续断种子方对少精子症模型大鼠睾丸生精细胞增殖分化的影响

目的基于丝裂原活化蛋白激酶p38/细胞外调节蛋白激酶1/2(p38 mitogen-activated protein kinase/extracellular regulated protein kinases1/2,p38 MAPK/ERK1/2)通路探索续断种子方对少精子症模型大鼠睾丸生精细胞增殖分化的影响。方法按随机数字表法将44只雄性SD大鼠分为4组(正常组、模型组、左卡尼汀组和续断种子方组),每组11只。正常组常规喂养,其余3组大鼠腹腔注射环磷酰胺进行造模。造模成功后,各组大鼠给予相应药物灌胃,给药4周后,检测大鼠精子浓度、活率及睾丸组织病理,生化法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平,RT-PCR与Western blot检测p38 MAPK、ERK1/2表达。结果与正常组比较,模型组大鼠精子浓度与精子活率明显下降(P<0.01),睾丸曲细精管分布疏松伴萎缩,各级精子细胞排列层次紊乱、数量较少,SOD、GSH水平下降(P<0.01),MDA水平升高(P<0.01),p38 MAPK、ERK1/2表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,续断种子方组大鼠精子浓度、活率均升高(P<0.01),睾丸曲细精管结构基本恢复正常,管壁各级生精细胞层次基本整齐,管腔内见大量成熟精子,SOD、GSH水平升高(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),p38 MAPK、ERK1/2表达降低(P<0.05)。结论续断种子方能通过降低p38 MAPK、ERK1/2表达,抑制氧化应激及调节生精细胞凋亡,促进睾丸中精子发生,从而治疗少精子症。

蓝猪耳精细胞的分离及两个精细胞群体的收集

蓝猪耳是二细胞型花粉,生殖细胞在花粉管中分裂形成两个精细胞。用体内-体外技术培养出花粉管后,将其置于爆破液中即可释放出花粉管内含物,其中包括两个精细胞和营养细胞。在显微镜下两个精细胞具二型性:体积较大的精细胞与花粉管的营养核相连,体积较小的精细胞只与大精细胞连接。两个精细胞之间的连接比较结实,需用微量酶液将两个精细胞分开。用显微操作仪就可分别挑选出两个精细胞群体,分别有上百个细胞。蓝猪耳精细胞的成功分离为利用蓝猪耳开展离体受精研究打下了良好的基础。这种单一纯化的精细胞群体的获得为用分子生物学方法区分两个精细胞的特异基因和蛋白质创造了条件。

多花黄精对少弱精子症大鼠生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础研究

目的阐明多花黄精对少弱精子症大鼠模型生精细胞凋亡的保护作用及药效物质基础。方法采用UHPLC-Q Exactive Focus HRMS技术鉴定多花黄精化学成分,及其提取物灌胃给予大鼠后在血清和睾丸组织中的化学成分。设置空白组、模型组、阳性药组(左卡尼汀300 mg/kg)及多花黄精高、中、低剂量组(10、5和2.5 g/kg),考察其改善少弱精子症的药理作用,每组6只大鼠。通过HE染色观察大鼠睾丸组织病理形态,TUNEL染色观察大鼠睾丸生精细胞的凋亡情况,免疫荧光法检测DNMT3A和PIWIL1蛋白表达。结果从多花黄精提取物、大鼠血清、大鼠睾丸中分别鉴定出138种、23种、30种化学成分。模型组大鼠睾丸曲细精管中大量生精细胞凋亡,DNMT3A和PIWIL1蛋白低表达,而多花黄精高、中剂量组大鼠睾丸曲细精管中TUNEL阳性生精细胞数量减少,DNMT3A和PIWIL1蛋白表达显著升高。结论多花黄精对少弱精子症大鼠具有保护作用,其可能是通过上调大鼠睾丸中DNMT3A和PIWIL1的表达,逆转生精细胞的凋亡。

