新型端粒末端转移酶疫苗有望治疗胰腺癌

2006年10月，英国权威临床杂志British Journal of Cancer（BJC）刊登了丹麦Pharmexa制药公司产品GV1001治疗胰腺癌的Ⅰ／Ⅱ期临床试验结果，充分肯定了GV1001治疗胰腺癌的效果。GV1001是一种端粒末端转移酶疫苗，研究显示广泛激活免疫系统的可打破肿瘤引起的免疫抑制，能控制肿瘤的发展，因此许多肿瘤，包括不含已知肿瘤抗原的肿瘤细胞都可以被端粒末端转移酶免疫疗法所杀灭。

人端粒末端转移酶反转录酶及bcl-2在病理性瘢痕成纤维细胞中的表达

端粒末端转移酶的激活与肿瘤的发生密切相关。随着对其研究的深入，人们逐渐认识到人端粒末端转移酶反转录酶（human telomerase revere transcriptase，hTERT）可能在端粒末端转移酶活性调节中发挥重要作用。但在病理性瘢痕的发生发展过程中，有关端粒末端转移酶激活的机制及其与bcl-2mRNA表达水平的关系鲜见报道。笔者通过检测hTERT、bcl-2mRNA在人病理性瘢痕成纤维细胞中的表达水平，旨在探讨在此过程中是否存在端粒末端转移酶激活机制及其意义。

尿液中端粒末端转移酶可有效诊断膀胱癌

由于目前对检测早期膀胱癌可用的无创方法既无有效的敏感性,又缺乏特异性,不能作为常规检查应用,所以发现新的分子标记物就成为最具挑战性的目标之一。为能在排泻出的尿液中应用一种相对简单、廉价和精确的方法来检测出端粒末端转移酶的活性,以便应用于大规模筛查膀胱癌, 意大利的Sanchini等开展了一项病例对照研究,并发表于 JAMA杂志。

p27kip1基因转移对食管癌细胞生存素表达和端粒酶活性的影响

背景:p27kip1是新近发现的一种抑癌基因,早期研究表明p27kip1基因转移能显著抑制食管癌细胞和人食管癌裸鼠移植瘤的生长,表明该基因疗法可能是食管癌治疗的新途径,但其抑癌机制尚未完全阐明。目的:研究p27kip1基因转移对食管癌细胞生存素(survivin)表达和端粒酶活性的影响,从而阐明p27kip1的抑癌机制,为p27kip1基因治疗食管癌提供理论依据。方法:将携带p27kip1基因的重组腺病毒(Ad-p27kip1)和LacZ重组腺病毒(Ad-LacZ)分别转染食管癌细胞系Eca9706,观察细胞形态变化,以免疫细胞化学染色和蛋白质印迹法检测p27kip1和生存素的表达,以端粒重复序列扩增程序(TRAP)聚合酶链反应(PCR)-酶联免疫吸附测定(ELISA)检测端粒酶活性。结果:经Ad-p27kip1转染后,Eca9706细胞变圆,呈葡萄串样聚集以致脱落。细胞p27kip1表达明显增强,生存素表达降低,端粒酶活性显著受抑制。结论:p27kip1基因抑制食管癌细胞生长的作用机制可能与下调生存素表达和抑制端粒酶活性有关。

联合检测端粒酶和CK20诊断大肠癌外周血微转移的研究

目的联合检测细胞角蛋白20(cytoker-atin20,CK20)表达和端粒酶的活性,初步探讨它们在检测大肠癌微转移中的意义。方法用RT-PCR法,检测52例大肠癌患者术前和术后不同时间外周血中的CK20的表达。用端粒重复片段扩增方法检测相应患者外周血中的端粒酶的活性。结果52例患者外周血中检出CK20表达及端粒酶活性检测阳性率按不同时间段分别为61·9%与57·7%(术前),69·1%与72·1%(术后24h),34·6%与30·9%(术后早期化疗结束后)。两者的阳性表达均与患者Duke’s分期存在显著性相关。结论端粒酶和CK20均可作为标志物来检测大肠癌患者外周血中微转移。

