217份一粒系小麦苗期抗条锈病鉴定及抗病基因检测

小麦条锈病是影响小麦生产的重要病害之一。发掘新的抗病基因,培育新的抗病品种是防治小麦条锈病最经济有效的措施。一粒系小麦作为普通小麦的二级基因源,蕴含了丰富的抗病资源。为了从一粒系小麦中发掘新抗病基因,促进其利用,本文对217份一粒系小麦材料进行了苗期抗条锈病鉴定和A基因组的部分抗条锈病基因检测。结果表明,共有55份材料在苗期对CYR32表现抗病,占25.35%;抗病基因分子标记检测显示,携带Yr1、Yr34/Yr48、Yr69、Yr76抗性基因的材料分别有26、22、16、34份。共有4份表现高抗或免疫的材料同时携带2个抗性基因:2份材料携带Yr69和Yr34,2份携带Yr1和Yr34。所有供试材料中均未检测到Yr17。此外,有23份抗病材料未检测到以上抗病基因,其中7份表现高抗及免疫,可能携带其他已知或新的抗条锈病基因。本研究为一粒系小麦的利用提供了参考信息。

一粒系小麦遗传多样性分析及抗条锈菌CYR34鉴定

一粒系小麦(Einkorn wheat,AA)作为小麦的基础物种,在形成普通小麦的过程中染色体组部分位点丢失,评价一粒系小麦的遗传多样性及对病害抗性的水平对普通小麦育种和遗传改良具有重要的理论意义和育种价值。本研究利用15对条带清晰、多态性高的SSR引物对170份一粒系小麦材料进行遗传多样性分析,并接种条锈菌流行生理小种CYR34进行抗病性评价。结果表明,SSR分析获得71个等位变异,引物平均多态性信息含量为0.6540;聚类分析和群体结构分析均将170份供试材料分为两个类群,两类群内的平均遗传距离分别为0.4732和0.5404;抗病性评价获得19份抗性较好的材料,其中免疫材料3份,近免疫材料2份,高抗1份,中抗13份,占供试材料的11.17%;有3对SSR引物与一粒系小麦抗条锈病显著相关。综上所述,一粒系小麦存在较多的等位基因变异,含有优异的抗条锈病基因,具有提高小麦抗条锈病的育种潜力。

人粒系集落刺激因子(hG-CSF)cDNA于P_RP_L启动子作用下在大肠杆菌中的表达

hG—CSF cDNA在天然状态下很难在大肠杆菌中表达。本文以作者克隆的高活性形式hG—CSF cDNA为模板,经PCR扩增出含hG—CSF信号肽中丙氨酸(Ala)及成熟型全部氨基酸编码序列的cDNA片段,于NcoⅠ、BamHⅠ位点克隆于原核表达载体PJLA602中,用高活性hG—CSF特异探针菌落原位杂交筛选出阳性克隆。此克隆hG—CSF cDNA在λ噬菌体 P_RP_L串联启动子和大肠杆菌atpE翻译起始区(TIR)共同作用下,阳性菌株热诱导表达后经小鼠骨髓细胞体外CFU-G测试表明,表达产物具明显的粒细胞集落刺激活性。

当归多糖对人粒单系祖细胞和粒系白血病细胞株增殖分化的实验研究

目的 :研究当归多糖 (APS)对人粒单系造血祖细胞 (CFU -GM )和急性早幼粒白血病细胞株 (HL - 6 0 )增殖分化的影响。方法 :采用造血细胞体外培养 ,形态学观察 ,流式细胞术和免疫细胞化学等实验血液学技术。结果 :APS对正常CFU -GM的体外增殖有显著刺激作用 ;而对HL - 6 0细胞的增殖却有明显的抑制作用 ;APS可能通过阻止HL - 6 0细胞从静止期进入增殖周期 ,抑制DNA的合成等途径来抑制细胞增殖 ;APS可能诱导HL - 6 0细胞发生凋亡。结论 :APS有可能成为既能促进正常造血 ,又能抑制白血病等肿瘤细胞增殖 ,并诱导其凋亡或分化的天然诱导剂。

