窖蛋白1对大鼠星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的影响

目的探讨糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)对体外培养的大鼠星形胶质细胞窖蛋白1(caveolin-1,Cav-1)的影响。方法原代培养出生24h内SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,分为对照组和OGD组(给予星形胶质细胞6h的OGD和24h的再灌注损伤,建立OGD损伤模型)。用多重免疫荧光的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达,实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达的变化。根据小干扰RNA(siRNA)的原理,将Cav-1siRNA转染星形胶质细胞,采用CCK-8的方法检测星形胶质细胞活力。结果大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cav-1普遍表达。与对照组比较,OGD组星形胶质细胞Cav-1mRNA和蛋白表达量下降(P<0.05)。siRNA转染后,与对照组比较,OGD组星形胶质细胞活力下降(P<0.05)。结论 SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cav-1表达的下调,导致OGD后细胞损伤加重,提示Cav-1对星形胶质细胞具有保护作用。

窖蛋白1在肿瘤免疫及肿瘤耐药中的作用

窖蛋白1(CAV-1)为细胞窖(Caveolae)的标志蛋白,参与了细胞内吞、信号传导、脂质代谢、免疫反应、肿瘤发生及发展等多种生理及病理过程。肿瘤严重威胁人类健康,虽然目前肿瘤的治疗方法多样,治疗后缓解率大幅度上升,但仍有部分患者对治疗不敏感以及缓解后复发产生耐药。肿瘤耐药的机制多样,参与耐药发生的因素复杂导致耐药后缺乏良好的逆转耐药方案。而肿瘤细胞诱导的免疫抑制在肿瘤的发生及耐药中也起着重要作用。研究表明,CAV1在肿瘤免疫及肿瘤耐药过程中发挥重要作用,文中就近年来CAV-1在肿瘤免疫及肿瘤细胞耐药过程中的作用进行综述。

窖蛋白1在无血清状态下诱导FBJ细胞死亡

目的研究无血清状态下,FBJ-S1细胞较FBJ-LL细胞更易死亡的原因。方法用细胞活性检测法分析细胞的活性,分别用HPTLC法、逆转录PCR法和免疫印迹法检测细胞中GD1a和窖蛋白1(caveolin-1)的含量。结果研究表明,在无血清培养基培养条件下,富含神经节苷脂GM3和GD1a的低转移性的FBJ-S1小鼠骨肉瘤细胞趋向死亡,但对含有几乎相同量GM3而无GD1a表达的高转移性的FBJ-LL细胞的生长却未见明显影响。同时发现:a.FBJ-S1细胞富含窖蛋白1,而FBJ-LL细胞中窖蛋白1表达量则较低;b.利用小干扰基因沉默技术在FBJ-S1细胞中沉默窖蛋白1的表达,结果使细胞存活率升高;c.使用GD1a处理FBJ-LL细胞导致其趋向死亡,通过免疫印迹法检测窖蛋白1发现其蛋白表达量增加。结论在无血清培养条件下,窖蛋白1诱导FBJ细胞的死亡。

窖蛋白1在急性髓系白血病细胞中表达的初步观察

目的明确窖蛋白1(Caveolin-1,CAV1)在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及临床意义。方法收集AML患者骨髓标本83例、对照组11例,运用实时定量PCR(q PCR)方法检测CAV1基因m RNA的表达水平,分析CAV1在AML不同阶段表达特征及临床意义。结果⑴CAV1基因m RNA在AML初治组表达比对照组显著降低(P<0.05),初治组与缓解组表达无显著差异(P=0.123);难治组与复发组CAV1表达水平比初治组、缓解组、对照组显著升高(P<0.05)。⑵初治组中化疗缓解组与化疗未缓解组之间CAV1表达水平无显著差异。⑶AML初治组中CAV1基因m RNA表达水平与患者骨髓单个核细胞比例、外周血原始细胞比例、外周血白细胞计数无明显相关性(P>0.05)。结论 CAV1在AML中表达与白血病阶段有关,呈双向表达模式,随着病情进展而升高,可能成为预测白血病病情进展的指标之一。

