2016-2022年北京市人源空肠弯曲菌多重耐药及流行特征分析

目的 对2016-2022年北京地区人源空肠弯曲菌流行特征和多重耐药进行分析。方法 对2016-2022年肠道门诊的感染性腹泻患者粪便样本进行滤膜驱动法分离培养空肠弯曲菌并采用琼脂稀释法(MIC)进行耐药实验。结果 2016-2022年共检出人源空肠弯曲菌614株,检出月份以4-10月为主,占87.46%(537/614),发病年龄集中在20~<40岁,占51.63%(317/614),男、女性别比为1.52∶1。耐药结果显示,614株菌以萘啶酸耐药率最高,为78.99%(485/614),红霉素耐药率最低,为4.89%(30/614)。614株菌有116种耐药谱型,耐三重及以上耐药菌株占65.64%(403/614),耐药谱以耐萘啶酸、环丙沙星、四环素谱型最多,占23.62%(145/614)。结论 空肠弯曲菌引起的腹泻逐年增多,多重耐药严重且谱型复杂。

苏州市空肠弯曲菌耐药与分子特征分析

目的了解苏州市空肠弯曲菌的耐药情况和分子特征。方法对2018年-2022年苏州市分离的空肠弯曲菌进行全基因组测序分析了解毒力基因、耐药基因、多位点序列分型(Multi-locus sequence typing,MLST)等分子特征,通过琼脂稀释法了解其耐药表型。结果61株空肠弯曲菌被分为42个ST型别,以ST464占比最高(9.8%),包含12个CC群,以CC21占比最高(19.7%)。61株菌共检出18种耐药基因,97种毒力基因。药敏试验耐药率排前3位的抗生素分别是萘啶酸,四环素和环丙沙星,耐药率分别为90.2%,88.5%和73.8%,对红霉素100.0%敏感,多重耐药率达到41.0%。结论苏州市空肠弯曲菌多重耐药率高,携带耐药基因和毒力基因较多,克隆群以CC21为主,但ST型别较为分散,呈现较高的遗传多样性。

大肠杆菌肠菌素对空肠弯曲菌的促生长作用研究

[目的]调查鸡肠道内大肠杆菌分泌肠菌素的水平,以及其对空肠弯曲菌的促生长作用。[方法]利用间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法检测临床分离的30株鸡肠道大肠杆菌分离株的肠菌素产量;利用λRed同源重组系统构建大肠杆菌entB基因缺失突变株,并用ic-ELISA方法测定大肠杆菌亲本株和突变株的肠菌素产量;检测亲本株和突变株在不同限铁培养基中的生长曲线;将大肠杆菌亲本株和突变株培养上清接种空肠弯曲菌,探究大肠杆菌肠菌素对空肠弯曲菌生长的影响。[结果]30株鸡肠道大肠杆菌分离株分泌肠菌素水平介于11~126μmol/L之间。利用λRed同源重组系统成功构建2株大肠杆菌entB基因缺失突变株。定性结果显示,大肠杆菌亲本株在CAS培养基中产生黄色晕圈,而entB基因缺失株不产生晕圈。ic-ELISA检测结果显示,亲本株分泌肠菌素浓度为100~150μmol/L,而基因缺失株未检测出肠菌素。大肠杆菌亲本株和entB基因缺失株在富铁培养基中生长无显著差异(P>0.05),在限铁培养基中达到平台期的D 600 nm值分别为0.6和0.3。促生长试验结果显示,大肠杆菌亲本株培养上清接种空肠弯曲菌24和36 h,菌落数分别为7.8和8.2 lg CFU/mL,而entB基因缺失株培养上清接种后菌落数分别为7.0和7.3 lg CFU/mL。[结论]大肠杆菌具有分泌肠菌素的能力,且其在限铁环境下能促进空肠弯曲菌的生长,试验结果为深入研究肠菌素介导的肠道细菌之间的相互作用奠定基础。