重组人粒系集落刺激因子对白血病细胞的作用

作者观察了重组人粒系集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）对ＨＬ一６Ｏ细胞和原代培养的急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞的作用，结果显示，ｒｈＧ一ＣＳＦ可刺激白血病细胞生长，并诱导部分ＡＭＬ细胞向粒系分化。提示ｒｈＧ一ＣＳＦ对白血病细胞存在着增殖与分化的双重作用，这种作用对改进白血病治疗可能产生重要影响。

白细胞介素－1对粒系细胞和红系细胞的正负调节作用

应用重组人白细胞介素－１β（γｈＩＬ－１β）对小鼠骨髓和外周血粒系细胞与红系细胞作用的研究表明：ＩＬ－１单剂量腹腔注射后ｄ７红系造血细胞明显减少，网织红细胞在ｄ８显著下降。５～１０万Ｕ·ｋｇ－１剂量范围内ＩＬ－１促进粒系细胞的增殖和分化成熟。应用流式细胞仪对骨髓细胞周期分析显示骨髓大体积细胞在注射ＩＬ－１后ｄ３Ｓ期细胞明显增多。我们的结果表明ＩＬ－１抑制红系造血细胞的分化增殖，在适当的剂量范围内促进粒系细胞的增殖和分化成熟。其作用的分子基础是诱导造血细胞的细胞周期变化。

38例脐血粒系祖细胞体外培养的观察

本文报告用体外单层半固体琼脂培养法检测38例新生儿脐血粒—巨噬系祖细咆集落(CFU-GM),以观察人脐血造血功能。结果:38例中17例脐血7天CFU-GM产率56.11±74.37/2×10~5((?)±SD),范围10～292/2×10~5,丛38.87土2.27/2×10~5((?)±SD),范围3～145/2×10~5,其中6例14天CFU-GM产率58.67±7.55((?)±SD),范围11～118/2×10~5,以巨大集落为主,≥1000个细胞,该组CFU-GM产率在对照组成人骨髓范围内;21例脐血7天CFU-GM产率20.85±0.55/10~5((?)±SD),范围0～45/10~5,比成人外周血多。可见人脐血富含粒—巨乐造血干/祖细胞。

粒系集落刺激因子对急性髓系白血病原代细胞mdr1基因表达的调节作用

研究多药耐药基因(mdr 1)与急性髓系白血病(AML)细胞分化之间的关系。采用常规分离白血病细胞,体外培养7天,然后通过形态学、细胞化学、细胞功能(NBT)、细胞免疫化学(APAAP)和逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)及MTT技术观察了细胞分化和mdr1表达变化以及AML细胞对柔红霉素敏感性反应。结果表明,AML细胞分化成熟后mdr1表达水平下降,并且随mdr1水平下降,AML细胞对柔红霉素敏感性增加。结论提示,AML细胞分化与mdr1之间有密切的内在联系,利用分化诱导剂粒系集落刺激因子从基因水平逆转白血病耐药是一种行之有效的方法。

干细胞动员时提前应用粒系集落刺激因子对患者发热及感染的影响

背景与目的：造血干细胞移植一直被广泛应用于恶性肿瘤和恶性血液系统疾病的治疗,甚至在一些良性疾患中也有应用,如再生障碍性贫血等。造血干细胞的动员也同样被广泛应用。由于移植过程中的高风险,任何能够增加造血干细胞的回收率和简化造血干细胞采集的方法都有望提高造血干细胞移植的成功率。因此本文研究旨在观察提前给予粒系集落刺激因子（在白细胞介于1×10^9-2×10^9/L时）,是否影响干细胞采集的数量和患者感染、发热的发生率。方法：对70例恶性肿瘤患者按随机单双号顺序进入A组和B组。全部患者给予环磷酰胺4 g/m2化疗,分别在白细胞≤1×10^9/L后（A组）和介于1×10^9-2×10^9/L（B组）时,皮下注射粒系集落刺激因子（惠尔血）5μg/kg。在白细胞回升至2×10^9/L以上时,分2-3次采集外周血造血干细胞,同时计数单个核细胞和CD34＋细胞数量。结果：A组采集单个核细胞数量平均为4.34×10^8/kg;B组为3.8×10^8/kg（P〉0.75）。CD34＋细胞A组为2.62×10^6/kg;B组为2.97×10^6/kg（P〉0.9）。感染、发热的发生率A组为18/33;B组为8/35（P〈0.01）。结论：提前给予粒系集落刺激因子（G-CSF）不会影响外周血造血干细胞采集的数量,而发热和感染的发生率却显著降低。

