白屈菜碱对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤生长和血管生成的抑制作用及其机制

目的:探讨白屈菜碱对肺癌移植瘤小鼠肿瘤生长和血管生成的影响,并阐明其作用机制。方法:选取32只健康C57BL/6小鼠,制备Lewis肺癌移植瘤小鼠模型。将小鼠随机分为模型组(0.9%氯化钠)、低剂量白屈菜碱组(25 mg·kg^(-1)白屈菜碱)、高剂量白屈菜碱组(50 mg·kg^(-1)白屈菜碱)和阳性对照组(60 mg·kg^(-1)环磷酰胺),每组8只。称量各组小鼠移植瘤质量并计算抑瘤率,计算各组小鼠胸腺指数和脾脏指数,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(INF-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况并计算微血管密度(MVD)及VEGF蛋白表达评分,Westernblotting法检测各组小鼠肿瘤组织中核因子κB(NF-κB)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达水平。结果:与模型组比较,低和高剂量白屈菜碱组及阳性对照组小鼠移植瘤质量均降低(P<0.05);与低剂量白屈菜碱组比较,高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠移植瘤质量均降低(P<0.05),抑瘤率均升高(P<0.05);与高剂量白屈菜碱组比较,阳性对照组小鼠移植瘤质量均降低(P<0.05),抑瘤率升高(P<0.05)。与模型组比较,低和高剂量白屈菜碱组及阳性对照组小鼠脾脏指数和胸腺指数均升高(P<0.05);与低剂量白屈菜碱组比较,高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠脾脏指数及胸腺指数均升高(P<0.05);与高剂量白屈菜碱组比较,阳性对照组小鼠脾脏指数和胸腺指数均升高(P<0.05)。ELISA法,与模型组比较,低和高剂量白屈菜碱组及阳性对照组小鼠血清中IL-2、INF-γ和TNF-α水平均升高(P<0.05);与低剂量白屈菜碱组比较,高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠血清中IL-2、INF-γ和TNF-α水平均升高(P<0.05);与高剂量白屈菜碱组比较,阳性对照组小鼠血清中IL-2、INF-γ和TNF-α水平均升高(P<0.05)。与模型组比较,低和高剂量白屈菜碱组及阳性对照组小鼠肿瘤组织MVD降低(P<0.05);与低剂量白屈菜碱组比较,高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠肿瘤组织MVD降低(P<0.05);与高剂量白屈菜碱组比较,阳性对照组小鼠肿瘤组织中MVD降低(P<0.05)。与模型组比较,低和高剂量白屈菜碱组及阳性对照组小鼠肿瘤组织中VEGF蛋白表达量减少;与低剂量白屈菜碱组比较,高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠肿瘤组织中VEGF蛋白表达量减少;与高剂量白屈菜碱组比较,阳性对照组小鼠肿瘤组织中VEGF蛋白表达量减少;模型组、低剂量白屈菜碱组、高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠肿瘤组织VEGF蛋白表达评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting法,与模型组比较,低和高剂量白屈菜碱组及阳性对照组小鼠肿瘤组织中NF-κB和HIF-1α蛋白表达水平降低(P<0.05);与低剂量白屈菜碱组比较,高剂量白屈菜碱组和阳性对照组小鼠肿瘤组织中NF-κB和HIF-1α蛋白表达水平降低(P<0.05);与高剂量白屈菜碱组比较,阳性对照组小鼠肿瘤组织中NF-κB和HIF-1α蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:白屈菜碱能够抑制Lewis肺癌移植瘤小鼠肿瘤组织生长、保护免疫器官和抑制肿瘤血管生成,可能通过靶向NF-κB/HIF-1α信号通路和下调NF-κB及HIF-1α蛋白表达水平发挥治疗作用。

敲减辅酶Q10B表达对裸鼠食管鳞癌皮下移植瘤细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的探讨敲减辅酶Q10B(COQ10B)表达对裸鼠食管鳞状细胞癌(鳞癌)皮下移植瘤细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法利用慢病毒转染技术将COQ10B的干扰慢病毒及其阴性对照转染至食管鳞癌细胞(KYSE150细胞)中,构建敲减COQ10B表达的KYSE150细胞(sh-COQ10B组)和阴性对照KYSE150细胞(sh-NC组)。选择雌性BALB/c裸鼠20只,随机分入sh-COQ10B组和sh-NC组各10只,分别于裸鼠右前肩胛处皮下接种转染sh-COQ10B和sh-NC的KYSE150细胞,以此构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察接种后不同时间皮下移植瘤生长情况并测量瘤体的体积和质量。接种第26天实验结束后取瘤体组织,采用HE、免疫组化、TUNEL染色法观察裸鼠皮下移植瘤中细胞增殖和凋亡的情况,以Westernblotting法检测移植瘤中EMT相关蛋白(E-cadherin和Vimentin)和凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达。结果与sh-NC组比较,sh-COQ10B组中COQ10B蛋白表达量低(P<0.05);皮下移植瘤模型构建成功且裸鼠均无死亡。sh-COQ10B组移植后不同时间瘤体体积和质量均小于sh-NC组(P均<0.05)。与sh-NC组比较,sh-COQ10B组肿瘤细胞凋亡率高,瘤体组织内Bcl-2、Vimentin蛋白表达低,Bax、E-cadherin表达高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论敲减COQ10B表达可抑制裸鼠食管鳞癌皮下移植瘤细胞增殖和EMT的发生,促进肿瘤细胞凋亡。

