积雪草苷调节HIF-1α/VEGF信号通路对食管癌细胞上皮-间质转化和放疗敏感性的影响

目的 探讨积雪草苷(AS)调节缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对食管癌(EC)细胞上皮-间质转化(EMT)和放疗敏感性的影响。方法 以不同浓度的AS或不同放疗剂量干预EC9706细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,计算半数抑制浓度;将EC9706细胞分为control组、放射组(单纯X射线照射)、AS组、联合组(AS+X射线照射)、激活剂组(AS+X射线照射+HIF-1α/VEGF通路激活剂二甲基草酰甘氨酸),平板克隆实验检测放疗敏感性;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭;流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA表达。Western blotting检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果 随着AS浓度和放疗剂量的增加,EC9706细胞活力逐渐降低;与control组相比,放射组、AS组存活分数、迁移与侵袭细胞数、HIF-1α、VEGF mRNA表达及MMP-2、vimentin、HIF-1α、VEGF蛋白表达降低,细胞凋亡率及E-cadherin、Bax表达升高(P <0.05);与放射组、AS组相比,联合组存活分数、迁移与侵袭细胞数、HIF-1α、VEGF mRNA表达及MMP-2、vimentin、HIF-1α、VEGF表达降低,细胞凋亡率及E-cadherin、Bax表达升高(P <0.05);与联合组相比,激活剂组上述指标变化均逆转(P <0.05)。结论 AS可能通过抑制HIF1-α/VEGF信号通路抑制EMT,增强EC细胞的放疗敏感性。

积雪草活性成分槲皮素通过介导STAT3磷酸化抑制IL-23/IL-17A炎症轴发挥抗银屑病作用

目的探讨积雪草抗银屑病活性成分及其作用机制。方法利用TCMSP、PharmMapper等数据库获取积雪草化合物和靶点,利用GeneCards数据库筛选银屑病相关的潜在靶点,Cytoscape 3.10.0软件导入积雪草活性成分、银屑病共同靶点制作“药物-活性成分-作用靶点”网络图,使用STRING数据库构建PPI网络,借助DAVID数据库进行通路富集分析。通过网络药理学筛选得到积雪草主要活性成分槲皮素、积雪草苷、积雪草酸,并将这3种活性成分(7.5、15、30、60μmol/L)作用于脂多糖(LPS)刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症模型,Griess法检测细胞NO水平评价抗炎活性。ELISA检测TNF-α、IL-6细胞促炎因子的表达,RT-qPCR测定细胞IL-23、IL-17A、TNF-α、IL-6 mRNA的表达,Western blotting检测细胞p-STAT3(Tyr705)、p-STAT3(Ser727)的表达变化。结果网络药理学研究分析获取积雪草靶点139个,银屑病靶点4604个,PPI网络图显示CASP3、EGFR、PTGS2和ESR1为治疗银屑病的关键靶点,分析得到槲皮素、积雪草苷、积雪草酸可能是积雪草抗银屑病关键活性成分。KEGG结果显示与癌症、IL-17以及MAPK信号通路相关。槲皮素、积雪草苷、积雪草酸处理细胞炎症模型,发现槲皮素表现出明显的抗炎活性,细胞NO水平降低(P<0.05)。与LPS组相比,槲皮素处理后细胞中TNF-α,IL-6促炎因子分泌减少(P<0.05),IL-23、IL-17A、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平降低(P<0.05),STAT3磷酸化的两个位点(Tyr705、Ser727)蛋白表达均明显下调(P<0.05)。结论积雪草抗银屑病主要活性成分为槲皮素、积雪草苷和积雪草酸,其中关键成分槲皮素通过抑制NO产生、炎症因子TNF-α、IL-6的表达,并通过介导STAT3磷酸化调控IL-23/IL-17A炎症轴抑制炎症反应发挥抗银屑病作用。

高效液相色谱法测定化妆品中羟基积雪草苷和积雪草苷的含量

建立了一种使用高效液相色谱测定化妆品中羟基积雪草苷和积雪草苷含量的方法。样品经提取液超声提取后,用Acutfex PA-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm)分离,以体积比2:2:6的甲醇-乙腈-水作为流动相等度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长205 nm。采用外标法测定,结果表明,积雪草苷和羟基积雪草苷在质量浓度5~100μg/mL内线性关系良好,方法的检出限为质量分数0.0015%,定量限为质量分数0.005%。在不同类型的空白化妆品(水类、乳类、膏霜类)中进行加标回收试验,方法的回收率为82.8%~106%,相对标准偏差为0.94%~4.28%。该方法前处理简单,分离效率高,重复性好,准确度和精密度高,适用于化妆品中积雪草苷和羟基积雪草苷的测定。

