水苏糖对秦川牛精液冷冻保存效果的影响

试验主要探究在牛精液冷冻稀释液中添加水苏糖对秦川牛精液冷冻保存效果的影响。添加不同浓度(0、20、40、60、80 mg/mL)水苏糖到牛精液冷冻基础稀释液中,检测冷冻-解冻后秦川牛精子运动性能、质膜完整性、顶体完整率、线粒体活性及抗氧化性相关指标。结果表明,与对照组相比,40 mg/mL水苏糖处理显著(P<0.05)提高冷冻-解冻后精子活力(43.83%)和顶体完整率(78.70%);质膜的完整性和线粒体活性在随着水苏糖浓度的增加显著提升,但质膜的完整性在不同水苏糖浓度之间差异不显著(P>0.05);同时,40 mg/mL水苏糖组显著提高GSH-Px酶和CAT酶的活性(P<0.05),并显著降低精子细胞中的MDA含量(P<0.05)。综上表明,40 mg/mL水苏糖处理显著提升冷冻-解冻后牛精子品质和抗氧化能力,对秦川牛的冷冻精液具有较好保存效果。

原花青素对吐鲁番黑羊精液低温保存效果的影响

为研究原花青素(PC)对吐鲁番黑羊精液低温保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集5只2岁成年吐鲁番黑羊公羊精液,在精液基础稀释液中添加不同浓度(0、10、20、30、40μg/mL)的PC进行低温保存,每隔24 h检测精子活率、活力、曲线速率(VCL)、直线速率(VSL)、畸形率、质膜完整率等指标,在保存24、72、120 h时检测总抗氧化能力(T-AOC)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明:各PC添加组的精子活率、活力、VCL、VSL、质膜完整率、T-AOC和CAT活性均高于对照组(P<0.05),畸形率低于对照组(P<0.05),其中20μg/mL PC添加组的精子质量高于其他各组(P<0.05)。综上所述,在基础稀释液中添加PC可以显著提高精液品质,且PC添加浓度为20μg/mL时对吐鲁番黑羊精液低温保存效果最佳。

2020—2022年河北省种猪常温精液质量品质的对比研究

本研究旨在比较2020—2022年河北省种猪常温精液质量品质的差异,为猪场保存、稀释种猪常温精液等方面提供建议。测定中心于2020—2022年对河北省种公猪站进行常温精液质量抽检,采集了2020—2022年度河北省良补项目种公猪站的公猪常温精液,共计577份样品,对种猪常温精液样品活力、前向运动精子数和精子畸形率进行了检测。结果发现,2022年杜洛克猪、长白猪和大约克夏猪的精子活力分别显著高于2020年和2021年(P<0.05),2021年显著高于2020年(P<0.05);2021年杜洛克猪前向运动精子数显著高于2020年和2022年(P<0.05),但2020年与2022年前向运动精子数无显著差异(P>0.05)。2020年和2021年长白猪的前向运动精子数显著高于2022年(P<0.05),2020年与2021年两者无明显差异(P>0.05)。2021年大约克夏猪前向运动精子数显著高于2020年和2022年(P<0.05),2020年与2022年相比无显著差异(P>0.05);2022年杜洛克、长白和大约克夏畸形率分别显著高于2020年和2021年(P<0.05),2021年显著高于2020年(P<0.05)。2022年种猪常温精液活力和畸形率优于2020年和2021年,前向运动精子数较前两年有所降低,但精液质量和使用效率有所提高,使成本有一定的降低。目前,河北一些种公猪站经过了转型升级,在人员技能培训、智能化饲养管理、精准定量灌装设备等方面进行了改进,使种猪常温精液质量有所提高,但还有一些种公猪站存在精液稀释不均、人员欠缺专业知识、智能化饲养管理不足等问题。

影响种公猪精液中精子凝集及高原生质滴原因分析和措施

“公猪好,好一群;母猪好,好一窝”,种猪场管理者普遍认为种公猪应该是站在整个繁育体系的金字塔顶尖部位,种公猪在猪育种、生产中具有重要地位。种公猪精液质量直接关系到母猪受胎率和产仔数。种公猪的种用价值是通过精液得到传递。种公猪精液质量是成功受精和养殖效率的关键,所以在每次进行人工授精之前,一定要检查精液品质。精准科学地饲养管理种公猪,做好精液品质检查,是提高种猪场生产率和经济效益的一个重要措施。目前,实施新的《种猪常温精液》GB 23238-2021国家标准,深部输精剂量要求60毫升。随着低剂量输精技术的发展,对精液质量品质的要求越来越高。本文综合分析导致精液精子凝集黏连和原生质滴高的原因及采取的措施,扩大顶级公猪在种猪群体中的覆盖率,加快育种进程,提高后代猪的遗传性能,从而带动生猪生产水平的进一步提高,提高猪场经济效益。

