基于糖化酶的布鲁氏菌抗体快速检测方法的建立与评估

目的:建立一种布鲁氏菌抗体相对定量检测的新方法,并对其性能进行评价。方法:验证液化条件;建立糖化酶与血糖仪反应值的标准曲线;制备酶标抗体及ELISA平板进行样本检测及反应体系干扰验证的试验。结果:糖化酶浓度与糖浓度成正比,糖化酶-布鲁氏菌脂多糖抗原耦联-1对阴阳性区分度更好,干扰验证试验发现临床样本中葡萄糖、HBsAg、HBsAb、HCV和BSA的水平,均对检测结果无影响。结论:通过构建基于葡萄糖检测的ELISA法,通过便捷式血糖仪,可以实现快速检测布鲁氏菌抗体,为临床诊断提供了新的手段。

N-糖基化改造提高Aspergillus fumigatus生淀粉糖化酶的催化效率

生淀粉糖化酶(raw starch glucoamylase,RSGA)可以直接作用于未糊化淀粉颗粒。该研究基于Aspergillus fumigatus来源RSGA氨基酸序列分析发现,Asn121、Asn422和Asn610位点均为Asn-Xaa-Ser形式的糖基化基序,具有将其突变为Asn-Xaa-Thr形式糖基化基序的潜力。首先,利用NetNGlyc 1.0 Server评估突变序列N-糖基化的可能性,并获得突变体S123T(Asn121-Pro122-Thr123)、S424T(Asn422-Gly423-Thr424)和S612T(Asn610-Arg611-Thr612)。突变体在Komagataella phaffii中表达并完成糖基化,利用去糖基化酶EndoH处理进一步验证突变体均成功被糖基化。在此基础上,以生玉米淀粉为底物,在40℃,pH 4.6的条件下分析了突变体S123T、S424T和S612T的催化效率(k cat/K m),分别是RSGA的1.31、1.29和1.15倍,这主要是由于K m值降低导致突变体对底物的亲和力增加造成的。此外,蛋白浓度及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示突变体S123T表达量提高了9.3%,且糖基化效果显著。酶学性质分析结果显示,重组酶的最适反应温度从70℃降低到60℃。研究结果表明,N-糖基化基序改造是一种有效的提高RSGA的催化效率的策略。

DNS法与菲林试剂法测定酿酒大曲糖化酶活力的比较分析

试验采用菲林试剂法和DNS法分别对20个大曲糖化酶活力进行测定,并比较两种方法测得结果的相关性、精密度和准确性。结果表明,DNS法的检测值大于菲林试剂法,两种方法测得大曲糖化酶活力的结果高度相关(相关系数r=0.9918);同时两种方法测得糖化酶活力的精密度和准确度也均较好,相对于菲林试剂法,DNS法测定糖化酶活力的精密度较高,准确度稍好。两种方法均能满足大曲日常检测需求,从精密性和准确性来说,DNS法相对更优。

具有磁响应性的聚乙二醇载体固定化糖化酶的研究

以两亲性的聚乙二醇胶体粒子，通过吸附－交联法固定化糖化酶。研究了戊二醛浓度，缓冲液ｐＨ值及加酶量对酶固定化的影响，固定化酶活力可达１７０９５Ｕｐｅｒｇｒａｍ干胶，活力回收为６３％。磁性固定化酶最适温度比天然酶提高５℃，最适ｐＨ比天然酶提高０５个ｐＨ单位。并且对酸、碱、热的稳定性大大增强，贮存及操作稳定性也大大提高。该磁性载体合成简单，固定化方法简便，具有磁性，易于分离，因而为工业上的应用提供了一种新的可能。

我国商品糖化酶酶制剂中分解生淀粉糖化酶活力的比较

共收集国内有代表性酶制剂厂生产的糖化酶商品样２１份，测定其分解生淀粉糖化酶活力结果表明，万单位糖化酶含分解生淀粉糖化酶活力最高样品为１０８３８单位，最低为１０３９单位，平均为５４５０单位。取分解生淀粉糖化酶活力高、中、低的样品，进行了生淀粉吸附分离，并经凝胶电泳鉴定，其吸附的酶与测定的酶活力高低相符。

交联糖化酶聚集体的制备

为了克服游离糖化酶的部分缺点,将游离糖化酶用合适的沉淀剂沉淀后,再用戊二醛作为交联剂进行交联,制备了新型的固定化糖化酶-交联糖化酶聚集体。研究结果表明,糖化酶最适聚集条件为:pH5.6,20℃,5g/L的糖化酶液中加入叔丁醇沉淀,可获得比较理想的糖化酶聚集体;最适交联条件为:向糖化酶聚集体中加入10%戊二醛水溶液交联120min,再经离心、洗涤数次后即得交联糖化酶聚集体,酶活力为游离糖化酶的40.4%。