靶向FOLR1的脱氧核酶提高鼻咽癌移植瘤对紫杉醇的敏感性

目的:探讨裸鼠鼻咽癌移植瘤能否通过靶向FOLR1的脱氧核酶(DrzE)提高其对紫杉醇的敏感性。方法:取CNE-1鼻咽癌亲本细胞及CNE-1/taxol紫杉醇耐药细胞进行裸鼠成瘤实验,分别予靶向FOLR1的“10-23”型DrzE单用和紫杉醇单用及紫杉醇-DrzE联用后比较各组鼻咽癌移植瘤体的抑制情况。RT-qPCR及Western blot检测用药前后各组瘤体FOLR1 mRNA及蛋白的表达。结果:CNE-1瘤体较CNE-1/taxol瘤体生长速度快,瘤体体积更大(P<0.05);CNE-1瘤体生长能被紫杉醇单药抑制,但紫杉醇对CNE-1/taxol瘤体无效;两种瘤体生长均能被DrzE单药抑制,其中耐药瘤体更显著(P<0.05);紫杉醇与DrzE联用较分别单用两药对移植瘤的抑制作用更显著(P<0.05);给药前CNE-1/taxol移植瘤中FOLR1的表达量显著高于CNE-1(P<0.01),用药后DrzE单药组及紫杉醇与DrzE联用组中两种移植瘤体FOLR1表达量均显著低于对照组(P<0.05)。结论:靶向FOLR1的脱氧核酶DrzE转染裸鼠移植瘤体后可减慢鼻咽癌瘤体的生长,提高鼻咽癌耐药移植瘤体对紫杉醇的敏感性。

miR-551在甲状腺癌患者中的表达及靶向ERBB4对SW579细胞移植瘤生长的影响

目的 探讨miR-551在甲状腺癌患者中的表达及靶向ERBB4对SW579细胞移植瘤生长的影响。方法 选取2019年1月-2022年3月于我院病理科采集并保存的甲状腺乳头状癌组织及其配对的癌旁组织100例。将SW579细胞随机分为Control组、miR-NC组、miR-551组和miR-551+pcDNA-ERBB4组。RTPCR检测甲状腺癌组织和细胞中miR-551表达,分析甲状腺癌组织中miR-551表达和临床病理特征相关性;CCK-8、Transwell法、流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡率;蛋白质印迹法检测细胞中ERBB4蛋白表达;荧光素酶活性基因报告检测miR-551和ERBB4靶向关系。建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为miR-NC组和miR-551组,比较两组裸鼠肿瘤体积;TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡率。结果 甲状腺癌组织中miR-551表达低于癌旁组织(P<0.05)。与甲状腺上皮细胞相比(1.00±0.10),甲状腺癌细胞中miR-551表达(0.32±0.04)明显降低(P<0.05)。与Control组相比,miR-551组细胞中miR-551表达(1.28±0.13)和细胞凋亡率(25.72±1.78)明显增加,24 h、48 h细胞活力(分别为52.38±5.46、32.29±3.17)、细胞侵袭数目(81.06±6.32)和细胞中ERBB4蛋白(0.46±0.05)表达明显降低(P<0.05);与miR-551组相比,miR-551+pcDNA-ERBB4组细胞中miR-551表达和细胞凋亡率(7.69±0.82)明显降低,24 h、48 h细胞活力(分别为85.11±7.61、71.56±6.82)、细胞侵袭数目(136.82±7.54)和细胞中ERBB4蛋白表达(0.84±0.08)明显增加(P<0.05);与miR-NC组(1.00±0.10)相比,转染野生型ERBB4(ERBB4-WT)时miR-551组荧光素酶活性明显降低(0.34±0.04)(P<0.05);与miR-NC组相比,miR-551组裸鼠肿瘤体积明显减少,肿瘤组织中细胞凋亡率(51.62±4.31)明显升高(P<0.05)。结论 甲状腺癌组织中miR-551呈低表达,过表达miR-551可靶向调控ERBB4抑制甲状腺癌细胞增殖和侵袭,诱导甲状腺癌细胞凋亡。