乳腺癌组织中端粒酶活性的定量检测及其与临床病理的关系

背景与目的:端粒酶是一种在细胞永生化及癌症发生过程中起重要作用的核蛋白酶。最近关于乳腺癌中端粒酶活性与预后因素间的关系,因研究方法的差异而呈现出不一致的报道。本研究旨在建立一种可行的银染端粒酶定量检测法,以探讨乳腺癌中端粒酶活性与临床病理学预后因素间的关系。方法:运用银染端粒重复序列扩增法(SS-TRAP)检测了52例新鲜乳腺癌及其癌旁组织,32例乳腺良性病变和14例正常乳腺组织中端粒酶的活性表达,对结果予以定量并结合临床资料进行分析。结果:乳腺癌、癌旁组织、良性病变及正常乳腺组织中端粒酶阳性率分别为90.38%(47/52)、28.85%(15/52)、31.25%(10/32)、0(0/14)。端粒酶分别为36.91±15.35、8.27±4.37、14.10±5.28、0(TPG单位),单因素方差分析结果显示,乳腺癌组端粒酶活性水平明显高于其他3组(P值均<0.01)。Logistic回归分析结果表明,乳腺癌中端粒酶的表达与病理类型、分化程度明显相关(P=0.003及0.004),即随着肿瘤的进展,端粒酶活性亦增加。其中,浸润性非特殊癌端粒酶活性水平明显高于浸润性特殊癌(P<0.05);中、低分化癌端粒酶活性均高于高分化癌(P<0.05),中、低分化癌间无显著性差异(P>0.05)。端粒酶活性表达在患者病程、年龄、绝经状况间均无显著性差异(P>0.05)。

端粒酶在人胚肾上皮细胞转化中的作用

目的:利用原代人胚肾上皮细胞转化模型阐明端粒酶在细胞癌变过程中的作用。方法:用逆转录病毒介导的基因导入法,使人端粒酶催化亚基(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)、HRas癌基因、猿猴病毒40(simianvirus40,SV40)编码的早期抗原在原代人胚肾上皮细胞中稳定地表达,观察细胞的生长特性、染色体畸变率以及细胞转化特征。结果:端粒酶的激活虽然能延长细胞的寿命,但不能使细胞永生化。如果细胞同时表达端粒酶和SV40编码的大T抗原(largeTantigen,LT),细胞就能获得永生化。在此永生化细胞株中导入HRas癌基因以及SV40编码的小T抗原(smallTantigen,ST),细胞发生恶性转化,表现为在软琼脂上形成克隆并在裸鼠皮下形成肿瘤。与原代细胞相比,永生化细胞株的染色体畸变率无改变,而恶性转化细胞的畸变率明显增加。此外在转化细胞和几种肿瘤细胞中表达阻抑人端粒酶的特异性siRNA,能显著地抑制肿瘤细胞的生长、诱导细胞凋亡并减少软琼脂上形成的克隆数目。结论:细胞永生化是癌变过程的必要阶段,端粒酶的激活不仅是细胞永生化的重要环节,而且在维持肿瘤细胞生长中起重要的作用。

端粒酶反义寡核苷酸及顺铂对恶性脑胶质瘤治疗的协同作用

目的观察端粒酶反义寡核苷酸(ODN)及顺铂对恶性脑胶质瘤治疗的协同作用。方法用15例Ⅲ、Ⅳ级端粒酶活性阳性表达的恶性脑胶质瘤制备单细胞悬液并原代培养,以5μmol／L端粒酶反义ODN抑制恶性胶质瘤细胞端粒酶活性后,用不同浓度顺铂处理细胞。流式细胞仪检测处理前后胶质瘤细胞PCNA、TUNEL阳性百分率变化情况。结果端粒酶反义ODN作用于恶性胶质瘤细胞72h后,TRAP法检测端粒酶活性转为阴性,此时0．3μg／mL顺铂即可对胶质瘤细胞有明显抑制增殖、促进凋亡作用。结论端粒酶反义ODN能抑制端粒酶活性,增加恶性胶质瘤细胞对顺铂的敏感性,与顺铂在治疗恶性脑胶质瘤细胞过程中有协同作用。

端粒酶基因和Ki-67蛋白在Hodgkin淋巴瘤肿瘤细胞中的表达

目的 :研究Hodgkin淋巴瘤R S细胞端粒酶基因表达及与Ki 6 7表达的相关性 ,探讨Hodgkin淋巴瘤的生物学行为。方法 :用原位杂交的方法在 4例正常淋巴结、7例反应性增生淋巴结和 35例Hodgkin淋巴瘤中检测端粒酶基因hTR和hTRT的表达 ,同时应用免疫组化技术检测了Ki 6 7蛋白表达。结果 :端粒酶基因hTRT、hTR在正常淋巴结和反应性增生淋巴结内有低水平或中等量的表达 ,hTRT和hTR分别在 30 / 35、32 / 35例Hodgkin淋巴瘤的R S细胞中具有高表达。Hodgkin淋巴瘤内反应性淋巴细胞hTRT的表达弱 ,且较少 ,而hTR较为广泛。Ki 6 7在R S细胞中的表达与hTRT、hTR较为一致 ,具有明显表达。结论 :Hodgkin淋巴瘤的肿瘤细胞大部分具有hTRT、hTR和Ki 6 7的表达 ,因此R S细胞具有恶性增殖能力。