间质作用因子1通过正调控窖蛋白1抑制FBJ-S1-H的迁移性

目的证明间质作用因子(stromal interaction molecule1,Stim1)在FBJ诱导的小鼠骨肉瘤细胞中的抑癌作用。方法在Stim1高表达的FBJ-S1-H细胞采用Stim1以siRNA干扰技术得到Stim1沉默的几株S1-H单克隆细胞株,通过细胞行为学方法和RT-PCR技术对其mRNA进行研究,通过明胶酶谱法对细胞基质金属酶活性进行研究。结果通过细胞行为学方法证明,Stim1的沉默提高了细胞的迁移性,通过对mRNA表达的研究发现,Stim1沉默引起了多种基因表达的变化,其中包括基质金属酶9(matrix mexalloprotelnase 9,MMP-9)的升高,窖蛋白(caveolinl,Cav1),甾醇调控因子Srebf1的降低等,提高单克隆细胞中的Cav1含量可以使细胞迁移性降低。结论实验结果证明在FBJ-S1-H细胞中,Stim1能够抑制细胞的移动性,沉默Stim1的表达能够提高细胞的迁移性。

窖蛋白1表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征及其癌前病变的关系

目的研究窖蛋白1(caveolin-1)表达对子宫内膜样腺癌(EA)临床病理特征及子宫内膜上皮内瘤变(EIN)的意义。方法采用免疫组织化学SP法检测93例子宫内膜样腺癌及35例子宫内膜上皮内瘤变中窖蛋白1的表达,分析窖蛋白1表达水平及与临床病理参数的关系。结果窖蛋白-1在子宫内膜样腺癌中阳性率(65.6%),显著高于子宫内膜上皮内瘤变(阳性率17.1%)。窖蛋白-1表达水平在低分化腺癌(86.4%)、肿瘤浸润深度≥1/2(82.8%)、淋巴管间隙受侵(88.2%)、肿瘤直径≥2cm(76.8%)患者中明显高于对照组。子宫体下段及宫颈粘膜腺体受侵(不包括宫颈间质受侵)(76.9%)及年龄>60岁(74.3%)患者中与对照组无明显差异。结论窖蛋白-1表达可能参与子宫内膜样腺癌的发生,窖蛋白-1阳性与子宫内膜样腺癌的分级及其一部分决定辅助治疗的高危因素密切相关。

模拟微重力对肺微血管内皮细胞窖蛋白-1和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨回转模拟微重力对肺微血管内皮细胞(PMVEC)窖蛋白-1(caveolin-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法以肺微血管内皮细胞为研究对象,采用回转器模拟微重力效应。将细胞分为回转12h组、回转24h组(在30r/min条件下回转培养12、24h),以及对照12h组、对照24h组(放置于细胞回转器旁静置培养12、24h)。采用Griess法检测细胞的NO释放量,透射电镜观察细胞胞膜窖的超微结构变化,Western blotting检测eNOS和caveolin-1的表达。结果回转12h组较对照12h组NO产量和eNOS蛋白表达均有增加,回转24h组较对照24h组NO产量和eNOS蛋白表达也有增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。由透射电镜可见,对照12h组和对照24h组PMVEC细胞膜表面均可见典型的希腊字母Ω状胞膜窖,较丰富,结构清晰;回转12h组PMVEC细胞膜上胞膜窖的结构破坏,数量减少;回转24h组PMVEC细胞膜上很难发现胞膜窖的特征性结构,数量进一步减少。Western blotting检测发现,回转12h组与对照12h组相比,回转24h组与对照24h组相比,PMVEC中caveolin-1表达均显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论回转模拟微重力可抑制肺微血管内皮细胞中caveolin-1的表达,增强eNOS表达,提高细胞内NO的释放量。

非小细胞肺癌中窖蛋白1基因的蛋白表达和甲基化及其意义

目的 检测窖蛋白1（Cav-1）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的蛋白表达以及启动子的甲基化状况，探讨Cav-1基因在NSCLC中的作用及其临床意义。方法 应用免疫组织化学（SP法）和量子点Qd600染色检测123例NSCLC组织、17例良性病变肺组织中Cav-1蛋白表达和亚细胞定位。亚硫酸氢钠处理DNA，甲基化特异性PCR（MSP）检测Cav-1基因启动子区域的甲基化水平。结果 Cav-1蛋白在肺支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞的胞质和胞膜高表达。癌旁组织（对照）组和肺癌组中Cav-1蛋白的阳性率分别为17／17、43．1％（53／123），两组间差异有统计学意义（P=0．001）；Cav-1蛋白在NSCLC不同的组织学类型（P=0．552）和分化程度（P＝0．160）中差异均无统计学意义。Cav-1蛋白阳性率与NSCLC的TNM分期（P=0．001）以及淋巴结转移（P=0．001）均相关。在40例Cav-1蛋白表达为阴性的肺癌组织和12例癌旁肺组织，MSP法均未检测到Cav-1基因启动子区域的甲基化。结论 Cav-1蛋白失表达的机制可能与启动子区是否甲基化无关。Cav-1蛋白高表达预示NSCLC恶化进展和高侵袭性。