积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定

应用流动相中添加β-环糊精法,建立了HPLC法测定积雪草总苷中的积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的含量。采用C18色谱柱,以乙腈-4mmol/Lβ-环糊精溶液(25︰75)流动相,检测波长204nm。积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B均在2～20μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.25%、98.41%和100.15%,RSD分别为1.12%、1.21%和1.20%。

一测多评法同时测定积雪草总苷及其2种制剂中3种成分

目的建立一测多评法同时测定积雪草总苷及积雪苷片、积雪苷霜软膏中3种成分的含有量。方法各样品甲醇提取液的分析采用Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-(2 mmol/L羟丙基-β-环糊精)(24∶76);体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长205 nm。以羟基积雪草苷为内标,计算其他2种成分的相对校正因子,测定含有量。结果积雪草苷B、羟基积雪草苷、积雪草苷在各自范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均加样回收率97.93%~102.05%,RSD 0.61%~2.06%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法稳定可靠,可用于积雪草总苷及其2种制剂的质量控制。

积雪草研究热点及趋势可视化分析

目标:对积雪草的相关研究进行文献计量学和可视化分析,总结该研究领域的研究进展、研究热点及趋势。方法:检索中国知网(CNKI)、万方数据、维普数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)2000年1月1日至2023年11月15日收录的积雪草相关研究文献。利用NoteExpress 3.9软件整理文献题录,通过CiteSpace 6.2.R5软件对作者、研究机构及关键词进行可视化分析。结果:纳入829篇文献,年发文量整体呈波动上升趋势;来源期刊324种,载文量最多的是《中国中西医结合肾病杂志》(26篇);涉及696位作者,发文量最多的是朱晓玲(24篇),核心作者包括朱晓玲、王永钧、章卓等;核心研究机构有海军军医大学、浙江中医药大学第一附属医院、重庆医科大学等;高频关键词有“积雪草苷”“积雪草酸”“中药复方”等。结论:积雪草当前的研究热点主要集中在化学成分、生物效应、研究方法和疾病治疗4个方面。积雪草酸及其抗炎、抗氧化、增殖、凋亡、抗肿瘤等领域是未来积雪草研究的重点趋势。

积雪草苷抑制伊马替尼耐药的K562细胞的生长和迁移

目的研究积雪草苷对慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞增殖、迁移和周期停滞的作用,并且探讨了其对GATA-1表达的调节。方法以CML细胞系K562、抗伊马替尼(imatinib,IM)K562细胞(K562r)和人源CML细胞为模型,CCK-8测定不同浓度积雪草苷对3种细胞活力的影响。选择0、25、50、100μmol/L积雪草苷处理K562r细胞,CFSE标记测定细胞增殖,Transwell测定细胞迁移,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹检测cyclin A、CDK2、CDK4、cyclin D1、Ki67、PCNA、VEGF、MMP-9和MMP-14蛋白水平。结果与对照组比较,积雪草苷处理可显著抑制K562r细胞增殖和迁移,并促进其细胞周期阻滞。同时我们发现积雪草苷处理可显著上调K562r细胞中GATA-1水平。结论积雪草苷能够抑制K562r细胞增殖、迁移并诱导其细胞周期阻滞,其机制可能与GATA-1的表达上调相关。

积雪草提取物在个人护理品中的应用

主要介绍了积雪草的主要功效成分和基本特性,阐述了积雪草在个人护理品中可具有抗菌、消炎、促进成纤维细胞和胶原蛋白的合成等多种功效,该产品在晒后修护、伤口愈合、疤痕修复、抗衰老等个人护理品领域市场前景广阔。

超声波-酶法提取积雪草中积雪草总苷的工艺研究

目的:优化积雪草中积雪草总苷的提取工艺。方法:以积雪草苷和羟基积雪草苷含量之和为考察指标,采用单因素试验和正交试验对酶用量、酶解时间、酶解温度、乙醇体积分数、液料比、超声提取时间进行考察,优化超声波-酶法提取积雪草中积雪草总苷的工艺条件并进行验证试验。结果:最优提取工艺为纤维素酶用量12 mg/g,以10倍液料比加入60%乙醇,60℃酶解60min,超声提取50 min;验证试验中积雪草总苷平均提取率为1.92%(RSD=1.83%,n=3)。结论:超声波-酶法用于积雪草中积雪草总苷的提取,工艺稳定、可行。

生物转化法提高积雪草中积雪草酸的质量分数

开发一种微生物转化工艺,将积雪草中的积雪草苷转化为活性更高的积雪草酸,从而提高积雪草的中药使用价值.从积雪草富集培养物中分离筛选到一株黑曲霉(Aspergillus niger)JH-2菌株,液体培养转化处理积雪草后,其中的积雪草苷可转化为积雪草酸,质量分数显著提高;经过工艺优化后,积雪草苷的转化率可以达到98.2%,积雪草酸质量分数提高到2.73mg/g,是未经转化处理时的0.90mg/g的3.03倍.利用黑曲霉JH-2发酵转化处理的中药材积雪草,能够显著提高积雪草酸的质量分数,具有转化工艺简单、产率高和成本低的优点,有较高的工业化应用价值.

