一组端粒相关蛋白分子的克隆

目的:进一步了解端粒酶的生物学功能及其在永生化或肿瘤细胞中作用的分子机制,筛选新的端粒相关蛋白分子.方法:基于酵母双杂交技术原理,采用DNA重组技术构建诱饵融合蛋白表达载体,筛选cDNA文库,β-半乳糖苷酶滤膜影印分析确证阳性克隆,对阳性克隆质粒测序并在GenBank进行cDNA序列同源性比较.结果:AH109、Y187酵母菌基因表型稳定,无His渗漏表达.成功构建端粒酶催化亚单位诱饵融合蛋白表达载体pGBKT7-hTERT,其表达的融合蛋白对AH109酵母细胞生长无毒性且不具有激活自身报告基因(LacZ)的作用.从cDNA文库中筛选到Ade+、Leu+、Trp+和His+阳性克隆28个,β-半乳糖苷酶菌落影印滤膜分析筛选到Ade+、His+和LacZ+阳性克隆12个,其中有5个文库质粒具有自身激活报告基因的作用,予以弃除.7个阳性克隆质粒测序发现有2个为重复序列,cDNA序列同源性比较最终获得6个已收录人cDNA序列,他们分别为T-STAR、PAWR、I-1、SMARCB1、LOXL3和HKR3.结论:获取新的端粒相关蛋白可了解端粒酶全酶的结构及其在肿瘤、细胞永生化的生物学功能及分子机制,为肿瘤、衰老的发生及防治奠定重要的理论基础.

MDS患者端粒相关蛋白TRF1基因的表达

目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者骨髓端粒相关蛋白TRF1 mRNA的表达水平,以研究其在MDS发生发展中的作用。方法以实时定量RT-PCR方法,检测24例MDS患者和8例对照骨髓TRF1 mRNA表达水平,以SPSS11.5软件进行统计分析。结果MDS患者骨髓均表达TRF1,初诊低危组和高危组TRF1 mRNA的表达均升高(P<0.005)。随着病情的进展,TRF1表达升高(P<0.005);随着病情的改善,TRF1表达降低(P<0.01)。结论TRF1 mRNA随着病情变化在MDS患者骨髓的表达改变,提示TRF1作为端粒长度的负性调节因子,是揭示MDS预后的不良因素之一。

胎儿心肌细胞端粒相关蛋白的表达

目的探讨端粒酶逆转录酶(TERT)、端粒酶相关蛋白1(TP1)和端粒重复结合因子2(TRF2)表达与心肌细胞分化和发育的关系。方法应用S-P免疫组化方法分别对不同月份胎儿心肌细胞TERT、TP1和TRF2蛋白表达进行检测。结果胎儿心肌细胞核中TERT的表达随胎龄增加而减少;胎儿心肌细胞胞浆TP1和TRF2的表达随胎龄增加而增加。结论TERT、TP1和TRF2表达方式可能促使部分心肌细胞永久退出细胞周期而进入终末分化和肥大阶段。

端粒相关蛋白TIN2

TIN2(TRF1相互作用核蛋白2)是一重要的端粒相关蛋白。人TIN2蛋白包括N端,TRF1交互作用区(TRF1-Int)和C端3个结构域。它在TRF1复合物、TRF2复合物和Shelterin的功能中扮演关键角色,协同其它端粒蛋白维持端粒长度、结构和功能。TIN2与个体发育、细胞分化和肿瘤发生密切相关。

端粒结构及其相关蛋白对端粒长度调控的研究进展

哺乳类动物染色体末端由一段特殊的TTAGGG重复序列及其相关蛋白组成 ,并形成T环和D环结构 ,称作端粒。端粒 3′伸出端由于富含碱基G ,可形成稳定的G 四联体结构。端粒自身的这些结构及其相关蛋白TRF1、TRF2、TIN2、端锚聚合酶等对端粒长度起着重要的调控作用。

人端粒相关蛋白

端粒是染色体末端的特殊结构,由端粒DNA与端粒蛋白构成,维持染色体的稳定。端粒相关蛋白直接影响端粒的功能,调节端粒DNA的长度,与细胞的衰老和癌变密切相关。端粒蛋白包括端粒双链DNA结合蛋白、端粒单链DNA结合蛋白、其它端粒相关蛋白。端粒结合蛋白直接保护端粒DNA,端粒相关蛋白通过与端粒结合蛋白的相互作用间接影响端粒的功能。本文对这些端粒相关蛋白的细胞生物学功能的研究进展进行概述。