DJ-1/Nrf2在精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞氧化应激中的表达及意义

目的:考察蛋白DJ-1(DJ-1)/稳定核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)在精索静脉曲张相关性弱精症患者生精细胞氧化应激中的表达及意义。方法:收集本院2021年12月-2023年12月收治的120例确诊为精索静脉曲张相关性弱精症的男性患者临床资料,60例为新诊断患者纳入新诊断病例组,60例为接受维生素C联合维生素E治疗3个月的患者纳入病例治疗组;同期婚前健康检查健康男性40例为对照组。检测3组精液生精细胞形态、精液生精细胞的DJ-1、Nrf2蛋白及mRNA,外周血氧化应激[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)]、DJ-1、Nrf2。结果:3组年龄、体质指数、精液体积及精子尾部畸形率均无差异(P>0.05);对照组、病例治疗组、新诊断病例组精子正常形态依次降低,精子头畸形率、体畸形率、头体环合畸形率依次增高,生精细胞DJ-1(0.35±0.11、0.71±0.16、0.89±0.12)、Nrf2蛋白(0.31±0.09、0.62±0.14、0.78±0.13)及mRNA均依次增高,血清MDA、DJ-1、Nrf2依次增高,SOD、GSH-Px依次降低(均P<0.05)。结论:激活DJ-1/Nrf2通路有助于增强精索静脉曲张相关性弱精症生精细胞的抗氧化能力,保护细胞免受由氧化应激引起的损伤,DJ-1/Nrf2通路或是精索静脉曲张相关性弱精症的治疗的潜在分子靶点。

五唇兰精细胞的分离

五唇兰(Doritis pulcherrima)具二胞花粉,授粉后1 d即有花粉开始萌发,授粉后5 d开始有生殖细胞完成有丝分裂形成一对精细胞。通过人工授粉使花粉管在子房内发育,再利用花粉管直接爆破,成功分离出五唇兰的精细胞。成对的2个精细胞在直径大小、荧光强弱上均显示出较大差异,预示2个精细胞具有不同的前途。

牛精细胞膜上受体的研究

用9种具有人类血型专一性或无血型专一性的凝集素,对牛精细胞表面膜上的受体进行了研究.各种凝集素的浓度各不相同就能使牛精细胞发生凝集反应.VBL对人或羊或牛精细胞发生凝集反应的最低浓度也不相同.上述凝集素用FITC标记,再与牛精细胞作用,从荧光显微镜下可以看到,各种凝集素在牛精细胞膜上的受体的分布各不相同,显示在膜上各种凝集素有其相对应的各自的受体.

烟草精细胞两个群体的分离

高等植物的倾向受精是一个非常吸引人的研究课题，目前对其机理还不清楚。要想探索高等植物倾向受精现象，前提之一是要分离出一定数量的两个精细胞群体作为分子生物学研究方法的材料。以前的研究表明，烟草(Nicotiana tabacum L.)花粉管中的两个精细胞体积差异明显。这种异型性的精细胞可能与倾向受精有关。烟草是二胞型花粉，生殖细胞只在体内生长的花粉管中才分裂形成两个精细胞。用体内／体外技术培养出花粉管后，爆破花粉管即可释放出花粉管内含物，其中包括两个精细胞。用微量酶液可使两个精细胞分开。然后用显微操作器可挑选出两个大小不同、数量上千的精细胞群体。这种单一纯化的精细胞群体为用分子生物学方法区分两个精细胞的DNA和蛋白质差异打下基础。本研究是高等植物的第二例、二胞花粉植物中的第一例分离两个特定精细胞群体的尝试，为构建烟草两个精细胞的cDNA文库创造了条件。

输精管阻断对大鼠生精细胞增殖和生精过程的影响

为了解输精管阻断对大鼠生精细胞增殖和生精过程的影响，应用流式细胞技术，对输精管阻断４周和８ 周组大鼠的生精细胞ＤＮＡ 含量进行了分析。结果显示：输精管阻断４ 周和８ 周，实验组的精子细胞和精子比例明显少于相应的对照组（Ｐ＜ ０．０５）；而精原细胞和次级精母细胞比例则明显高于相应的对照组（Ｐ＜ ０．０５）；同时，输精管阻断后生精细胞增殖指数（ＰＩ）值明显降低（Ｐ＜ ０．０５），且细胞多处于Ｇ０ ／Ｇ１ 期，其中８ 周组的Ｓ期细胞比例明显地少于４ 周组（Ｐ＜ ０．０５）。提示：输精管阻断可以影响生精过程的多个阶段，使生精细胞的增殖延缓。

