肾移植排斥反应非侵入性诊断的研究进展

肾移植是目前治疗终末期肾病的首选方法,其效果优于透析,能够改善患者的生活质量,然而排斥反应依然是移植患者需要面临的首要问题。目前临床诊断移植排斥反应的金标准诊断是基于肾活检的组织学分析,因其侵入性操作存在很多缺点,如并发症、成本高和风险高等[1]。因此,迫切需要新的非侵入性检测手段以预测排斥反应及其类型,明确排斥反应的免疫机制,并确定和调整免疫疗法。

IL-17参与小鼠心脏移植排斥反应的实验研究

目的研究Th17细胞相关因子白细胞介素17(IL-17)在小鼠心脏移植排斥反应中的表达及意义。方法建立小鼠颈部异位心脏移植模型,实验动物随机分为同系移植组和急性排斥反应组。观察2组供心存活时间,应用RT-PCR检测移植心脏IL-17、核孤独受体γt(RORγt)、干扰素-γ(IFN-γ)mRNA在移植术后1、2、3、4、5、6、7、8 d的动态表达水平。免疫荧光法观察移植术后第4天移植心脏内CD4+、CD8+T细胞中IL-17的表达情况。结果RT-PCR检测显示,在急性排斥反应组中,IL-17和RORγt mRNA的表达都早于IFN-γ,在移植术后第2天即可于移植心脏中检测到,其表达量在术后第4天均达到高峰,随后逐渐下降,并分别在术后第6天和第7天无表达。免疫荧光结果显示,急性排斥组移植心脏内有大量CD4+、CD8+T细胞浸润,细胞因子IL-17主要由CD4+T细胞分泌。结论Th17细胞在移植排斥反应的发生发展中可能起着非常重要的作用,对移植脏器中细胞因子IL-17的检测可作为急性排斥反应早期诊断的预见性和特异性指标。

三级淋巴结构在器官移植排斥反应中的现状与展望

器官移植后,移植物的排斥反应是最常见的并发症之一,无论病因如何都会对移植物产生不良损害。三级淋巴结构(TLS)于病理情况下非淋巴组织内发生。针对调节移植物排斥反应的机制鉴定和表征,不仅能够促进人们对器官移植物的存活及预后的理解,而且还为治疗移植物排斥反应提供了思路。

肝移植排斥反应中C4d的表达意义

目的:研究肝移植排斥反应中C4d沉积的部位和意义方法:对肝移植患者的肝穿刺标本作C4d免疫组化染色,观察C4d阳性沉积情况与肝脏病理改变的关系.结果:急性细胞性排斥反应中的69.2%肝移植标本,在肝小叶汇管区小血管壁及肝血窦壁上有C4d的沉积.33.3%移植后乙肝复发和28.6%乙型肝炎的标本中,仅汇管区小血管壁有C4d的沉积,而无肝血窦壁上C4d的沉积.12例器官保存性损伤的肝标本中1例汇管区小血管壁及肝血窦壁上有C4d的沉积,此例1mo后再次穿刺发现急性细胞性排异反应.肝移植后胆管阻塞的标本中没有发现C4d的沉积.结论:C4d在肝血窦壁的沉积可以作为肝移植急性排斥反应鉴别诊断一个比较特异的免疫组化指标.

猪-猕猴延迟性异种移植排斥反应的发生机制

目的 :探讨猪 猕猴延迟性异种移植排斥反应 (DXR)的发生机制。方法 :建立湖北白猪 云南猕猴的腹腔异位心脏移植模型 ,应用中华眼镜蛇毒因子 (Y CVF)完全清除受者体内补体 ,并应用环孢素A(CsA)、环磷酰胺 (CTX)和甲泼尼龙 (M .P)三联免疫抑制治疗。检测血清C3、C4、抗猪内皮细胞天然抗体 ,免疫组化方法染色检测移植物中C3、C5b 9、IgG、IgM、细胞间黏附分子 1(ICAM 1)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)、单核巨噬细胞 (CD6 8)、NK细胞 (CD5 7)、CD4 +T细胞和CD8+T细胞的表达。结果 :移植心存活时间分别为 8、10、13和 13天 ,血清C3和补体总活性均下降为 0 ,抗猪内皮细胞天然抗体水平在移植后则有一个更为明显的下降 ,在移植心失功前 2～ 4天开始天然抗体稍有回升 ,但较术前正常时仍明显偏低。移植心有程度不等的C3、C4、C5b 9、IgG及IgM沉积 ,大量的单核细胞 (5 0 % ) ,少量的NK细胞 (8%～ 10 % )、CD4 +T细胞 (15 % )和CD8+T细胞(2 5 % )。移植物血管内皮细胞表面出现ICAM 1的表达上调 ,移植物间质中出现TNF α的表达增加。结论 :体液免疫和细胞免疫参与猪 猕猴DXR排斥反应的发生。