空肠弯曲菌双分子荧光互补系统构建及其在蛋白质互作研究中的应用

为研究空肠弯曲菌中蛋白质的相互作用,建立适合于该菌稳定高效表达的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)系统,通过构建基于基因启动子、荧光蛋白以及基因回补方式等不同条件的重组载体,分别导入空肠弯曲菌进行荧光数值比较分析,确定荧光表达最优的参数,建立以porA启动子和Venus荧光蛋白的质粒回补的BiFC体系。用该体系探究空肠弯曲菌鞭毛表达蛋白的互作。结果表明:已知flhF与flhG互作的BiFC-flhF-flhG载体在菌体内表达的荧光值显著高于阴性对照载体,而BiFC-flhF-fliM和BiFC-flhF-fliG与阴性对照无差异,说明BiFC体系建立成功,且flhF与fliG、fliM不存在互作关系。综上,本研究建立了适用于空肠弯曲菌的BiFC体系,可为该菌蛋白质互作研究提供高效便捷的方法。

微酸性电解水对空肠弯曲菌的杀灭特性及机制

探究微酸性电解水(slightly acidic electrolyzed water,SAEW)对空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)的杀灭效果和杀灭机制。通过使用不同有效氯质量浓度(available chlorine concentration,ACC)的SAEW对C. jejuni进行不同时间的处理,考察ACC和处理时间对杀菌效果的影响;通过加入蛋白质,考察蛋白质对SAEW杀菌效果的影响;此外,分析了SAEW对多代培养菌的杀灭效果。通过对细胞膜完整性、形态以及细胞内容物含量等变化分析,探究SAEW杀灭C. jejuni的机制。结果表明:SAEW对C. jejuni的杀灭效果与ACC和处理时间呈正相关;蛋白质会减弱SAEW的杀菌效果;C. jejuni在10代内未对SAEW产生抗性反应;SAEW处理可破坏细胞膜完整性,菌体表面出现凹陷褶皱、破损,胞内核酸、蛋白质和ATP泄漏等变化,表明细胞膜受损可能是SAEW杀灭C. jejuni的主要原因。

冀鲁部分地区鸡源空肠弯曲菌耐药性与遗传进化特征研究

为了解冀鲁部分地区鸡群空肠弯曲菌的感染情况、耐药性与遗传进化特征,试验于2020年11月份—2021年12月份采集邯郸市、邢台市、石家庄市、聊城市部分养鸡场泄殖腔拭子369份,对空肠弯曲菌进行分离培养与纯化、PCR鉴定;采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法对分离到的空肠弯曲菌进行耐药性分析;选取有代表性的分离菌株,通过扩增7个空肠弯曲菌管家基因进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分析和遗传进化分析。结果表明:采集的369份鸡泄殖腔拭子样品中有88份为空肠弯曲菌阳性,阳性率为23.85%;共分离出16株空肠弯曲菌,分离率为4.34%。16株分离菌株对链霉素、红霉素和阿奇霉素的耐药率最高,均为93.75%;对左氧氟沙星、磺胺甲口恶唑、林可霉素、多黏菌素、头孢噻呋、大观霉素、头孢噻肟和新霉素的耐药率较高,为50.00%~87.50%;对恩诺沙星的耐药率为43.75%;对阿莫西林的耐药率为37.50%;对氧氟沙星、庆大霉素和氨苄西林的耐药率均为31.25%;对青霉素和氟苯尼考的耐药率均为25.00%;对多西环素和万古霉素的耐药率最低,均为18.75%。选取的10株有代表性的分离菌株[邯郸市3株(HeBHD-1、HeBHD-2、HeBHD-3)、邢台市2株(HeBXT-1、HeBXT-2)、石家庄市2株(HeBSJZ-1、HeBSJZ-2)、聊城市3株(SDLC-1、SDLC-2、SDLC-3)]共属于8个序列型别(sequence type,ST),其中HeBHD-3为新的ST(ST12017),HeBHD-2和SDLC-3为ST6077,SDLC-1和SDLC-2为ST4259,HeBHD-1、HeBSJZ-1、HeBXT-1、HeBXT-2和HeBSJZ-2分别为ST2328、ST1213、ST1723、ST11076和ST11851。仅4株被归类为克隆群CC,其中HeBXT-1、SDLC-1和SDLC-2属于克隆群CC-354,HeBSJZ-1属于克隆群CC-460,另外6株的ST没有被归类为任何克隆群。HeBXT-1、SDLC-1、SDLC-2、HeBSJZ-1、SDLC-3和HeBHD-3(新的ST)分离株与上海人源参考株SHI IC140的亲缘关系最近,HeBHD-1和HeBSJZ-2分离株与四川鹌鹑源参考株V20的亲缘关系最近,而HeBHD-2和HeBXT-2分离株与河南人源参考株HN-CJD07042的亲缘关系最近。说明冀鲁部分地区鸡群存在空肠弯曲菌感染的情况,分离菌株耐药性较为严重,且遗传进化特征呈现多样性,因此应加强对该地区鸡群空肠弯曲菌的动态监测。