易黄汤对脾虚湿热型宫颈癌小鼠皮下移植瘤cGAS/STING/IRF-3信号通路及相关免疫因子的影响

目的探讨易黄汤对脾虚湿热型宫颈癌小鼠皮下移植瘤环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)/干扰素刺激基因(STING)/干扰素调节因子-3(IRF-3)信号通路及相关免疫因子的影响。方法选取6~8周龄SPF级雌性BALB/c小鼠50只,随机分为造模组40只和空白组10只。空白组正常喂养,造模组通过湿热环境及高脂高糖饮食建立脾虚湿热型小鼠模型,当小鼠出现嗜卧懒动、易激惹、形体消瘦、进食及饮水量减少、毛发疏松粗糙、粪便时干时溏、肛温稍有增加则认为造模成功。将2×106个/mL对数生长期HPV16阳性人宫颈癌CaSki细胞悬液0.2 mL接种于上述50只小鼠右腋下,5~7 d后可触及直径≥5 mm结节时即认为皮下移植瘤造模成功。将造模组按随机数字表法分为模型组和易黄汤低剂量、中剂量、高剂量组,每组10只。低、中、高剂量组均按体质量40.0 mL/kg分别予含生药浓度0.25、0.50、1.00 g/mL易黄汤药液灌胃,模型组和空白组予同等剂量生理盐水灌胃,均隔日1次,干预4周。干预后计算5组小鼠胸腺、脾脏指数和瘤质量、抑瘤率;ELISA法检测5组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;支链DNA信号扩增法检测5组小鼠皮下移植瘤组织HPV E6 mRNA转录水平;Western blot测定5组小鼠移植瘤组织中cGAS、STING、IRF-3蛋白表达量。结果与空白组比较,模型组胸腺和脾脏指数、IL-6、TNF-α水平显著下降(P<0.05),HPV E6 mRNA转录水平显著增加(P<0.05);易黄汤不同剂量组中以高剂量组的抑瘤率最高为(35.42±4.86)%(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组胸腺和脾脏指数、IL-6、TNF-α水平及cGAS、STING和IRF-3蛋白表达量显著增加(P<0.05),皮下移植瘤质量及HPV E6 mRNA转录水平显著降低(P<0.05),且降低程度与易黄汤剂量成正比。结论脾虚湿热能促进CaSki细胞生长、HPV表达增加,易黄汤可能通过激活cGAS/STING/IRF-3信号通路增强免疫功能,从而抑制HPV表达及宫颈癌小鼠移植瘤生长。

超声造影评估裸鼠食管癌移植瘤血管生成情况的实验研究

目的探讨超声造影(CEUS)对裸鼠食管癌移植瘤血管生成情况的评估价值。方法选取18只裸鼠,于其背部皮下注射人食管癌细胞株建立食管癌移植瘤模型,分别于移植后4、6、8周均随机选取6只裸鼠,先应用二维超声观察移植瘤回声、形态和边界,再行CEUS检查并获取时间-强度曲线(TIC)。然后处死所有裸鼠,使用HE染色观察移植瘤细胞结构和组织形态,免疫组化观察移植瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达和微血管密度(MVD),比较移植后不同时间移植瘤CEUS表现、TIC定量参数及病理学检查结果的差异。Pearson相关分析法分析TIC定量参数与VEGF蛋白表达、MVD的相关性。结果所有裸鼠食管癌移植瘤模型均成功建立,未出现死亡。移植后4周,移植瘤二维超声表现为类椭圆形低回声肿块,边界清晰,内部回声不均匀,CEUS表现为移植瘤内部呈均匀增强;移植后6周,移植瘤二维超声表现为肿块边界欠清晰,内部回声不均匀,CEUS表现为移植瘤内部呈不均匀高增强;移植后8周,移植瘤二维超声表现为肿块边界不清晰,内部回声不均匀,CEUS表现为移植瘤内部出现灌注缺损。移植后4、6、8周移植瘤峰值强度(PI)、曲线下流入面积(AWI)及曲线下流出面积(AWO)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);与移植后4周比较,移植后6、8周移植瘤PI、AWI和AWO均升高(均P<0.05);与移植后6周比较,移植后8周移植瘤PI和AWO均升高(均P<0.05)。HE染色显示,移植后4周移植瘤见角化珠且细胞间见细胞间桥;移植后6周移植瘤角化珠和细胞间桥均稍减少,毛细血管增多;移植后8周,移植瘤角化珠和细胞间桥均明显减少,毛细血管增多,可见病理性核裂变。免疫组化显示,移植后4、6、8周MVD和VEGF蛋白表达比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);与移植后4周比较,移植后6、8周移植瘤MVD均升高,移植后8周移植瘤VEGF蛋白表达升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。相关性分析显示,移植瘤PI、AWI、AWO与MVD、VEGF蛋白表达均呈正相关(均P<0.001)。结论CEUS能够有效观察裸鼠食管癌移植瘤内部血流灌注情况,TIC定量参数PI、AWI、AWO随着移植瘤的生长而逐渐升高,其与移植瘤MVD、VEGF蛋白表达均呈正相关,可以较好地评估移植瘤血管生成情况。

