糖络宁减轻大鼠背根神经节细胞炎症反应的作用机制研究

目的:以施万细胞外泌体为切入点,观察糖络宁含药血清对体外高糖诱导的大鼠背根神经节细胞炎症反应的影响。方法:采用糖络宁含药血清干预高糖培养的施万细胞,分为正常组、高糖组、糖络宁组,干预48 h后,提取各组细胞上清液中外泌体,将各组外泌体分别干预正常糖和高糖条件培养的大鼠背根神经节细胞,分为无外泌体-正常糖组,正常外泌体-正常糖组、高糖外泌体-正常糖组、糖络宁外泌体-正常糖组、无外泌体-高糖组、正常外泌体高糖组、高糖外泌体-高糖组、糖络宁外泌体-高糖组8个组,48 h后,收集各组细胞并进行相关检测。CCK-8法检测各组细胞活力,酶联免疫法检测各组细胞上清液中炎症介质(TNF-α、IL-6、IL-1β)的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测各组细胞炎症介质的表达情况。结果:与正常外泌体-正常糖组比较,高糖外泌体-正常糖组细胞活力下降(P<0.05),炎症介质的基因和蛋白表达均增加(P<0.05);而与高糖外泌体-正常糖组比较,糖络宁外泌体-正常糖组细胞活力有所升高(P<0.05),各炎症介质的基因和蛋白表达均有所下调(P<0.05)。高糖条件培养的背根神经节细胞中,不同组外泌体干预表现出类似的作用效果;结论:糖络宁能通过调控施万细胞外泌体减轻大鼠背根神经节细胞炎症反应。

糖络宁调控细胞骨架干预糖尿病周围神经病变脱髓鞘的作用机制

目的 基于PDZ和LIM结构域蛋白7(PDZ and LIM domain protein 7,Pdlim7)和突触极蛋白(synaptopodin-2,Synpo2)调控的丝状肌动蛋白(filamentous actin, F-actin)探讨糖络宁改善糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)脱髓鞘的干预作用及机制。方法 采用腹腔注射链脲佐菌素建立高血糖大鼠模型。将SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组(α-硫辛酸,20 mg/kg)和糖络宁组(10.9 g/kg),每组12只。干预12周后,观察透射电镜观察大鼠坐骨神经超微结构并统计髓鞘相对面积和G-ratio;检测鼠尾热痛阈值与坐骨神经神经传导速度,观察各组大鼠神经功能;4D-label free蛋白质组学联合生物信息学分析筛选DPN大鼠坐骨神经的差异性蛋白。采用蛋白免疫印迹法与免疫荧光法检测坐骨神经细胞骨架相关胶质纤维酸性蛋白、微管蛋白、F-actin和Pdlim7、Synpo2的表达。结果 与空白组比较,模型组坐骨神经髓鞘相对面积和G-ratio数值降低(P<0.05),热痛阈值增加(P<0.01),运动和感觉神经传导速度均降低(P<0.01);与模型组比较,糖络宁组髓鞘相对面积和G-ratio数值显著升高(P<0.01),热痛阈值降低(P<0.01),运动和感觉神经传导速度均增加(P<0.01)。蛋白质组学显示,糖络宁干预12周后,DPN大鼠坐骨神经差异蛋白多与细胞骨架、肌动蛋白结合及PDZ结构域和LIM结构域蛋白相关。与空白组比较,模型组坐骨神经中F-actin、Pdlim7和Synpo2表达降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01);与模型组比较,糖络宁组F-actin、Pdlim7和Synpo2表达明显升高(P<0.01)。共定位结果表明,与空白组比较,模型组髓鞘上F-actin表达显著降低(P<0.01),与F-actin共定位的Pdlim7表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,糖络宁组髓鞘上F-actin表达显著升高(P<0.01),与F-actin共定位的Pdlim7表达明显升高(P<0.01)。结论 糖络宁改善DPN坐骨神经脱髓鞘与调控细胞骨架相关,机制与增加Pdlim7和Synpo2的表达,进而增加细胞骨架蛋白F-actin生成而促进髓鞘生成有关。

