产细菌素Enterocin Y3粪肠球菌对小鼠肠道菌群及代谢功能的影响

为探讨产细菌素Enterocin Y3粪肠球菌DH9003的益生菌作用,对15只健康C57雄性小鼠进行等体积灌胃无菌生理盐水(对照组,n=7)和粪肠球菌DH9003(处理组,n=8),4周后收集小鼠粪便,测定粪肠球菌DH9003对小鼠肠道菌群结构和代谢功能的影响。结果显示,用粪肠球菌DH9003灌胃小鼠,7 d内就可在其体内大量定植;7~28 d时,该细菌数量缓慢增加并趋近稳定。通过观察小鼠肠道和肝脏组织切片研究病理学特征,灌胃粪肠球菌DH9003不会对小鼠肠道和肝脏产生有害影响,相反会使小鼠的肠黏膜更为密集且长度增加,改善小鼠肠黏膜。用粪肠球菌DH9003灌胃使该菌株成为不同分组小鼠肠道差异的主要物种。同时,补充粪肠球菌DH9003对小鼠肠道的菌群结构具有一定的调节作用,导致门水平上的变化为拟杆菌门和厚壁菌门相对丰度的差异变化。灌胃粪肠球菌DH9003前和灌胃28 d后,从小鼠粪便中共检出254种差异代谢物,其中124种显著上调,130种显著下调。基于KEGG通路富集分析发现显著性水平较高的代谢通路有ABC转运蛋白和蛋白消化吸收通路。结论:小鼠摄入粪肠球菌DH9003后可在其体内定植并对肠道菌群和代谢能力有一定影响。

大蒜素有效成分DATS对粪肠球菌抑制作用的体外研究

目的:观察大蒜素有效成分二烯丙基化三硫(DATS)对感染根管粪肠球菌生物膜的作用。方法:选取60颗健康单根管恒牙,45颗建立粪肠球菌感染根管模型。分为4组(n=15):阴性对照组(未感染组)、DATS组、氢氧化钙组和阳性对照(无抗菌处理)组。二倍稀释法测定DATS对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。分别于实验第1天、第3天和第7天,取根管内层牙本质粉末,置于2 mL BHI中培养72 h,电子比浊仪读取肉汤上层液体浊度。使用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。结果:DATS对粪肠球菌的MIC和MBC(μg/mL)分别为2 560和5 120。第1天,DATS组、氢氧化钙组、阳性对照组与阴性对照组浑浊度,DATS组小于氢氧化钙组(P<0.05);第3天时,DATS组与阴性对照组浑浊度无统计学差别(P=0.454),已基本杀灭细菌;第7天时,氢氧化钙糊剂组与阴性对照组有统计学差别(P<0.05),不能完全杀灭细菌。各时间点阳性对照组浑浊度最高。结论:DATS能够有效杀灭或抑制感染根管中的粪肠球菌。

氯己定对粪肠球菌耐药性和致病性的影响及其机制

目的:探讨长期使用氯己定对粪肠球菌(E.faecalis)耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:将E.faecalis标准菌株反复暴露于氯己定中传代10代,记录每一次传代时的最低抑菌浓度(MIC)值。收集第10代且MIC值增加的细菌,即为E.faecalis氯己定耐药菌株(E.faecalis-Cs)。绘制2种菌株生长曲线,透射电子显微镜观察2种菌株形态表现,结晶紫染色法检测2种菌株细菌生物膜形成量,微生物黏着碳氢化合物(MATH)法检测2种菌株细菌疏水率,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2种菌株细菌生物膜中S-核糖基高半胱氨酸裂解酶(LuxS)mRNA表达水平。结果:随着传代次数(第0~10代)的增加,E.faecalis的MIC值逐渐升高。E.faecalis和E.faecalis-Cs的生长曲线无明显差异。透射电镜,E.faecalis和E.faecalis-Cs均呈椭圆形或双球型,细胞壁结构完整,边缘光滑,细胞质分布均匀,2种细菌形态大小和细胞壁厚度及完整性方面无明显差异。结晶紫染色法,与E.faecalis比较,E.faecalis-Cs生物膜形成量明显增加(P<0.05)。MATH法,与E.faecalis比较,E.faecalis-Cs的细菌疏水率明显升高(P<0.05)。RT-qPCR法,与E.faecalis比较,E.faecalis-Cs细菌生物膜中LuxS mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论:E.faecalis在反复暴露于氯己定后会产生耐药性,耐药菌株致病能力增强。群体感应(QS)系统LuxS基因高表达和更强的细菌生物膜形成能力可能是E.faecalis对氯己定产生耐药性的潜在机制。

