慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1沉默调控子宫内膜基质细胞蜕膜化与自噬

目的探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制。方法收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况。从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E_(2))+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E_(2)+P4组、sh-SF-1+E_(2)+P4组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平。结果EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05)。与sh-NC+E_(2)+P4组比较,sh-SF-1+E_(2)+P4组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05)。结论EM患者子宫内膜组织内SF-1表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关。

类固醇生成因子-1对青春期小鼠睾丸中睾酮生成及精子发生的调节

目的 探讨类固醇生成因子 1(SF 1)对青春期小鼠睾丸内分泌功能及精子发生过程的调节作用 ,并推测其可能机制。 方法 用免疫组织化学方法定位SF 1在不同年龄小鼠睾丸中的细胞分布 ,进一步分离有SF 1阳性表达信号的青春期小鼠Leydig细胞在体外进行培养 ,用反义转染方法抑制细胞内SF 1蛋白质的表达 ,检测细胞的睾酮分泌量及睾酮生成酶P4 5 0scc的mRNA水平变化。 结果 1 SF 1在青春期Leydig细胞核有表达 ;反义抑制细胞内SF 1蛋白质的表达 ,则细胞的睾酮分泌量及P4 5 0sccmRNA水平均显著下降 ;2 SF 1在青春期小鼠睾丸B型精原细胞及细线期、偶线期、粗线期的初级精母细胞核中也有表达。 结论 1 SF 1参与调节青春期睾丸Leydig细胞中P4 5 0scc基因的转录 ,影响睾酮分泌 ;2 SF 1作为一种核受体 ,可能也是生精过程中重要的转录调控因子 ,调节B型精原细胞向初级精母细胞分化及初级精母细胞第 1次减数分裂过程中特异表达的基因转录过程 ,从而影响青春期小鼠精子发生过程。

类固醇生成因子-1基因异常可导致46,XY严重睾丸发育不全

目的:在46,XY尿道下裂或隐睾病例中寻找类固醇生成因子-1(Steroidogenic factor-1,SF-1)基因异常情况,通过分析基因型与患儿表型的关系揭示SF-1基因在人类性腺分化发育中的作用机制。方法:收集60例46,XY尿道下裂或隐睾且肾上腺功能正常的患者和40例外生殖器发育正常的男性儿童分别为病例组和正常对照组,对所有研究对象的SF-1基因进行测序,测序结果用标准核苷酸BLAST软件进行序列比对。结果:本研究发现了1例SF-1基因突变,为杂合子缺失c.11835delC。该患儿的表型为尿道下裂会阴型伴双侧隐睾、生后呈女性外阴,严重的男性化不全。此外,还发现1个SF-1基因多态性位点rs1110061(G/C),等位基因G/C的频率在病例组及正常对照组中分布无明显统计学差异。结论:SF-1基因异常可能是46,XY尿道下裂或隐睾患儿的病因之一,其表型为46,XY严重男性化不全、严重睾丸发育异常。

类固醇生成因子-1基因G146A多态性与2型糖尿病的相关性

目的探讨类固醇生成因子-1(SF-1)基因G146A多态性与2型糖尿病及其胰岛素抵抗的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,对151例2型糖尿病患者(病例组)与141名非糖尿病患者(对照组)G146A位点进行分析。结果对照组SF-1 G146A中G／A+A／A基因频率为46．8％,显著低于病例组的58．3％(P=0．04)。病例组A等位基因频率明显高于对照组(P=0．01)。病例组中,G／A+A／A基因型携带者的空腹胰岛素水平、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及稳态模型评估胰岛β细胞分泌功能(HOMA-β)均显著高于G／G型携带者(P值均<0．05)。结论SF-1基因G146A多态性可能是发生2型糖尿病的易感因素,且与胰岛素抵抗作用相关。

类固醇生成因子-1与代谢综合征关系的研究进展

类固醇生成因子-1(SF-1)是一种孤儿核受体,在人类下丘脑、垂体、肾上腺和性腺等组织中均有表达,对内分泌器官的分化和发育,以及内分泌系统的代谢调节发挥重要的作用。通过对SF-1基因敲除小鼠模型的研究以及对人类SF-1基因突变表现型的分析,逐步明确SF-1在下丘脑—垂体—肾上腺轴和下丘脑—垂体—性腺轴的各个环节均参与调控。最近有研究表明,SF-1基因的突变和缺失,将导致一系列内分泌系统的代谢紊乱,最终导致糖尿病、肥胖和高血压等一系列代谢综合征的症候群。文章就SF-1与代谢综合征关系的研究进展作一综述。