血清窖蛋白-1在慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压患者中的表达及意义

目的研究血清窖蛋白-1(Cav-1)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压(PAH)患者中的表达及其意义。方法选取稳定期COPD患者65例,根据是否合并PAH分成COPD组[肺动脉收缩压(PASP)<40 mmHg,35例]及COPD-PAH组(PASP≥40 mmHg,30例)。另选取在本院健康体检的志愿者30例作为对照组。对比各组基线资料、动脉血气分析、肺功能指标,以及血清Cav-1、白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评价Cav-1对COPD合并PAH的诊断价值。结果 COPD-PAH组与COPD组第一秒用力呼吸容积(FEV1)/用力肺活量(FVC)、FEV1占预计值百分比(FEV1%)及氧分压[p(O_2)]低于对照组,而二氧化碳分压[p(CO_2)]、PASP均高于对照组(P<0.01)。COPD-PAH组p(O_2)低于COPD组,p(CO_2)、PASP均高于COPD组(P<0.01)。对照组、COPD组及COPD-PAH组Cav-1表达水平呈逐渐降低趋势,而IL-6、TNF-α表达水平呈逐渐升高趋势(P<0.01)。血清Cav-1诊断COPD合并PAH的ROC曲线下面积为0.902(0.821～0.955),最佳截断值为6.66μg/L,此时诊断敏感度为76.7%,特异度为85.7%,与多普勒超声诊断仪测量PASP结果比较一致性较好(Kappa值=0.627)。结论血清Cav-1在COPD相关PAH患者表达明显下调,可以作为预测COPD相关PAH的新型血清标志物。

非小细胞肺癌中窖蛋白1和pERK1／2表达与预后相关性研究

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织窖蛋白1与pERK1／2的表达及其与预后的关系。方法应用免疫组织化学（SP法）检测160例NSCLC及20例正常肺组织标本中窖蛋白1与pERK1／2的表达。结果窖蛋白1在NSCLC和正常肺组织阳性率分别为65．6％（105／160）和100％（20／20），P=0.002。中一高分化组和低分化组阳性率分别为56．8％（46／81）和75.7％（53／70），P=0．015；Ⅰ-Ⅱ期阳性率为58．2％（53／91），Ⅲ～Ⅳ期阳性率75．4％（52／69），P=0．024；有淋巴结转移组阳性率为77．8％（56／72），无淋巴结转移组阳性率为55．7％（49／88），P=0．003。窖蛋白1阳性患者1、3、5年生存率（71.4％、37．1％、17．1％）低于阴性患者（89．1％、69．1％、43.6％），P=0．000。pERK1／2在NSCLC和正常肺组织阳性率分别为61．3％和0，P=0．000；中一高分化组和低分化组阳性率分别为53．1％（43／81）和71．4％（50／70），P=0.021；Ⅰ～Ⅱ期阳性率为49．5％（45／91），Ⅲ-Ⅳ期阳性率76.8％（53／69），P=0．000；有淋巴结转移组阳性率为80．6％（58／72），无淋巴结转移组阳性率为45.5％（40／88），P=0．000。pERK1／2阳性患者1、3、5年生存率（74．5％、42.9％、19．4％）低于阴性者（82．3％、56．5％、37．1％），P=0.002。窖蛋白1与pERK1／2负相关，P=0．000。结论窖蛋白1在NSCLC中低表达，pERK1／2在NSCLC中高表达。窖蛋白1蛋白阳性表达和pERK1／2蛋白高表达与NSCLC的发生及侵袭、转移相关。窖蛋白1和pERK1／2可作为NSCLC一个预后预测的指标。

膀胱尿路上皮癌组织中窖蛋白1的表达及其与患者预后的关系

目的 明确膀胱尿路上皮癌组织中窖蛋白1的表达水平,并探讨其与膀胱尿路上皮癌预后的关系.方法 应用免疫组化法检测85例膀胱尿路上皮癌组织中窖蛋白1的表达,比较其中64例初发者和21例复发者的表达差异,以及窖蛋白阳性和阴性表达初发患者的预后.结果 85例膀胱尿路上皮癌组织中,窖蛋白1表达阳性34例（40.0%）.窖蛋白1在初发性和复发性膀胱尿路上皮癌组织中的表达阳性率分别为32.8%和61.9%,差异有统计学意义（P〈0.05）.21例窖蛋白1阳性表达的初发性膀胱尿路上皮癌患者平均无瘤生存时间为14.2个月,43例窖蛋白1阴性的初发性膀胱尿路上皮癌患者平均无瘤生存时间为18.9个月,两组差异有统计学意义（P〈0.05）,窖蛋白1阳性表达组的术后无瘤生存率低于阴性表达组（P〈0.05）.结论 窖蛋白1与膀胱尿路上皮癌的发生有关,其阳件表达是膀胱尿路上皮癌复发的高危因素.