5-Aza-CdR对裸鼠皮下移植瘤组织中甲状腺乳头状癌细胞自噬和凋亡的影响及其机制

目的:探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对裸鼠皮下移植瘤组织中TPC-1细胞自噬和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:16只BALB/c雌性裸鼠右前腋下接种人甲状腺乳头状癌(PTC) TPC-1细胞建立移植瘤模型。成瘤后裸鼠随机分为对照组和实验组,每组8只,对照组裸鼠腹腔注射生理盐水,实验组裸鼠腹腔注射5-Aza-CdR,隔日给药1次,连续给药4周。观察2组裸鼠移植瘤生长情况,末次给药后处死裸鼠,称瘤体质量。HE染色观察2组裸鼠移植瘤组织病理形态表现,免疫组织化学染色检测2组裸鼠移植瘤组织中微管相关蛋白轻链3 (LC3)、B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测2组裸鼠移植瘤组织中LC3、Beclin-1、Bcl-2、Bax、细胞外信号调节激酶激酶(MEK)、细胞外信号调节激酶1 (ERK1)、细胞外信号调节激酶2 (ERK2)、磷酸化ERK1 (p-ERK1)、磷酸化ERK2(p-ERK2) mRNA和蛋白表达水平,并计算Bax/Bcl-2比值。结果:与对照组比较,实验组裸鼠移植瘤体积和质量明显降低(P<0.01)。对照组裸鼠癌细胞数量多,排列紧密,细胞形状不规则,细胞核染色清晰,细胞核大,细胞有重叠和分叶,可见明显的病理性核分裂象,符合PTC病理特点;实验组裸鼠癌细胞数目明显减少,排列稀疏,细胞核固缩且胞核不明显,结缔组织明显增多。与对照组比较,实验组裸鼠移植瘤组织中LC3B和Beclin-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05或P<0.01),MEK、ERK1/2及p-ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结结论论:5-Aza-CdR可抑制裸鼠皮下移植瘤组织中TPC-1细胞生长,诱导移植瘤细胞自噬并促进细胞凋亡,其机制可能与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/MEK/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制有关。

齐墩果酸对肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究

目的研究齐墩果酸对人肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其对肿瘤组织凋亡及相关基因表达的影响。方法BALB/c裸鼠皮下接种人肝癌细胞株HCCLM3构建肝癌移植瘤模型,随机分为模型组和药物组,分别给予0.01 mL/g玉米油和5 mg/kg齐墩果酸灌胃。给药期间测量并记录各组裸鼠的一般状态、体质量、瘤体质量和体积。通过HE、Ki67、TUNEL染色分别检测移植瘤组织中细胞坏死病理学改变、细胞增殖、细胞凋亡情况;采用qRT‐PCR检测移植瘤组织中CyclinD1、CyclinE1、CDK4、Bcl⁃2和Bax基因的mRNA表达水平。结果与模型组相比,药物组裸鼠体质量无明显差异,移植瘤体质量和体积均显著下降(均P<0.05)。HE染色结果显示药物组移植瘤组织形态发生明显改变,出现坏死区域。药物组瘤组织Ki67阳性表达强度显著低于模型组(P<0.01);TUNEL阳性表达强度显著高于模型组(P<0.05)。齐墩果酸给药后移植瘤组织中增殖相关基因CyclinD1、CyclinE1和CDK4的mRNA表达水平均降低,但差异无统计学意义(均P>0.05);抑凋亡相关基因Bcl⁃2的mRNA表达水平降低(P<0.05),而促凋亡相关基因Bax的mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论齐墩果酸能抑制人肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡相关。

车叶草苷调节RAS/RAF/MEK/ERK信号通路对肝细胞癌细胞活性及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨车叶草苷调节Ras蛋白(Ras protein,RAS)/Raf蛋白激酶(Raf protein kinase,RAF)/丝裂原激活蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞活性及裸鼠移植瘤生长的影响。方法体外培养人HCC-LM3以细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)法筛选车叶草苷体外最佳作用浓度。将HCC-LM3细胞随机分为对照组(细胞正常培养,不作其他干预)、车叶草苷组(3 mmol/L车叶草苷进行干预)、ML-098组(0.5μmol/L RAS激活剂ML-098进行干预)、车叶草苷+ML-098组(车叶草苷3 mmol/L和RAS激活剂ML-098终浓度0.5μmol/L联合干预)。以CCK-8法、流式细胞术分别检测各组HCC-LM3细胞活性、凋亡率;Western blot检测各组HCC-LM3细胞增殖、凋亡相关蛋白表达及RAS/RAF/MEK/ERK信号通路相关蛋白表达。制备HCC-LM3裸鼠原位癌模型并随机分为对照组(5 ml/kg生理盐水)、车叶草苷低剂量组(25 mg/ml车叶草苷)、车叶草苷中剂量组(50 mg/ml车叶草苷)、车叶草苷高剂量组(100 mg/ml车叶草苷)。检测各组裸鼠肝体比、肿瘤长径。以Ki67免疫组织化学染色法检测各组裸鼠肿瘤细胞增殖指数;Western blot检测各组裸鼠肿瘤RAS/RAF/MEK/ERK信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,车叶草苷组HCC-LM3细胞凋亡率、裂解凋亡蛋白酶3(Cleaved caspase-3)与B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,caspase-9)蛋白表达均升高(P均<0.05),细胞活性、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)与RAS蛋白表达、p-RAF/RAF、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均降低(P均<0.05);ML-098对HCC-LM3细胞各指标的作用与车叶草苷相反(P<0.05)。与车叶草苷组相比,车叶草苷+ML-098组HCC-LM3细胞凋亡率、Cleaved caspase-3与Bax、caspase-9蛋白表达均降低(P均<0.05),细胞活性、PCNA与RAS蛋白表达、p-RAF/RAF、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均升高(P均<0.05)。与对照组相比,车叶草苷低、中、高剂量组裸鼠肝体比、肿瘤长径、肿瘤细胞增殖指数、RAS蛋白表达、p-RAF/RAF、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均降低(P均<0.05),并呈一定剂量依赖性(P均<0.05)。结论车叶草苷可抑制RAS/RAF/MEK/ERK信号通路激活,降低HCC细胞体外细胞活性并促使其凋亡,延缓其裸鼠移植瘤生长。