链霉菌中一类同源非典型端粒的克隆及分析

采用自连接-PCR的方法克隆和测序了Streptomyces cattleya DSM46488、Streptomyces mobaraensisDSM40847及Streptomyces davawensisJCM4913的端粒,序列比对发现,这3种端粒具有较高的序列相似性,前60个核苷酸的序列相似性达到了80%以上;在二级结构水平,这些端粒含有多个回文序列,其中,包含相同的回文序列I和II,但并不能通过折返形成超级发夹结构;Streptomyces cattleya DSM46488、StreptomycesmobaraensisDSM40847及Streptomyces davawensis JCM4913的端粒与线性质粒pSHJG1端粒及Streptomyces albus J1074染色体端粒均具有较高的序列相似性;系统发育分析显示它们与典型端粒及其他非典型端粒处于不同的进化分支,S.cattleyaDSM46488、S.mobaraensis DSM40847、S.davawensisJCM4913、S.albus J1074及S.hydroscopicussubsp.Jinggangensis 5008都编码同源的潜在末端蛋白-端粒相关蛋白,暗示了这类同源的非典型端粒系统广泛存在于链霉菌中。

人端粒酶催化亚单位及其相关蛋白在骨肿瘤中的表达

目的:研究骨肿瘤中端粒酶相关基因中,人端粒酶催化亚单位(humantelomerasecatalyticsubunit,hTERT)和人端粒酶相关蛋白(humantelomeraseassociatedprotein,TP1)两个重要成分的表达及对评估肿瘤良、恶性的意义。方法:提取50例手术切除骨肿瘤组织、2种人成骨肉瘤细胞系Saos-2、OS732和原代培养人成骨细胞的总RNA。用一步RT-PCR方法检测hTERT和TP1mRNA的表达。结果:所有骨肿瘤标本及细胞系均检测到TP1的表达。hTERT在17例良性骨肿瘤、33例骨肉瘤、2种人成骨肉瘤细胞系和人成骨细胞的表达率分别为64.7%、57.6%、0%和0%。良、恶性骨肿瘤间hTERT表达的差异不具有显著性(P>0.05),不同分化程度骨肉瘤间hTERT表达的差异也不具有显著性(P>0.05)。结论:一步RT-PCR是检测端粒酶亚单位的有效方法。hTERT和TP1表达水平的上调在骨肿瘤恶性进展中可能不起主要作用,在骨肿瘤发展和维持中可能有替代性(ALT)机制导致细胞永生化。

星形细胞胶质瘤中生存素、周期蛋白E和端粒酶相关蛋白的表达与意义

目的探讨生存素(survivin)、周期蛋白E(cyclin E)和端粒酶相关蛋白(hTP1)在星形细胞胶质瘤中的表达与意义。方法应用免疫组织化学SP法、原位杂交法分别检测106例星形细胞胶质瘤组织中生存素、周期蛋白E和hTP1的表达,分析它们之间的相互关系。结果生存素定位于肿瘤细胞胞浆,周期蛋白E和hTP1主要定位于肿瘤细胞核。生存素、周期蛋白E和hTP1的阳性表达率分别为55.7%(59/106)、61.3%(65/106)和84.9%(90/106)。生存素、周期蛋白E表达和hTP1标记指数均与星形细胞胶质瘤病理分级密切相关(P<0.05)。生存素和周期蛋白E阳性共表达率均为50.9%(54/106),两者的表达呈正相关(P<0.01)。生存素、周期蛋白E表达与hTP1标记指数有相关性(P<0.01)。结论生存素、周期蛋白E和hTP1表达与星形细胞胶质瘤恶性程度有关,其表达异常可能在星形细胞胶质瘤的形成和恶变中发挥重要作用。

端粒锌指相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床病理意义

目的端粒锌指相关蛋白(ZBTB48)在乳腺癌中的表达及其临床病理意义。方法选取2014年1月-2015年12月90例在湖南省肿瘤医院接受手术切除的乳腺癌标本及配对正常组织,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测ZBTB48的信使核糖核酸(m RNA)表达水平,免疫组织化学检测ZBTB48、Ki-67的蛋白表达水平,分析ZBTB48的表达水平与临床病理因素的相关性;利用网络公共数据库,分析ZBTB48的表达水平与患者预后的关系。结果 ZBTB48 m RNA的表达水平在癌组织中比正常组织中低,差异有统计学意义(P=0.029);ZBTB48蛋白的表达水平在癌组织中比正常组织低,差异有统计学意义(P=0.000);ZBTB48蛋白的表达水平与Ki-67蛋白的表达水平呈负相关(P=0.0005);ZBTB48的m RNA表达水平与年龄、肿瘤大小、分化程度及TNM分期相关;ZBTB48的表达水平低则乳腺癌患者的预后差。结论 ZBTB48低表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、分化程度及TNM分期有关,是乳腺癌患者预后差的危险因素。

寄生原虫端粒蛋白研究进展

端粒蛋白是指那些直接或间接与端粒结合的蛋白组分。近年来寄生虫端粒蛋白研究引起了人们广泛的关注,为寄生虫病的研究提供了新的思路。端粒蛋白具有维持染色体稳定和细胞周期调控等多种功能,共同参与寄生虫生命周期的调节,同时也为寄生虫病的预防和治疗开辟了新的途径。论文主要综述了包括TRFs、Rap1、TERT、RPA、Sir2和Orc1、Gbp、Ku、Rbp38以及LaTBP1等原虫端粒蛋白及其功能,以期为寻找新的防治寄生虫病的靶点提供借鉴。