糖络宁治疗糖尿病周围神经病变临床疗效及其对氧化应激反应的影响

目的观察糖络宁治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的临床疗效并对其作用机制进行初步探讨。方法选择符合标准的DPN患者62例,随机分为治疗组32例和对照组30例。在糖尿病基础治疗的同时,治疗组口服糖络宁,对照组口服弥可保,疗程均为2个月。观察治疗前后患者临床症状、神经病变积分(MDNS)及神经传导速度的改善情况,并观察治疗前后血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性水平及总抗氧化能力(TAOC)的变化。结果治疗组总有效率为93.8%(30/32),明显优于对照组的70.0%(P<0.01)。2组治疗后临床症状积分、MDNS积分均明显下降,且治疗组明显低于对照组(P<0.01)。2组治疗后神经传导速度均明显改善,治疗组优于对照组(P<0.05)。2组治疗后血清SOD活性及TAOC水平明显升高,MDA水平明显下降,TAOC/MDA明显升高,TAOC与MDA呈负相关(r=-0.206,P<0.01),且治疗组优于对照组(P<0.01)。在治疗过程中未见明显不良反应。结论糖络宁治疗DPN疗效确切,其作用机制可能与抗氧化应激有关。

糖络宁对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节线粒体抗氧化剂活性的影响

目的观察中药复方糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节细胞线粒体中3种抗氧化剂的影响。方法SD雄性大鼠40只,随机取7只为对照组,余33只制作链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,其中29只造模成功后随机分为模型组9只、治疗组10只、中药组10只,分别给予生理盐水、α硫辛酸和糖络宁灌胃,共给药8周,观察各组大鼠背根神经节细胞线粒体锰超氧化物歧化酶(MnSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、过氧化氢酶(CAT)活性的变化。结果与对照组比较,模型组大鼠线粒体MnSOD、GPX、CAT活性(U/mg蛋白)均明显下降(分别为32.16±4.75 vs.20.17±3.31,45.67±5.64 vs.30.19±4.33,2.87±0.47 vs.1.24±0.34,P<0.01);与模型组比较,治疗组、中药组大鼠线粒体MnSOD、GPX、CAT的活性均明显改善(分别为30.78±5.27、39.10±7.67、2.56±0.31和29.14±3.79、39.43±6.23、2.49±0.28,P均<0.01)。结论糖络宁可显著提高糖尿病大鼠背根神经节线粒体中3种抗氧化剂的活性,可能是其防治糖尿病周围神经病变的机制。

糖络宁配合穴位按摩治疗糖尿病性周围神经病变的临床研究

目的观察糖络宁配合穴位按摩对糖尿病性周围神经病变(DPN)的临床疗效。方法将符合标准的DPN患者60例,随机分为治疗组(30例)和对照组(30例),在基础治疗的同时,治疗组予糖络宁,同时配合局部穴位按摩治疗;对照组口服甲钴胺治疗。治疗2个月后观察2组患者临床症状、神经病变积分(MDNS)、血液流变学及肌电图的改善情况,并进行治疗前后及2组间比较。结果治疗组总有效率为93.3%,对照组为63.3%,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。2组临床症状积分及MDNS均明显下降,且治疗组明显低于对照组(P<0.05或P<0.01),治疗组患者的肢体麻木、疼痛、触觉、针刺觉、震动觉、踝反射等神经系统症状改善明显,明显优于对照组(P<0.05或P<0.01),治疗组治疗后全血黏度高切、中切、低切及血浆黏度均明显下降,而对照组下降不明显,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。2组治疗后神经传导速度及波幅均明显改善,但治疗组改善较对照组更明显(P<0.05)。治疗过程中未见明显的不良反应。结论糖络宁加穴位按摩可明显提高DPN临床疗效。