1株犬源多重耐药粪肠球菌的分离鉴定及其致病性分析

[目的]明确1例犬泌尿生殖道感染的发病原因。[方法]无菌采集病犬尿液,通过细菌分离纯化、革兰染色镜检、生化试验、16S rRNA基因扩增进行鉴定,同时经药敏试验、毒力基因和耐药基因检测及细菌致病性试验测定纯化菌株的生物学特征。[结果]分离得到1株兼性厌氧型革兰阳性球菌;菌落形态如针尖大小、表面光滑、半透明、圆形凸起、边缘整齐;生化鉴定结果显示,致病菌能发酵乳糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、精氨酸,不能发酵木糖、氧化酶、枸橼酸盐、棉籽糖和鸟氨酸脱羧酶;16S rRNA基因序列与已发表的粪肠球菌序列相似性高于99%,鉴定为粪肠球菌,并将其命名为EFGZ23GY01;药敏试验结果显示,分离株仅对万古霉素及氯霉素敏感,对新霉素中度敏感,对克林霉素等25种药物耐药;8种粪肠球菌毒力基因检测结果显示,分离株携带efaA、ace、asa 1及gelE毒力基因;14种耐药基因检测结果显示,分离株携带tetL、sulⅠ、tetC、bla TEM、bla OXA-23、aadA 1和sulⅢ耐药基因;致病性试验结果显示,5只小鼠注射菌液12 h后出现精神萎靡,被毛杂乱等症状,未出现死亡,48 h后死亡1只,表明分离菌对小鼠具有致病性。[结论]本研究成功从犬尿液种分离得到1株粪肠球菌,其携带多种毒力基因和耐药基因,且对小鼠有致病性,研究为病犬的后续治疗提供了参考。

根管治疗中光动力疗法作用于粪肠球菌的优化根管预备程度的研究

目的:筛选出应用亚甲基蓝光动力疗法辅助根管消毒效果最优的根管预备程度。方法:体外孔板内构建粪肠球菌生物膜,以证实亚甲基蓝光动力疗法对粪肠球菌有杀菌作用。在离体牙根管中构建粪肠球菌生物膜,比较光动力疗法对于不同预备程度根管内粪肠球菌的清理效果。结果:体外建模证实光动力疗法可杀灭粪肠球菌。根管预备0.04锥度下,20号和25号根管组杀菌效果不如30号根管组;在25号根管组中,0.04锥度组杀菌结果不如0.06锥度组和0.08锥度组。结论:光动力疗法对根管中的粪肠球菌有明显杀菌作用,配合亚甲基蓝光动力疗法对根管内粪肠球菌进行清理的相对优化预备程度为0.04锥度30号和0.06锥度25号。

一株蜱源性粪肠球菌的分离鉴定及对小鼠的致病性试验

为了研究蜱源性粪肠球菌的生长条件及致病性,试验从草原革蜱体内分离出细菌,然后对分离菌进行革兰氏染色、生化鉴定、溶血试验、16S rRNA基因序列分析及构建系统进化树、药敏试验,最后通过小鼠致病性试验验证分离菌的致病性。结果表明:分离菌在普通营养琼脂培养基上培养可见光滑、湿润、呈灰白色微凸状、边缘整齐的露珠状小菌落;革兰氏染色镜检为阳性菌;分离菌可发酵麦芽糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇和蔗糖,西蒙氏枸橼酸盐试验及吲哚试验结果均为阳性,明胶试验及氧化酶试验结果均为阴性。分离菌16S rRNA基因序列与GenBank中粪肠球菌(登录号为CP018102.1)的相似性达99%以上;分离菌对环丙沙星敏感,对卡那霉素、庆大霉素、红霉素及头孢噻肟耐药;分离菌在血琼脂培养基上呈现α溶血,但是对昆明小鼠无明显致病性,小鼠各实质脏器无任何肉眼可见的病理变化。说明分离菌为粪肠球菌,仅对抗生素环丙沙星敏感,并无明显致病性。

