2种抗生素对大黄鱼肠道组织及紧密连接蛋白基因表达的影响

为探究盐酸多西环素和恩诺沙星对大黄鱼肠道结构及肠道紧密连接蛋白相关基因表达的影响,在水温16.80~22.50℃下,将体质量(41.57±1.63)g的大黄鱼饲养在直径1 m、水深1.25 m的圆形塑料水槽中,投喂剂量0、0.2、1.0、2.0 g/kg的药饵5~7 d,停药后1、5、15 d,观察肠道组织形态变化,测定紧密连接蛋白基因Claudin-7、ZO-1和Occludin的相对表达量。试验结果显示:大黄鱼摄食2种药物后,肠道均出现肠绒毛萎缩,组织空泡化等病变,随着给药剂量的增加和给药时间的延长,肠道组织损伤程度逐渐加深,紧密连接蛋白基因表达量持续降低;肠黏膜损伤在停药15 d后仍未恢复至对照组水平,药物剂量越高恢复程度越低;与对照组相比,2种药物高剂量组紧密连接蛋白基因表达量在停药15 d后仍显著低于对照组(P<0.05),其余组无显著差异(P>0.05)。试验结果表明,盐酸多西环素和恩诺沙星以剂量时间依赖方式损伤大黄鱼肠道组织,降低肠道通透性,药物剂量越高,恢复周期越长,在15 d后仍未完全恢复。

茶多酚对乳鸽十二指肠形态发育、抗氧化功能和紧密连接蛋白基因mRNA表达的影响

试验旨在探究饲粮添加茶多酚对乳鸽十二指肠形态发育、抗氧化功能及紧密连接蛋白基因mRNA表达量的影响,为茶多酚作为功能性饲料添加剂在养鸽生产中的合理应用提供理论依据。选取初始体重一致、健康1日龄仔鸽240只,随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只仔鸽。对照组饲喂基础饲粮,茶多酚低、中、高剂量组分别在基础饲粮中添加100、200和400 mg·kg^(-1)茶多酚,试验期28 d。试验结束后,采集乳鸽十二指肠组织进行肠道形态发育、抗氧化功能以及紧密连接蛋白基因表达测定。结果表明,与对照组相比,中剂量茶多酚极显著提高乳鸽十二指肠绒毛高度(VH)、隐窝深度(CD)、提高绒隐比(VH/CD)(P<0.01),高剂量茶多酚极显著提高乳鸽十二指肠绒毛高度和隐窝深度(P<0.01);低剂量茶多酚极显著降低乳鸽十二指肠丙二醛(MDA)含量(P<0.01),中剂量茶多酚极显著降低乳鸽十二指肠MDA含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.01),高剂量茶多酚极显著提高乳鸽十二指肠总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低MDA含量和LDH活性(P<0.01),3个剂量茶多酚均极显著提高SOD2基因mRNA表达量(P<0.01),高剂量茶多酚还极显著提高过氧化氢酶(CAT)基因mRNA表达量(P<0.01);此外,低剂量茶多酚极显著提高Occludin、降低Claudin-2 mRNA表达量(P<0.01),中剂量茶多酚极显著提高Occludin和ZO-1并降低Claudin-2 mRNA表达量,高剂量茶多酚极显著提高Occludin和ZO-1基因mRNA表达量,显著提高Claudin-3基因mRNA表达量(P<0.05)并极显著降低Claudin-2 mRNA表达量(P<0.01)。综上所述,饲粮添加茶多酚可以通过改善乳鸽十二指肠肠道发育、提高肠道抗氧化能力和调节肠道紧密连接蛋白相关基因mRNA表达量进而维持乳鸽肠道健康。