茶多酚对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡影响的研究进展

精索静脉曲张（varicocele,VC）是男性不育症的主要致病原因之一,在普通男性人群的发病率约为15%~20%,在不育症患者中发病率达35%~40%[1],精索静脉曲张患者合并生精功能异常的概率达54.8%[2]。生精细胞可能会受到精索静脉曲张的影响而出现异常的细胞凋亡,从而导致精液异常,引起男性不育症的发生。

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

用光镜、电镜观察了生后 1～ 1 8d昆明白小鼠的生精上皮。结果显示 ,生后 1～ 3 d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞 2类形态结构截然不同的细胞 ,前者位于管中部 ;生后 4～ 5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上 ;生后 6～ 7d,原始 A型精原细胞大量出现并附着在基膜上 ;生后 8d,A型精原干细胞大量出现 ,B型精原细胞开始出现 ;生后 1 0 d,B型精原细胞大量出现 ;生后 1 2～ 1 3 d,前初级精母细胞出现 ,少数曲细精管的管腔开始出现 ;生后 1 4～ 1 5d,多数曲细精管管腔基本形成 ,前初级精母细胞大量出现。本试验的结果表明 ,7～

大鼠睾丸局部热作用对生精细胞凋亡的影响

目的 :研究大鼠睾丸局部受热后生精细胞凋亡的情况。 方法 :70只雄性SD大鼠随机分为热处理组 ( 43℃ )和对照组 ( 2 2℃ ) ,分别按睾丸局部处理后 12h、1d、3d、6d、10d、5 0d和 80d分成 7个亚组。应用电镜、流式细胞术和原位末端标记法 (TUNEL) ,检测各亚组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况。 结果 :电镜显示热处理各组均出现生精细胞凋亡表现 ;流式细胞术检测发现热处理各组亚单倍体细胞百分率明显升高 (P <0 .0 1) ;TUNEL法显示热处理各组生精细胞凋亡率明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,各类生精细胞对热的敏感性不同。 结论 :大鼠睾丸局部受热后生精细胞凋亡增加 ,初级精母细胞受热后最敏感 ,其次为精子细胞和精子 。

枸杞多糖对热应激大鼠生精细胞凋亡的保护作用及其机制研究

目的:研究枸杞多糖对热应激所致大鼠生精细胞凋亡的保护作用及其作用机制。方法:雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、热应激组(HS)、枸杞多糖高(HLBP)、中(MLBP)、低(LLBP)剂量组[剂量分别为100、50、10 mg/(kg.d)],每组18只。按以上剂量给枸杞多糖组大鼠连续灌胃14 d,正常对照组和热应激组给予等量生理盐水灌胃。第15 d给予热应激组和各枸杞多糖组大鼠43℃水浴30 min。热应激后24 h、48 h和7 d颈椎脱臼处死大鼠,TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达,ELISA法检测睾丸组织胞质细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)浓度。结果:与热应激组比较,各枸杞多糖组的凋亡指数均明显降低(P<0.05),免疫组化显示生精细胞Caspase-3阳性表达明显减少(P<0.05),胞质Cyt C浓度显著降低(P<0.05)。结论:枸杞多糖能抑制Cyt C自线粒体释放出来,使Caspase-3的活化减少,导致生精细胞的凋亡减少,推断其通过线粒体途径抑制生精细胞的凋亡而起到保护睾丸组织的作用。