粪肠球菌EF-ZA1107-06的增殖培养基优化及其特性研究

本文对粪肠球菌EF-ZA1107-06的疏水性、自凝聚力、耐酸特性、生长特性和高密度培养进行了研究。结果表明,粪肠球菌EF-ZA1107-06的疏水性较好,自凝聚力随时间增加而快速增长。粪肠球菌EF-ZA1107-06对pH 2.0溶液的耐受性较差,对pH为2.5、3.0和4.0的溶液的耐受性较好。最适培养基为MRS肉汤中的葡萄糖、酵母粉、牛肉膏和硫酸镁的质量分数分别为2.0%、2.0%、3.0%、0.08%,其他成分保持不变。在此条件下,活菌数可达8.77lgCFU/mL,较优化前提高了7倍,满足菌株高密度培养的需要。

一株鸡源粪肠球菌的分离鉴定

近年来河北部分地区肉鸡关节囊肿病发病率有逐渐增多的趋势,患病肉鸡饲料利用率下降,淘汰率增高,给肉鸡养殖造成了较大的经济损失。肉鸡腿病的发病原因很多,其中细菌感染是主要原因之一。肉鸡关节囊肿中分离的细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门菌,但尚无关于分离粪肠球菌的报道。通常认为,细菌所携带的毒力因子在疾病发生过程中起着至关重要的作用,已报道的粪肠球菌毒力因子主要包括溶血素(cyl)、表面蛋白(esp)、明胶酶E(gelE)、聚集物质(asal)、心内膜炎抗原(efaA)、胶原蛋白黏附素(ace)、透明质酸(Hyl)。笔者自保定某鸡场患关节囊肿肉鸡的关节液中分离鉴定到一株粪肠球菌,该结果可为肉鸡关节囊肿的防控提供基础。

一株具有多种毒力基因的粪肠球菌噬菌体的研究分析

以之前分离出的奶牛乳房炎源粪肠球菌SL22为宿主菌,从临床型乳房炎乳样中分离纯化噬菌体,对其进行生物学特性分析、小鼠治疗试验及毒力基因与耐药基因检测。结果分离到1株噬菌体,该噬菌体形成的噬菌斑如针尖状,电镜下发现该噬菌体无尾,头部呈对称多面体,直径约66 nm,将其命名为vB_Eco T_PSL22(简称PSL22);只裂解其宿主菌,核酸类型为dsDNA;最佳感染复数为0.1,裂解量约为52 PFU/cell;在p H4.0~12.0时活性稳定,能耐受60℃左右高温。对小鼠治愈率为33.33%(2/6),含有2个耐药基因(Acc和aac(3)-Ⅳ)和4种毒力基因(gelE、cylA、ace和efaA)。通过本次试验,可为临床型乳房炎奶牛乳房中噬菌体的多样性研究提供参考,也可为研究奶牛乳房中的微生态系统提供依据。

一株卵形鲳鲹肠道源粪肠球菌的分离鉴定与生物学特性研究

【目的】近年来鱼源益生菌在水产养殖中的应用越来越广泛,然而卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)源的益生菌鲜有报道。从卵形鲳鲹中分离潜在益生菌并对其生物学特性进行分析,为该菌株在卵形鲳鲹中的应用提供理论基础。【方法】无菌采集健康卵形鲳鲹肠道内容物,进行细菌分离与鉴定;对典型菌落做形态观察、革兰染色、生化鉴定、16S rRNA基因序列分析、药敏试验、耐盐能力试验、产酸能力及生长曲线测定和毒力基因鉴定。【结果】根据分离菌株的形态特征、革兰染色、生化特性和16S rRNA基因测序结果比对,分离菌株与粪肠球菌(Enterococcus faecalis)相似度达100%,确定其为粪肠球菌。该菌株菌落呈淡灰白色,为革兰氏阳性球菌,七叶苷、纤维二塘、麦芽糖、甘露醇、水杨苷等生化检测结果均显示阳性。药敏试验结果表明,分离菌株对哌拉西林、多粘菌素B、青霉素、复方新诺明、苯唑西林等药物呈现出不同程度的耐药性;对环丙沙星、麦迪霉素、头孢曲松呈中等敏感,对万古霉素、头孢哌酮、氧氟沙星等11种药物敏感。分离菌株可在0%~8%NaCl浓度下生长,具有一定耐盐性。产酸能力和生长曲线测定结果表明,随着菌株大量繁殖,菌液pH值快速下降,其产酸能力增强。毒力基因鉴定结果表明,分离菌株包含efaA、agg、as、fsrA 4种毒力基因。【结论】该研究成功从卵形鲳鲹肠道内分离到一株潜在益生菌菌株,鉴定为粪肠球菌。该菌株具有良好的耐盐和产酸能力,并含有与肠道黏附相关的毒力基因,可为该菌株的后续应用奠定基础。