基质金属蛋白酶12在胃癌组织、细胞中的表达及对裸鼠移植瘤生长的影响实验研究

目的:观察基质金属蛋白酶12(MMP-12)在胃癌组织和胃癌细胞株SGC-7901中的表达及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:收集胃癌患者42例,手术后留取肿瘤组织和距肿瘤边缘>3 cm的正常胃黏膜组织,应用免疫组化EnVision法检测MMP-12的表达。合成sh-MMP12质粒,应用慢病毒载体转染胃癌细胞株SGC-7901,设为sh-MMP12组,同时设立未行任何干预的细胞为空白对照组(NC组),应用Western blot法检测MMP-12和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MMP-12和PCNA mRNA的表达。选择4~5周龄的BALB/C雌性裸鼠5只,分别将sh-MMP12组和NC组细胞悬液注射于同一只裸鼠的左右两侧腋下(左侧为sh-MMP12组,右侧为NC组),间隔7 d测量并记录肿瘤体积,28 d后处死小鼠对瘤体称重。结果:免疫组化结果显示,胃癌组织MMP-12阳性率高于正常胃黏膜组织,胃癌组织MMP-12和PCNA表达呈正相关(均P<0.05)。Western blot结果显示,sh-MMP12组MMP-12和PCNA蛋白表达量于NC组(均P<0.05)。RT-qPCR结果显示,sh-MMP12组MMP-12和PCNA mRNA表达量低于NC组(均P<0.05)。裸鼠移植瘤实验结果显示,sh-MMP 12组肿瘤体积在7、14 d时与NC组比较无统计学差异(均P>0.05),而在21、28 d时与NC组比较明显缩小(均P<0.05);28 d后,sh-MMP12组腋下肿瘤重量低于NC组(P<0.05)。结论:胃癌组织和细胞株SGC-7901中MMP-12表达升高,抑制MMP-12可减缓裸鼠移植瘤生长。

虎杖苷调控Janus激酶1/信号传导和转录激活因子3信号通路对小鼠宫颈癌细胞凋亡及裸鼠移植瘤作用实验研究

目的:探讨研究虎杖苷调控Janus激酶1(JAK1)/信号传导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对小鼠宫颈癌细胞凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法:选取人宫颈癌HeLa细胞株,分为对照组(未经任何处理的HeLa细胞)、虎杖苷低、中、高剂量组(加入50、100、150μmol/L虎杖苷),继续培养24、48、72 h, Annexin V双染法检测HeLa细胞凋亡,MTT检测HeLa细胞增殖能力,Transwell小室检测HeLa细胞侵袭能力,qRT-PCR检测JAK1、STAT3 mRNA表达,Western blot检测JAK1/STAT3信号通路相关蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:与对照组比较,虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞凋亡率升高,高剂量组凋亡率高于中剂量组,中剂量组高于低剂量组(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞增殖和侵袭能力显著下降,虎杖苷高剂量组增殖率和侵袭细胞数最低(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞中JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达显著下降,高剂量组JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组小鼠肿瘤体积缩小,肿瘤质量降低(均P<0.05)。结论:虎杖苷可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制其增殖、迁移、侵袭及裸鼠皮下成瘤,其作用机制可能与调控JAK1/STAT3通路信号通路有关。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂1对人食管鳞状细胞癌斑马鱼移植瘤模型的作用