类固醇生成因子-1启动子甲基化状态及其基因表达在子宫内膜癌中的临床意义

目的:探讨子宫内膜癌(EC)组织中类固醇生成因子-1(SF-1)启动子甲基化状态、基因表达及其临床意义。方法:应用亚硫酸氢测序、蛋白免疫印迹法、免疫组化检测重庆医科大学附属第一医院2013年1月至2014年8月收治的60例EC患者的术后标本、30例癌旁组织和20例正常子宫内膜组织中SF-1启动子甲基化状态和基因的表达,分析SF-1蛋白表达与肿瘤临床病理特征的关系。结果:(1)与癌旁组织和正常子宫内膜组织相比,EC组织中SF-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。(2)SF-1蛋白的表达在不同的组织分级和病理类型的比较,差异有统计学意义(P<0.05),在不同的年龄、手术病理分期、肌层浸润深度和淋巴结转移间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)DNA甲基转移酶(DNMT)3a和DNMT3b在EC组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05)。(4)EC组织中SF-1基因启动子区甲基化胞嘧啶百分比显著低于癌旁组织(8.2%vs 40.9%,P<0.05)。结论:EC组织中SF-1启动子呈低甲基化,SF-1蛋白表达显著增高,SF-1蛋白异常高表达与患者的临床病理特征有关,可能促进EC的发生、发展。

7例儿童原发性肾上腺皮质功能减退症临床特征及NR0B1、类固醇生成因子-1基因突变分析

目的观察儿童原发性肾上腺皮质功能减退症(PAI)的临床特征及NR0B1、类固醇生成因子-1(SF1)基因的突变情况,并分析两者关系。方法 7例PAI患者,分别来自5个家系,记录其临床症状、体征以及血促肾上腺皮质激素(ACTH)、血皮质醇、电解质等实验室检查结果,采集患者及其家系成员的外周血进行NR0B1和SF1基因外显子测序,对测序结果阴性者进行多重连接探针扩增技术(MLPA)检测。结果 7例患者均为男性,均由儿童期起病,其中3例有家族史。全部患者均有不同程度的皮肤色素沉着、血ACTH升高及血皮质醇降低。仅1例患者存在NR0B1插入突变(5800-5801 ins G),但无肾上腺危象、低促性腺激素性性腺功能减退和生殖发育异常等表现;其母亲同时存在NR0B1同义突变(5129C>T,C38C)和插入突变(5800-5801 insG),但无肾上腺皮质功能减退表现。所有患者及其家系成员均未检测到SF1基因突变,MLPA检测亦未发现NR0B1和SF1存在大片段缺失或重复改变。结论儿童期PAI以遗传因素为主要病因,可能由先天性肾上腺皮质发育不良(AHC)所致,且NR0B1突变的区域、类型可能与临床表型的严重程度密切相关。除AHC外,可能存在X连锁致病基因导致PAI。

类固醇生成因子-1在肾上腺肿瘤中的诊断及预后价值

目前尚无可靠的免疫组织化学标志能有效鉴别肾上腺皮质瘤与其他肾上腺肿块。尽管一些标志，如melan—A和inhibin—a目前已被临床应用，但其诊断准确性极其有限。