母源粪菌移植联合粪肠球菌对雏鸡早期生长发育的影响

本研究旨在初探以“粪菌+益生菌”的模式人工构建菌组,整体调控雏鸡肠道菌群及健康。试验采取母源粪菌移植+粪肠球菌对雏鸡进行干预,观察其对雏鸡早期生长发育的影响。选取100只1日龄海兰褐雏鸡随机分为4组,分别为对照组(CON组)、粪菌移植组(FMT组)、粪肠球菌处理组(EF组)和联合处理组(CT组),每组5个重复,每个重复5只鸡,共25只。CON组和FMT组饲喂基础日粮,EF组和CT组在基础日粮中添加2×10^(9)CFU/kg粪肠球菌。前7日每日下午CON组和EF组雏鸡断饲断水2 h后饲喂15 mL PBS溶液,FMT组和CT组雏鸡断饲断水2 h后饲喂15 mL粪菌液,试验周期为14 d。检测雏鸡生长性能、免疫器官指数、血清免疫指标、回肠形态、回肠杯状细胞数量及肠道菌群α多样性与聚类等指标。结果显示:14日龄雏鸡,CT组肠道长度、回肠绒毛绒腺比、血清LZM含量、IL-10含量和杯状细胞数量均显著(P <0.05)高于CON组,分别高出11.63%、30.65%、48.02%、65.07%和44.83%,回肠绒毛高度显著(P <0.05)高于FMT组和EF组,分别高出10.26%和10.14%;EF组体重、胫骨长、回肠绒毛高度、回肠绒毛绒腺比均显著(P <0.05)高于CON组,分别高出8.46%、3.70%、11.16%、38.48%;FMT组雏鸡LZM含量、回肠绒毛高度均显著高于(P <0.05)CON组,分别高出31.94%和11.04%,FMT组Shannon指数显著(P <0.05)高于EF组;EF组Alistipes、Bacterroides、Odoribacter有益菌的丰度提高,FMT组Prevotella、Megamonas有益菌的丰度提高,CT组Parabacteroides、Collinsella有益菌的丰度提高,3个试验组Shigella、Bamesiella有害菌的丰度均降低。综上,本研究结果表明粪菌移植联合粪肠球菌能够促进海兰褐雏鸡早期生长发育,增强免疫力,改善肠道菌落结构,维持肠道微生态平衡。“粪菌+益生菌”或是调控家禽肠道菌群与健康的潜在策略。

根管再次感染中粪肠球菌作用的再认识

根管系统解剖结构复杂及根管内感染微生物的残留常引起根管再次感染,导致根管治疗失败、患牙预后不佳。粪肠球菌(Ef)是根管再次感染中的重要致病菌,通过形成难以清除的生物膜及分泌多种毒力因子等参与根管再次感染及根尖周炎的发生发展。多年来,本领域国内外学者对Ef在根管再次感染中的致病机制及干预措施进行了大量的研究,并认识到除Ef外,多种微生物在根管再次感染中也发挥了重要作用,理解这些关键微生物间的相互作用有助于理解根管再次感染的病因及可能机制。Ef从检出率高被学者们“认识”,随着技术的发展和研究的深入,由于多种微生物也被检出,其经历了“被质疑”到“被再认识”的过程。本文旨在探讨根管再次感染中以Ef为主的微生物的重要作用,再认识根管再次感染中Ef的重要角色。

粪肠球菌JSHY-R5对致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌的拮抗作用

以致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌为受试菌株,从采集自江苏沿海地区的健康凡纳滨对虾体内分离筛选拮抗菌株,通过形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定,测定其对受试菌株的拮抗效果,并对被动保护效果进行分析。结果显示,筛选出1株对致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌有良好抑制效果的菌株JSHY-R5,经形态特征、生理生化及16S rDNA序列分析鉴定该菌株为粪肠球菌。当JSHY-R5与致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌以5∶1的接种比例共培养时,JSHY-R5对致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌具有明显的抑制作用。此外,饲料添加JSHY-R5处理的凡纳滨对虾体内副溶血弧菌黏附因子(VpadF)mRNA的表达量显著下调,对虾免疫因子(Serpin、Hemocyanin、Peneidins)mRNA表达量显著升高,暴露在致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌下的5 d存活率相比投喂常规饲料的阳性组提高26%。本试验证实筛选的粪肠球菌JSHY-R5对致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌具有较好的抑制作用,可以抑制副溶血弧菌黏附因子的mRNA表达,调节免疫因子的表达,增强宿主免疫防御能力,从而提高对虾的存活率,具有应用为饲料添加剂的潜力。