糖络宁对STZ诱导糖尿病大鼠血清NGF含量及坐骨神经NGF mRNA表达的影响

目的:观察中药复方糖络宁对糖尿病大鼠血清NGF含量及坐骨神经组织NGF mRNA表达的影响。方法:采用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、西药组和糖络宁高、中、低剂量组并分别给药,共给药12周,另设正常对照组,给药结束后,观察各组大鼠血清NGF含量及坐骨神经组织NGF mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清NGF含量明显下降;与模型组比较,西药组与糖络宁各剂量组大鼠血清中NGF含量明显升高;糖络宁高剂量组血清NGF含量又明显高于西药组。与正常对照组比较,模型组大鼠坐骨神经组织中NGF mRNA表达明显下降;与模型组比较,西药组与糖络宁中、高剂量组大鼠坐骨神经组织中NGF mRNA表达明显升高。结论:糖络宁可提高糖尿病大鼠血清NGF水平,可上调糖尿病大鼠坐骨神经组织NGF mRNA表达,这可能是糖络宁治疗糖尿病周围神经病变的机制。

糖络宁配合中药泡洗治疗糖尿病性周围神经病变的临床研究

目的观察糖络宁配合中药泡洗对糖尿病性周围神经病变(DPN)的临床疗效。方法将符合诊断标准的DPN患者80例,随机分为治疗组(38例)和对照组(42例),在基础治疗的同时,治疗组予糖络宁,同时配合中药泡洗治疗;对照组口服弥可保(甲钴胺)治疗。对患者的临床疗效、总症状评分量表(TSS)及密西根糖尿病神经病变评分量表(MDNS)神经症状积分、双侧胫神经运动神经及感觉神经传导速度进行观察。结果治疗组总有效率为94.7%,高于对照组的64.3%(P<0.05);2组TSS、MDNS积分均显著改善,且治疗组优于对照组(P<0.05);治疗组双侧胫神经运动神经传导速度有明显的改善,且优于对照组(P<0.05)。2组治疗过程中均未见明显的不良反应。结论糖络宁加中药泡洗可明显提高DPN临床疗效,改善神经传导速度,安全性好。

糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节线粒体DNA及电镜下线粒体结构的影响

目的观察糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节线粒体DNA、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)及线粒体结构的影响。方法选取14只SD大鼠作为正常组,其余SD大鼠采用链脲佐菌素制作糖尿病大鼠模型,造模成功后,将其随机分为模型组、西药组(α-硫辛酸)、中药组(糖络宁),共给药8周,给药结束后,检测线粒体DNA水平、8-OHd G水平,并运用电镜观察线粒体内部结构。结果与正常组比较,模型组大鼠神经细胞线粒体DNA、8-OHd G水平明显增加(P<0.01);与模型组比较,中药组与西药组神经细胞线粒体DNA、8-OHd G水平明显降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠DRG线粒体肿胀明显,内部结构破坏严重,线粒体内特异结构嵴消失;而中药组大鼠DRG线粒体结构相对完整,线粒体嵴保存完好;西药组大鼠DRG线粒体也存在轻度肿胀,内部结构不完整,嵴显示不清楚。结论糖尿病大鼠神经细胞中线粒体会发生明显改变,其内部结构严重破坏,DNA表达过度升高,DNA的氧化损伤也非常明显。糖络宁可明显减低线粒体DNA表达,减少氧化损伤,缓解线粒体结构的破坏,这是糖络宁治疗糖尿病周围神经病变的机制之一。

