硫唑嘌呤对RSL3诱导小鼠精母细胞铁死亡的影响

目的:探讨硫唑嘌呤(AZA)对还原型谷胱甘肽(GSH)过氧化物酶4抑制剂RSL3诱导的小鼠精母细胞铁死亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:小鼠精母GC-2细胞随机分为对照组(不进行处理)、RSL3组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h)、RSL3+铁死亡抑制剂(Fer-1)组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h+2μmol·L^(-1) Fer-1处理12 h)、RSL3+低剂量AZA组(给予10 nmol·L^(-1)RSL3处理24h+5μmol·L^(-1)AZA处理12h)、 RSL3+中剂量AZA组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h+10μmol·L^(-1) AZA处理12 h)和RSL3+高剂量AZA组(给予10 nmol·L^(-1) RSL3处理24 h+20μmol·L^(-1) AZA处理12 h)。MTT法检测不同浓度AZA和不同浓度RSL3作用后GC-2细胞活性,采用GSH和氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒检测GC-2细胞中GSH和GSSG水平,采用丙二醛(MDA)试剂盒检测各组GC-2细胞中MDA水平,采用Western blotting法检测各组GC-2细胞中长链脂酰CoA合成酶4 (ACSL4)、血红素氧合酶1 (HO-1)和谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)蛋白表达水平,采用免疫荧光法检测各组GC-2细胞中ACSL4蛋白表达情况。结果:与对照组比较,5、10和20μmol·L^(-1)AZA组GC-2细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),30和40μmol·L^(-1) AZA组GC-2细胞细胞活力明显降低(P<0.01),因此AZA作用浓度选择为20μmol·L^(-1)以内。与对照组比较,1、5和10 nmol·L^(-1) RSL3组GC-2细胞活性差异无统计学意义(P>0.05),50、100、500和1 000 nmol·L^(-1)RSL3组GC-2细胞活性明显降低(P<0.05或P<0.01),因此将RSL3作用浓度定为10 nmol·L^(-1)以内。GSH和MDA试剂盒检测,与对照组比较,RSL3组GC-2细胞中GSSG和MDA水平明显升高(P<0.05), GSH水平明显降低(P<0.05);与RSL3组比较,RSL3+Fer-1组和RSL3+AZA组GC-2细胞中GSSG和MDA水平明显降低(P<0.01), GSH水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组比较,RSL3组GC-2细胞中ACSL4和HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05),GPX4蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与RSL3组比较,RSL3+Fer-1组和RSL3+AZA组GC-2细胞中GPX4蛋白表达水平明显升高(P<0.05),ACSL4和HO-1蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光检测,与对照组比较,RSL3组GC-2细胞中ACSL4蛋白表达量明显增多;与RSL3组比较,RSL3+Fer-1组和RSL3+AZA组ACSL4蛋白表达量明显降低。结论:AZA可以减轻RSL3诱导的小鼠精母细胞铁死亡。

绵马鳞毛蕨精母细胞和游动精子超微结构特征的研究(英文)

应用电镜技术对蕨类植物绵马鳞毛蕨DryopteriscrassirhizomaNakai精母细胞和游动精子的超微结构特征进行了研究.精母细胞为多边形,细胞质内含有丰富的线粒体、质体、内质网、高尔基体等常见的细胞器,在细胞质中还可见到一些同心圆膜状结构,位于质膜的附近或精母细胞的角偶.同心圆膜状结构由双层膜环绕构成,外被1层单位膜.精母细胞与精子器的璧细胞之间形成了分离腔,在精母细胞质膜外形成了嗜锇层,这些结构的形成说明精母细胞已经开始与雄配子体逐渐分离,进入独立发育的阶段.尽管精母细胞之间也有嗜锇层的形成,但嗜锇层是不连续的,其上有一些空隙,精母细胞之间可通过空隙进行物质和信息的交流.成熟的精子细胞外被1层透明的薄膜,里面为游动精子,螺旋状,由环状细胞器环绕3～4圈构成,这些环状细胞器包括多层结构、微管带、巨大线粒体、鞭毛带和1个长形浓缩的细胞核.游动精子的后端为一些泡囊化的细胞质,其中包括一些残存的线粒体、造粉质体及大的囊泡等.当成熟的精子细胞排出精子器后,其内的游动精子挣脱透明质膜的束缚,摆脱后端的囊泡,成为1条游动精子.本文还对绵马鳞毛蕨和其它蕨类植物精子的超微结构特征进行了比较.