ELISA法测定粒系集落刺激因子的初步研究

鼠抗人ｒｈＧ－ＣＳＦ单抗为包被抗体，兔抗人ｒｈＧ－ＣＳＦ多抗为酶标抗体，建立Ｇ－ＣＳＦ定量测定的ＥＬＩＳＡ法。试验敏感度为０．０９５ｎｇ／ｍｌ．批内变异系数为７．３％，批间变异系数为１２．７％。临床初步应用证实１８例正常人群对照均未检出，３５例ＡＰＬ患者检出率为１４．４％（４／３５）．６例感染患者均捡出，平均０．３５±０．２５ｎｇ／Ｌ。

四生汤促进骨髓粒系造血祖细胞增殖的实验研究

四生汤促进骨髓粒系造血祖细胞增殖的实验研究＊凌昌全１史剑慧２陈哲１张红武１（１第二军医大学附属长海医院中医科上海２００４３３）（２上海市放射医学研究所上海２０００３２）在应用四生汤（又名“减毒一号”）减轻放疗所致患者造血功能损伤（尤其是外周血白细胞减...

以粒系细胞巨变为特征的巨幼细胞性贫血——附6例报告

目的报告以粒系细胞显著增生和巨变为特征的巨幼细胞性贫血 (MA)。方法用形态学检查方法分析粒系细胞显著增生和巨变为特征 MA的一般临床、血象和骨髓象特点。结果此种 MA的外周血白细胞 (WBC)和血小板 (Plt)多呈明显或显著减低 ,骨髓粒系细胞显著增生和巨变 ,而幼红细胞增生不明显甚至出现细胞量减少。幼红细胞多为轻中度巨变 ,一般 MA中常见典型的原红和早幼红细胞巨变少见或不见。予以 Vit B1 2 或和叶酸一起治疗 ,具有与一般 MA一样的明显疗效。结论认为骨髓粒系细胞显著增生和巨变为特征的 MA是一种特殊类型 。

四物汤及各单味药的含药血清对粒系-巨系造血祖细胞集落(CFU-GM)的影响

目的 :研究四物汤及各单味药对粒系 -巨系造血祖细胞集落 (CFU - GM)的影响 ,更近于真实地反映药物在体内作用的实际情况 ,以进一步探讨四物汤补血作用的配伍机制。方法 :采用血清药理学体外实验法。结果 :四物汤能明显促进造血祖细胞的增殖 ,单味药当归的作用最强 ,单味药熟地黄、川芎的作用也较正常对照组有增强趋势 ,而单味药白芍对 CFU - GM的增殖似无作用。几种受试药的作用强弱顺序可排列如下 :当归 >四物汤 >川芎 >熟地黄 >白芍。结论 :上述结果提示在促进 CFU - GM的增殖方面 ,四物汤的生血补血作用源于当归 ,川芎与熟地黄似有一定的协同作用 ,而白芍不表现协同作用。

一粒系小麦的微卫星分析

利用普通小麦A基因组含有微卫星位点的引物对在3种一粒系小麦的部分同源微卫星位点进行了检测。结果发现,59%的小麦A基因组微卫星位点的引物对可在3种一粒系小麦的多个种质中检测到部分同源微卫星位点,表明A基因组含有的微卫星位点在普通小麦和一粒系小麦间并不完全保守。一粒系小麦的微卫星位点之间在扩增条带数目以及扩增条带长度上均存在广泛差异,同一微卫星位点在不同一粒系小麦种质中的扩增条带数目以及扩增条带长度上也表现明显差异。

人类巨细胞病毒对粒系祖细胞分化过程中HOXA9基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中HOXA9基因表达情况,并且用人类巨细胞病毒(HCMV)进行干扰,探讨HCMV对HOXA9基因的影响。方法体外定向培养CFU-G,经MTT法检测后,HCMV-AD169滴度为106蚀斑形成单位(PFU)/mL,按0.1mL105PFU/mL接种培养体系。采用RT-PCR技术测定HOXA9基因表达。结果随时间推移,HOXA9基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;HOXA9基因受HCMV影响下调(P<0.05)。结论 HOXA9基因在脐血粒系祖细胞发育过程中呈规律表达,提示HOXA9基因与粒系造血活动有相关性;HCMV下调HOXA9表达的同时,HCMV干扰细胞集落生成较正常组差,提示HCMV可能通过调控HOXA9基因表达异常引起HSPC增殖分化异常。