目的通过构建人食管鳞状细胞癌(ESCC)的斑马鱼移植瘤模型,研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(CST1)表达对ESCC肿瘤转移及血管生成的影响。方法通过慢病毒转染技术构建CST1过表达/敲低ESCC细胞,并经Transwell小室法检测细胞侵袭/迁移能力的变化,再通过显微注射技术分别将CST1过表达/敲低ESCC细胞注射至斑马鱼胚胎卵黄囊,建立人ESCC斑马鱼移植瘤模型,观察两株细胞在斑马鱼体内的定植迁移、分布及对斑马鱼肠下静脉丛(SIVs)的影响。结果体外实验表明,CST1过表达ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显增强,而CST1敲低ESCC细胞的侵袭/迁移能力明显减弱。斑马鱼移植瘤模型实验表明,当接种细胞数为300~500个/只时,ESCC斑马鱼移植瘤建模的存活率大于0.8;与对照组相比,CST1过表达细胞在斑马鱼体内具有明显的迁移特性,且SIVs区域血管呈明显增生状态,而CST1敲低细胞迁移能力减弱,SIVs区域血管生成明显受到抑制。结论通过显微注射技术成功构建人ESCC的斑马鱼异种移植瘤模型,并应用于肿瘤的在体功能学研究。CST1过表达具有促进ESCC肿瘤转移及血管生成的作用,提示CST1在ESCC发生发展进程中发挥潜在的致癌作用。

呼吸道产黑素普雷沃菌对小鼠Lewis移植瘤生长的影响

目的 探讨肺癌患者肺部定植的产黑素普雷沃菌(PM)对小鼠Lewis移植瘤生长的影响。方法 购买6周龄的C57BL/6J雌性小鼠40只,随机选取30只构建小鼠Lewis移植瘤模型,10只作为对照组,至14 d时将模型组小鼠随机分为PBS组、PM1组、PM2组,在瘤周注射PBS或PM菌液,每周2次,观察小鼠肿瘤细胞生长情况;收集小鼠的肺泡灌洗液,应用16S rRNA扩增子测序技术,分析样本中微生物组成及微生物多样性。结果 PM1、PM2组小鼠肿瘤体积、质量均大于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05);PM组小鼠肺泡灌洗液中微生物较对照组、PBS组丰度增加,Alpha多样性增多,Bete多样性降低。结论 小鼠肿瘤局部PM丰度增加显著促进小鼠Lewis移植瘤的生长,并且影响小鼠下呼吸道微生物菌群平衡。

尼美舒利对宫颈癌荷瘤裸鼠移植瘤的影响及机制实验研究

目的:探讨尼美舒利对宫颈癌荷瘤裸鼠移植瘤的影响及可能的机制。方法:建立人宫颈癌C33A细胞裸鼠皮下移植瘤模型40只,随机分为模型组、尼美舒利组、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制剂组、联合组,每组10只。尼美舒利组每天给予20 mg/kg尼美舒利灌胃,模型组给予等量0.5%羟甲基纤维素钠灌胃,PPARγ抑制剂组每天给予10 mg/kg PPARγ抑制剂GW9662灌胃,联合组给予尼美舒利联合PPARγ抑制剂处理,均连续干预4周。采用流式细胞术检测各组裸鼠脾脏自然杀伤(NK)细胞活性。采用TUNEL法检测各组裸鼠移植瘤细胞凋亡情况。采用Western blot检测移植瘤组织PPARγ、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT蛋白表达。结果:40只裸鼠皮下出现直径至少5 mm的肿瘤结节,且未出现红肿或坏死的迹象,模型建立成功。与模型组比较,尼美舒利组NK细胞活性增强,PPARγ抑制剂组NK细胞活性降低(均P<0.05)。与尼美舒利组比较,联合组NK细胞活性降低(P<0.05)。与PPARγ抑制剂组比较,联合组NK细胞活性增强(P<0.05)。各组干预后第3、6、9、12天,与模型组比较,尼美舒利组移植瘤体积缩小,PPARγ抑制剂组移植瘤体积增大(均P<0.05);与尼美舒利组比较,联合组移植瘤体积增大(P<0.05);与PPARγ抑制剂组比较,联合组移植瘤体积缩小(P<0.05)。与模型组比较,尼美舒利组移植瘤细胞凋亡率及PPARγ、PTEN蛋白表达量升高,p-AKT/AKT比值降低;PPARγ抑制剂组移植瘤细胞凋亡率及PPARγ、PTEN蛋白表达量降低,p-AKT/AKT比值升高(均P<0.05)。与尼美舒利组比较,联合组移植瘤细胞凋亡率及PPARγ、PTEN蛋白表达量降低,p-AKT/AKT比值升高(均P<0.05)。与PPARγ抑制剂组比较,联合组移植瘤细胞凋亡率及PPARγ蛋白、PTEN蛋白表达量升高,p-AKT/AKT比值降低(均P<0.05)。结论:尼美舒利可抑制宫颈癌荷瘤裸鼠移植瘤生长,增强NK细胞活性,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与上调PPARγ及PTEN/AKT通路有关。