小鼠精母细胞钙通道特性及硝苯地平的作用

目的 为了建立一个合理、客观评价药物或毒物对生殖系统影响的细胞模型 ,研究了机械分离、未经酶消化的小鼠精母细胞Ca2 + 通道特性及硝苯地平对其的作用。方法 采用全细胞膜片钳技术。结果阻断K+ 电流后 ,当钳制电位 -90mV、指令电压 -80～ +1 0mV、步阶电压 1 0mV时 ,记录到Ca2 +电流 ,二价无机阳离子对Ca2 + 电流的抑制作用Ni2 +>Cd2 + ,而L型Ca2 + 通道激动剂BayK8644对电流无任何影响。分析小鼠精母细胞上记录的Ca2 + 电流为T型Ca2 + 通道开放产生。L型Ca2 + 通道阻断剂硝苯地平对精母细胞Ca2 + 电流有明显的抑制作用 ,半数最大抑制浓度为 0 .3 9μmol·L-1,而且细胞外液冲洗恢复缓慢 ,这支持了二氢吡啶类药物可用于男性避孕。结论 机械分离。

小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验方法改进及应用

目的 对小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验方法进行改进 ,以达到染色体分裂相增多、铺展好、背景清晰的效果利于阅片 ,并将改进后方法应用于农药的致突变实验。方法 将原方法中分离曲细精管改为全睾剪碎 ,软化步骤提前 ,并改用 2 %柠檬酸钠软化 ;固定过程中去除大块组织 ,最终制备小鼠睾丸初级精母细胞染色体标本。结果 两次实验中 ,某农药各剂量组染色体畸变细胞率与阴性对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5) ;某农药各剂量组及阴性对照组染色体畸变细胞率与阳性对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 方法改进后可见大量分散铺展良好、背景清晰中期分裂相细胞 ,利于观察。

小鼠精母细胞在体外分化为精子细胞

目的:探讨未成熟小鼠生精细胞在体外培养条件下的分化情况。方法:用支持细胞(TM4)条件培养液培养出生后14d的BALB/c小鼠睾丸细胞,对照组采用添加1%胎牛血清的MEM培养液维持细胞存活,在不同时段收获细胞,实时定量RT-PCR分析精子细胞特异性基因Tnp2表达的变化。结果:实时定量RT-PCR显示,在体内,Tnp2的表达随小鼠日龄增长而升高,与精子细胞发生过程同步;在睾丸细胞体外培养过程中,Tnp2的表达在TM4条件培养液培养d5显著升高(P<0.05),而对照组始终无变化。结论:在TM4条件培养液的作用下,小鼠精母细胞在体外分化为精子细胞。

中国人精母细胞和卵母细胞联会复合体的电镜观察

以微铺展技术结合硝酸银染色,对中国人精母细胞和流产胎儿卵巢联会复合体的形态和行为作了电镜观察。列出中国人的SC核型和模式图。根据减数分裂前期XY的复杂形态变化,XY的配对可分为5种类型。对XY短臂之间形成的SC和XY长臂顶端的次级联合以及XY配对的性质和机理作了描述和讨论。本文还报道了一个罕见的三倍体精母细胞,对三倍体精母细胞中SC的配对行为以及和人类染色体疾病病因的可能关系作了分析和讨论。

稳恒磁场强度对小鼠骨髓细胞和精母细胞的遗传效应研究

稳恒磁场强度为 40mT、 5 0mT、 60mT、 10 0mT ,作用 30d后测定分析小鼠初级精母细胞染色体畸变率和骨髓嗜多染红细胞微核率。稳恒磁场强度为 40～ 60mT时 ,对小鼠初级精母细胞染色体畸变的发生无明显影响 ;稳恒磁场强度为 10 0mT时 ,可致小鼠初级精母细胞染色体畸变、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率显著增高。

褐家鼠精母细胞中联会复合体的研究——Ⅰ.表面铺展联会复合体的PTA染色

本文应用 PTA 染色技术研究了褐家鼠精母细胞联会复合体,发现一些 PTA 或硝酸银对染色质负染而对 SC 正染的图象,即染色质被漂白。在这铺展的图象中进一步证明,SC 是同源染色体配对形成的一种结构。

