基于多克隆抗体的糠氨酸ic-ELISA检测方法的建立

采用甲醛法制备了糠氨酸完全抗原,通过交叉验证确保了多克隆抗体的特异性,从而建立了基于该抗体的糠氨酸间接竞争酶联免疫吸附测定(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测方法。结果显示,建立的ic-ELISA检测方法有效检测范围为12.20~2143.42 ng/mL,最低检测限为2.69 ng/mL。该方法操作简便、迅速,成本低廉,同时具备高灵敏度和优异特异性,为高效检测食品中糠氨酸质量浓度提供了新的选择,具有一定实际应用价值。

超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂王浆中糠氨酸

应用超高效液相色谱-串联质谱法建立一种适用于蜂王浆中糠氨酸含量的分析方法。样品用10.6 mol/L盐酸在110℃条件下水解24 h,水解后的样品经C18固相萃取柱净化,3 mol/L盐酸洗脱,纯净水1:1稀释,以2 mM甲酸铵水溶液(含0.01%甲酸)和2 mM甲酸铵甲醇溶液(含0.01%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,ACQUITY BEH C18柱上分离,电喷雾离子源(ESI)正离子模式,多反应监测模式(MRM)检测基质匹配,外标法定量。结果显示,糠氨酸在0.00125~0.07500 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r2)为0.997,方法检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为17μg/kg和50μg/kg。在1倍、2倍和10倍LOQ这3个添加水平下,糠氨酸的平均回收率范围为105.8%~119.4%,相对标准偏差(RSD)为0.4%~4.9%(n=6)。采用本方法对20批蜂王浆中的糠氨酸进行了测定,样品中糠氨酸含量在68.0~311.5μg/kg之间。本方法检出限低、灵敏度高、准确性好,适用于蜂王浆中糠氨酸的测定。

婴儿配方奶粉中糠氨酸和乳果糖的含量及影响含量变化因素研究

文章通过检测市售婴儿配方奶粉的糠氨酸质量分数和乳果糖质量浓度,分析影响糠氨酸质量分数和乳果糖质量浓度的因素。结果表明,糠氨酸质量分数为124.4~1210.3 mg/100 g蛋白质,乳果糖质量浓度为17.9~769.1 mg/L,原产地和主要原料种类对糠氨酸质量分数和乳果糖质量浓度无统计学差异(P>0.05),生产加工条件和贮存条件会产生影响。糠氨酸也可以作为乳制品中反映赖氨酸破坏程度的指标,市售婴儿配方奶粉的封闭赖氨酸占总赖氨酸为2.7%~20.5%,可利用赖氨酸平均质量分数为7.5 g/100 g蛋白质,略高于母乳平均水平(6.6 g/100 g蛋白质)。通过监测标志物的方法来控制婴幼儿配方奶粉的质量,为新鲜婴幼儿配方奶粉相关标准体系制定提供参考。

影响牛奶中糠氨酸质量分数变化的因素

综述了影响糠氨酸质量分数的相关因素,并加以归类和概括。系统的阐述了影响牛奶中糠氨酸质量分数的因素,包括杀菌过程中的加热温度和加热时间,储存过程中的储存温度和储存时间以及牛奶自身的理化性质,为科学地检测及反应牛奶中糠氨酸质量分数提供依据。

牛奶中糠氨酸检测方法的研究进展

综合阐述了牛奶等食品中糠氨酸检测方法的最新进展,比较了高效液相色谱、液相色谱质谱联用、毛细管电泳质谱联用和表面荧光法在糠氨酸检测中的优缺点,为进一步开发牛奶等食品中糠氨酸检测的新方法提供参考。

生乳与巴氏杀菌乳中糠氨酸含量及其测定方法研究

本试验研究了生乳与巴氏杀菌乳中糠氨酸含量及其测定方法,并提出糠氨酸作为巴氏杀菌乳中复原乳成分的标示物质,可鉴定巴氏杀菌乳中是否掺入复原乳。研究结果表明,生乳中糠氨酸含量应低于7 m g/100 g;乳粉中糠氨酸含量大于135 m g/100 g;不含复原乳的巴氏杀菌乳中糠氨酸含量应小于12 m g/100 g。使用高效液相色谱(HPLC)紫外检测糠氨酸平均偏差<5%(n=5);回收率为98.2%。