小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长调控的实验研究

目的 研究放射损伤小鼠骨髓基质细胞对粒系祖细胞生长的影响。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞贴壁培养法和粒系祖细胞 (CFU GM)培养法。结果 伤后 3～ 7d ,有基质细胞贴壁的CFU GM生长明显低于无贴壁组 ;伤后 14d贴壁层形成后 ,放射损伤组的CFU GM生长明显低于正常对照组 ;放射损伤后 3～ 7d ,骨髓基质细胞可抑制正常CFU GM生长 ,用薄层琼脂分隔基质细胞贴壁层与靶细胞 ,其抑制作用减弱。当无外源性集落刺激因子 (CSF)时 ,基质细胞贴壁层对CFU GM生长仍显示一定刺激作用。结论 辐射使骨髓基质细胞功能受到一定损伤 ,但在放射损伤造血修复与重建过程中 ,骨髓基质细胞仍起着“刺激”与“抑制”

粒系集落刺激因子对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34^+细胞动员效果的相关性

本研究观察粒系集落刺激因子 (G CSF)作为造血干细胞动员剂对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34+细胞动员效果的关系。对 2 6例行自体造血干细胞移植患者在G CSF动员前后收集外周血标本 ,用流式细胞术检测动员前后CD3+、CD3+CD4 +、CD3+CD8+、CD3+CD4 +CD8+及CD3+CD4 -CD8-细胞绝对数量的变化并与外周血CD34+细胞的动员效果进行相关性分析。结果表明 :G CSF动员后外周血CD3+、CD3+CD4 +、CD3+CD4 +CD8+及CD3+CD4 -CD8-细胞的绝对数量分别增加 2 .2 3,2 .6 2 ,2 .99及 10 .96倍 ,而CD3+CD4 -CD8+细胞的变化无统计学意义 (P =0 .2 4 3)。各亚群细胞的变化与CD34+细胞动员效果比较 ,仅CD3+CD4 -CD8-细胞的变化与CD34+细胞动员效果间具有良好的相关性 ,r =0 .796 ,P =0 .0 0 0。结论 :G CSF将造血干细胞由骨髓动员到外周血的同时 ,使外周血中T细胞亚群的绝对数量发生不同程度的变化。在各T淋巴细胞亚群中CD3+CD4 -CD8-细胞的增加与CD34+细胞的动员效果间具有统计学意义的相关性。

沙纳唑对体外培养的小鼠骨髓粒系造血祖细胞的放射增敏作用

目的:本实验旨在研究沙纳唑以及合并γ射线照射对体外培养小鼠骨髓粒系造血祖细胞(CFU-GM)集落形成的影响,分析沙纳唑是否对其有放射增敏作用。方法:从小鼠骨髓分离CFU-GW,在37℃、5％CO_2条件下培养,当细胞进入呈指数生长期,分别在培养液中加入一系列浓度沙纳唑(0,1,5,12.5,25,50,100,200,400,800μg/ml)进行孵育,接受^(60)Coγ射线照射(剂量为0,0.5,1,2,3,4Gy),观察细胞集落形成比。为评价沙纳唑对CFU-GM的放射增敏性,将CFU-GM接受沙纳唑和γ射线照射(2Gy)处理以及两者合并处理来评价沙纳唑对CFU-GM的放射增敏作用。结果:(1)沙纳唑对体外CFU-GM集落形成有明显细胞抑制作用,且随剂量增加作用增大。沙纳唑在低剂量(低于200μg/ml)对CFU-GM集落形成抑制作用呈线性关系(r=0.9987,P<0.01),IC_(20)和IC_(50)分别为50和120μg/ml。(2)放射照射对CFU-GM也有明显抑制作用,饱和剂量和D_0值分别是2.0和0.72Gy。(3)用沙纳唑联合放射照射处理CFU-GM后,对CFU-GM的抑制作用比单一处理都要强,但经统计学分析沙纳唑与放射照射之间无协同作用。结论:沙纳唑对体外培养小鼠骨髓粒系造血祖细胞有细胞毒性作用,但在低于IC_(20)剂量下复合放射照射对CFU-GM集落形成无放射增敏作用。