婴幼儿血流感染空肠弯曲菌1例并文献复习

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)广泛存在于家禽肠道,是全球范围内广受重视的人畜共患食物源性病原菌,主要引起人类和牲畜急性胃肠道感染。空肠弯曲菌导致的肠外感染较为少见,本资料报道1例空肠弯曲菌导致婴幼儿血流感染病例,并加以相关文献复习,以提高临床对空肠弯曲菌的认识。

扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析

目的了解扬州市区腹泻人群中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的感染流行和耐药性状况。方法采用多重PCR方法对扬州市区两所医院门诊部和住院部的腹泻人群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌感染状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果在2937份粪便样品中,142份空肠弯曲菌阳性、平均阳性率4.83%,10份结肠弯曲菌阳性、平均阳性率0.34%。不同医院间感染率差异不显著(P>0.05),门诊部感染率极显著高于住院部(P<0.01),7岁以下幼儿感染率极显著高于其它人群(P<0.01),6月-8月感染率显著高于其它月份(P<0.05)。93株空肠弯曲菌分离株对21种抗生素高度敏感的是:庆大霉素91.40%、阿齐红霉素89.25%、红霉素88.46%、阿莫西林87.10%、链霉素83.87%、头孢噻肟81.72%、卡那霉素81.72%,高度耐药的是:头孢哌酮100%、复方新诺明100%、头孢拉定97.85%、头孢克罗93.55%、环丙沙星91.40%、萘啶酸91.40%、左旋氧氟沙星88.17%、土霉素87.50%。耐药菌株耐药谱主要集中在9耐至14耐,达81.71%,两医院分离株多重耐药性无显著性差异(P>0.05),不同诊区分离菌多重耐药性存在显著性差异(P<0.05)。结论扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行及耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价腹泻人群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供了科学依据。

空肠弯曲菌的磁捕获_-荧光PCR检测方法的建立

为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立空肠弯曲菌的磁捕获_荧光聚合酶链反应 (IMC_FPCR)方法。IMC_FPCR法检测空肠弯曲菌方法简便易行 ,可在 2 4h内完成 ,特异性好 ,检测低限达到 10cfu mL ,抗干扰性强。IMC_FPCR方法可望解决非可培养状态的空肠弯曲菌检测难题 ,是一种适用于检验检疫、卫生防疫和农产品安全检验等领域的快速方法。

江苏奶牛空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析

目的了解江苏省奶牛空肠、结肠弯曲菌流行及耐药状况。方法采用多重PCR方法对10个奶牛场的产奶牛、育成牛和饲养环境进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果1531份样品中,119份空肠弯曲菌阳性,平均阳性率7.77%;3份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率0.20%;空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率最高分别为30.91%、3.57%。在三类样品中,产奶牛空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率分别为5.02%、0.32%,育成牛空肠弯曲菌阳性率为8.70%、未检出结肠弯曲菌,环境样品空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率为10.28%、0.18%。35株奶牛空肠弯曲菌分离株对8大类21种抗生素高度敏感率的是:阿莫西林100%、阿齐红霉100%、链霉素97.14%、庆大霉素94.29%、红霉素91.43%、头孢噻肟82.86%、克林霉素82.86%;高度耐药率的是:头孢哌酮100%、恩诺沙星100%、环丙沙星97.14%、复方新诺明97.14%、左旋氧氟沙星94.29%、萘啶酸94.29%、头孢拉定94.29%、诺氟沙星91.43%、头孢克罗88.57%。菌株耐药谱显示,35株分离株的耐药主要集中在9耐到12耐,占88.57%,产奶牛分离株的多重耐药性较其它分离株更严重。结论我国奶牛群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行和耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价我国奶牛群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供科学依据。