类固醇生成因子-1基因沉默对人肾上腺皮质腺癌H295R细胞的作用及其临床意义

目的研究类固醇生成因子-1（SF-1）基因下调对人肾上腺皮质腺癌H295R细胞的影响，并探讨SF-1在肾上腺肿瘤发病中的作用。方法用含SF-1特异性短发夹（shRNA）序列的质粒载体pGenesill—SF1shRNA及含非特异性序列的阴性对照质粒pGenesill—negative-shRNA分别转染H295R细胞。48h后用蛋白质印迹法和荧光定量PCR检测SF-1表达水平。WST-1法及细胞计数法检测转染后细胞增殖情况，免疫组化SABC法检测转染后各细胞组中Ki67表达，TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果SF-1-shRNA有效地抑制了SF—1的表达，在蛋白水平和mRNA水平的抑制率分别为69．07％和71．02％（P〈0．01）。WST-1及细胞计数法均显示SF-1基因沉默组细胞增殖缓慢，增殖明显受到抑制（P〈0．01）；而TUNEL结果恰好相反，荧光镜下SF-1基因沉默组凋亡细胞的数目及形态均比较明显，凋亡细胞数约为阴性对照组的3．7倍（P〈0．01）；SF-1基因干扰后，其Ki-67阳性细胞率要低于阴性对照组细胞，分别为（16．90±2．17）％和（33．48±3．16）％（P〈0．01）。结论SF-1基因沉默可抑制肾上腺皮质腺癌细胞增殖，有望成为研究肾上腺肿瘤发病机制及其治疗的重要分子。

类固醇生成因子-1(SF-1)的研究进展

类固醇生成因子-1(SF-1),又被称为Ad4BP或NR5A1,是孤儿核受体家族成员,在类固醇生成、脑和垂体激素调控、肾上腺肿瘤发生中发挥着关键作用,是肾上腺和性腺发育及功能的重要调控因子。最近几年,SF-1的研究取得了很大进展,本文将对SF-1的发现、分子结构、体内表达进行简述,重点阐述SF-1调控的靶基因、转录激活功能调控在生理病理中的研究,特别是相关的拮抗药物进展等几个方面。

类固醇生成因子-1在醛固酮瘤中的表达及意义

目的 探讨类固醇生成因子-1（SF-1）在原发性醛固酮增多症（PA）发病中的作用.方法 分别收集16例醛固酮瘤组织标本和12例正常肾上腺组织标本,Western b1ot法检测各标本SF-1蛋白表达水平,荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测其mRNA表达水平.结果 醛固酮瘤组SF-1无论在蛋白表达水平还是在mRNA表达水平均高于正常肾上腺组,蛋白表达水平分别为（0.87±0.05和0.39±0.07,P＜0.01）,mRNA水平则前者是后者的10.48倍（P＜0.01）,差异均有统计学意义.结论 SF-1表达上调在PA的发病中发挥着重要作用.

类固醇生成因子-1表达下调在介导促肾上腺皮质激素对H295R细胞醛固酮和皮质醇急慢性分泌调控中的作用

目的 观察促肾上腺皮质激素（ACTH）刺激人肾上腺皮质癌H295R细胞后对醛固酮和皮质醇的调控影响,并探讨类固醇生成因子-1（SF-1）基因沉默在介导该反应中的作用.方法 用慢病毒包装携带SF-1特异性短发夹RNA（shRNA）序列的载体pLVX-shRNA-SF-1,同时设立阴性及空白对照组,转染人肾上腺皮质癌H295R细胞,转染后48 h应用Western blot和实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）法检测SF-1表达水平.设置100 nmol/L ACTH刺激实验组和对照组细胞,检测刺激1h后类固醇急性调节蛋白（StAR） mRNA表达水平,检测刺激48 h后醛固酮合成酶CYP11B2和皮质醇合成酶CYP11B1 mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定同时期醛固酮和皮质醇激素的含量,比较两组细胞醛固酮和皮质醇增幅.结果 实验组细胞SF-1在蛋白水平和mRNA水平分别下降了69％和71％ （P＜0.05）.ACTH刺激1h时实验组比对照组StARmRNA表达水平升高1.4倍,两组细胞醛固酮水平分别为（91.59 ±4.28）和（79.90±2.41） ng/L（P＜0.05）,但皮质醇水平分别为（23.72±1.50）和（23.74±1.40） ng/L（P ＞0.05）.刺激48 h时实验组CYP11B2基因表达水平是对照组细胞的13倍,但醛固酮表达含量分别为（129.50 ±6.87）、（131.52 ±7.56） ng/L（P＞0.05）;实验组CYB11 B1 mRNA表达水平仅为对照组细胞的1.18倍（P＞0.05）,但皮质醇含量为（28.95 ±1.51）和（33.08±1.67） ng/L（P＜0.05）.两种激素在ACTH刺激后对比各自增幅,对照组分别为实验组的1.37倍和1.80倍（P＜0.05）.结论 SF-1表达下调可以降低醛固酮和皮质醇对ACTH的敏感性和反应性.