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠PERK-CHOP-Caspase-12通路的影响

目的观察糖络宁对糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)大鼠坐骨神经内质网应激相关PERK-CHOP-Caspase-12通路的调节作用。方法选用8周龄雄性SD大鼠,除空白对照组外,采用高脂饲料致高血脂联合链脲佐菌素腹腔注射诱导高血糖致DPN大鼠模型。将高脂高糖大鼠随机分为模型对照组、阳性药(氧化三甲胺)对照组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,连续给药12周。给药过程中,动态监测大鼠血糖、血脂,确保糖尿病造模成功。12周后采用免疫荧光法检测坐骨神经中葡萄糖调节蛋白(glucose regulatory protein 78k D,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、蛋白激酶样内质网激酶(PKR-like ER kinase,PERK)、caspase-12和caspase-3的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组坐骨神经中GRP78、CHOP、PERK、Caspase-12和Caspase-3的表达均显著升高(P<0.01或P<0.05);与模型对照组比较,糖络宁低剂量组和高剂量组GRP78表达显著升高(P<0.01),CHOP、PERK、Caspase-12和Caspase-3表达明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论糖络宁防治DPN的作用机制与调节坐骨神经中内质网应激相关的PERK-CHOP-Caspase-12通路相关蛋白表达而抑制细胞凋亡有关。

糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的影响

目的:观察糖络宁(TLN)对糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素注射建立大鼠糖尿病模型,造模成功的大鼠分为模型和TLN组,另设正常对照组。TLN干预32周,检测背根神经节细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果:模型组与正常对照组相比细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.05)。TLN组与模型组相比细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:TLN能够下调caspase-3蛋白表达,抑制细胞凋亡,从而发挥其神经保护作用。

糖络宁对STZ诱导糖尿病大鼠糖、脂毒性及神经电生理的影响

目的:观察糖络宁对STZ诱导糖尿病大鼠糖、脂毒性及神经电生理的影响。方法:采用一次性腹腔内注射大剂量链脲佐菌素(STZ,60 mg·kg-1)诱导糖尿病大鼠模型。将糖尿病模型鼠随机分为模型组、糖络宁组、α-硫辛酸组(每组23只),正常鼠(15只)为正常对照组。糖络宁组予糖络宁按生药20 g·kg-1·d-1ig,α-硫辛酸组予α-硫辛酸20 mg·kg-1·d-1ig,其他2组大鼠予等体积蒸馏水ig,连续处理12周。观察体质量(BM)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、游离脂肪酸(FFA)水平以及摆尾温度阈值(TTT)、坐骨神经运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)的变化。结果:与正常鼠比较,各组糖尿病大鼠FPG、HbA1c、FFA水平及TTT均明显升高(P<0.01),而BM、MNCV、SNCV明显下降(P<0.01);经糖络宁、α-硫辛酸处理后两组大鼠FPG、HbA1c、FFA及TTT、MNCV、SNCV均明显改善(P<0.05),但BM无明显变化。糖络宁组大鼠在FPG、HbA1c、FFA改善方面与α-硫辛酸组比较有统计学差异(P<0.05),其余指标均未见明显统计学差异(P>0.05)。结论:中药糖络宁能有效改善糖尿病大鼠的糖、脂毒性和神经传导速度,保护神经组织,对糖尿病周围神经病变(DPN)有防治作用。

糖络宁对STZ诱导糖尿病大鼠背根神经节线粒体呼吸链复合物的影响

目的观察中药复方糖络宁对糖尿病大鼠背根神经节细胞线粒体呼吸链复合物的影响。方法采用链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型，造模成功后随机分为模型组、α,硫辛酸组、糖络宁组，共给药8周，给药结束后，观察糖络宁对大鼠背根神经节细胞线粒体呼吸链复合物的影响。结果与正常组比较，模型组大鼠线粒体呼吸链复合物Ⅰ～Ⅳ活性均明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）；与模型组比较，仪硫辛酸组大鼠线粒体呼吸链复合物Ⅰ～Ⅳ的活性均明显改善，差异有统计学意义（P〈0．01）；与模型组比较，糖络宁组大鼠线粒体呼吸链复合物Ⅰ～Ⅳ的活性均明显改善，差异有统计学意义（P〈O．01）；糖络宁组与α硫辛酸组比较，大鼠线粒体呼吸链复合物Ⅳ的活性改善更加明显，差异有统计学意义（P〈O．05）。结论显著提高糖尿病大鼠背根神经节中线粒体呼吸链各个复合物的活性，可能是糖络宁防治糖尿病周围神经病变的作用机制。