西南医院发现端粒酶相关蛋白

第三军医大学西南医院陈兵教授带领的研究小组日前发现六种与人端粒酶催化亚单位相互作用的蛋白。

端粒及其对相关疾病的影响

端粒由简单的DNA(脱氧核糖核酸)高度串联重复序列TTAGGG组成,其位于染色体的末端,端粒DNA与端粒相关的蛋白质对端粒的功能具有重要作用.端粒酶可以合成端粒DNA序列,从而对维持端粒的功能和稳定、基因的完整性及细胞增殖能力具有重要作用.端粒的长度随着年龄的增长和细胞不断分裂而逐渐缩短,这将导致体细胞衰老或发生致癌转化,进而影响健康个体的存活寿命,因此端粒被称为细胞寿命的"生物钟".高的疾病发生率及低存活率均被认为与端粒的缩短密切相关.本文主要介绍了端粒、端粒酶及端粒相关蛋白复合体(shelterins)三者之间的相互关系.一些促进端粒损耗的内源性及外源性因子可导致多种与端粒相关的疾病的发生,包括衰老、癌症、造血缺陷和心血管疾病等.这些发现有助于我们对端粒的理解,并为进一步预防和治疗端粒相关疾病奠定了基础.

TZAP蛋白在乳腺导管癌中的表达及临床意义

目的:观察端粒锌指相关蛋白(TZAP)在乳腺导管癌及癌旁非瘤组织中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化法检测145例乳腺浸润性导管癌、35例导管原位癌及癌旁正常乳腺组织中TZAP的表达,分析其表达与临床病理特征的关系。结果:与癌旁正常乳腺组织100%强阳性相比(180/180),TZAP蛋白在乳腺导管内癌中虽然都有着色(总阳性率100%,35/35),但总体表达下调(其中强阳性率5.71%,2/35;中等阳性率68.57%,24/35;弱阳性率25.71%,9/35);在浸润性导管癌中表达下调更明显(阳性率为45.52%,66/145;阴性率为54.48%,79/145)。TZAP阴性的病例具有组织学分级较高、肿瘤体积较大、有淋巴结转移、HER2基因有扩增、Ki67增殖指数较高、TNM分期较高的特点,表明TZAP表达下调与乳腺导管癌的发生和进展有关。结论:TZAP在乳腺导管癌组织中表达下调,可能在其发生和恶性进展中起重要作用。

端粒复合体与冠心病的研究进展

端粒复合体由端粒DNA、端粒相关蛋白、端粒酶共同构成,是维持染色体DNA稳定的重要结构。多种心血管危险因素和不良生活方式均可造成端粒缩短加快,而健康的生活方式及他汀类药物则可减缓端粒缩短。在细胞、动物等研究基础上,多项端粒复合体与冠心病相关的临床研究,阐明了端粒复合体功能失调在冠心病的发生、发展、预后中起到的重要作用。冠心病患者外周血白细胞端粒长度明显缩短,端粒长度短是心血管事件再发的一个独立的危险因素,具有预测心血管事件预后的价值。目前,针对端粒长度缩短与冠心病相关的机制、端粒相关蛋白与冠心病的相关性以及白细胞亚群的研究等方面尚有研究空间。

胶质瘤细胞端粒酶基因表达对其增殖及凋亡影响的研究

背景与目的:端粒酶逆转录酶(hTERT)和端粒酶相关蛋白1(hTP1)是人端粒酶的重要组成部分。已知胶质瘤细胞有端粒酶异常再活化,而hTERT和hTP1基因表达是否也相应增加,尚不清楚。本研究是为了探讨胶质瘤细胞hTERT和hTP1基因表达、增殖活性及凋亡程度变化的相互关系及其在胶质瘤发生、发展中的作用。方法:采用mRNA原位杂交、免疫组织化学染色及原位细胞凋亡检测(TUNEL)等方法观察了70例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果:本组70例胶质瘤hTERTmRNA和蛋白的阳性表达率分别为88.6%和82.9%,WHOI￣II级组、III级组及IV级组间比较二者的阳性表达率均无显著性差异(P>0.05),hTP1mRNA和蛋白及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的阳性表达率均为100%。以上五种阳性肿瘤细胞的密度彼此间均呈显著性正相关(r=0.589￣0.882,P<0.0005),并均随肿瘤级别升高而相应增加,不同级别组间比较差异均有显著性(P<0.05￣0.01)。凋亡肿瘤细胞的检出率也为100%,但凋亡肿瘤细胞密度随肿瘤级别升高而相应减少,不同级别组间比较差异均有显著性(P<0.01),且与前五种阳性肿瘤细胞密度间均呈显著性负相关(r=-0.551￣-0.775,P<0.0005)。结论:以上指标对评价胶质瘤的生物学行为均有重要参考价值,胶质瘤细胞hTERT和hTP1基因异常表达是其端粒酶再活化的先决条件,后者通过抑制肿瘤细胞衰老凋亡和促进其增殖在胶质瘤的发生、发展过程中均起重要作用。