饲粮添加茶多酚对马岗鹅空肠组织形态、抗氧化能力及紧密连接蛋白相关基因表达的影响

本试验旨在探究饲粮中添加茶多酚(TP)对70日龄马岗鹅肠道组织形态、抗氧化能力及紧密连接蛋白相关基因表达的影响。试验选取体重基本一致、健康的28日龄马岗鹅240只(公母各占1/2),随机分为4组,分别饲喂添加0(对照)、100(低剂量)、500(中剂量)和1000 mg/kg(高剂量)茶多酚(纯度为98.7%)的试验饲粮,每组6个重复,每个重复10只。预试期1周,正试期5周。结果表明:1)与对照组相比,饲粮添加500 mg/kg茶多酚显著提高马岗鹅空肠绒毛高度(P<0.05);饲粮添加100和500 mg/kg茶多酚显著降低空肠隐窝深度(P<0.05),并显著提高空肠绒隐比(V/C)(P<0.05)。2)与对照组相比,饲粮添加500和1000 mg/kg茶多酚显著提高空肠谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及谷胱甘肽过氧化物酶2(GPX2)活性(P<0.05);饲粮添加100和500 mg/kg茶多酚显著降低空肠丙二醛(MDA)含量(P<0.05);各添加剂量茶多酚均显著降低空肠乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮添加500和1000 mg/kg茶多酚均显著提高空肠与抗氧化能力相关基因超氧化物歧化酶1(SOD1)、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)、GPX2和血红素氧合酶-1(HO-1)的mRNA相对表达量(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮添加500和1000 mg/kg茶多酚显著提高空肠紧密连接蛋白相关基因闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白-5(Claudin-5)和咬合蛋白(Occludin)的mRNA相对表达量(P<0.05);各添加剂量茶多酚均显著提高空肠E钙黏连蛋白(E-cadherin)的mRNA相对表达量(P<0.05)。由此可见,饲粮添加一定剂量的茶多酚可以促进马岗鹅空肠的形态发育,提高空肠的抗氧化能力以及肠壁紧密连接的程度。综合考虑,在70日龄马岗鹅饲粮中茶多酚的推荐添加量为500 mg/kg。

非小细胞肺癌患者紧密连接蛋白-1基因启动子甲基化分析及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者中紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因甲基化检测的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应MS-PCR检测101例NSCLC患者癌组织及癌旁组织ZO-1基因启动子甲基化状态,以61例肺部良性病变患者作为对照,并用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测63例甲基化阳性组和200例阴性组中的mRNA和蛋白表达。结果 ZO-1 mRNA和蛋白在启动子甲基化阳性和阴性组中的差异有显著统计学意义(t=-26.028,P<0.01;t=-37.216,P<0.01)。ZO-1启动子甲基化在癌组织(32.7%,33/101)和正常组织中(11.5%,7/61)的差异有显著统计学意义(χ2=9.190,P<0.01)。癌旁组织ZO-1启动子甲基化在淋巴结转移组(35.5%,11/31)和未转移组中(17.1%,12/70)中的差异有显著统计学意义(χ2=4.110,P<0.05),癌组织ZO-1启动子甲基化在2年生存组(27.5%,14/51)和2年死亡组(43.2%,19/44)中的显著差异有统计学意义(χ2=4.150,P<0.05)。结论 ZO-1启动子甲基化影响了其mRNA转录和蛋白的表达,癌旁组织和癌组织ZO-1启动子甲基化分别可能作为NSCLC患者淋巴结转移和2年内生存的预测因子。