糖络宁对高糖环境中雪旺细胞内质网应激IRE1通路的影响

目的观察中药复方糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的抗凋亡保护作用,探讨糖络宁对于内质网应激IRE1信号通路的调控作用。方法在高糖环境中培养雪旺细胞,设置空白对照组、模型组、糖络宁组、不同阻断剂组。培养12、24小时后,应用流式细胞术检测糖络宁含药血清处理下的细胞凋亡水平,应用免疫印迹法(Western blot,WB)检测内质网应激的IRE1-TRAF2-JNK凋亡通路的标志蛋白肌醇依赖酶1(inositol-requiting enzyme 1,IRE1)、X盒结合蛋白(X-box binding protein 1,XBP1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor-associated factor 2,TRAF2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XBP1、TRAF2、JNK的基因表达。结果高糖孵育雪旺细胞12、24小时可显著诱导其损伤,细胞活力下降;与正常组比较,高糖环境下雪旺细胞凋亡水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖络宁含药血清能够改善高糖环境下雪旺细胞的凋亡(P<0.05)。在造模后检测时间点12小时、24小时,与空白组比较,模型组IRE1α、TRAF2和JNK表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,糖络宁组含药血清组TRAF2和JNK蛋白的表达显著降低(P<0.05)。在造模后检测时间点12小时,与空白组、模型组比较,糖络宁组含药血清组XBP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。PCR结果显示,糖络宁含药血清能够发挥类似于TRAF2 siRNA阻断剂的作用,抑制IRE1途径下游凋亡通路。结论糖络宁可对抗高糖环境引起的雪旺细胞损伤,作用机制与调控内质网应激IRE1信号通路有关。在IRE1通路被激发的初期,可能激活IRE1-XBP1通路,提高高糖环境下雪旺细胞的存活能力;当内质网应激过载时糖络宁抑制IRE1-TRAF2-JNK通路,减轻高糖环境下的雪旺细胞的凋亡。

糖络宁对糖尿病大鼠血糖及摆尾温度阈值的影响

目的观察糖络宁对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠一般指标及摆尾温度阈值的影响,探讨其对糖尿病性周围神经病变(DPN)的防治作用。方法采用一次性腹腔内注射60 mg/kg STZ诱导糖尿病大鼠模型。将模型大鼠随机分为模型组、糖络宁组、α-硫辛酸组,每组23只,另取15只大鼠为正常组。糖络宁组予糖络宁20 g/(kg.d)灌胃,α-硫辛酸组予α-硫辛酸20 mg/(kg.d)灌胃,正常组和模型组大鼠予等体积蒸馏水灌胃,连续处理12周。观察大鼠体质量(BM)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)及摆尾温度阈值的变化。结果与正常组比较,各组糖尿病大鼠BM明显下降(P<0.01),而FPG、HbA1c及摆尾温度阈值均明显升高(P<0.01);经糖络宁、α-硫辛酸处理后,2组大鼠FPG、HbA1c及摆尾温度阈值均明显改善(P<0.05),但BM无明显变化。糖络宁组大鼠在FPG改善方面与α-硫辛酸组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论糖络宁能有效改善糖尿病大鼠的糖毒性和摆尾温度阈值,对DPN有防治作用。