猪精液常温保存的影响因素及抗氧化剂的应用

猪的人工授精技术发展促进了养猪业规模扩大和专业化程度提升,提高猪精液的保存效果是推进人工授精技术发展的关键。目前,大部分猪精液为常温保存,但这一保存方法容易导致精液内活性氧过度积累,降低精液质量。稀释剂中加入适量的抗氧化剂,能够改善猪精液的质量并延长保存期限。本文综述了猪精液常温保存的主要影响因素和抗氧化剂在猪精液常温保存稀释剂中的应用进展,以期为抗氧化剂在猪精液常温保存中的应用提供理论支持,并为开发新型猪精液稀释剂提供参考。

基于基因组重测序的公猪精液品质候选基因研究

本研究基于某企业公猪站172头纯种大白猪10 316条精液品质记录,分别针对精液体积、精液密度、有效精子密度、精子活力、精子畸形率以及直线运动比例进行统计分析,绘制每种性状的分布情况。相关性分析发现,精液体积与精液密度呈负相关,精子活力与直线运动比例呈正相关、与畸形率呈负相关。进一步分别选取精液体积性状极端高和极端低的10个样品,提取基因组DNA,进行15×全基因组重测序,共获得高质量SNPs和InDels 11 400 036个。以10 kb为window、5 kb为步长进行遗传分化系数(Fixation Index,Fst)分析,以0.1%的window为阈值,筛选精液体积高低组的极端分化区域,共获得4.43Mb的区域,包含142个候选基因。利用David工具进行GO富集分析,结果表明候选基因主要参与细胞分裂(GO:0051301)、白细胞运动(GO:1903238)、信号转导(GO:0007165)以及受体聚集(GO:0043113)等生物学过程。其中CDK6、CDK13、CDK14、STAG1和TNKS等基因主要参与细胞分裂过程,且均有与精子质量相关的报道,可作为影响公猪精液品质的候选基因,为后续分子标记的发掘提供理论依据。

降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存效果的影响

试验旨在研究降温方式及平衡时间对湖羊精液冷冻保存的影响。设计毛巾包裹(1.5、2.5、3.5、4.5、5.5、6.5、7.5h)和37℃水浴(50、100、150、200、250mL)2种降温方式并探究最佳试验条件,在此基础上各自添加冷冻II液后平衡0、0.5、1.5、2.5、3.5 h,并确定最优平衡时间,最后比较2种最优方式下湖羊冷冻精液的精子活率、活力、运动参数、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量。结果表明:毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);添加200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h组解冻的精子活力高于其他各组(P<0.05);毛巾包裹降温2.5 h后继续平衡2.5 h处理与200 mL水浴降温至4℃后继续平衡2.5 h处理的精子活率、活力、质膜完整率和顶体完整率均不存在显著差异,但毛巾包裹降温处理的精子ROS含低于水浴降温处理(P<0.05)。由此可见,毛巾包裹降温2.5 h后添加冷冻II液继续平衡2.5 h是湖羊精液冷冻保存较适宜的处理方式,湖羊精液冷冻保存效果显著提高。

不同精液质量男性生殖激素水平与氧化应激的临床分析

目的分析不同精液质量男性生殖激素和抗氧化水平,探讨生殖激素及抗氧化对男性精液质量的影响。方法在北华大学附属医院生殖中心筛选28名单纯少精子症、36名单纯弱精子组和28名少弱精子症患者精液。精液分析按照世界卫生组织的标准进行。化学发光免疫法测定血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素、泌乳素、雌二醇、睾酮(T)浓度。黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用活性氧试剂盒检测精浆中活性氧(ROS)水平。结果不育组男性精液浓度、前向运动精子率、精子总活力和精子不活动率与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。不育组患者血清中T浓度明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);少弱精症组中FSH明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不育组SOD活力和ROS水平与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论睾酮合成下降与男性不育有关,少精、弱精、少弱精的重要原因可能是氧化应激中抗氧化剂与ROS的脂质过氧化损伤的不平衡。