粪肠球菌牙本质黏附及其影响因素的研究进展

粪肠球菌是难治性根尖周炎(refractory apical periodontitis,RAP)的主要致病菌,该细菌可耐受严苛环境,引发根尖周免疫炎症反应,造成根管内外持续性感染。粪肠球菌黏附于根管牙本质壁形成生物膜,其耐药和抗冲刷能力显著增强,是介导其致病的关键因素。粪肠球菌与牙本质的黏附包括非特异性和特异性黏附,后者由黏附相关毒力因子介导,主要包括肠球菌胶原结合蛋白(adhesin of collagen from enterococci,Ace)、表面蛋白(extracellular surface protein,Esp)、明胶酶(gelatinase,GelE)和丝氨酸蛋白酶(serine prtease,SprE)、菌毛以及聚集物质,且受到多个双组份系统调控。Fsr双组份系统在群体密度增加时可以促进gelE及sprE的表达,GelE进一步减少表面肠球菌胶原结合蛋白Ace,而GrvRS双组份系统则在响应血清环境时直接下调ace的表达。CroRS双组份系统及WalRK双组份系统也可能分别促进和抑制包括ace及gelE在内的多种毒力因子的表达,进而影响粪肠球菌的黏附性。此外,根管机械/化学预备、根管内环境因素等均可对粪肠球菌牙本质黏附产生影响。根管治疗中避免粪肠球菌的引入和使用干扰黏附的药物可以有效预防粪肠球菌的黏附,而多种活化荡洗方法也可以有效增加根管内粪肠球菌的清除率。针对粪肠球菌牙本质黏附关键因子与调控因素为靶点设计合理药物,有望为根管感染控制提供新的思路与手段。本文就粪肠球菌与牙本质的黏附性及其影响因素进行综述。

基于深度学习构建金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的快速图像识别系统

目的基于GoogleNet、ResNet101和Vgg193种深度学习模型,对血流感染病原菌(金黄色葡萄球菌、粪肠球菌)进行高置信度的识别,比较模型间的性能与分类能力,探讨深度学习模型对血流感染病原菌快速识别的应用可行性。方法将革兰染色及摄像预处理后的细菌图像和空白对照图像输入模型,进行训练与验证,共采集1682张金黄色葡萄球菌、1723张粪肠球菌和688张空白对照显微图像,对其中1344张金黄色葡萄球菌、1376张粪肠球菌和544张空白对照图像进行训练,余下的图像用于验证。根据模型间的分类参数评估出性能最佳的模型。结果ResNet101模型识别三类验证集图像的交叉熵损失值(0.0087103)最低,Epoch值(93)最大且准确率(99%)最高;GoogleNet模型识别三类验证集图像的交叉熵损失值为0.06389,Epoch值为86,准确率为98.6%;Vgg19模型识别三类验证集图像的交叉熵损失值为0.035682,Epoch值为86,准确率为97.7%。结论ResNet101模型在对三类验证集图像的分类上性能最佳;深度学习模型可对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的革兰染色图像进行准确、可信的快速识别。

基于比较基因组学研究粪肠球菌乳源分离株的安全性

粪肠球菌为同型发酵乳酸菌,在食品生产中应用广泛。然而,很多粪肠球菌为条件致病菌,使其在食品中的应用存在很大的争议。本文以粪肠球菌乳源分离株为研究对象,探究粪肠球菌乳源分离株的安全性。采用Illumina Hiseq高通量测序平台对35株粪肠球菌乳源分离株进行全基因组测序,与NCBI数据库中下载的21株粪肠球菌粪便分离株进行比较基因组学分析。结果表明,粪肠球菌整体基因组长度为(2.93±0.13)Mb,GC含量在(37.43±0.13)%,转运RNA(tRNA)有(56±4)个,编码序列(CDS)数量在(2768±146)个。粪肠球菌乳源分离株平均基因组长度与粪便分离株无显著差异,而平均CDS数量显著高于粪便分离株。系统发育树结果显示同分离源的菌株聚类在同一进化分支,该结果与平均核苷酸一致性(ANI)聚类结果基本一致。乳源分离株含有5~11种耐药基因、8~24种毒力因子及18~31个可移动遗传元件,与粪便分离株相比较,乳源分离株平均每株菌少携带3个耐药基因和毒力因子,多2.4个可移动遗传元件。因此即使是在乳制品中分离得到的粪肠球菌,也存在致病的风险,使用前需要经过严格的安全性评价。