量子点免疫荧光组化技术检测肝细胞癌中窖蛋白1的表达

目的研究窖蛋白1在人肝细胞癌组织芯片中的表达,并探讨其在肝细胞癌发生过程中的可能作用。方法采用量子点免疫荧光组织化学技术检测60例肝细胞癌及其对应的癌旁组织芯片中窖蛋白1的表达,并就其表达与临床病理学特征之间的关系进行分析。结果窖蛋白1表达水平在肝细胞癌与癌旁组织芯片中分别为364.75±114.67、281.14±57.08,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。但窖蛋白1表达水平在患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期中差异无统计学意义(P>0.05)。结论人肝细胞癌组织中存在着窖蛋白1的表达,可能参与了肝细胞癌发生的早期过程。

窖蛋白-1在细胞增殖和肝再生中的作用

窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是组成胞膜窖(caveolae)的主要功能蛋白。作为质膜上的独立结构,胞膜窖参与多种细胞活动,如胆固醇运输、信号转导以及细胞膜的组装等。通常,窖蛋白-1可以通过其N端的窖蛋白脚手架区(caveolin scaffolding domain,CSD)寡聚细胞外信号激酶(Erk1/2)的上游蛋白,抑制Erk1/2的活化,从而抑制细胞增殖和肿瘤转移。新近研究表明,窖蛋白-1通过促进甘油三酯的储存和利用而对肝再生起重要的调控作用。因此,窖蛋白-1可能是调控肝实质细胞增殖的关键蛋白。

窖蛋白-1、基质金属蛋白酶-2与乳腺肿瘤的侵袭和转移

窖蛋白(caveolin)是分子量为21～24 kD的整合膜蛋白,是胞膜窖(caveolae)的标志性结构分子,其家族成员窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)参与细胞内许多重要的生命活动.近来研究发现,窖蛋白-1与乳腺上皮细胞转化及乳腺癌的发生密切相关.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是基质降解代谢的主要酶类,几乎能降解细胞外基质和基底膜的所有成分,其家族成员明胶酶A(MMP-2)在乳腺癌的浸润和转移过程中起重要作用.新近发现,窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2在胞膜窖中共定位,窖蛋白-1通过抑制基质金属蛋白酶-2的激活来抑制乳腺癌的侵袭和转移,起到肿瘤抑制因子的作用.本文对窖蛋白-1与基质金属蛋白酶-2各自在乳腺肿瘤侵袭转移中的作用及两者关系的研究进行综述.

窖蛋白-1与乳腺癌

窖蛋白（caveolin）是分子量为21～24kD的整合膜蛋白，是胞膜窖（caveolae）的标志性结构分子．目前已克隆并鉴定出窖蛋白基因家族的3个成员：窖蛋白-1，窖蛋白-2和窖蛋白-3．其中窖蛋白-1参与细胞内的许多生命活动，如胆固醇的运输，细胞膜的组装，细胞信号传导，细胞周期调控，细胞转化和肿瘤形成．窖蛋白-1还可以与转录因子相互作用，调节相关基因的表达，抑制肿瘤发生．另外，在乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌等多种恶性肿瘤中均发现窖蛋白-1的异常；近年来发现，窖蛋白-1与乳腺上皮细胞转化和乳腺癌发生密切相关．本文概括介绍了窖蛋白-1的结构特点、窖蛋白-1介导的信号通路及与乳腺癌发生的关系方面的研究进展．

窖蛋白-1与肿瘤

窖蛋白是胞膜窖结构中的特征性结构蛋白。窖蛋白在细胞内吞、胆固醇运输、细胞膜组装、调节信号转导和肿瘤生成、转移等生命活动中扮演了重要角色。窖蛋白基因家族中的窖蛋白-1(Cav-1)可能参与肿瘤生成和转移的病理机制,以及与多药耐药等密切相关。窖蛋白-1参与调节细胞周期与信号转导,在细胞凋亡程序中发挥重要作用,具有抗血管新生,负性调节生长因子,参与肿瘤细胞侵袭和转移的作用。