糖络宁配合足浴治疗糖尿病性周围神经病变临床研究

目的:观察糖络宁配合足浴治疗糖尿病性周围神经病变(DPN)的临床疗效。方法:将符合标准的DPN60例随机分为治疗组(30例)和对照组(30例),在基础治疗的同时,治疗组加服糖络宁并配合足浴;对照组加服弥可保(甲钴胺),观察患者症状、神经传导速度及波幅变化,并进行组间比较。结果:治疗组总有效率明显优于对照组(P<0.05)。治疗组对DPN患者的肢体麻木、疼痛、触觉、针刺觉、震动觉、踝反射减弱等神经系统症状改善明显,对神经传导速度及波幅亦有明显的改善作用。结论:糖络宁与足浴合用可明显提高DPN临床疗效。

糖络宁对糖尿病大鼠坐骨神经能量代谢和神经传导速度的影响

目的:观察糖络宁(TLN)对糖尿病大鼠坐骨神经能量代谢和神经传导速度(NCV)的影响。方法:链脲佐菌素注射建立糖尿病大鼠模型并随机分为模型组和TLN组,另设正常对照组。TLN干预8周,检测坐骨神经MNCV和ATP、Pcr、Cr含量。结果:模型组与正常对照组比较,MNCV显著减慢,Pcr含量以及Pcr:Cr明显减低(P<0.05)。TLN组与模型组比较,MNCV和Pcr含量以及Pcr:Cr显著升高(P<0.05)。结论:TLN能够改善坐骨神经能量代谢,加快NCV,从而发挥其神经保护作用。

糖络宁对STZ诱导DPN大鼠氧化应激的影响

目的观察糖络宁对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠氧化应激的影响。方法SD大鼠60只,随机选取10只为正常对照组,其余50只大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ建立糖尿病大鼠模型,造模成功后随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组。药物干预12周后,检测大鼠血清中总抗氧化能力(T-AOC)及抗氧化酶如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等的活力,同时测定氧化应激产物如丙二醛(MDA)含量、活性氧自由基(ROS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活力。结果与空白对照组比较,模型对照组T-AOC降低(P<0.01),抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT活力降低(P<0.01);氧化应激产物MDA、ROS含量升高(P<0.01),iNOS的活力升高(P<0.01)。与模型对照组比较,糖络宁低剂量组T-AOC升高(P<0.01),抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT活力升高(P<0.01);氧化应激产物MDA含量降低(P<0.01),ROS含量降低(P<0.05),iNOS的活力降低(P<0.01)。糖络宁高剂量组T-AOC的活力升高(P<0.05),CAT的活力升高(P<0.01);氧化应激产物MDA含量降低(P<0.01),ROS含量降低(P<0.05),iNOS的活力降低(P<0.01)。结论中药复方糖络宁可以明显提高具有抗氧化能力物质SOD、GPx、CAT含量和T-AOC的活力,清除对周围神经有害的氧化代谢产物及氧化应激活性物质MDA、ROS和iNOS的含量及活力,具有明显抗氧化应激能力,减轻氧化损伤,对糖尿病周围神经病变(DPN)有明显的保护作用。

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经功能及内质网应激IRE1α-XBP-1-CHOP通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)大鼠内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ER stress)IRE1α-XBP-1-CHOP通路的影响。方法建立DPN大鼠模型,设置空白对照组(Control)、模型对照组(Model)、氧化三甲胺组(TMAO)、糖络宁低剂量组(LTLN)和糖络宁高剂量组(HTLN),分别灌胃给药12周。采用放射免疫试剂盒测定稳态胰岛素抵抗指数;采用透射电镜和劳克坚劳蓝染色观察坐骨神经结构;测定鼠尾热痛阈值、神经传导速度和蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5, PGP 9.5)蛋白的表达并检测周围神经功能;采用Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78, GRP 78)、X盒结合蛋白1(X-box binding protein1, XBP-1)、凋亡蛋白C/EBP同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein Homologous protein, CHOP)、B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)和磷酸化真核翻译起始因子2α(phospho-ukaryotic translation initiation factor 2α, P-eIF 2α)的蛋白表达;通过免疫荧光组织化学法检测肌醇激酶1 (inositol requiring enzyme1α, IRE 1α)、生长停滞及 DNA损伤基因34 (growth-arrest and DNA damage-inducible gene 34, GADD 34)和内质网氧化蛋白(endoplasmic oxidoreductin-1-like, Ero1α)指标。结果与模型组比,糖络宁高、低剂量组能够有效改善坐骨神经的结构和功能,并能够影响内质网应激IRE1α-XBP-1-CHOP凋亡通路提高GRP 78、Bcl-2和P-eIF 2α的表达(P<0.05),降低P-IRE1α、XBP-1、CHOPGADD 34、Bax和Ero1α的表达(P<0.05)。结论糖络宁能够通过抑制ER stress中IRE1α-XBP-1-CHOP凋亡途径相关蛋白的表达,从而减轻ER stress诱导的细胞凋亡,改善坐骨神经的结构和功能从而防治DPN。