转基因小鼠源性胰腺癌原位移植瘤模型的构建与评价

目的构建转基因LSL-KrasG12D/+LSL-Trp53R172H/+Pdx1-Cre(KPC)小鼠胰腺癌原位移植瘤模型,为研究胰腺癌的发展机制和治疗策略提供稳定、可靠的药物临床前研究动物模型。方法将KPC转基因小鼠的自发胰腺癌的组织块进行C57BL/6J小鼠胰腺原位移植,利用超声进行肿瘤监测,对原发肿瘤和传代肿瘤进行苏木精-伊红(HE)染色和免疫荧光染色评价模型的肿瘤病理学特征。结果KPC小鼠的自发肿瘤能够在C57BL/6J小鼠的胰腺上稳定生长,肿瘤增殖指标Ki67、基质纤维化标志物α-SMA、免疫细胞标志物CD45和CD206均稳定表达,该模型能够稳定地保留原发胰腺癌病理学特征,并发生与临床胰腺癌患者相似的广泛转移。结论成功建立转基因小鼠源性胰腺癌原位移植瘤模型,该模型能够模拟出胰腺癌的基质环境和免疫细胞浸润情况,具有较好的稳定性和均一性,可以作为研究胰腺癌进展和治疗策略的有效药物临床前研究模型。

过表达miR-181a-5p的口腔癌皮下移植瘤小鼠模型的小肠代谢组学研究

目的通过检测口腔癌皮下移植瘤小鼠小肠中代谢物和代谢通路的变化,分析过表达miR-181a-5p对皮下移植瘤小鼠小肠中代谢物和代谢物组的影响。方法实验分为3组,空白对照(Control)组、阴性对照(negative control,NC)组以及实验(over expression of miR-181a-5p,OE)组。将不同组别处理后的细胞混悬液,通过皮下注射到M-NSG重度免疫缺陷雌性小鼠右侧腹股沟中上部,构建成口腔癌皮下移植瘤小鼠模型。按时记录小鼠体重变化,对小鼠小肠组织进行HE染色,观察各组病理变化。采用超高效液相色谱-串联飞行时间质谱联用仪和串联Orbitrap质谱联用仪检测NC组、OE组和Control组小鼠小肠中的代谢物,使用XCMS预分析原始数据,质量评价样本数据,鉴定Control组与NC组、NC组与OE组的差异代谢物,进行KEGG富集分析获取差异代谢通路。结果Control组和NC组小肠组织中共鉴定出170种差异代谢物。代谢物富集的显著性信号通路包括胆碱代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、γ-氨基丁酸(GABA)神经突触代谢、甘油磷脂代谢、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路代谢、癌症中心碳代谢以及烟酸和烟碱胺代谢通路。NC组和OE组相比,小鼠小肠中检测到VIP(variable importance in the projection)>2的差异代谢物有16种,显著性差异代谢物包括甘油磷酰胆碱、棕榈酸、3-羟基丁酰肉碱、β-羟丁酸等。代谢物富集到的显著性差异通路为胆碱代谢通路。结论口腔癌皮下移植瘤可引起小鼠小肠的代谢物发生变化,主要改变了小肠中与能量代谢相关的代谢物。过表达miR-181a-5p影响口腔癌皮下移植瘤小鼠小肠代谢物,代谢物富集通路为胆碱代谢通路。

表达抗PD-1抗体的溶瘤病毒在结肠癌腹腔移植瘤模型中的抗肿瘤作用

为了研究表达小鼠抗PD-1抗体(VT1093M)的溶瘤病毒对结肠癌腹腔移植瘤模型的抗肿瘤作用,利用BALB/c小鼠成瘤的小鼠结肠癌CT26-luc细胞株建立了结肠癌腹腔移植瘤模型。接种后第8天进行分组,设置生理盐水(normal saline,NS)组、病毒VT09X组和VT1093M组,每组5只,注射剂量为2.5×10^(7)pfu/250μL,NS注射250μL,每隔一天注射一次,共注射5次。末次注射后6 d,脱颈处死小鼠,提取外周血中CD45^(+)细胞和腹水细胞,进行体外杀伤实验。治疗组初次出现荧光消失后第13天,进行再挑战实验。结果表明,造模实验确定最佳接种条件为200μL的2.5×10^(6)个/mL细胞悬液;药效实验中,VT09X组和VT1093M组较NS组具有明显的肿瘤抑制效果,VT1093M组治疗期间出现肿瘤消失情况,较VT09X组抑瘤效果明显,但差异无统计学意义;再挑战实验中,VT1093M组均未出现肿瘤再次生长;在体外杀伤实验中,注射病毒组的外周血CD45^(+)细胞在靶效比为1∶40时对CT26-luc杀伤效果明显,对4T1细胞,各组杀伤效果较差。因此,重组溶瘤病毒VT1093M在结肠癌腹腔转移瘤模型中具有显著的抗肿瘤作用,且能激发小鼠产生较为持久的特异性免疫反应。