艾灸对克罗恩病大鼠结肠肿瘤坏死因子-α含量及艾灸鼠结肠上清液对培养的结肠上皮细胞内紧密连接蛋白及其基因表达的影响

目的:通过观察温和灸、隔药灸对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导大鼠结肠上皮细胞紧密连接——咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin-1)和闭锁蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)及其基因表达的影响,探讨艾灸对肠上皮屏障损伤的修复/保护机制。方法:将SD大鼠随机分成正常组、模型组、温和灸组、隔药灸组和西药组,各12只。采用三硝基苯磺酸制备克罗恩病(Crohn’s Disease,CD)大鼠模型。温和灸组与隔药灸组选择"天枢""气海"穴分别予以温和灸和隔药灸,每日1次,共治疗14次;西药组以柳氮磺胺吡啶溶液灌胃,每日2次,共14次。治疗结束后剖取各CD组大鼠结肠,制备结肠黏膜上清液;正常组纯化并培养结肠上皮细胞建立肠上皮屏障体外模型。将各CD组结肠黏膜上清液分别与正常大鼠结肠上皮细胞混合培养1周,采用ELISA法检测各组结肠黏膜上清液TNF-α含量,Western blot和荧光定量PCR法观察其对CD大鼠体外结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达的影响。结果:CD模型组较正常组大鼠结肠黏膜上清液中TNF-α含量有显著增高(P<0.01),温和灸、隔药灸和柳氮磺胺吡啶治疗后TNF-α含量显著降低(均P<0.01),其中温和灸、隔药灸组优于西药组(均P<0.05);与此同时,温和灸、隔药灸和西药组结肠黏膜TNF-α上清液体外诱导大鼠结肠上皮紧密连接occludin、claudin-1和ZO-1及其mRNA表达较模型组有显著增高(P<0.01,P<0.05),且隔药灸、温和灸两组也优于西药组(均P<0.05)。结论:艾灸(隔药灸、温和灸)可能是通过降低CD大鼠结肠黏膜异常增高的TNF-α,进而促进或调节结肠上皮紧密连接occludinc、laudin-1和ZO-1及其mRNA表达,达到修复/保护肠上皮屏障损伤的目的。

儿童急性白血病ZO-1基因甲基化状态临床意义分析

目的探讨紧密连接蛋白(zonula occluden protein-1,ZO-1)基因启动子区甲基化状态在儿童急性白血病(AL)骨髓检测中的临床意义。方法将48例确诊为AL(35例急性淋巴细胞白血病,13例急性髓细胞白血病)患儿的骨髓标本作为研究组,20例非血液肿瘤患儿骨髓标本作为对照组。采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测研究组与对照组ZO-1基因启动子区甲基化状态。逆转录PCR(RT-PCR)检测研究组与对照组ZO-1基因mRNA的表达情况。结果 MS-PCR检测结果显示,治疗前研究组ZO-1基因甲基化阳性率为68.8%(33/48),对照组均呈非甲基化状态(P<0.05);动态观察31例急性淋巴细胞白血病ZO-1基因甲基化阳性率:治疗前64.5%(20/31),治疗第33天48.4%(15/31),治疗第12周29.0%(9/31)。治疗过程中复发2例,甲基化状态由部分甲基化条带转变为完全甲基化条带。5例疗程结束,停药前仍有1例可检出。治疗前与治疗第33天、治疗第12周比较差异均有统计学意义(P<0.05),治疗第33天与治疗第12周比较差异有统计学意义(P<0.05);急性淋巴细胞白血病68.6%(24/35),与急性髓细胞白血病69.2%(9/13)比较差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示,研究组治疗前及动态观察中,ZO-1基因甲基化阳性病例均无mRNA表达,对照组全部表达。结论 ZO-1基因启动子区高甲基化状态在儿童急性白血病中有较高的特异性,与疾病发生、发展及转归密切相关。ZO-1基因有可能作为新的白血病分子标志,为临床早期诊断、疗效判断、预后评价、微小残留检测提供新的指标。