端粒酶活性与癌胚抗原诊断恶性腹水114例对比分析

目的:比较端粒酶活性(TA)和癌胚抗原(CEA)指标诊断恶性腹水的价值。方法:良、恶性腹水各57例,应用端粒重复序列扩增-杂交-酶联免疫分析技术检测TA、磁性抗体分离酶联免疫测定技术检测CEA。比较TA与CEA诊断恶性腹水的特异性、敏感性、预测值、准确性等指标的差别。结果:腹水标本检测TA与CEA的阳性结果:恶性腹水组分别为48例(84.2%)与33例(57.9%)、良性腹水组分别为:4例(7.0%)与6例(10.5%),组间各指标阳性结果均具有极显著性差异(P<0.01)。TA与CEA诊断恶性腹水的特异性、敏感性、阳性预测值、阴性预测值、准确性分别为:93%与89.5%,84.2%与57.9%,92.3%与84.6%,91.4%与57.9%,87%与73.7%。结论:TA是良好的诊断恶性腹水指标,其诊断价值高于CEA。

端粒酶在萎缩性胃炎大鼠胃黏膜组织中的表达及胃乐益对其影响

目的观察胃乐益对萎缩性胃炎大鼠胃黏膜组织中端粒酶活性的抑制作用。方法将80只大鼠随机分为4组,即正常对照组、模型组、胃乐益治疗组(胃乐益组)、生理盐水对照组(生理盐水组),观察各组胃黏膜组织病理学改变,并应用端粒重复扩增法测定各组胃黏膜组织中端粒酶的活性。结果正常对照组胃粘膜未呈现端粒酶活性,模型组、胃乐益组、生理盐水组端粒酶阳性率分别为60%、25%、55%,胃乐益组与模型组、生理盐水组比较差异均有显著性(P＜0．01)。结论胃乐益对端粒酶的激活有一定的抑制作用,胃乐益治疗慢性萎缩性胃炎作用机制之一可能与其一定程度抑制端粒酶活性有关。

粪中脱落细胞端粒酶活性检测筛查大肠癌初探

目的探讨粪中脱落细胞端粒酶活性检测筛查大肠癌的敏感性和特异性。方法对45例大肠癌患者,34例非大肠癌患者,从新鲜大便中分离脱落细胞并裂角,用聚合酶链端粒重复扩增(PCR-TRAP)银染技术观察端粒酶活性表达情况。同时采用试纸法做受检者粪隐血试验。结果45例大肠癌患者粪便标本中有30例端粒酶阳性表达,1例大肠腺瘤、1例溃疡性结肠炎端粒酶表达为阳性,提示粪便脱落细胞端粒酶活性检测对大肠癌的敏感性为66.67%,特异性为94.12%。粪便隐血试验中大肠癌的敏感性为82.22%,特异性为58.82%。两种方法对大肠癌阳性检出率差异无显著性(P>0.05)。端粒酶阳性表达与其大肠癌Duke’s分期、淋巴结转移和癌肿部位均未见显著相关(P>0.05)。结论粪中脱落细胞端粒酶活性检测有望成为一种新的大肠癌筛选方法。

手术对肺癌患者外周血中癌细胞端粒酶活性的影响

目的:检测肺癌患者手术前后外周血中癌细胞端粒酶活性,了解手术对其影响及意义。方法:应用端粒酶重复序列扩增法(PCR-TRAP)检测30例肺癌患者手术前及术后第5天外周血中癌细胞端粒酶活性,随访其预后。本院同期30例非肿瘤患者为对照组。结果:非肿瘤患者外周血端粒酶活性均为阴性,肺癌患者手术前后阳性率分别为60%(18/30)及50%(15/30),手术前后阳性率无显著差异(P>0.05),手术后有6例端粒酶活性上升,其中4例存活不足1年;15例端粒酶活性明显下降(P<0.01),其中6例转阴性,15例存活均超过1年。结论:肺癌患者外周血端粒酶活性可能对诊断、指导治疗、判断预后有参考价值,手术治疗能减少外周血中癌细胞。