制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

积雪草甙和羟基积雪草甙是积雪草及其相关制品质量控制的两个指标成分,本研究利用制备型高效液相色谱从积雪草提取物中同时分离纯化得到这两个成分。对制备色谱的流动相组成、流速、进样量和检测波长等制备参数进行了优化。采用的色谱柱为C18柱(50mm×200mm,5μm);流动相为甲醇-水(体积比为60∶40),流速100mL/min;二极管阵列检测器在220nm检测;进样体积为1.5mL。在20min的运行时间内,积雪草甙和羟基积雪草甙与干扰成分得到很好的分离,产品纯度达到98%以上。此方法具有快速高效、产品纯度高的特点,可以用于制备积雪草甙和羟基积雪草甙对照品。

积雪草总苷及其制剂的含量研究．Ⅰ．积雪苷霜软膏中积雪草苷和羟基积雪草苷的HPLC法测定

建立了流动相添加剂-HPLC法测定积雪苷霜软膏中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量。采用C18色谱柱,以乙腈-水(30︰70,添加β-环糊精4.54g/L)为流动相,检测波长204nm。积雪草苷和羟基积雪草苷在0.2～20μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.20%和98.90%,RSD为1.06%和1.17%。

HPLC法测定积雪草总苷转化产物中积雪草酸B单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷和积雪草酸单葡萄糖苷的含量

本文建立了积雪草总苷转化产物中积雪草酸B单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷和积雪草酸单葡萄糖苷含量的测定方法。采用Agilent 1100 Series高效液相色谱仪,Welch Materials,XB-C18(250 mm×4.60 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-4 mmol/Lβ-CD溶液(1～15 min:26∶74;15～45 min:28∶72;45～60 min:29∶71,磷酸调节至pH 2.8)梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为204 nm的方法。积雪草酸B单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷和积雪草酸单葡萄糖苷依次在0.6～6.0μg、1.24～12.4μg和1.34～13.4μg范围内线性关系良好,Y=335.19X-4.7855(r=0.9999)、Y=303.61X-15.208(0.9998)和Y=281.77X-16.357(0.9999);平均加样回收率(n=6)依次为97.59%、100.19%和100.33%,RSD分别为1.70%、0.91%和0.45%。方法学研究结果表明该方法准确、可靠,适用于积雪草总苷转化产物中积雪草酸B单葡萄糖苷、羟基积雪草酸单葡萄糖苷和积雪草酸单葡萄糖苷的含量测定。

响应面法优化积雪草的微波提取工艺

目的优化积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的微波提取工艺。方法以液料比、乙醇体积分数、微波功率和提取时间为自变量,积雪草苷和羟基积雪草苷的提取总量为响应值,在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken中心组合实验,以4因素3水平的响应面法(RSM),优化积雪草的微波提取工艺条件。结果积雪草微波提取的最佳工艺条件为:液料比为10∶1,乙醇体积分数为44.55%,微波功率为300 W,提取时间为3.52 min,在此条件下,积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的总提取量为33.03 mg·g^-1,与理论值33.70 mg·g^-1相对误差为2.01%。结论该方法具有高效、简便的优点,可用于积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的提取。

积雪草总三萜酸及其主要成分的抗抑郁活性研究

目的:探讨积雪草总三萜酸和其主要成分积雪草酸、羟基积雪草酸的抗抑郁作用。方法:采用小鼠强迫游泳实验、小鼠悬尾实验、开野实验和拮抗利血平所致的小鼠眼睑下垂实验,分别以小鼠不动时间、自主活动数和拮抗率作为评价指标。结果:在强迫游泳实验中积雪草总三萜酸、积雪草酸、羟基积雪草酸60 mg/kg、120 mg/kg剂量均能显著缩短小鼠不动时间,在悬尾实验中30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg剂量均能显著缩短小鼠不动时间,开野实验结果表明给药后小鼠的自主活动无明显变化,在利血平拮抗实验中积雪草总三萜酸、积雪草酸、羟基积雪草酸均可减少小鼠眼睑下垂。结论:积雪草总三萜酸、积雪草酸、羟基积雪草酸有抗抑郁作用。