TGFβ2-DC对小鼠同种异体角膜移植排斥反应的抑制作用

目的:观察自体TGFβ2-DC对于同种异体角膜移植术后免疫排斥反应的调节作用。方法:PBS或已摄取供体抗原的自体TGFβ2-DC经小鼠尾静脉注射7d后,建立小鼠同种异体角膜移植模型,临床观察两组植片混浊程度等情况,比较植片存活时间。结果:TGFβ2-DC注射后,植片发生移植排斥反应的时间延迟,植片存活时间明显延长,PBS组及TGFβ2-DC尾静脉组植片的存活时间分别为17.8±3.01d和37.6±1.65d(P<0.01)。结论:摄取供体抗原的不成熟自体DC可以诱导受体获得供体抗原的特异性免疫耐受,使小鼠同种异体角膜移植的免疫排斥反应延迟,植片存活时间明显延长。

树突状细胞在大鼠穿透性角膜移植排斥反应中的作用

目的观察大鼠角膜组织中树突状细胞的分布,以了解树突状细胞在穿透性角膜移植排斥反应中的作用。方法制作大鼠穿透性角膜移植模型,观察角膜透明度、新生血管。采用免疫组织化学方法检测OX-62+树突状细胞在角膜的分布。结果术后角膜植片均出现不同程度的新生血管、角膜水肿、混浊、基质增厚。排斥反应发生率100%。正常角膜组织中未见OX-62+树突状细胞分布,在发生急性排斥反应的角膜上皮层中有阳性细胞表达。脾脏阳性细胞表达与文献报道一致。结论OX-62+树突状细胞出现在移植后发生排斥的角膜组织中,角膜组织中的树突状细胞可能参与角膜移植后的免疫反应。

新型免疫抑制剂SYL934的抗皮肤移植排斥反应研究

目的探讨新型免疫抑制剂SYL934对皮肤移植排斥反应的影响。方法采用体外HTRF-IP1(Homogeneous Time-Resolved Fluorescence-IP1)方法,检测SYL934的活性磷酸酯SYL934-P对鞘氨醇-1-磷酸1型受体(sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1P1)及鞘氨醇-1-磷酸3型受体(sphingosine-1-phosphate receptor 3,S1P3)的激动活性,采用体内大鼠外周血淋巴细胞检测实验考察SYL934的体内免疫抑制作用,采用大鼠心率检测实验考察SYL934对心率的影响,通过小鼠异体皮肤移植实验考察SYL934对皮肤移植排斥反应的影响。结果 SYL934的活性磷酸酯SYL934-P能够在体外选择性激动S1P1而非S1P3,单次灌胃给予SD大鼠SYL934能够明显降低大鼠外周血淋巴细胞数量,发挥明显的免疫抑制效应,而不会影响大鼠心率。每天灌胃给予小鼠SYL934可以明显提高小鼠皮肤移植模型中移植皮片的存活率。结论 SYL934具有较好的体内外生物活性,具有开发成为抗皮肤移植排斥反应药物的应用前景。

TLSF_（JM）对DNFB诱导的小鼠接触性皮炎和同种异体皮片移植排斥反应的抑制作用

本文首次对急性Ｔ淋巴细胞白血病ＪＭ细胞系所分泌的抑制因子（ＴＬＳＦＪＭ），在体内的免疫调节作用进行了研究。结果表明：（１）体内应用ＴＬＳＦＪＭ可明显抑制由ＤＮＦＢ所诱导的小鼠接触性皮炎，降低局部针对变应原的特异性炎症反应；（２）ＴＬＳＦＪＭ能有效地延长移植在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠上的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠皮片的存活时间，并降低体外混合淋巴细胞反应中受体淋巴细胞对供体同种异体抗原刺激的再次增殖反应。