冷冻保存技术在蜜蜂精液保存中的研究与应用

蜜蜂精液冷冻保存对蜜蜂种质资源保护和品种改良具有重要意义,有利于蜜蜂育种中的后裔测定和基因组选择,加快育种进程。蜜蜂精子结构特殊,冷冻保存对其活力和受精率有较大影响,目前该技术尚未广泛应用。该文综述了蜜蜂精液冷冻保存的研究简况、蜜蜂精子的结构、冷冻损伤机理和精液冷冻技术的研究进展,以期为今后进一步优化改进蜜蜂精液冷冻保存技术提供参考。

猪精液冻融技术及其影响因素研究进展

养猪业是我国畜牧产业的重要组成部分。国内生猪养殖主要采用自繁自养模式,配种所使用的精液多采用鲜精或常温稀释保存精液,而精液冻融技术可实现猪精液的长期保存,但与牛、小鼠等物种相比较,猪精液冻融技术还有待于进一步优化改善。为进一步改进猪精液冷冻技术并实现在生产上大规模应用,本文主要综述了猪精液冻融技术发展概况、主要技术流程,影响猪精液冻融后精子活力的关键因素,包括精液的采集、冷冻前降温平衡、冷冻保护剂添加和冷冻方法等,以及精子冻融过程中的理化性质变化,包括物理结构损伤、功能性损伤、精子抗冻机制等,最后总结、展望了能够提高猪精液冻融效果的新方法。

实验室饲养对中华蜜蜂雄蜂精液及转录水平基因表达的影响

为探索中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricius种用雄蜂的高效培育方法,本研究利用实验室和蜂群条件培育中华蜜蜂性成熟雄蜂,比较各实验组雄蜂的体重、可采集精液比例及精子活力,利用转录组测序技术解析实验室饲养对雄蜂基因表达的影响。结果表明,与蜂群饲养组相比,实验室饲养组中华蜜蜂性成熟雄蜂的精子活力无显著差异,但雄蜂的体重和可采集精液比例显著降低。转录组测序共筛选获得实验室饲养组雄蜂的差异表达基因602个,其中上调表达186个,下调表达416个。上调的差异表达基因显著富集于蛋白质结合、核质、淘汰的核质组分和胞内细胞器等19个GO功能分类;下调的差异表达基因显著富集于ATP合成耦合质子转运、线粒体内膜、呼吸体和碳水化合物代谢过程等22个GO功能分类,以及氧化磷酸化、碳代谢、脂肪酸降解和三羧酸循环等6条KEGG通路。表明实验室饲养可作为培育中华蜜蜂种用雄蜂的备选方法进行深入研究。实验室饲养可能通过抑制机体能量代谢和干扰线粒体功能影响雄蜂的生长和精子发生。研究结果为进一步研发中华蜜蜂种用雄蜂的工厂化培育技术提供了科学参考,有助于加速我国本土蜜蜂的良种选育进程。

脯氨酸对山羊精液低温保存的影响

为提高精液对精子的抗氧化保护能力,延长精子在体外的存活时间,在低温保存(4℃)条件下,向山羊精液基础稀释液中添加浓度为0、0.5、1、2、4 mM的脯氨酸,经保存24 h、48 h后,检测各处理组的精子活力、顶体完整率、质膜完整率,及48 h各组线粒体活性、活性氧水平、丙二醛、脂质过氧化物含量、抗氧化酶活性等精子质量评定指标。结果表明,在精液中添加一定浓度的脯氨酸可提高精子抗氧化能力,且添加最适浓度为1 mM。在1 mM处理组中,精子48 h总活力71.3%,比对照组显著提高18.57%(P<0.01),顶体完整率提高12%,质膜完整率提高10.5%,线粒体活性提高23.15%,抗氧化酶活性均显著提高(P<0.05),活性氧水平、丙二醛、脂质过氧化物含量均显著降低(P<0.05),并且脯氨酸脱氢酶活性显著提高(P<0.05),凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspas-9、P53和BCL-2)表达量显著降低(P<0.05)。因此,在4℃液态保存的山羊精液中,添加脯氨酸能够提高保存后的精液品质。这为脯氨酸作为一种可以有效提高山羊精液品质的抗氧化剂提供了新的思路。