LED光质对积雪草生长及总苷含量的影响

通过研究LED光质对水培积雪草生长和生理指标的影响,探索积雪草在植物工厂中适宜的光质,为积雪草在植物工厂水培过程中的光环境适应机制和高产优质提供理论依据。本试验以未生根的积雪草幼苗为材料进行水培,利用植物工厂的LED人工光源,设计蓝光(B)、红蓝光组合(R∶B=2∶8、R∶B=3∶7、R∶B=5∶5、R∶B=7∶3、R∶B=8∶2)、红光(R)等7种不同光质的处理,测定各处理水培积雪草的生长指标、光合色素及有效成分的含量和产量。试验结果表明:R有利于水培积雪草的分枝数、叶片数、叶面积、匍匐茎、全株鲜质量和全株干质量;R∶B=2∶8、R∶B=3∶7、B有利于水培积雪草的叶绿素a、总叶绿素和类胡萝卜素的积累;R∶B=7∶3有利于积雪草苷和羟基积雪草苷含量的形成与积累;R有利于积雪草总苷产量积累。

RE-HPLC测定积雪草中积雪草甙、羟基积雪草甙的含量

目的:测定不同产地的中药积雪草甙和羟基积雪草甙的含量。方法:采有REHPLC法进行测定。结果:不同产地的积雪草中积雪草甙和羟基积雪草甙的含量有很大差异。结论:方法简便。

积雪草CabHLH基因家族的全基因组鉴定和表达分析

目的:鉴定积雪草中bHLH转录因子家族,利用生信分析其蛋白理化性质和在基因组中的相关特性,为CabHLH家族基因在积雪草三萜生物合成调控研究中提供理论基础。方法:根据bHLH基因家族特征筛选积雪草的CabHLH基因家族,进行生信学分析和表达分析。结果:基于基因组和转录组一共鉴定得到137个CabHLHs基因,命名为CabHLH001~CabHLH137。每个CabHLH蛋白均有bHLH结构域,多数为亲水性蛋白,定位于细胞核,系统进化树分析发现CabHLH家族蛋白成员可被分为16个组别29个亚组,与拟南芥AtbHLH蛋白系统分类结果类似。积雪草CabHLHs在基因组内存在大量的基因复制,而与拟南芥的共线性发现成对基因较少,这些成对的基因具有类似的生物学功能。137个CabHLHs在不同组织部位呈现差异表达,CabHLH017、CabHLH023、CabHLH096、CabHLH076表达受到茉莉酸甲酯(MeJA)诱导并在叶中高表达。结论:在积雪草基因组中共获得137个CabHLHs基因,具有亚家族分类的序列特征和不同的表达模式,叶中高表达并响应MeJA的CabHLHs可能具有调控积雪草三萜生物合成的作用。

胶束毛细管电泳分离分析积雪草及其制剂中的4种三萜类有效成分

以pH=9.72的40%甲醇-16 mmol/L SDS-20 mmol/L硼砂溶液作为隐运行电解质,在分离电压25 kV,进样时间7 s,进样压力3447.38 Pa(0.5 psi),柱温25℃,PDA检测波长214 nm的仪器条件下,建立了一种胶束毛细管电泳法,能同时分离分析积雪草及其制剂中的羟基积雪草苷、积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草酸4种三萜类有效成分.运用此方法分析测定积雪草及其制剂中的4种三萜类有效成分的含量,加标回收率90%~110%,相对标准偏差均不超过5%.

积雪草主要三萜类化合物测定方法的优化研究

【目的】建立以环糊精为流动相添加剂的高效液相色谱法测定积雪草药材中三萜类化合物积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的含量,为控制积雪草的质量提供依据。【方法】采用分子设计方法优选流动相添加剂-环糊精种类,效应面法分析环糊精浓度、流动相中乙腈的比例、流动相pH对分离的影响,优化色谱条件,测定积雪草中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量。【结果】优化后HPLC色谱测定方法以γ-环糊精为流动相添加剂,固定相为CAPCELLPAKC18柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-3mmol/L环糊精溶液(含0.10%磷酸)=20∶80(V/V),流速1.0mL/min,柱温25℃,检测波长205nm;羟基积雪草苷和积雪草苷B分离度为4.32;积雪草苷为200~2000ng,积雪草苷B为120~1200ng,羟基积雪草苷为200~2000ng内线性关系良好,方法精密度、重现性、稳定性和回收率良好。【结论】新HPLC色谱测定方法简便、准确、可靠,且经济环保,可用于测定积雪草药材中主要三萜类化合物。