健康婴儿粪便中粪肠球菌的分离鉴定与体外安全性评价

为筛选出符合安全要求的粪肠球菌,该研究以采集的1月龄健康婴儿粪便样本为研究对象,采用MRS分离纯化和16S rRNA测序进行菌种鉴定,共鉴定出64株粪肠球菌。该研究对其中16株菌进行体外安全性评价,分别考察其溶血性、抗生素敏感性和6种毒力基因。结果发现16株粪肠球菌均未出现β溶血现象;药敏试验发现菌株对四环素(56.25%)、红霉素(43.75%)耐药率较高,青霉素(37.50%)和环丙沙星(31.25%)次之,未发现万古霉素和替考拉宁耐受菌株;继上述实验获得的8株相对安全菌株进行毒力基因检测,共检出5种毒力基因:ace、asal、efaA、cylA、gelE,以ace+efaA+gelE+为主要携带模式;综合评价后最终得到4株粪肠球菌候选菌株,编号为:LX29、LX31、LX41、LX50,可为后续的功能性研究和产品开发奠定基础。

NF-κB信号通路调控对粪肠球菌脂磷壁酸刺激下巨噬细胞PD-L1表达的影响

目的 探讨粪肠球菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid, LTA)对巨噬细胞免疫检查点——细胞程序性死亡蛋白配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)表达的影响及调控机制。方法 用不同浓度LTA刺激小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)建立体外模型,利用流式细胞术、qRT-PCR、蛋白免疫印迹、细胞免疫荧光检测PD-L1表达与核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65磷酸化水平;NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082预处理巨噬细胞,通过以上方法进一步检测PD-L1、p65磷酸化表达变化。结果 LTA可明显诱导RAW264.7细胞中PD-L1表达,提高p65磷酸化水平(P<0.05);抑制NF-κB信号通路后,p65磷酸化水平明显降低,同时PD-L1表达减少(P<0.05)。结论 LTA可促进PD-L1在巨噬细胞中的表达,该过程受到NF-κB信号通路的调控,为进一步理解慢性根尖周炎发病机制及其治疗提供了新思路。

牛乳腺炎粪肠球菌逃逸巨噬细胞的分子机制研究

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cylA基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cylA基因缺失突变株(BME1708△cylA)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞活性;在明确细胞活性不受影响的条件下,提取被侵染的BMC-7总mRNA,利用RT-qPCR检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α以及NOS2的转录水平差异,采用ELISA法检测相应表达水平;利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cylA基因对BMC-7的p38 MAPK信号通路磷酸化水平的影响;利用p38 MAPK信号通路抑制剂(PD 169316)孵育BMC-7,ELISA法检测相应细胞因子表达水平,以明确cylA基因调控该信号通路的分子机制。结果显示:与BME1708组相比,BME1708△cylA组在IL-10和TNF-α转录水平下调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);与BME1708组相比,BME1708△cylA组IL-10表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05);TNF-α的表达水平降低,但是差异不显著;对p38 MAPK磷酸化检测结果显示,粪肠球菌cylA基因可以激活p38 MAPK信号通路并使其磷酸化;在PD 169316孵育后,与未添加抑制剂组相比,添加抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cylA基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,可通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控。

猪源粪肠球菌分离鉴定及其对PEDV复制的影响

为研究粪肠球菌对PEDV复制的影响,试验从9日龄健康仔猪粪便中分离粪肠球菌,通过形态学观察、生化试验和16S rDNA测序完成分离株初步鉴定,并利用qRT-PCR试验方法探究分离菌株对PEDV复制的影响。结果表明:从仔猪粪便中分离得到一株革兰氏阳性链状排列的球菌,其生化鉴定结果均符合粪肠球菌特征,16S rDNA测序结果表明分离菌株与登录号为MT604811、MT544905的粪肠球菌同源性高达100%,确定此分离菌株为粪肠球菌,命名为E1。qRT-PCR结果显示,菌株E1的培养液、全菌体及过滤上清液对PEDV的复制均有抑制作用,且E1培养液与IPEC-J2细胞预孵育时对PEDV复制的抑制作用最为显著。研究成功分离一株猪源粪肠球菌,此分离株E1可在体外抑制PEDV的复制,其结果为病毒性肠道疾病的防治提供新的理论基础。