基于下一代测序的精液菌群研究进展

精液菌群在男性生殖健康中发挥着重要作用,其构成可能与精子质量、少弱精子症的发生、辅助生殖技术妊娠结局相关。同时,由于精液菌群可能向伴侣及后代传递,因此对女性生殖健康及后代的健康都可能产生影响。常规细菌培养方法因耗时、条件限制等难以发现完整的精液菌群结构。下一代测序技术(NGS)可以揭示完整的精液菌群组成,有助于阐明人类生理学和病理生理学基础上复杂的微生物-宿主相互作用。本文就基于NGS研究的精液菌群构成、与男性不育症的关系、损伤精子质量的作用机制等内容进行综述,总结使用NGS来描述不同男性生殖道解剖部位的细菌定植模式的研究结果。目前的研究结果揭示了男性精液呈现独特的多样性菌群结构,精液菌群结构异常与精子质量和生育状态密切相关,精液可能具有支持健康功能的原生菌群。但迄今为止,精液菌群的来源、构成、及其对生育力和妊娠结局的影响尚不明确,精液菌群多样性影响精子的具体机制还需要具有大样本量和适当的对照标本进一步研究。

鸭精液细管法冷冻保存及解冻程序的建立

试验以BPSE为鸭精液稀释液,探讨细管法冷冻、保存及解冻技术对鸭精液冷冻、解冻后活力、活率及受精率等的影响。比较不同体积分数的甘油(GL)、二甲基亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺(DMA)3种冷冻保护剂在4℃平衡不同时间对鸭精液活力的影响以及不同解冻条件和不同保存时间(1、30、365 d)对鸭精液活力和活率的影响,且评价冷冻后鸭精液与新鲜鸭精液(CK)的受精率和孵化率差异。结果表明,在6%DMA中平衡45 min和8%DMA中平衡30 min冷冻,解冻后的鸭精子活力较好,分别为0.416和0.415,二者间无显著差异;采用37℃30 s解冻后的鸭精液活率为57.18%,显著高于4℃3 min解冻后的精液活率(45.28%);在液氮中保存1、30、365 d,解冻后鸭精液的活力和活率差异均不显著;冷冻精液解冻后的受精率为37.73%,显著低于对照组的受精率(93.24%);冷冻鸭精液解冻后的孵化率为84.79%,显著低于对照组的孵化率(92.19%)。研究建立的在8%DMA中平衡30 min的细管法可用于鸭精液的冷冻保存,37℃解冻30 s可用于鸭精液的解冻。

鸡精液甘油简易冷冻保存技术改进与优化效果评价

[目的]改进与优化鸡精液甘油细管简易冷冻保存技术。[方法]采用单因素设计试验,使用6%的冻存(3、6、9个月)与现配甘油保护液制作细管冷冻精液,比较冷冻精液冻后精子活力、活率及畸形率。采用液氮面上熏蒸法优化一步冷冻法冷冻速率,并用优化后一步冷冻法与前期研发的两步冷冻法制作细管冷冻精液,检测两种冷冻方案冻后与离心去甘油后的精子活力、活率、畸形率及种蛋受精率、孵化率。采用一步冷冻法冷冻不同品种公鸡精液,并采用不同输精轮次应用于不同年龄母鸡,通过输精试验评价输精效果。[结果]①添加冻存3、6、9个月的甘油保护液与现配甘油保护液冻后精子活力、活率、畸形率均无显著差异(P>0.05)。②经优化和重复率比较后一步冷冻法最佳冷冻速率为细管精液距离液氮面3 cm冷冻3 min,样品精子活力≥60%的重复率为100%,精子活力≥65%的重复率为65%。③一步冷冻法精子活力、精子活率分别为62.84%和76.00%,均极显著高于两步冷冻法(58.17%和68.62%)(P<0.01),两种冷冻方案的精子畸形率无显著差异(P>0.05)。一步法、两步法冷冻精液离心去甘油前、后平均精子活力、种蛋平均受精率和平均孵化率均无显著差异(P>0.05),单日最高受精率分别为68.34%和80.00%。④采用一步冷冻法制备的黑凤鸡与湘东鸡冻精输精后的种蛋受精率和孵化率均无显著差异(P>0.05)。给30周龄母鸡输精后种蛋受精率极显著高于68周龄母鸡(P<0.01)。3轮4次输精模式种蛋受精率极显著高于1轮2次输精模式(P<0.01)。[结论]将甘油保护液制备成储备液在―20℃冻存,采用一步冷冻法并预先进行冷冻速率优化,输精时注意精液冷藏时长、母鸡年龄、输精轮次,能得到稳定较好的输精效果。