无蒸煮生淀粉糖化酶菌的选育

从２３份土样中筛选出１０５株野生型霉菌，其中有１０株具有较高的糖化生淀粉的能力，尤以Ａ—４（Ⅱ）、Ｃ和Ｅ６３株菌酶活力最高，分别达１１２５２，８２５１和８２５１个酶活性单位；对Ｃ株菌进行紫外光诱变，从诱变后的菌株中筛选出有较大正向突变的２株菌株Ｃ（１）和Ｃ（５），与诱变前相比，Ｃ（１）菌的生淀粉糖化酶活力提高了２７３％，经生淀粉酒精发酵试验，相同条件下酒精度提高了２２４％；Ｃ（５）菌的生淀粉糖化酶活力提高了１２１％，酒精度提高了５９７％。

交联糖化酶聚合体的制备与性质研究

交联糖化酶聚合体是利用硫酸铵沉淀糖化酶,以戊二醛为交联剂对其进行化学交联,制备出的一种无载体固定化糖化酶。本实验对交联糖化酶聚合体的制备和酶学性质进行研究。实验结果表明:交联酶聚合体的最终酶活力为3.15×104U/g干胶,其作用的最适pH4.6,最适反应温度为50℃,Km值为1.75%,当酶保护剂黄原胶的添加量为5.0mg/g时,交联糖化酶聚合体残余酶活力较高,且具有比游离酶更高的热稳定性。

辐照食品级糖化酶制剂应用试验

在采用辐照技术研制的食品级糖化酶制剂的基础上,着重与现在酶制剂工业生产的粉剂糖化酶制剂进行较全面的比较,给出了两种生产工艺和产品品质的差异,以及发醇工业实用效果,证明辐照食品级糖化酶优于目前应用的粉剂糖化酶。

α-淀粉酶和糖化酶协同酶解葛根淀粉动力学研究

研究α-淀粉酶和糖化酶协同作用水解葛根淀粉分子,并建立酶解动力学模型。研究α-淀粉酶和糖化酶在单酶体系、双酶体系、不同淀粉颗粒粒径、不同酶用量的组合对还原性糖形成的影响,以此确定淀粉水解模式和最佳酶用量的组合。基于淀粉颗粒粒径能影响淀粉水解,修正现有的α-淀粉酶和糖化酶协同酶解淀粉动力学方程,并研究葛根淀粉初始质量浓度和不同酶用量组合对解淀粉动力学模型有效性影响。结果表明:单酶体系与双酶体系对还原糖的形成速率差异显著(P<0.01);α-淀粉酶和糖化酶具有协同作用,α-淀粉酶用量为20U和糖化酶为36U为最佳酶组合;对修正的酶解动力学模型进行验证,结果表明修正的酶解动力学模型只有在葛根淀粉初始质量浓度≤18.5mg/mL、α-淀粉酶和糖化酶在较低酶浓度的组合条件下才有效。

利用糖化酶水解马铃薯淀粉生产糖浆的工艺研究

以马铃薯淀粉为原料,经α-淀粉酶处理后,进行糖化酶酶解制备糖浆。以DE值为指标,确定了最佳的糖化酶用量、pH值、温度及时间等条件。试验结果表明,最佳马铃薯淀粉糖浆的生产工艺条件为糖化酶用量0.48g,pH值4.5,时间3h。

不同碳源对黑曲霉产糖化酶活力的影响

碳源对黑曲霉产糖化酶活力有很大影响。研究可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和β-环糊精为碳源时,分别对黑曲霉产糖化酶活力的影响。结果表明,可溶性淀粉为碳源时酶活力最高,最高可达350.34±14.06U/ml;其次是葡萄糖;蔗糖和麦芽糖为碳源时酶活力没有显著性差异;乳糖为碳源时酶活力低于蔗糖和麦芽糖;β-环糊精的酶活力最低。不同碳源发酵培养基中生物量研究表明,黑曲霉能充分利用可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖,对乳糖的利用较差,几乎不能利用β-环糊精。