孤核受体类固醇生成因子-1缺陷与性腺发育

孤核受体类固醇生成因子-1（SF-1）是核受体超家族的成员之一,参与人体肾上腺和性腺组织发育、类固醇激素合成和生殖功能等多种相关基因的表达与调控.到目前为止,人类已发现25种SF-1基因突变,其临床表现轻重不一,检测SF-1基因缺陷可能有助于明确46,XY性发育障碍患者的分子病因诊断.

小阴茎儿童类固醇生成因子-1基因异常研究

目的探寻45例小阴茎儿童类固醇生成因子-1(steroidogenic factor-1,SF1)的基因异常情况,进一步了解突变对阴茎分化、发育及性腺功能的影响。方法收集2011年10月至2013年2月就诊于上海市儿童医院内分泌科的小阴茎患儿并选取50名健康儿童做对照。抽取其外周血标本提取DNA,PCR扩增产物并进行SF1基因测序分析。测序结果用比对软件Sequencher进行序列比对。结果在45例患儿中检测到14例突变,共4种;其中10例突变为c.437G>C(p.G146A),经Pubmed的单核苷酸多态性(SNP)库证实为多态性,其rs编号rs1110061,对该SNP位点进行Hardy-Weinberg群体遗传平衡检验,结果P值均>0.05,符合群体遗传平衡,组间各基因型(GG、GC、CC)及等位基因(G/C)的频率在2组间的分布差异均无统计学意义。余4例突变集中在外显子4和6,包括2种未报道的错义突变及1种同义突变。2种错义突变分别是2例c.565C>T(p.P189S)突变,1例c.1056G>T(p.Q352H)突变;1例同义突变是1062(G>A)。运用Polyhen及Mutaion-tastor软件预测1056(G>T)造成的Q352H氨基酸改变引起疾病,而c.565C>T(p.P189S)突变预测对蛋白功能无明显影响。结论 SF1基因异常是单纯性小阴茎患儿的少见病因,仅1例c.1056G>T(p.Q352H)突变可能是单纯性小阴茎患儿致病突变之一,该突变对下丘脑-垂体及睾丸性激素分泌功能无影响,对以后生育功能的影响有待随访;SF1的rs1110061多态性位点与小阴茎的发生无明显相关性,需扩大样本量进一步研究。

类固醇合成因子1在子宫内膜异位症发病机制中的作用

子宫内膜异位症(EMs)是一种雌激素依赖性疾病,局部雌激素的大量形成在EMs的发生与发展中发挥重要的作用。芳香化酶是雌激素合成过程中的关键酶。近年来研究已经证实,EMs患者的在位和异位内膜均有芳香化酶的异常高表达,而正常子宫内膜却无该酶的表达,且已有不少芳香化酶抑制剂治疗EMs成功的病例报道。然而最近的研究发现,类固醇合成因子1(SF-1)在正常子宫内膜基质细胞中不表达,而在异位内膜基质细胞中异常表达,SF-1是异位子宫内膜组织芳香化酶合成的主要调控者,EMs患者的异位和在位内膜中芳香化酶表达量直接受SF-1表达的影响,而SF-1表达的异常主要是由于表达该蛋白的基因启动子区的过甲基化。综述SF-1在EMs发病机制中作用的研究进展。

雌二醇对香猪睾丸中SF-1和3β-HSD及NOS表达的影响

为探明外源雌二醇（E2）对香猪睾丸中类固醇生成因子-1（SF-1）、3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）和一氧化氮合酶（NOS）表达的影响,以便进一步探讨雌激素影响睾丸生殖功能的作用机制,将12头1日龄雄性贵州香猪随机平分为对照组（空白）、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组,试验Ⅰ～Ⅲ组从2日龄连续9d经腹腔每头每天分别注射E20.1mL、0.5mL和2.5mL,26日龄时手术取出左侧睾丸,采用酶联免疫吸附法测定SF-1、3β-HSD及NOS的含量。结果表明：与对照组相比,试验Ⅰ～Ⅲ组睾丸中SF-1、3β-HSD和NOS的表达量显著升高（P〈0.05）。其中,SF-1的表达量随E2用量增加显著升高（P〈0.05）;3β-HSD的表达量在E2用量为0.5mL/（d·头）时最高,在2.5mL/（d·头）时表达量又下降（P〈0.05）;NOS的表达量各试验组间差异不显著（P〉0.05）。E2能够促进新生香猪睾丸中SF-1、3β-HSD及NOS的表达。

