Phytophthora cap sici Leon.),恶疫霉[P.cactorum (Leb. et Cohn) Schroeter],掘氏疫霉(P.drechsleri Tucker),菸草疫霉(P.nicotianae van Breda de Haan),苎麻疫霉(P.boehm eriaeSaw .),柑桔褐腐疫霉[P.citrophthora (Sm . et Sm .) Leonian],隐地疫霉(P.cryptogea Pethyb. etLaff.)。这些疫菌是造成新疆茄果类、瓜类、棉花、苹果、梨、枸杞、草霉、红花、白术等幼苗及成株大量死亡及烂果的主要病原,在农业生产中具有十分重要的意义。

西瓜砧木种传镰刀菌的种类鉴定及其致病性研究

本研究针对神力砧木种胚和福田将军砧木种壳分离得到的2个镰刀菌分离物,结合形态特征及分子生物学的方法进行了鉴定,并研究了其对西瓜砧木种子发芽的影响和幼苗的致病性。结果表明:2个分离物均为尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)。2个尖孢镰刀菌分离物对西瓜砧木种子发芽有显著的影响,发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数等指标均显著降低,且能导致西瓜砧木幼苗出现典型的枯萎症状,经柯赫氏法则检验证明其具有致病性。西瓜砧木种子传带尖孢镰刀菌并具有致病性为国内首次报道。

鸭源隐孢子虫种类鉴定及对鸡鸭致病性研究

为鉴定在河南地区鸭群中广泛存在的隐孢子虫种类及其致病性 ,我们将河南省鸭源隐孢子虫分离株传代增殖 ,1 0只鸡和 1 0只鸭分别逐只接种上述分离株 640万个卵囊 ,应用光镜和扫描电镜技术对样品进行观察。根据卵囊形态测定数据 ,排卵囊规律 ,寄生部位及其寄生特点鉴定该分离株为贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)。该分离株接种鸡、鸭后主要引起呼吸道和法氏囊的炎症。病理形态学变化表现为气管纤毛脱落 ,杯状细胞排空 ,上皮细胞肥大或增生。除虫体寄生处之外 ,其他区域微绒毛尚保持完整。对虫体寄生密度 。

黑龙江烟草病害种类鉴定及发生情况

为了明确黑龙江主要烟区目前病害发生和危害情况,于2010—2013年对黑龙江烟草主产区病害进行普查。鉴定结果表明,黑龙江烟草病害26种,其中真菌病害11种,细菌病害2种,病毒病害7种,寄生性种子植物1种,非侵染性病害5种;发生普遍且危害重的病害主要是烟草普通花叶病、角斑病。

海南岛葫芦科蔬菜根结线虫种类鉴定

运用比较形态学、同工酶和mtDNA-PCR对采自海南岛4个市县的葫芦科蔬菜根结线虫进行鉴定,结果发现5个种群均存在象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)。该种线虫是葫芦[Lagenaria siceraria (Molina) Standl]和丝瓜[Luffa cylindrica (Linn.) Roem]上的新记录种,文昌和陵水属其首次被报道的分布地区。有2个样本表现为象耳豆根结线虫和南方根结线虫(M.incognita)的混合种群。

湖南省蔬菜根结线虫发生及种类鉴定

对湖南省蔬菜主产区的根结线虫病发生与危害程度进行了系统调查,结果显示蔬菜根结线虫病发生普遍,大棚蔬菜发病率高达80%,露地蔬菜发病率也在10%左右。对采自湖南省内10种蔬菜作物上的23个根结线虫种群进行了种类鉴定。采用2龄幼虫测量值、会阴花纹形态特征、PCR法及序列测定相结合的方法进行了鉴定,结果表明南方根结线虫是湖南省蔬菜根结线虫病的优势病原种群,占87%。

人源隐孢子虫分离株种类鉴定与种系发育关系分析

目的确定郑州某医院分离到1株隐孢子虫(PRHN)所属种/基因型。方法用PCR对该分离株18S rRNA、HSP70、Cpn60和AOX进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序,扩增序列经用DNAstar和ClustalX与GenBank参考序列比对,用PAUP4.0构建种系发育进化树,以确定该分离株与其他隐孢子虫虫种之间的亲缘关系。结果通过18S rRNA、HSP70基因分析该分离株与Cryptosporidium parvum(C.parvum)鼠基因型同源性最高,分别为99.9%和99.2%,在种系发育树上,PRHN均与C.parvum鼠基因型亲缘关系最近;对Chaperponin 60(Cpn60)和Alternative oxidase(AOX)进行序列分析时,该分离株与本实验室分离到的猪隐孢子虫(C.suis)亲缘关系最近。结论该分离株为C.parvum鼠基因型。