安卡红曲霉液态发酵产色素及糖化酶的研究

对1株红曲霉(Monascus anka sp.)液态发酵产色素及糖化酶的培养条件进行了优化。研究了碳源、氮源、装液量、接种量等因素对色素积累及糖化酶活力的影响。并通过正交试验确定了最佳培养条件:甘油10%,蛋白胨1.5%,温度32℃,初始pH5.75,接种量6%,装液量75mL/500mL,种龄5d。验证实验表明,以色价最佳组合条件发酵时,发酵液色价达到263.5U/mL;以糖化酶活最佳组合条件发酵时,酶活达到409.6U/mL;以色价和糖化酶活力最佳组合条件发酵时,发酵液色价为260.3U/mL,糖化酶活为404.0U/mL。

黑曲霉酸性α-淀粉酶基因和糖化酶基因对工业酒精酵母的整合及其共表达

用PCR合成的黑曲霉 (Aspergillusniger)酸性α 淀粉酶 (Acidα amylase)的cDNA ,构建了由酵母醇脱氢酶(ADH1 )启动子和终止子引导表达 ,酸性α 淀粉酶自身信号肽序列引导分泌的表达元件 ,与黑曲霉糖化酶cDNA的表达元件同时插入由酵母rDNA序列引导同源整合的酵母YIp型表达载体pWHY中 ,构成双基因表达分泌质粒pWAG。采用pWAG与酵母YEp型G4 1 8抗性表达质粒的共转化 ,将两个基因表达元件整合到酒精生产酵母菌株AS2 346的染色体rDNA序列中 ,获得同时表达胞外酸性α

α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉的工艺条件优化

【目的】探讨α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉的工艺条件,为降低微藻生产生物柴油成本提供参考。【方法】采用α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉,以葡萄糖含量为测定指标,选取反应温度、底物质量浓度、加酶量(m(α-淀粉酶)∶m(糖化酶)=3∶1)、反应时间4个影响因素,进行L25(54)正交试验,确定最佳酶解工艺条件;采用高效液相色谱法(HPLC)、电子扫描电镜(SEM)、X射线衍射(XRD)法对酶解产物的物理特性进行分析。【结果】最佳酶解工艺条件为:反应温度80℃、底物质量浓度0.1 g/mL、加酶量为干基底物淀粉质量的0.6%、反应时间4 h、反应pH 4.0,在此条件下,马铃薯淀粉水解液中葡萄糖含量最高,为802.9 g/L。HPLC、SEM、XRD测定结果表明,酶解产物中葡萄糖所占比例最高,酶解未破坏马铃薯淀粉晶型结构,酶解作用只在淀粉表面发生。【结论】得到了α-淀粉酶和糖化酶协同酶解马铃薯淀粉的最佳工艺条件,为微藻生产生物柴油提供了较好的碳源,节约了生产成本。

多孔醋酸纤维素球形载体固定化糖化酶的研究

报道了一种多孔醋酸纤维素球形固定化酶载体的制备技术，以ＮａＩＯ４氧化法活化，固定糖化酶，测定了固定化糖化酶的催化反应特性，并与游离酶作了比较．固定化酶在５５℃下水解１０批淀粉溶液，总反应时间超过２４ｈ，活力无显著变化．

一种快速检测糖化酶活力的电泳活性染色方法

该文根据糖化酶能水解淀粉的性质,采用Search-PAGE在分离胶中加入淀粉作为糖化酶的作用底物,电泳结束后温浴一定时间,糖化酶所在部位胶板中的淀粉被酶解,其余部分的淀粉依然存在,碘液染色后,糖化酶存在的部位呈现透明区域,没有被水解的部位则被染成蓝色,每块胶板1次可筛选出8～15个样品.

超声波催化糖化酶水解淀粉的初步研究

本文简要介绍了近期在华南理工大学食品化工研究室进行的“超微酶”系列研究之一，即将糖化酶固定于经钛盐活化的多孔硅胶上，在超声场条件下，研究超声波对固定化糖化酶催化水解淀粉的作用及对酶动力学特性的影响，结果表明，在一定功率和频率的超声场条件下，超声波使固定化酶的酶活力提高两倍多，而不改变其ｐＨ和温度特性。

糖化酶研究进展及其在食品工业中的应用

介绍了糖化酶产生菌株的分布、结构与多型性、作用机制、基因和固定化研究与处理及其在食品生产中的应用现状,并对其未来发展趋势进行了展望。

生淀粉糖化酶高产菌的选育

从土壤及霉变淀粉质等样品中分离出对生淀粉具有降解作用的菌种约 6 0株 ,其中生淀粉糖化酶最高的一株根霉OR 1 ,其酶活为 90U/mL ,通过一次紫外和亚硝基胍诱变 ,酶活分别达到 2 0 0U/mL、 3 2 5U/mL ,RDA值分别为 70 %、 6 5 %。诱变株是一株产生淀粉糖化酶较高的根霉。