树突状细胞在角膜移植排斥反应中的免疫调节机制的探讨

目的观察自体未成熟树突状细胞(iDC)对于小鼠同种异体角膜移植的免疫调节作用,探讨其作用机制。方法PBS或自体iDC尾静脉注射7d后,采用双色免疫荧光染色法及流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4+CD28+及CD4+CTLA-4+ T细胞的表达。PBS或自体iDC尾静脉注射7d后进行小鼠同种异体角膜移植,临床观察两组植片的存活时间。结果iDC注射后,脾脏中CD4+CD28+ T细胞的比例下降(P<0.01),而CD4+CTLA-4+ T细胞比例明显升高(P<0.01)。iDC经尾静脉注射后明显延长了同种异体角膜移植片的存活时间(P<0.01)。结论iDC可诱导CD80/CD86-CTLA-4抑制型共刺激信号替代CD80/CD86-CD28信号通路,从而阻断协同刺激信号的传递及T细胞的活化,对于同种异体角膜移植排斥反应具有免疫抑制作用。

全角膜移植术后移植排斥反应及继发性青光眼的防治研究

目的探讨全角膜移植术后移植排斥反应和继发性青光眼的预防和治疗的有效方法,提高全角膜移植术的成功率。方法回顾性分析全角膜移植患者50例(50只眼)。手术方式包括带周边巩膜环的创缘叠加式缝合全角膜移植或移植片和植床边对边缝合的全角膜移植。术后眼表面分别应用他克莫司(tacrolimus,FK506)和环孢素(cyclosporin,CsA)预防和治疗移植排斥反应。应用房水引流植入物或睫状体冷凝术治疗角膜移植术后青光眼,比较其疗效。结果术后随访6～27个月。总的眼球保存率是96%,角膜移植片透明率是42%,手术后获得了超过0.05以上的视力16例,最好视力为1.2。FK506组的最终视力和术后12个月移植片透明率均高于CsA组(P<0.01和P<0.05)。FK506组和CsA组术后12个月的移植片透明率分别是61%和24%。与边对边缝合全角膜移植相比,叠加式缝合全角膜移植能明显降低手术后青光眼发生率(P<0.01)。房水引流植入物和睫状体冷凝术均可有效控制全角膜移植术后青光眼,但睫状体冷凝术的并发症较严重。结论通过改良手术技术,应用强效免疫抑制剂FK506和房水引流植入物,全角膜移植术不仅可以挽救角膜严重损毁的眼球,而且可以使患者的视力得到较好的恢复。

人重组粒细胞集落刺激因子对淋巴细胞分泌细胞因子和移植排斥反应的影响

目的 研究人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对淋巴细胞分泌白细胞介素 4 (IL 4 )和干扰素 γ(IFN γ)的影响 ,探讨rhG CSF能否通过改变细胞因子分泌而减轻急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的发生。方法 将供髓小鼠 (雄性BALB/C ,H 2d)随机分为两组 ,rhG CSF处理组 (实验组 )和未经处理组 (对照组 )。分别培养两组小鼠外周血淋巴细胞 ,以双抗夹心ELISA法检测上清液中淋巴细胞所分泌的细胞因子IL 4和IFN γ。再用主要组织相容性抗原 (MHC)完全不合的纯种近交系小鼠建立allo BMT/aGVHD动物模型 ,观察移植排斥反应发生程度。结果 实验组外周血淋巴细胞培养上清液中IFN γ浓度较对照组明显降低 ,而IL 4浓度较之升高 ;接受经rhG CSF动员后进行骨髓移植的小鼠较供者未经动员者aGVHD发生率及程度低。结论 rhG CSF可能通过改变造血干细胞移植物中淋巴细胞因子分泌而减轻aGVHD的发生。

Genistein联合环孢素A对大鼠心脏移植排斥反应中CXCR3表达的干预

目的:探讨Genistein联合环孢素A在大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应中对CXCR3的影响。方法:近交系Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者,行大鼠颈部心脏移植手术,移植后的大鼠随机分为3组,急性排斥反应(AR)组:心脏移植术后未采取任何治疗;环孢素A(Cs A)组:术后接受Cs A治疗;Cs A+Genistein(C+G)组:术后接受Cs A及Genistein的联合治疗。术后7 d,分别采集3组移植心脏,制备成组织切片,HE染色观察移植心脏的病理学改变,免疫组化及Western blot检测CXCR3受体的表达。结果:AR组CXCR3呈强阳性表达,C+G组炎性细胞浸润程度明显减轻,且CXCR3蛋白在心肌组织中呈低表达。结论:Genistein联合环孢素A能明显抑制大鼠心脏移植急性排斥反应中CXCR3的表达,减轻免疫排斥反应。