带绦虫精母细胞发生的超微结构观察

目的：在超微结构水平研究带绦虫精母细胞的发生。方法：透射电镜。结果：本文对猪带绦虫，牛带绦虫，及豆状带绦虫的精母细胞的发生进行了ＴＥＭ观察，结果精母细胞的发生（ｓｐｅｒｍａｔｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）可分辨出两种精原细胞：Ａ型和Ｂ型，以及包绕其周围的支持细胞。Ａ型精原细胞为干细胞。Ｂ型为母细胞。Ｂ型精原细胞经４次无细胞分离的有丝分裂，形成１６个初级精母细胞，其特点为胞质中存在核糖体团。初级精母细胞经减数分裂产生３２个次级精母细胞，排列成玫瑰花团样。次级精母细胞经短暂的发育过程很快形成精细胞。结论：带绦虫精原细胞的分裂方式为无细胞分离的有丝分裂。

阿维菌素对小鼠初级精母细胞致突变性的研究

以小鼠初级精母细胞染色体畸变分析方法研究阿维菌素 (Avermectin)对小鼠雄性生殖细胞的诱变性。将昆明系雄性小鼠 5 0只随机分为 5组 ,每组 10只 ,第 1— 3组为阿维菌素高、中和低剂量组 ,分别以 9.6 0、4.80和 1.92mg/kg体重 (相当于 1/2、1/4和 1/10LD50 )剂量的阿维菌素与 1,2 丙二醇溶液 1次灌胃 ;第 4组为阳性对照组 ,以 6 0mg/kg体重剂量的环磷酰胺 1次腹腔注射 ;第 5组为阴性对照组 ,仅灌服溶剂。于给药后第 12d和 13d每组取 5只小鼠 ,每只按 2mg/kg体重剂量腹腔注射秋水仙素 2h后取材。试验结果表明 ,无论给药后第 12d和 13d ,环磷酰胺阳性对照组与相应阴性对照组相比 ,其差异均极显著 (P <0 .0 1) ,阿维菌素高、中和低 3个剂量组与相应阴性对照组相比 ,其差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ,证明阿维菌素对初级精母细胞不具诱变性。

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对小鼠精母细胞JAZF1 mRNA及孤核受体TR4蛋白表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)对小鼠精母(GC-2 spd)细胞JAZF1 mRNA及TR4蛋白表达的影响。方法将GC-2 spd细胞置于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养液培养24 h。采用Real-time PCR方法检测细胞JAZF1 mRNA的相对表达水平,采用Western blot检测TR4蛋白表达水平。结果与对照组比较,50、100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的JAZF1 mRNA表达升高,而200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞的TR4蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEHP对生精细胞具有生殖毒性作用,可能通过JAZF1调控孤核受体TR4的表达从而影响雄性生殖功能。

低剂量棉酚和甾体激素联合用药对精母细胞凋亡和支持细胞吞噬作用的影响

目的探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药对睾丸精母细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用的影响。方法本实验采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯125μg/(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,用药4、6和8周取睾丸组织,应用体视学、原位缺口末端标记(TUNEL)和油红O染色的方法,观察精母细胞和球形精子细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用。结果联合用药中,甾体激素成分可明显减少精母细胞和球形精子细胞的数量,精母细胞凋亡增加并同时伴有生精上皮油红O染色的增强。结论精母细胞凋亡并被支持细胞吞噬是联合用药抗生育机制之一。

一种新的制备哺乳动物精母细胞联会复合体的微铺展技术

本文报道一种新的制备哺乳动物精母细胞联会复合体(SC)的微铺展法,与常规铺展法比较,具有简便易行,适用于野外工作等特点。此外,微铺展法不仅可用新鲜材料,而且还可用长期冷冻保存的材料来制备SC标本。

公骡精母细胞的减数分裂

关于骡不育以及个别母骡偶然生育的现象 ,历来存有争议 ,认为因亲本染色体歧异导致杂种不能进行减数分裂的理论 ,否认骡生育的事实 ;而为母骡生育提出解释的理论则认为一定是母骡产生了只含单一亲本染色体组的卵子 ,回交后代已回归为马或驴。但是一些新的研究却证明 ,事实与上述理论都存在明显矛盾。为了进一步探讨种间杂种生殖隔离现象的遗传机理 ,本研究采用性成熟公骡的睾丸为材料 ,制备组织切片和减数分裂联会复合体标本进行观察 ,发现个别性腺发育较好的个体虽然减数分裂存在大量异常 ,但确有少数精母细胞完成了减数分裂并产生精子。在骡的精母细胞内 ,发现有与马的联会复合体相似的线段状物 ,电镜下可辨其某些片段呈双线性结构。据此结果对杂种不育的传统理论进行了讨论 ,认为应综合考虑杂种的异源染色体和异源细胞核与细胞质相互作用的双重影响 。