葛根素对饲喂氧化大豆油肉鸡小肠黏膜屏障功能及抗氧化能力的影响

本试验旨在研究葛根素对饲喂氧化大豆油饲粮黄羽肉鸡小肠黏膜形态结构、紧密连接蛋白基因表达及抗氧化能力的影响。试验采用2×2因子设计,因子包括油脂质量(新鲜大豆油和氧化大豆油)和葛根素添加水平(0、750 mg·kg^(-1))。选取健康1日龄雌性黄羽肉鸡360只,随机分成4个处理组,分别为新鲜大豆油饲粮组、新鲜大豆油+葛根素(750 mg·kg^(-1))饲粮组、氧化大豆油饲粮组和氧化大豆油+葛根素(750 mg·kg^(-1))饲粮组,每组6个重复,每个重复15羽。在28和56日龄时,每个重复随机选取1只鸡,取十二指肠、空肠、回肠检测小肠形态结构和测定小肠黏膜紧密连接蛋白基因表达及抗氧化指标。结果表明:1)饲喂氧化大豆油显著降低28日龄肉鸡十二指肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度(V/C)、回肠V/C和claudin-1 mRNA表达量以及56日龄肉鸡3个肠段的绒毛高度及V/C(P<0.05),显著升高56日龄3个肠段的隐窝深度(P<0.05)。饲粮中添加葛根素显著提高28日龄肉鸡空肠绒毛高度和V/C、回肠闭合小环蛋白1(ZO-1)mRNA表达量和56日龄肉鸡十二指肠V/C、空肠和回肠的绒毛高度及V/C(P<0.05),显著降低3个肠段的隐窝深度(P<0.05)。2)饲喂氧化大豆油显著升高28日龄十二指肠还原型谷胱甘肽(GSH)含量和空肠还原型谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05),并显著降低28日龄回肠GSH含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05)。饲粮中添加葛根素显著提高28日龄肉鸡十二指肠GSH-Px活性(P<0.05)。饲喂氧化大豆油显著降低56日龄回肠SOD活性和T-AOC(P<0.05),饲粮中添加葛根素显著提高56日龄肉鸡十二指肠SOD和回肠SOD、GSH-Px活性(P<0.05),显著降低56日龄肉鸡空肠GSH含量、SOD活性、T-AOC和回肠T-AOC(P<0.05)。综上所述,饲喂氧化大豆油破坏肠道黏膜形态结构、降低紧密连接蛋白基因的表达量和抗氧化能力,添加葛根素可提高肉鸡小肠黏膜紧密连接蛋白基因的表达量,改善氧化损伤条件下肠道黏膜形态结构,提高抗氧化酶的活性而提高其抗氧化能力。

亲鸽饲粮添加黑水虻幼虫粉对乳鸽生长性能、抗氧化及肠道物理屏障功能的影响

试验旨在探究亲鸽饲粮添加黑水虻幼虫粉对乳鸽生长性能、血清免疫指标、抗氧化功能、肠道形态发育及紧密连接蛋白相关基因表达的影响。试验选取192只体重相近且健康的1日龄乳鸽和96对产蛋日期相近的7月龄亲鸽,随机分成4组,每组6个重复,每个重复8只乳鸽和4对亲鸽,每对亲鸽以“2+2”哺育模式哺育乳鸽。对照组饲喂基础日粮,0.5%、1.0%、1.5%黑水虻幼虫粉组分别饲喂含0.5%、1.0%和1.5%黑水虻幼虫粉的试验饲粮,试验期28 d。结果显示:与对照组相比,黑水虻幼虫粉组乳鸽28日龄体重显著提高(P<0.05);0.5%、1.0%黑水虻幼虫粉组血清IgM和IgG含量显著提高(P<0.05);血清总抗氧化能力和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及回肠谷胱甘肽过氧化物酶和T-SOD活性显著提高(P<0.05),乳酸脱氢酶活性和血清丙二醛含量显著降低(P<0.05);回肠SOD1、SOD2和CAT mRNA相对表达量均显著提高(P<0.05);肠道绒毛高度、绒隐比和肌层厚度显著提高(P<0.05),隐窝深度显著降低(P<0.05);回肠Claudin-3、Occludin和ZO-1 mRNA相对表达量均显著提高(P<0.05),Claudin-2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮添加0.5%~1.0%黑水虻幼虫粉更有利于乳鸽生长,提高其免疫和抗氧化功能,改善肠道的物理屏障功能。