TIPE2在肾脏移植排斥反应患者中的表达及临床意义

目的探讨TIPE2在肾脏移植排斥患者中的表达,分析其在移植排斥反应中的作用。方法根据临床诊断标准,选取肾移植术后患者96例,其中急性排斥32例,慢性排斥33例(均行移植肾组织病理学诊断),肾移植后长期存活31例(存活5年以上,肾功能稳定,无蛋白尿)。32例健康志愿者作为对照组。用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC),用Western blot测定各组TIPE2蛋白的表达;同时用免疫组化法观察各组患者移植肾组织TIPE2表达的差异;用不同剂量的环孢素A和雷帕霉素处理淋巴细胞,用RT-PCR检测免疫抑制剂对TIPE2表达的影响。结果与对照组比较,TIPE2在肾移植术后急性排斥反应患者PBMC中表达下降(P<0.05),但肾脏移植慢性排斥患者则表达明显增高(P<0.001),肾功能稳定的患者TIPE2的表达轻度升高(P>0.05)。结果表明TIPE2在急性排斥的移植肾组织中表达较对照组轻度下降(P>0.05),但慢性排斥移植肾组织中明显降低(P<0.05)。同时发现环孢素A可抑制TIPE2表达,并呈现剂量依赖的关系(P<0.05);但雷帕霉素对TIPE2的表达没有影响(P>0.05);环孢素A和雷帕霉素合用同样抑制TIPE2的表达(P<0.05)。结论TIPE2与肾移植术后急性、慢性排斥反应密切相关,表明TIPE2参与肾移植排斥反应的过程。

白介素4单克隆抗体对心脏移植排斥反应中细胞因子表达的影响

为观察白介素 4单克隆抗体 (IL- 4Mab)对同种大鼠心脏移植物存活时间及局部细胞因子网络的影响 ,将实验对象分对照和实验组 ,分别静脉给予生理盐水及抗白介素 4单克隆抗体 (OX81) ,采用改良的移植术式建立移植模型 ,常规监测排斥反应发生情况。应用 RT- PCR的方法检测移植物局部细胞因子如 IL- 1β、IL- 2、CD2 5、IL- 4、IL- 5、IL- 6、IL-10、TNF- α、IFN- γ的表达水平。结果表明 :IL- 4Mab组移植心存活时间没有显著性变化 ,IL- 1β、IL- 2、IL- 5、CD2 5、TNF-α、IFN- γ的表达较强 ,而 IL- 4、IL- 6、IL- 10的表达较弱。提示单纯应用抗 IL- 4单克隆抗体可能调节 TH1/ TH2类 CK的表达 ,但对于移植物的存活时间却少有影响 ,其可能的机制为 :1CK网络中存在其它的独立于 IL- 4的 TH2类 CK;2TH亚群中存在除 TH1及 TH2亚群以外的亚群 THX;3IL-

落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用

目的:探讨落新妇甙对大鼠肺移植排斥反应的抑制作用。方法:采用大鼠左侧单肺移植模型。随机将肺移植后的40只大鼠分为4组:A组肺移植后用生理盐水(1ml/天)灌胃,B组肺移植后用环孢素A(5mg/kg/天)灌胃,C组肺移植后用落新妇甙(1ml/kg/天)灌胃,D组肺移植后用环孢素A(2.5mg/kg/天)及落新妇甙(1ml/kg/天)灌胃。术后第10天切取移植肺观察肺急性排斥反应分级情况。结果:B组、C组及D组移植肺排斥反应分级均低于A组(P<0.05～0.01);D组移植肺急性排斥反应最轻,优于C组(P<0.05)和B组(P<0.01)。结论:落新妇甙对肺移植排斥反应有较强的抑制作用,并与环孢素A有协同作用。

角膜移植排斥反应的基础研究进展

影响异体角膜缘/角膜缘干细胞移植术成败的关键是术后移植排斥反应的防治。在参阅有关文献后,本文对术后移植排斥反应的机制、表现及早期诊断和处理方法等诸多方面进行了较为全面的综述。

α-黑素细胞刺激素对同种异体小鼠异位心脏移植排斥反应的抑制作用

目的观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对同种异基因小鼠移植心脏存活时间的影响,以了解其在移植免疫中的作用。方法小鼠颈部心脏移植的Cuff模型,腹腔给予α-MSH,观察移植心脏的存活时间和病理改变。结果移植小鼠给予α-MSH后,移植心脏的存活时间比对照组显著延长,心脏病理显著改善,其中以50μg组效果最佳。结论α-MSH能抑制同种异基因小鼠的心脏移植排斥反应。