影响超高温灭菌纯牛乳糠氨酸含量的关键点分析及控制

牛乳中的乳糖作为还原糖,在热处理过程中与牛乳蛋白之间发生美拉德反应并生成中间产物——乳果糖基赖氨酸(Lactulosyllysine),其经酸水解后可生成呋喃素(Furosine)。呋喃素又称糠氨酸,可作为一个定量指标用于鉴别UHT灭菌纯牛乳或巴氏杀菌乳是否为复原乳。由于加工工艺参数的影响,使得UHT灭菌纯牛乳中的糠氨酸含量时常超出标准范围,为了解决此问题,本文分别对预巴杀温度、浓缩工艺、添加管道滞留奶以及UHT杀菌工艺参数这几个可能影响糠氨酸含量的关键点进行了分析,发现浓缩工艺、添加管道滞留奶以及UHT杀菌工艺参数是影响成品中糠氨酸含量最主要的关键点。

HPLC法测定婴幼儿配方食品中的糠氨酸

建立高效液相色谱法测定婴幼儿配方食品中糠氨酸的分析方法。样品经复溶后,经10.6 mol/L盐酸水解,用迪马铂金ODS色谱柱分离,采用紫外检测器在280 nm下进行检测,外标法定量。方法标准曲线线性相关系数r2=0.999 9,精密度RSD为2.23%,加标回收率为96.56%~106.24%,检出限(S/N=3)为0.38μg/mL,检测限(S/N=10)为1.25μg/mL。分析21个婴幼儿配方食品样品(含11个品牌),结果表明,糠氨酸含量水平在468 mg/100 g^1 467 mg/100 g(以蛋白质计)之间,部分样品的蛋白质质量损伤程度较大。

HPLC法测定乳品中的糠氨酸

本文采用高效液相色谱法测定乳品中的糠氨酸,应用耐酸的C18色谱柱和紫外检测器。本方法的最低检测限为1.48×10-9g,变异系数CV(%)为1.23,回收率为98.2%～100.8%。

反相离子对色谱法测定牛奶与奶粉中糠氨酸的含量

建立了反相离子对色谱法测定牛奶和奶粉中糠氨酸含量的分析方法。样品的盐酸水解液经氮气吹干,流动相溶解定容后直接测定。实验条件为:Luna C18色谱柱,柱温30℃,以2.5mmol/L 1-庚烷磺酸钠(磷酸调pH2.2)-乙醇(体积比为88∶12)为流动相,检测波长为280nm,流速为1mL/min。结果表明,糠氨酸的质量浓度在0.5～75.0mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系,线性方程为y=49365x+10677(r=0.9999),检出限(S/N=3)为0.0065mg/L。牛奶和奶粉样品的RSD分别为0.3%和1.0%,平均加标回收率均为98%。该方法在样品预处理中省去了干过滤及C18柱预萃取过程,操作简便,成本低廉,适用于乳品中糠氨酸含量的测定。

糠氨酸标准溶液的储存稳定性以及盐酸浓度对牛奶中糠氨酸检测结果的影响

本试验旨在研究糠氨酸标准溶液的储存稳定性以及牛奶前处理过程中盐酸浓度对糠氨酸检测结果的影响。试验1:分别用3.0、1.0和0.1 mol/L盐酸配制不同浓度糠氨酸标准溶液(1和5 mg/L),并分别放置于-20、4℃和室温(25℃)下,于第1、3、5、8、10、12、14、15、17和21天采用超高效液相色谱法测定糠氨酸含量(每个处理设3个平行),分析糠氨酸标准溶液在不同储存条件下的稳定性。试验2:设置11种不同浓度的盐酸,水解牛奶后测定糠氨酸含量,每个浓度设4个平行,试验独立重复3次,分析盐酸浓度对牛奶中糠氨酸检测结果的影响以及结果的重复性。结果表明:1)0.1和1.0 mol/L盐酸配制的糠氨酸标准溶液不稳定,3.0 mol/L盐酸配制的糠氨酸标准溶液稳定性较好,可于-20、4℃和室温条件下保存21 d。2)盐酸浓度显著影响牛奶水解效果(P<0.05),当水解液中盐酸浓度达到9.17 mol/L时糠氨酸可以完全游离出来,检测结果重复性比较好。因此,建议用3.0 mol/L盐酸配制糠氨酸标准溶液,于4℃保存,21 d内使用;水解牛奶所用盐酸浓度应使牛奶水解液中盐酸浓度至少达到9.17 mol/L。