添加Tollip对地中海水牛精液冷冻保存效果的影响

冷冻精液生产过程易受氧化应激影响,导致冷冻后精液品质下降。为探究添加Toll相互作用蛋白(Tollip)对地中海水牛精液冷冻保存效果的影响,本试验在精液冷冻时加入不同浓度的Tollip,检测精子冷冻后活力与运动参数、质膜和顶体完整率以及精液中活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和精液的总抗氧化能力(T-AOC)。结果表明:与对照组相比,添加不同浓度的Tollip能不同程度提高地中海水牛精子冷冻后活力、运动参数、质膜和顶体完整率以及精液T-AOC,降低地中海水牛精液ROS水平和MDA含量;其中0.50μg/mL Tollip为最适添加量。以上研究结果表明,添加0.50μg/mL Tollip能最大限度提高地中海水牛精子抗氧化能力,缓解氧化应激损伤,改善精液冷冻保存效果。

香菇多糖和冷冻平衡时间对猪精液冷冻保存效果的影响

为了研究香菇多糖和冷冻平衡时间对猪精液冷冻保存效果的影响,试验在公猪精液的冷冻稀释液中添加0.6 mg/mL的香菇多糖,冷冻平衡0,30,60,90,120,150 min后,分别采用观察法、异硫氰荧光棒标记的花生凝集素(FITC-PNA)染色法、低渗肿胀法和吖啶橙染色法检测冻后猪精子的活率、顶体完整率、质膜完整率和DNA完整性。结果表明:冻后猪精子的活率和顶体完整率随着平衡时间的延长呈先升高后降低的趋势,在平衡90分钟时达到最高,分别为45.19%、55.74%;冻后猪精子的质膜完整率在平衡30,60,120,150 min之间差异不显著(P>0.05),在平衡90分钟时最高,达到51.47%,显著高于其他平衡时间质膜完整率(P<0.05);冻后猪精子DNA完整率在平衡30,60,90,120 min之间差别不显著(P>0.05),其中平衡90 min时最高,为44.56%。说明冷冻稀释液中添加0.6 mg/mL香菇多糖并平衡90 min能显著提高猪精液的冷冻保存效果。

《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》版本演变及临床意义

精液分析是男性生育力评估的基石,《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》是公认的精液分析指南,为全世界精液检查程序的标准化和参考值提供了基础。自第1版问世以来已经过去了40余年,期间用于评价精液质量的实验室方法发生了显著变化,检测的精确度和准确性得到了提高。随着男科学和生殖医学的不断进步及辅助生殖技术的出现和进展,该手册不断更新并引入新的、基于循证医学的检测方法,除了进行精液常规分析,还可以评估精子功能以满足临床需要。2021年第6版发布,提供了满足评估男性生殖功能、生育保健、不育症的诊断与治疗所需实验室程序的最新循证信息。本文对手册的演变进行了梳理和分析,并强调了更新之处及其临床应用价值,希望其能够获得广泛接受和应用。

猪冷冻精液研究应用进展及问题分析与展望

1了解猪冷冻精液。1.1猪冷冻精液应用的优点。猪精液冷冻保存的最大优势是可以延长猪精液的使用期限。常温下新鲜精液使用时间有限,只能在1 d内使用。在17℃下用常温稀释液处理的精液,猪精子的存活时间可达2周以上。利用液氮等为冷源,保存用冷冻稀释液处理的精液,只要精液处于液氮内,理论上可以无限期保存。

聚蔗糖对猪精液冷冻保存效果的影响

为研究聚蔗糖对猪精液冷冻保存效果的影响,本实验分别在基础稀释液中添加不同浓度(0、10、20、30、40、50μg/mL)的聚蔗糖,检测冷冻后精子的活率、线粒体活性、质膜完整性、顶体完整性、DNA完整性,分析聚蔗糖对大白猪精液的冷冻保存效果。结果表明:与对照组相比,20、30、40、50μg/mL聚蔗糖组冻后猪精子的活率显著提高;20、30、40μg/mL聚蔗糖组的线粒体活性显著提高;10、20、30、40μg/mL聚蔗糖组的质膜完整性显著提高;20、30、40、50μg/mL聚蔗糖组的顶体完整性显著提高;10、20、30、40、50μg/mL聚蔗糖组的DNA完整性显著提高。本实验结果说明在基础稀释液中添加30μg/mL的聚蔗糖能有效提高猪精液的冷冻保存效果。