人类凋亡生精细胞超微结构研究

目的 :研究人类生精细胞凋亡的超微结构特征。 方法 :10例不育男性 ,年龄 2 8～ 36岁 ,手淫留取精液标本 ,生理盐水洗涤离心 ,戊二醛固定 ,树脂包埋 ,超薄切片 ,电镜观察。 结果 :①生精细胞及精子存在多形态的超微结构异常 ;②生精细胞凋亡的发生是一连续过程 ,电镜下根据其形态变化可分为 3个阶段 :即凋亡发生的初始阶段 ,首先出现生精细胞核染色质浓缩 ,电子密度高 ,核膜间隙宽 ,局部核膜下或核双层膜间形成空泡 (出芽 ) ;第 2阶段出现核膜膨胀折叠 ,互相融合形成花环状结构 ;第 3阶段表现核膜、胞核裂解 ,细胞形成凋亡小体和残余体 ;③精子凋亡表现为顶体结构异常 ,浆内形成空泡 ,细胞器部分或全部消失 ,胞核浓缩呈细杆状 ,体积缩小 ,核周缘电子密度减低 ;④组织细胞、粒细胞吞噬凋亡的生精细胞或精子并形成髓鞘样结构。 结论 :①生精细胞和精子发生凋亡是男性不育病人常见的异常现象 ;②生精细胞凋亡早期胞核的“出芽”方式有 2种 :即核膜下和核膜间形成囊泡 ,在这过程中 ,核表面先出现针状突起 ,然后转变为光滑 ;③凋亡的生精细胞或精子最后被组织细胞或粒细胞吞噬 ;④对不育男性精液电镜检查 ,了解生精细胞的亚微结构 ,对该病的诊断和治疗具有重要价值。

低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞P53和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :研究低剂量 X射线对小鼠睾丸生精细胞 P5 3和 Bcl- 2蛋白表达的影响。方法 :采用免疫组织化学方法 (SABC法 )观察不同低剂量 X射线照射后各类生精细胞 P5 3和 Bcl- 2蛋白表达的剂量及时程效应关系。结果 :低剂量照射后各类生精细胞不同程度表达 P5 3和 Bcl- 2。 P5 3蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞 ,前者阳性率高于后者 ,并且随照射剂量增加而逐渐升高 ,而精子细胞和精子阳性率较低 ;Bcl- 2蛋白主要表达于精子细胞和精子 ,并且随照射剂量增加而逐渐降低 ,而精原细胞和精母细胞 Bcl- 2蛋白表达阳性率较低。结论 :低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸各类生精细胞 p5 3和 Bcl- 2蛋白表达具有一定规律性 。

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠睾丸组织NO,NOS和抗氧化的影响

目的:探讨补肾生精丸治疗男性不育症的作用机制。方法:以腺嘌呤灌胃SD大鼠,诱发生精细胞损伤大鼠模型。测定服用补肾生精丸前后实验动物睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)含量。结果:补肾生精丸可提高生精细胞损伤大鼠睾丸组织SOD活性,降低NOS活性及NO,MDA含量。结论:补肾生精丸对腺嘌呤诱发的大鼠生精细胞损伤具有保护作用,其作用与补肾生精丸能增强SOD活性、降低NOS活性和NO,MDA含量密切相关。

Fas及FasL表达对大鼠睾丸局部热作用生精细胞凋亡的影响

目的 :探讨 Fas及 Fas L表达对睾丸局部热作用后生精细胞凋亡的影响。方法 :在大鼠睾丸局部受热后 0 .5 d、1 d、3d和 6d,应用流式细胞仪、原位末端标记法 ( TUNEL)检测生精细胞凋亡情况 ;应用流式细胞仪和免疫组化法检测 Fas和 Fas L蛋白表达情况。结果 :与其对照组相比热处理各组生精细胞凋亡明显升高 ( P<0 .0 1 ) ,各热处理组 Fas表达明显增强 ( P<0 .0 1 ) ,Fas L表达亦增强 ( P<0 .0 5 ) ;并且热处理后 Fas及 Fas L阳性表达增强和凋亡增多在发生时间和生精细胞的定位上基本吻合。结论 :睾丸局部热作用可引起生精细胞凋亡增多 ;Fas和 Fas