双侧睾丸精母细胞性精原细胞瘤1例报告并文献复习

睾丸精母细胞性精原细胞瘤（spermatocytic seminoma，SS）比较罕见，目前国内仅有3篇左右相关报道，且发生双侧者更少见。我科于2011年6月收治1例双侧睾丸SS，现报告并结合文献复习如下。

铅和乙醇对雄性小鼠初级精母细胞的致突变性研究

目的观察铅、乙醇染毒对雄性小鼠初级精母细胞致突变性的影响,研究铅和乙醇对雄性小鼠联合生殖毒性。方法健康雄性小鼠,随机分为9组,每组8只。A～H组经灌胃分别给予醋酸铅15mg/kg体质量、30mg/kg体质量,乙醇1g/kg体质量、2g/kg体质量,醋酸铅15mg/kg体质量+乙醇1g/kg体质量,醋酸铅15mg/kg体质量+乙醇2g/kg体质量,醋酸铅30mg/kg体质量+乙醇1g/kg体质量,醋酸铅30mg/kg体质量+乙醇2g/kg体质量,对照组给等量蒸馏水,1次/d,每周5次,连续3周。所有动物均于染毒第25d处死,取双侧睾丸作初级精母细胞染色体畸变分析。结果高铅染毒组、高乙醇染毒组、铅和乙醇联合染毒组初级精母细胞染色体畸变率与对照组相比显著增加(P<0.05),析因分析表明醋酸铅和乙醇之间存在交互作用。结论铅和乙醇对于雄性小鼠初级精母细胞具有致突变性,并且存在协同作用。

双侧睾丸精母细胞性精原细胞瘤1例并文献复习

目的探讨睾丸精母细胞性精原细胞瘤(spermatocyticseminoma,SS)的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断、治疗及预后。方法对1例双侧睾丸SS组织行EnVision两步法免疫组化染色,并复习相关文献。结果双侧睾丸肿瘤呈无痛性缓慢生长,组织学上肿瘤边界清楚,包膜完整,肿瘤细胞弥漫分布,黏附性差,由3种类型细胞组成,缺少淋巴细胞浸润及间质肉芽肿反应。免疫表型:肿瘤细胞CD99、CD117、BCL-2阳性,CK、CD3、CD7、CD20、CD30、inhibin、PLAP、CK18均阴性,Ki-67增殖指数为50%。结论 SS是一种罕见的睾丸肿瘤,与经典性精原细胞瘤的临床及病理特点均不同,好发于老人,双侧发生者更为罕见。其与经典性精原细胞瘤、胚胎性癌和淋巴瘤鉴别非常重要,单纯睾丸切除后不需进一步治疗,预后良好。

阿维菌素对小鼠次级精母细胞致突变性的研究

将昆明系雄性小鼠随机分为 5组 ,每组 10只 ,第 1～ 3组为阿维菌素 (Avermectin)高、中和低剂量组 ,分别按体重 9.6 0、4 .80和 1.92mg/kg(相当于 1/ 2、1/ 4和 1/ 10LD50 )剂量灌服阿维菌素 1,2 丙二醇溶液 1次 ;第 4组为阳性对照组 ,以 2mg/kg剂量的秋水仙素 (colchicine)给小鼠 1次腹腔注射 ;第 5组为阴性对照组 ,给小鼠灌服溶剂。于给药后第 6和 14h ,每次每组各处死 5只小鼠 ,取其双侧睾丸 ,分离次级精母细胞。结果 ,不同时间取材的阳性对照组与相应阴性对照组相比 ,差异均极显著 (P <0 .0 1) ,不同时间取材的阿维菌素高、中和低 3个剂量组与相应阴性对照组相比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 )。研究表明 。

棉铃虫Helicoverpaarmigera(Hübner)精母细胞减数分裂研究

采用压片法HSG显带技术,对棉铃虫精母细胞减数分裂进行了研究,描述了其减数分裂各时期的特征。同 时通过C-带处理表明棉铃虫染色体单倍数目为n=31,染色体长度从2.05μm至6.20μm不等。

中华鳖精母细胞联会复合体的研究

本文以微铺展技术制备中华鳖精母细胞联会复合体标本，经硝酸银染色后电镜观察，分析了ＳＣ组型。并与有丝分裂染色体组型相比较，发现二者有着良好的一致性，而且微小染色体的ＳＣ结构和着丝粒清晰，未发现形态上有分化的性染色体。