反相离子对色谱法测定蜂王浆中糠氨酸的含量

研究采用反相离子对色谱法测定蜂王浆中糠氨酸的含量。色谱柱为AtlantisC18柱,乙腈/水(含有5mmol/L庚烷磺酸钠)/甲酸(20:79.8:0.2)为流动相,紫外检测波长280nm。糠氨酸的线性范围在0.25～50mg/L,线性关系良好,线性方程为y=0.2818x+0.0271,相关系数为0.9997,方法的检出限为11.9mg/100g蛋白,加标回收率为96.94%。适用于蜂王浆中糠氨酸的测定。

高效液相色谱法测定巴氏杀菌乳中糠氨酸不确定度的评定

利用高效液相色谱法测定了巴氏杀菌乳中糠氨酸含量,对糠氨酸测量不确定度的来源进行了分析和量化评定。巴氏杀菌乳中糠氨酸含量为45.2 mg/(100 g蛋白质)时,测量结果的扩展不确定度为5.2 mg/(100 g蛋白质)(k=2)。

复原乳中糠氨酸含量测定方法的研究

糠氨酸含量的测定要经过水解、纯化、分离三步。在纯化过程中,通过使用针式滤器替代干过滤和固相预萃取,直接上机分离,不仅节省分析费用,还能有效避免在预萃取过程中的损失;在分离过程中,通过改变二元梯度洗脱程序,利用DiscoveryRP-Amide C16色谱柱代替C18柱测定糠氨酸含量,即提高了灵敏度又能有效的缩短测定时间。用此方法定量分析糠氨酸含量,精密度高、测定快速、成本低廉,具有一定的推广意义。

乳与乳制品中糠氨酸含量的测定方法

糠氨酸(ε-N-2-呋喃甲基-L-赖氨酸)是牛奶在加热过程中美拉德反应的重要产物,美拉德反应的程度关系到生奶在加工过程中热处理的类型和强度,即成品液态奶品质的优劣;本方法用酸水解,固相萃取糠氨酸,反相离子对高效液相色谱紫外(280nm)检测器检测,依据糠氨酸标准物质定量。

生乳与UHT灭菌乳中糠氨酸含量及其测定方法研究

本文研究了生乳与UHT灭菌乳中糠氨酸含量及其测定方法,并提出糠氨酸作为UHT灭菌乳中复原乳成分的标示物质,以鉴定UHT灭菌乳中是否掺入复原乳。结果表明,生乳中糠氨酸含量低于7mg/hg(按蛋白质计);乳粉中糠氨酸含量大于135mg/hg,不含复原乳的UHT灭菌乳中糠氨酸含量应小于140mg/hg(按蛋白质计)。使用高效液相色谱(HPLC)紫外检测糠氨酸含量,平均偏差<5%(n=5);回收率为98.2%。

不同热处理DDGS中CNCPS组分与糠氨酸含量的相关性研究

本试验旨在利用康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系(CNCPS)的原理和方法评定不同程度热处理玉米乙醇糟(DDGS)的营养价值,并探究CNCPS组分及其瘤胃降解特性和小肠消化率与美拉德反应中间产物糠氨酸之间的相关性,为饲料营养价值的评定提供新的研究方法和思路。本试验将湿DDGS进行不同温度(110、120、130℃)、不同时间(0.5、1.0、1.5h)的烘干处理,采用常规化学分析方法并结合CNCPS和AMTS-Cattle数据库对蛋白质各组分的瘤胃降解特性和小肠消化特性进行估测,同时采用高效液相色谱法测定糠氨酸的含量,进而探求CNCPS各组分瘤胃降解特性和小肠消化率与糠氨酸含量之间的相关性并建立回归方程。结果显示:(1)不同程度热处理的DDGS之间,糠氨酸含量、蛋白质组分、瘤胃可降解蛋白质组分、瘤胃不可降解蛋白质组分、小肠可消化蛋白质组分均存在显著差异(P<0.05)。(2)糠氨酸与蛋白质PA2、PB1、PB2和PC组分,瘤胃可降解蛋白RDPB2组分,瘤胃不可降解蛋白RUPB2、RUPC和TRUP组分,小肠消化蛋白IDGPB2组分间均存在显著相关性(P<0.05),并可通过回归建立预测方程。综合试验结果,经过不同程度热处理的DDGS的蛋白质组分和糠氨酸含量存在显著相关性,可以利用糠氨酸含量对不同程度热处理DDGS的蛋白质组分的瘤胃降解特性和小肠消化率进行估测。