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达影响的研究

为探讨输精管结扎对生精细胞中凋亡调节基因Bcl－2、Bax蛋白表达的影响，应用免疫组织化学法检测了大鼠输精管结扎后2～12周睾丸生精细胞BCl－2、BCX的蛋白表达情况。结果发现，输精管结扎后总的生精细胞中Bcl－2表达阳性者减少，而Bax表达阳性者增加。在结扎组，平均300个精原细胞和300个精母细胞中，Bcl－2阳性细胞数分别为45．1±14．9、71．3±15．7，而在假手术组，阳性细胞数为52．7±12．1、81.1±14．3．结扎组较假手术组均有显著减少（P＜0．05）。在结扎组，平均300个精原细胞和300个精母细胞中，Bax阳性细胞数分别为84．2±19．4、49．9±17．3，而在假手术组．阳性细胞数为65．9±17．0、42．9±17．3．结扎组较假手术组均有显著减少（P＜0．05）。表明输精管结扎后凋亡抑制基因BCl－2的表达有减少趋势，凋亡促进基因Bax的表达有增强趋势，以促进生精细胞的凋亡。

L-肉碱对糖尿病大鼠生精细胞凋亡及附睾精子数量和活动率的影响

目的:探讨L-肉碱(LC)对糖尿病(DM)大鼠生精细胞凋亡及附睾精子数量和活动率的影响。方法:24只雄性SD大鼠随机均分为3组,一组作为对照组,剩余两组分别注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)建立DM模型。建模成功后,各组大鼠分别给予如下灌胃剂量:对照组:生理盐水;DM模型组:生理盐水;LC组:300 mg/kgLC溶液,连续灌胃6周。末次给药24 h后,麻醉处死所有大鼠,分别进行附睾精子计数并检测精子活动率,流式细胞术检测各组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况。结果:用LC治疗后的大鼠附睾头、尾精子活动率(%)分别为53.7±1.8和60.3±1.6,显著高于DM模型大鼠(分别为32.2±2.0和40.5±1.4,P<0.05),但低于对照组大鼠精子活动率63.1±2.4和68.9±1.3。与对照组附睾尾精子相对计数[(37.8±1.1)×106/100 mg]相比,DM组显著减少[(25.5±1.1)×106/100 mg],且具有统计学差异(P<0.05);LC治疗后大鼠附睾尾精子相对计数[(32.0±1.5)×106/100 mg]比DM组显著增加(P<0.05),但仍低于对照组。与对照组生精细胞凋亡率[(3.7±1.3)%]相比,DM组生精细胞凋亡率[(52.5±4.4)%]显著上升(P<0.05);经LC治疗后,LC组大鼠生精细胞凋亡率为(35.3±3.5)%,比DM组显著降低(P<0.05),但仍显著高于对照组。结论:LC(300 mg/kg)灌胃DM大鼠6周,可以减少DM大鼠生精细胞凋亡,增加附睾精子数量,提高精子活动率。

营养性肥胖对青春期雄性大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的:探讨营养性肥胖对青春期雄性大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法:健康雄性W istar大鼠40只,随机分为两组,每组20只,对照组给予普通饲料喂养,高脂组用高脂、高热量饲料喂养建立营养性肥胖大鼠模型,10周末处死大鼠摘取睾丸。全自动生化分析仪(ACA)检测外周血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);光镜观察睾丸组织病理学改变;TUNEL检测睾丸组织凋亡细胞;免疫组化法检测Bc l-2和Bax蛋白的分布和表达;RT-PCR法检测睾丸组织Bc l-2 mRNA和Bax mRNA的表达。结果:高脂组TC、TG、HDL-C和LDL-C(5.17±0.17、1.18±0.09、1.76±0.11、5.08±0.18)较对照组(1.38±0.12、0.39±0.05、0.97±0.07、0.75±0.06)显著升高(P<0.05);高脂组生精细胞凋亡指数(37.17±2.74)较对照组(5.16±0.81)显著升高(P<0.01),凋亡细胞以精原细胞和精母细胞为主;高脂组Bax蛋白和Bax mRNA(153.26±8.74、1.08±0.12)表达较对照组(101.81±6.14、0.37±0.04)明显升高(P<0.01);高脂组Bc l-2蛋白和Bc l-2 mRNA(139.26±7.21、0.46±0.05)表达较对照组(159.37±8.96、1.05±0.11)明显降低(P<0.01)。结论:营养性肥胖诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡增多,其机制可能与Bc l-2表达降低和Bax表达升高相关。

镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响。方法健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组。腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平。结果与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P<0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞。各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P<0.05)。结论硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关。