ATM对辐射后AT细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨ATM对电离辐射照射的毛细血管扩张共济失调症(ataxia telangiectasia,AT)患者皮肤的成纤维细胞系AT细胞(ATSBIVA)端粒酶活性的影响。方法:以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(GM0639)为对照,应用基于PCR的端粒重复扩增技术(telomeric repeat amplification protocal,TRAP)与高效液相色谱(HPLC)技术,定量分析细胞分别经0、1、3、5 Gy 60Coγ射线照射后以及经3 Gy 60Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72 h,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞的端粒酶活性的变化。结果:未照射时,除GM细胞外,AT、空载体AT、ATM+-AT细胞均呈现较高的端粒酶活性表达,但ATM+-AT细胞的端粒酶活性明显低于AT和空载体AT细胞的端粒酶活性(P<0．01),而后二者无明显差异(P> 0．05);电离辐射照射后,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞的端粒酶活性均呈剂量依赖性和时间依赖性增强,且在相同剂量点与时间点,ATM+-AT细胞的端粒酶活性高于GM细胞(P<0．01)(除5 Gy计量点外),但低于AT和空载体AT细胞(P<0．01),而后二者无明显差异(P>0．05)。结论:电离辐射可诱导细胞端粒酶活性表达;并且细胞端粒酶活性水平随剂量与时间的增加而增加;ATM可下调AT细胞端粒酶活性水平。推测端粒酶参与电离辐射诱导DNA损伤的修复。

端粒酶和erbB4基因在非小细胞肺癌中表达的研究

目的研究端粒酶和erbB4基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与肺癌临床、病理的关系。方法应用TRAP法测定56例肺癌组织标本中端粒酶的表达。同时应用免疫组化法检测56例肺癌石蜡组织中erbB4的表达。记录56例肺癌患者5年生存情况。结果NSCLC组织中端粒酶和erbB4阳性表达率分别为75%(42/56)及89.3%(50/56)。端粒酶、erbB4表达与不表达在临床分期组间的差异有统计学意义(P=0.004、0.005),端粒酶表达与不表达患者5年生存率差异有统计学意义(P=0.0005)。结论检测端粒酶及erbB4表达有助于判断NSCLC临床特点及预后。

以端粒酶为靶治疗肺癌研究进展

端粒酶是一种可以维持端粒长度的RNA酶,抑制端粒酶可能会使端粒缩短并使肿瘤无限增殖停止。该文就端粒酶在肺癌治疗中的研究进展作一综述。

管花肉苁蓉麦角甾苷对衰老小鼠端粒酶活性和免疫功能的影响

目的观察管花肉苁蓉麦角甾苷(CTWA)对实验性衰老小鼠心、肝和脑组织中丙二醛(MDA)含量、端粒酶活性和免疫功能的影响。方法小鼠sc 10%D-半乳糖10mL·kg-1,每天1次,连续8周,建立亚急性衰老模型。给药组小鼠从造模第9周起,分别ig给予CTWA 10,20和40mg·kg-1,每天1次,连续2周。硫代巴比妥酸比色法检测MDA含量;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;[3H]TdR掺入法测定淋巴细胞增殖反应;中性红实验测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;放射免疫法测定外周血白细胞介素2(IL-2)含量。结果模型组小鼠心、肝和脑MDA含量明显增加,心和肝端粒酶活性明显降低,淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血IL-2含量均显著下降。给予CTWA 2周,小鼠心、肝和脑MDA含量明显降低,CTWA 40mg·kg-1组小鼠心和脑组织端粒酶活性明显升高,淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血IL-2含量明显升高。结论CTWA能拮抗自由基损伤,增强衰老小鼠心和脑组织端粒酶活性和机体免疫功能,这些可能与CTWA的抗衰老作用有关。

脂质体介导的cripto反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞端粒酶活性

目的:探讨cripto反义寡核苷酸(ASODN)对结肠癌细胞端粒酶活性的影响。方法:应用脂质体瞬时转染法介导cripto反义寡核苷酸,处理人结肠癌细胞系后,分别采用实时定量PCR检测cripto mRNA表达,用TRAP检测端粒酶活性,采用软琼脂集落培养试验检测结肠癌细胞的生长。结果:Cripto ASODN可有效抑制结肠癌细胞集落生长,且与浓度相关。结肠癌细胞经Cripto ASODN转染后,端粒酶活性明显受到抑制,呈作用浓度和时间依赖性。并与ASODN的浓度和处理时间有关。结论:cripto基因可能参与对结肠癌细胞端粒酶活性的调控。

黄精多糖对App转基因小鼠大脑及性腺组织端粒酶活性的影响

目的探讨黄精多糖对实验性阿尔采末病小鼠脑组织端粒酶活性的影响。方法24只App转基因小鼠随机分为对照组、黄精多糖治疗组和维生素E治疗组。各组分别予以注射用水、黄精多糖溶液和维生素E溶液1mL灌胃,连续6wk。采用端粒重复扩增-微孔板杂交法检测App转基因小鼠大脑组织端粒酶活性。结果经黄精多糖治疗后,App转基因小鼠大脑组织端粒酶活性显著升高。结论黄精多糖可升高App转基因小鼠大脑组织端粒酶活性,可能具有延缓神经细胞衰老的作用。