糖络宁对DPN中IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠内质网应激IRE1-TRAF2-XBP-1途径的影响。方法以高脂饲料联合链脲佐菌素诱导SD大鼠致DPN模型,经糖络宁干预12周后,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠坐骨神经形态的变化,采用免疫荧光法检测DPN大鼠坐骨神经EDEM、PDI和TRAF2蛋白表达,采用Western blot法检测DPN大鼠坐骨神经细胞凋亡途径P-JNK和caspase-3的蛋白表达。选用RSC96细胞株,采用高糖环境培养的施万细胞模型,用糖络宁含药血清分别干预24h和48h,采用高内涵分析方法分别测定糖络宁含药血清对施万细胞中EDEM、PDI、TRAF2和P-JNK蛋白表达的影响。结果 HE染色结果显示,模型组大鼠坐骨神经髓神经脱髓鞘严重;糖络宁低、高剂量组坐骨神经脱髓鞘现象得到改善,坐骨神经髓鞘积分吸光度显示,模型组比空白组明显降低(P <0. 05),糖络宁高剂量组得到明显改善(P <0. 05);免疫荧光结果显示,糖络宁高低剂量组能使EDEM和PDI表达增加(P <0. 01,P <0. 05),TRAF2表达降低(P <0. 01,P <0. 05); Western blot法检测结果显示,糖络宁高低剂量均显示P-JNK和caspase-3的表达降低。细胞实验中,24h和48h干预后的150mmol/L葡萄糖组EDEM与PDI显著性降低(P <0. 01),TRAF2与P-JNK显著性升高(P <0. 01);高糖高剂量组的EDEM在24h干预后的表达显著升高(P <0. 01),而P-JNK表达显著降低(P <0. 05); PDI在48h干预后的表达显著升高(P <0. 01);高糖高、低剂量组的TRAF2在24h和48h干预后均显著降低(P <0. 01)。结论糖络宁能够改善受损的坐骨神经结构,与糖络宁影响内质网应激相关IRE1-TRAF2-JNK途径相关,通过促进EDEM和PDI的表达,抑制TRAF2、P-JNK和caspase-3的表达,从而抑制神经细胞凋亡,改善DPN。

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠Nrf2/ARE通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠Nrf2/ARE通路相关蛋白的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为空白对照组和链脲佐菌素(STZ)组,STZ组大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ,造模1周后,将空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L的大鼠稳定1个月后,随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,并给予相应药物12周。麻醉取大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学方法检测大鼠坐骨神经Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、及谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱,脱髓鞘严重,坐骨神经中Keap1、Nrf2、HO-1和γ-GCS的表达增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,糖络宁低、高剂量组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱和脱髓鞘现象得到改善,其中糖络宁低剂量组Keap1、Nrf2表达增加,糖络宁高剂量组HO-1、γ-GCS表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论糖络宁能够改善DPN大鼠坐骨神经的病理状态,上调Nrf2/ARE信号通路中Keap1、Nrf2、HO-1及γ-GCS的表达,增强机体抗氧化应激的能力。