SF-1和LRH-1在子宫内膜异位症卵巢颗粒细胞中的表达

目的分析类固醇生成因子-1(SF-1)、肝受体类似物-1(LRH-1)在子宫内膜异位症卵巢颗粒细胞中的表达。方法选取该院2016年2月至2017年2月收治的65例子宫内膜异位症患者作为观察组,另选同期65例女性健康体检者为对照组,对两组卵巢颗粒细胞中SF-1mRNA和LRH-1mRNA进行检测和比较。结果观察组SF-1mRNA和LRH-1mRNA表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组内不同分期患者SF-1mRNA和LRH-1mRNA表达水平存在差异,Ⅰ期+Ⅱ期>Ⅲ期>Ⅳ期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论子宫内膜异位症卵巢颗粒细胞中SF-1和LRH-1明显低于正常水平,分期越高,其水平越低,二者可能与子宫内膜异位症卵巢功能异常的病理机制相关。

类似卵巢性索肿瘤的子宫肿瘤4例及其临床病理特征

目的:类似卵巢性索肿瘤的子宫肿瘤(uterine tumor resembling ovarian sex cord tumor,UTROSCT)是发生于子宫体的罕见肿瘤。本研究旨在探讨UTROSCT的临床病理特点、诊断及鉴别诊断。方法:回顾性分析郑州大学第三附属医院2020年1月至2023年6月诊治的4例UTROSCT患者的临床病理资料、免疫组织化学及荧光原位杂交等检查结果,总结其病变特点。结果:4例患者年龄为44~59(中位数46.5)岁,3例因月经异常就诊,1例为体检发现。肿瘤直径为3.0~5.0(中位数4.1)cm,3例肿瘤位于黏膜下,1例位于肌壁间。彩色多普勒超声检查均提示不均质低回声,2例行宫腔镜下黏膜肌瘤电切术,1例行腹腔镜下全子宫加双侧输卵管切除术,1例行腹腔镜下全子宫加双附件切除术。4例患者随访2~42(中位数33.5)个月,均未见复发及转移。显微镜下肿瘤细胞呈片状、巢状、小梁状和条索状排列,3例肿瘤细胞由上皮样细胞构成,细胞中等大小,细胞质中等或稀少,部分细胞质透亮,1例肿瘤细胞由上皮样细胞和泡沫样细胞构成,其中泡沫样细胞大小较一致,胞质丰富,2种肿瘤细胞核呈圆形或卵圆形,染色质较细,可见核仁。4例肿瘤细胞均形态温和,未见明确坏死、脉管内瘤栓及病理性核分裂象。免疫组织化学显示肿瘤细胞表达波形蛋白(vimentin)(4/4)、细胞角蛋白(cytokeratins,CK)(3/4)、雌激素受体(estrogen receptor,ER)(4/4)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)(4/4)、白细胞分化抗原10(cluster of differentiation 10,CD10)(3/4),并且至少表达2种以上性索源性标志[钙网蛋白(calretinin)(3/4)、类固醇生成因子-1(steroidogenic factor-1,SF-1)(2/4)、白细胞分化抗原99(cluster of differentiation 99,CD99)(4/4)、神经细胞黏附分子(cluster of differentiation 56,CD56)(4/4)、α-抑制素(α-inhibin)(2/4)、肾母细胞瘤基因1(Wilms’tumor gene 1,WT-1)(3/4)]。4例肿瘤细胞均表达肌源性标志平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)(4/4)及结蛋白(desmin)(4/4),均不表达上皮膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)(0/4),增殖指数Ki-67为5%~10%。荧光原位杂交检测结果显示病例3和病例4 NCOA3基因断裂(2/4),病例1和病例2未见断裂;病例2未见JAZF1基因断裂(0/1)。结论:UTROSCT是一种非常罕见的子宫肿瘤,常见于中年女性,具有低度恶性倾向,彩色多普勒超声检查表现为不均质低回声,组织学形态、免疫组织化学及分子改变相结合有助于其诊断与鉴别诊断。