窖蛋白-1对血管张力的影响

Palade和Yamada分别于1953年和1955年,在电子显微镜下发现caveolae（胞膜窖）[1].近年来,对caveolae及其组分蛋白caveolin（窖蛋白）的研究较多,临床上发现许多疾病的发生发展与其密切相关：caveolae缺失可导致脂代谢障碍、肌萎缩、心血管疾病及癌症等[2].例如：caveolae/caveolin-1 与动脉粥样硬化（As）病变、冠心病发生有关：表达于血管内皮细胞表面的caveolae参与LDL的胞吞作用,促进LDL在内膜下沉积,导致脂质斑块的形成,因此,caveolae的缺失可延缓As的发展[2-3];脂肪细胞表面的caveolae参与转运大颗粒脂滴进入细胞,促进机体对血糖的利用,防止脂代谢障碍型糖尿病的发生[4];caveolin-1与肺癌、胰腺癌、乳腺癌及前列腺癌等多种癌症的发生发展有关[5-8],并参与癌细胞浸润与转移[9];此外,caveolin-1与肺动脉高压的关系将在后文中阐述.本综述重点讨论caveolae/caveolin-1对心血管系统的影响.

窖蛋白1在肿瘤及其血管生成中的作用

窖蛋白1(caveolin-1)是胞膜窖(caveolae)上的标志性蛋白,能够识别多种信号分子,与肿瘤的侵袭转移及血管生成等过程密切相关。而caveolin-1在肿瘤血管生成中的作用尚未定论,目前认为caveolin-1在肿瘤及其血管生成中具有促进及抑制双重作用。随着研究的不断深入,caveolin-1很可能成为肿瘤的治疗靶点或早期诊断指标。本文就caveolin-1在肿瘤及其血管生成的作用进行综述。

体外模拟冠状动脉痉挛微环境中窖蛋白-1与一氧化氮及内皮素-1相关性的研究

目的:研究体外模拟冠状动脉痉挛(内皮功能异常为基础)微环境中窖蛋白-1(caveolin-1,cav-1)与一氧化氮(nitric oxide,NO)及内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的相关性。方法:1.分离培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)。2.1脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建内皮功能损伤细胞模型,分组:空白对照组、阴性对照组、50mg/L、100mg/L、200mg/L,每组分别干预12h、24h。2鉴定:细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞活性;Annexin V/PI法检测细胞凋亡率;测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)抑制率。3.1在2的基础上用10μmol/L乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)干预细胞以模拟冠状动脉痉挛微环境,单用Ach为对照组;激光共聚焦技术检测胞浆Ca^(2+)([Ca^(2+)]i)评价模拟效果。2三种终产物检测:硝酸还原酶法检测NO含量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测ET-1含量,Western-blot法检测cav-1蛋白表达情况。结果:1LPS干预条件为50mg/L 24h及100mg/L 24h时可成功构建内皮功能损伤细胞模型,与阴性对照组相比:细胞活性下降(P<0.01),细胞凋亡率增高(P<0.05),SOD抑制率下降(P<0.05)。2与单用Ach处理组相比:LPS(50mg/L 24h)+Ach组[Ca^(2+)]i峰值降低不明显(P>0.05),LPS(100mg/L 24h)+Ach组降低明显(P<0.05);两实验组均NO分泌减少(P<0.05),ET-1分泌增多(P<0.01);LPS 50mg/L组cav-1表达增多不明显(P>0.05),LPS 100mg/L组增多明显(P<0.05);cav-1表达与NO分泌呈负相关(r=-0.7475),与ET-1分泌呈正相关(r=0.7509)。结论:Cav-1在体外模拟内皮功能异常导致冠状动脉痉挛过程中发挥一定作用,分别与NO、ET-1分泌呈负相关、正相关。

绿茶多酚影响高脂饮食大鼠窖蛋白-1表达的实验研究

目的：探讨绿茶多酚单体表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallcatechingallate，EGCG）对高脂饮食所致肥胖及窖蛋白-1（caveolin-1，Cav-1）表达的影响。方法：30只雄性Wistar大鼠（体质量170～190g）随机分为3组，即高脂饮食组、高脂饮食加EGCG组和对照组。饲养15周，测量体质量、血糖及血脂；用RT-PCR及Westernblot分别检测Cav-1mRNA及其蛋白表达。结果：高脂饮食可上调Cav-1mRNA和其蛋白表达；而EGCG可降低Cav-1mRNA和其蛋白的上调。结论：绿茶多酚降低高脂饮食大鼠Cav-1mRNA和其蛋白表达的作用，可能是绿茶及其多酚改善内皮功能和预防心血管疾病的分子机制之一。