部分省市鸡群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行状况分析

本研究采用多重PCR方法对我国部分省市不同品种、不同类型的鸡群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行病学调查。结果发现,在3132份鸡肛门棉拭样品中,检测出583份空肠弯曲菌阳性样品,平均阳性率18.61%;48份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率1.53%。鸡饲养环境样品217份,6份空肠弯曲菌阳性,阳性率2.76%。不同鸡群感染率悬殊较大,空肠弯曲菌阳性率从0%～73.3%、结肠弯曲菌阳性率从0%～7.4%。30个鸡群中空肠弯曲菌阳性率为86.67%,结肠弯曲菌阳性率43.33%。本调查结果表明我国鸡群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行呈现多样化。

空肠弯曲菌喹诺酮类抗生素敏感性检测及其耐药机理分析

目的了解我国不同宿主来源空肠弯曲菌对喹诺酮及氟喹诺酮类抗生素的耐药现状,分析耐药菌株的耐药机制。方法利用96孔琼脂稀释法分析不同来源空肠弯曲菌对萘啶酸、环丙沙星两种抗生素的最小抑菌浓度(MIC)。对102株检测耐药的菌株和27株敏感菌株通过基因测序的方法分析其耐药机制。结果234株空肠弯曲菌中共筛查到218株(93.16%)萘啶酸耐药菌株,其中鸡粪和鸭粪来源菌株耐药率均为100.00%,腹泻病人粪便来源菌株耐药率是97.96%,食品动物来源菌株耐药率是97.83%,牛粪来源菌株耐药率是77.97%,耐药率差异有统计学意义(P<0.05),鸡粪和鸭粪来源菌株耐药率最高;211株(90.17%)环丙沙星耐药菌株,其中鸡粪和鸭粪来源菌株耐药率均为100%,腹泻病人粪便来源菌株耐药率是91.84%,食品动物来源菌株耐药率是95.65%,牛粪来源菌株耐药率是77.97%,耐药率差异有统计学意义(P<0.05),鸡粪和鸭粪来源菌株耐药率最高。所有的耐药菌株gyrA基因的喹诺酮类耐药决定区(QRDR)都存在Thr-86-Ile点突变。gyrB基因相关区域测序显示不存在有意义突变。结论我国分离空肠弯曲菌菌株对萘啶酸、环丙沙星耐药严重,gyrA基因QRDR内的Thr-86-Ile突变能引起空肠弯曲菌对喹诺酮类及氟喹诺酮类抗生素高水平耐药。

空肠弯曲菌对动物源性食品安全的影响及对策

空肠弯曲菌是继沙门氏菌、志贺氏菌之后的又一人兽共患病原菌,不仅可导致人类胃肠炎和食物中毒,而且还与人类格林-巴利综合征、米勒-费希尔综合征的发生密切相关。充分认知该菌对动物源性食品安全的影响,及时采取科学控制措施,是防止该菌危害人类健康的重要途径。本文就防止空肠弯曲菌污染对动物源性产品安全的影响提出对策和建议,以便为有关部门前瞻性的采取防控措施提供支持。

2006-2008年江苏地区不同宿主感染空肠弯曲菌及其耐药性

目的检测2006-2008年江苏地区鸡、水禽、奶牛、丹顶鹤、猪、实验猴等标本感染空肠弯曲菌及其耐药性。方法采用APICampy System进行生化与分类鉴定,结合弯曲菌多重PCR检测方法对来自江苏地区的禽、牛、猪、猴3 010份标本,检测分离株及其耐药性。结果共检测样本3010份,402份空肠弯曲菌阳性,阳性率13.36%,其中家禽样阳性率15.83%(258/1630);水禽10.40%(52/500);奶牛7.65%(39/510);猪18.75%(30/160);猴15.00%(15/100);丹顶鹤12.50%(10/80);糜鹿0%(0/30)。选择不同宿主来源的108株对10大类27种抗生素高度敏感率的是:氯霉素100%、阿莫西林99.07%、阿米卡星92.59%、头孢噻肟91.67%、阿齐霉素90.74%;高度耐药率的是:头孢哌酮99.07%、复方新诺明99.07%、头孢孟多99.07%、磺胺甲基异噁唑97.22%、头孢拉丁91.67%。结果显示,108株分离株的耐药主要集中在9耐～20耐,占85.19%,猪分离株的多重耐药性较其它宿主来源分离株严重。结论江苏地区空肠弯曲菌的流行和耐药状况呈现多样化和复杂化,不同宿主来源分离株耐药性和多重耐药性存在差异。