高效液相色谱法测定牛奶中的糠氨酸

建立了牛奶中糠氨酸的含量测定方法。采用硅胶柱,3%冰乙酸溶液为流动相,检测波长为280nm,按外标法定量。结论:该方法科学、简便、精密度高,结果准确可靠。

干酒糟及其可溶物中糠氨酸含量与瘤胃降解特性和瘤胃非降解蛋白质的小肠消化率的相关性研究

本试验旨在验证美拉德反应中间产物糠氨酸含量与不同程度热加工干酒糟及其可溶物(DDGS)的瘤胃降解特性及瘤胃非降解蛋白质的小肠消化率之间存在相关性并建立回归方程,并与酸性洗涤不溶蛋白质作为饲料热处理敏感指标进行比较。试验采用高效液相色谱法测定不同热处理DDGS中糠氨酸含量,采用尼龙袋法测定干物质和粗蛋白质瘤胃降解特性并采用改进的三步体外法测定瘤胃非降解蛋白质的小肠消化率,分析两者之间相关性并建立回归方程。结果表明:1)随着加热程度的增加,DDGS中糠氨酸和酸性洗涤不溶蛋白质含量显著增加(P<0.05),干物质和粗蛋白质瘤胃有效降解率及瘤胃非降解蛋白质的小肠消化率降低,且不同处理之间存在显著差异(P<0.05)。2)糠氨酸与酸性洗涤不溶蛋白质含量均与干物质和粗蛋白质瘤胃培养可溶部分(r=-0.72 vs.-0.60; r=-0.60 vs.-0.51)、不可降解部分(r=0.96 vs.0.84; r=0.96 vs. 0.85)、有效降解率(r=-0.62 vs.-0.51; r=-0.72 vs.-0.61)以及瘤胃非降解蛋白质的小肠消化率(r=-0.52 vs.-0.57)存在显著相关性(P<0.05),并可建立回归预测方程。3)糠氨酸含量较酸性洗涤不溶蛋白质含量与瘤胃降解特性具有更高的相关性,二者与瘤胃非降解蛋白质的小肠消化率、总可消化蛋白质含量之间的相关性相似,但糠氨酸含量与小肠可消化蛋白质含量具有更高相关性(r=0.67)。综上,不同热处理DDGS中糠氨酸含量与瘤胃降解特性和小肠消化率存在相关关系,并可建立回归方程。糠氨酸含量较酸洗洗涤不溶蛋白质含量更适合作为评价饲料热加工程度的关键指标。

奶及奶制品中糠氨酸检测方法的研究进展

糠氨酸源于美拉德反应的早期产物,并最终经酸水解产生。它间接反映了美拉德反应的程度、赖氨酸营养功能的损失程度和食品受热程度等,被广泛应用于食品的品质评价。虽然糠氨酸在酸水解时的产率仅有30%~40%,但在相同的检测条件下,该产率是稳定的。近40年来,糠氨酸的检测方法研究主要集中于色谱分离系统和检测器的选择与优化,以及酸水解条件对糠氨酸产率的影响。本文针对奶及奶制品中糠氨酸的检测方法,从高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)与检测标准的建立、其他色谱技术或检测器的应用、酸水解条件的研究等方面进行综述,并对目前的主要问题和研究方向进行了展望,为进一步开发更高效、更灵敏、更准确和更稳定的新检测方法提供参考。