壮药白花蛇舌草水提物对MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用研究

目的观察白花蛇舌草水提物对MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制及免疫调节作用,并探讨其作用机制。方法取6只正常BALB/c-nu雌性裸鼠作为正常组;取30只BALB/c-nu雌性裸鼠复制MDA-MB-231乳腺癌移植瘤模型,将造模成功裸鼠随机分为模型组、环磷酰胺组及白花蛇舌草水提物低、高剂量组,每组6只。环磷酰胺组给予环磷酰胺25 mg/kg腹腔注射,每7 d注射1次;白花蛇舌草水提物低、高剂量组分别按照1500 mg/(kg·d)、6000 mg/(kg·d)灌胃白花蛇舌草水提物溶液,正常组和模型组灌胃等体积灭菌注射用水,均1次/d。各组均连续干预21 d,监测裸鼠活动状况,每间隔2 d测量1次肿瘤大小。干预结束后,测量体重、瘤重与脾重,计算脾脏指数、抑瘤率;HE染色观察移植瘤的病理学形态;脾淋巴细胞增殖试验评价脾脏中T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖能力;血液分析仪测定外周血中白细胞数目和淋巴细胞占比;ELISA法检测血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法测定模型组和白花蛇舌草水提物低、高剂量组裸鼠肿瘤组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路蛋白及凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-7(Caspase-7)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)]表达情况。结果与正常组比较,模型组裸鼠脾脏指数、外周血中白细胞数量均明显升高(P均<0.05),脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血淋巴细胞占比及血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞密集丰富排列无序,肿瘤细胞异型性明显。与模型组比较,白花蛇舌草水提物高、低剂量组裸鼠脾脏指数、脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血淋巴细胞占比及血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均明显升高(P均<0.05),瘤重、外周血中白细胞数量均明显降低(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞数目大量减少,细胞凋亡,组织结构破损;肿瘤组织中p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、mTOR、Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),Bax、Caspase-7、Caspase-9蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。环磷酰胺组裸鼠脾脏指数、瘤重、脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖能力指数、外周血白细胞数量和淋巴细胞占比均明显低于模型组(P均<0.05);肿瘤组织中肿瘤细胞数量明显减少。结论白花蛇舌草水提物可显著抑制MDA-MB-231乳腺癌裸鼠移植瘤生长,诱导乳腺癌细胞发生凋亡,增强移植瘤裸鼠免疫功能,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路激活,下调凋亡相关蛋白表达、上调促凋亡蛋白表达相关。

oHSV-1-GM-CSF联合anti PD-L1抗体治疗小鼠双侧结肠癌移植瘤

为了验证oHSV-1-GM-CSF与anti PD-L1抗体联用在双侧结肠癌皮下移植瘤模型中的全身抗肿瘤活性,并初步探究该联用方案在体内的作用原理,在BALB/c小鼠上利用CT26.WT细胞建立双侧结肠癌皮下移植瘤模型并进行随机分组,设置Vehicle、oHSV-1-GM-CSF、anti PD-L1以及oHSV-1-GM-CSF+anti PD-L1组。治疗结束后,取小鼠外周血淋巴细胞进行流式细胞术和体外杀伤实验,并继续观察治疗结束后的小鼠肿瘤消退情况或消退的肿瘤重新发生的情况。结果显示,oHSV-1-GM-CSF能在CT26.WT细胞上表达mGM-CSF,且溶瘤作用与空载病毒相比无显著差异;在体内实验中oHSV-1-GM-CSF对治疗侧的肿瘤抑制效果强于空载病毒,与anti PD-L1抗体联用后产生更强的抑制全身肿瘤的作用;流式结果显示,联用组小鼠外周血和脾脏中与特异性免疫相关的细胞比例显著上调,且外周血淋巴细胞能在体外特异性杀伤CT26.WT细胞而对同种属的4T1细胞无明显作用;生存期结果显示联用组能显著延长小鼠生存期,存活率为33.3%,且无肿瘤重新发生的情况。综上所述,oHSV-1-GM-CSF与anti PD-L1抗体联用后能加强机体的特异性免疫从而产生持久的抑瘤效果,并延长小鼠生存期,为临床对结肠癌的治疗方案提供数据支持。

芒柄花黄素对裸鼠人胃癌细胞SGC7901移植瘤生长的影响及其机制

目的 :探究芒柄花黄素(Form onone tin,Form)对注射人胃癌细胞系SGC7901细胞悬液裸鼠的保护作用和具体机制。方法:建模成功后将裸鼠分为对照组,低、中、高浓度(10、20、40 mg/kg)芒柄花黄素处理组。观察皮下肿瘤,称量湿重,计算出肿瘤湿重抑制率及体积抑制率。Western blot法检测β-catenin、p-β-catenin、CyclinD1、CDK4以及p-Akt、Akt、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的相对表达量;免疫组织化学方法测定各组裸鼠肿瘤组织中β-catenin、p-β-catenin、CyclinD1、CDK4、Caspase 3、Caspase 9蛋白表达情况。结果 :免疫组织化学方法结果显示β-cate nin、p-β-cate nin、CyclinD1、CDK4表达情况随Form干预浓度增加而减弱;Caspase3、Caspase 9表达随Form干预浓度增加而增强。Western blot结果显示β-Catenin、p-β-Catenin、CyclinD1、CDK4以及p-Akt、Akt、Bcl-2等蛋白的相对表达量随Form干预浓度增加而降低;Caspase3、Bax等蛋白的相对表达量随Form干预浓度增加而上升。结论:Form可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而抑制胃癌细胞的增殖,同时还可以上调Caspase3来促进胃癌细胞的凋亡。