空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究

目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时（Real-time）PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌，可以导致人类的急性肠炎与食物中毒，并能引发格林-巴利综合征等并发症。为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测，本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA，建立了针对空肠弯曲菌特异的hipo（hippuricase，马尿酸酶）基因的Real-timePCR方法，用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定。试验结果表明，该方法检测细菌的灵敏度为110CFU．人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1~10CFU。本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点。

空肠弯曲菌的致病性及致病机制研究进展

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是引起人类腹泻的主要致病菌之一,它也是重要的食源性致病菌,可通过食物链感染给人和动物,主要引起人的发热和急性肠胃炎,进一步还可引发心内膜炎、关节炎、骨髓炎等全身性疾病。自20世纪80年代以来,空肠弯曲菌就受到国内外的普遍关注,由于该菌感染的高发生率和造成的严重危害,有研究报道称它将是"下一个沙门菌"。空肠弯曲菌的致病机制主要包括侵袭、黏附、定植以及产生毒素,这一过程中多种毒力因子参与其中,像Fla、Peb1、CadF等与吸附和定植有关,CiaB、PldA等与侵入有关,还有细胞致死性膨胀毒素、细胞紧张性毒素等外毒素和内毒素。这些毒力因子在空肠弯曲菌侵袭宿主并引起其发病的过程中相互协调发挥作用。近年来对空肠弯曲菌的毒力因子检测和它们的致病机理已经有了初步研究。论文介绍了空肠弯曲菌对人和动物的致病作用,以及与致病相关的主要毒力因子的致病作用和致病机理,为该类病原菌毒力因子功能的研究,空肠弯曲菌病防治和空肠弯曲菌的免疫机制提供参考。

PCR-ELISA法检测食品中空肠弯曲菌

针对空肠弯曲菌16S rRNA基因应用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,核酸探针5’端标记生物素,将聚合酶链式反应(PCR)、核酸液杂交以及酶联显色技术结合,对检测条件进行优化,建立食品中空肠弯曲菌的聚合酶链式反应-酶联免疫吸附分析法(PCR-ELISA)。该方法特异性强、灵敏度高(比PCR高10倍),可以快速、准确检测食品中污染的空肠弯曲菌。该方法可应用于临床诊断、食品卫生监控及出口食品的病原微生物检测等各个领域。

深圳市肉类食品空肠弯曲菌的污染情况调查

目的了解我市常见肉类食品中空肠弯曲菌的污染状况,为控制和预防空肠弯曲菌食物中毒提供科学依据。方法在食品污监测点随机抽检肉类食品样品117份,用传统国标法和荧光PCR法进行检测。结果从117份肉类食品中检出4份空肠弯曲菌,阳性检出率为3.4%。结论深圳市肉类食品中存在空肠弯曲菌的污染,如果加工、销售不当,及监督不严,会对群众健康构成潜在威胁。

空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的B细胞抗原表位分析及功能鉴定

目的从生物信息学角度了解空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18的跨膜结构、B细胞抗原表位及其抗原性、基因序列保守性等特征,并鉴定空肠弯曲菌主要外膜蛋白优势B细胞抗原表位,为后续抗体检测和疫苗研究提供实验依据。方法使用NCBI/Blast,TMHMM Server V2.0,DNA Star等生物信息学分析软件对空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18进行蛋白跨膜结构预测、线性B细胞抗原表位及其抗原性分析、并对不同空肠弯曲菌OMP18蛋白的氨基酸序列同源性进行比较。采用空肠弯曲菌全菌抗体IgG为一抗,基于ELISA技术对优势线性B细胞抗原表位进行筛选鉴定。结果生物信息学预测结果表明外膜蛋白OMP18定位于空肠弯曲菌外膜且不存在跨膜结构。蛋白序列保守存在于各空肠弯曲菌株中,序列同源性达95%以上。同时,我们发现该外膜蛋白中存在3个明显的B细胞线性表位,且具有很强的抗原性。ELISA检测鉴定结果表明3个B细胞抗原表位都能有效识别空肠弯曲菌全菌抗体。结论空肠弯曲菌主要外膜蛋白OMP18保守存在于细菌表面,存在3个重要的B细胞线性抗原表位,可用于后续的抗体检测和疫苗开发研究。