紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响

目的探究紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆力及氧化应激损伤的影响。方法60只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、紫斑牡丹花粉组(750、1500、3000 mg·kg^(-1)),采用颈背部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1)),制备亚急性衰老模型。Morris水迷宫评估小鼠学习记忆力;HE、DAPI染色评估肝、脑组织细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清、肝脑组织内MDA、T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT及γ-H2AX、SA-β-Gal水平。结果水迷宫实验结果表明,紫斑牡丹花粉能明显提高衰老小鼠的学习记忆力。组织染色结果表明,紫斑牡丹花粉对D-半乳糖致衰老小鼠肝脑组织细胞损伤具有保护作用,且高剂量组作用最为明显。ELISA结果显示,与模型组比较,紫斑牡丹花粉各剂量组的MDA、γ-H2AX、SA-β-Gal水平降低,T-AOC、GSH-Px、SOD、CAT水平升高。结论紫斑牡丹花粉能改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习记忆力,提高衰老小鼠体内抗氧化酶活性和清除自由基、脂质过氧化物的能力,保护肝脑脏器组织细胞免受氧化损伤,提示其具有潜在的延缓衰老的作用。

Box-Behnken响应面法优选紫斑牡丹中丹皮酚和芍药苷提取工艺

目的优选紫斑牡丹中丹皮酚和芍药苷的提取工艺。方法在单因素试验基础上,以液料比、提取时间和乙醇体积分数为影响因素,以丹皮酚和芍药苷提取率的总权重综合评分为评价指标,采用Box-Behnken响应面法优选最佳提取工艺,并进行验证试验。结果最佳提取工艺为液料比28倍,提取时间150 min,乙醇体积分数52%。此工艺条件下,丹皮酚提取率为0.49%(RSD=1.33%,n=3),芍药苷提取率为5.38%(RSD=1.07%,n=3)。结论该提取工艺稳定、可行,可用于紫斑牡丹中丹皮酚和芍药苷的提取。

亚临界萃取结合分子蒸馏提取紫斑牡丹精油及其成分抗氧化能力分析

为优化紫斑牡丹精油提取工艺,分析精油成分与抗氧化能力。采用亚临界萃取与分子蒸馏相结合的方法(亚临界萃取-分子蒸馏法)和水蒸气蒸馏法,对紫斑牡丹精油进行提取。通过气相色谱-质谱联用仪对紫斑牡丹精油进行成分分析,并测定其抗氧化活性。结果表明,用亚临界萃取-分子蒸馏法提取精油的得率明显高于水蒸气蒸馏法。亚临界萃取-分子蒸馏法所得精油含79种主要成分,其中含量最高的是香叶醇,占总含量的14.664%;包含采用常用方法提取的牡丹精油中少见的雪松醇。亚临界萃取-分子蒸馏法提取的牡丹精油不仅对DPPH·、ABTS^(+)·、·OH均有一定的清除能力,也具有一定程度的抑制亚油酸酯质过氧化的作用。综上,采用亚临界萃取-分子蒸馏法提取可减少有效成分的损失,能获得更高品质的牡丹精油,有利于高附加值产品的开发与应用。

紫斑牡丹的化学成分、活性与开发利用研究进展

紫斑牡丹是我国西北牡丹种群的优势种,其作为地方传统药材,具有较高的食药价值和开发潜力。目前,已经从紫斑牡丹中分离和鉴定出了多种化学成分,包括单萜苷类、酚及酚苷类、黄酮类、低聚芪类、挥发油类、脂肪酸类、甾醇类、单宁类、三萜类等。现代研究表明,紫斑牡丹具有抗氧化、抗菌、抗癌等活性,已将其开发为口含片、软胶囊、口服液、保健化妆品、牡丹酒、花茶等新资源产品。本文主要对近10年国内外有关紫斑牡丹的化学成分进行分类整理,对其活性及开发利用现状进行梳理,并对发展前景进行展望,以期为紫斑牡丹的深入研究和综合开发利用提供参考。

微波辅助深共熔溶剂提取紫斑牡丹籽总黄酮的工艺优化及其抗氧化活性

目的:优化紫斑牡丹籽总黄酮的微波辅助深共熔溶剂提取方法,并探究其体外抗氧化活性。方法:以低共熔溶剂作为提取溶剂,采用微波辅助技术提取紫斑牡丹籽中的总黄酮。采用单因素实验以及响应面法进行提取工艺优化。从DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率进行总黄酮的体外抗氧化活性研究。结果:以氯化胆碱作为氢键受体,脲作为氢键供体的低共熔溶剂体系下,在摩尔比为1:3,含水量41.80%(V/V)的深共熔溶剂体系最优,料液比1:19 g/mL,微波功率为110 W,微波时间3.00 min,此时紫斑牡丹籽总黄酮得率为1.76 mg/g。当提取物总黄酮浓度在80μg/mL时,对DPPH·、羟基自由基的清除率分别为82.00%、42.10%。结论:采用微波辅助深共熔溶剂提取紫斑牡丹籽总黄酮,含量高,均具有抗氧化活性,且对DPPH自由基清除率超80%。

紫斑牡丹中PrPDAT基因克隆与表达分析

紫斑牡丹(Paeonia rockii)因种子富含α-亚麻酸(ALA)以及多种不饱和脂肪酸,作为一种具有潜力的木本油用植物被研究。二酰甘油酰基转移酶(PDAT)催化甘油二酯合成甘油三酯,是牡丹种子中脂肪酸生物合成关键酶之一。本研究对紫斑牡丹PrPDAT基因进行了克隆和生物信息学分析,并结合定量数据分析了该基因的时空表达模式。结果表明,该基因含有全长为1 692bp的开放阅读框,共编码563个氨基酸。理论等电点为7.02,表明该蛋白为中性蛋白,相对分子量为6.17 k Da,蛋白质不稳定性指数33.24,表明PrPDAT属于不稳定蛋白,亲水性平均值(GRAVY)为-0.21,表明为亲水性蛋白,网站预测表明该蛋白没有跨膜域。亚细胞定位预测表明该基因在叶绿体和内质网中表达,结构域分析表明该蛋白属于PLN02517超级家族,含有LCAT的结构域。二级结构预测分析表明不规则卷曲和α螺旋为PrPDAT蛋白的主要结构。系统进化结果表明,PrPDAT与芍药德拉瓦伊(Paeonia delavayi)Pd PDAT亲缘关系最近。实时荧光定量PCR的结果表明,PrPDAT基因在种子3个不同发育时期都有相应的表达,但表达的水平有所差异,呈现逐渐升高的趋势。由此推测,在紫斑牡丹种子发育和成熟过程中,PrPDAT基因对于合成油脂、蛋白等是有影响的,可能起到一定的阶段性调控作用,本研究对揭示PrPDAT在紫斑牡丹脂肪酸合成过程中的作用奠定了一定的理论基础。

一种紫斑牡丹全花茶的制作工艺研究

为开发提升紫斑牡丹市场价值,研究紫斑牡丹全花茶制作工艺。通过清理、护型、干燥等方法对紫斑牡丹全花进行加工,研究了烘干、微波干燥以及真空冷冻干燥方法对紫斑牡丹全花的干燥效果,从紫斑牡丹全花的色泽、形态、气味比较不同制作工艺,并测定最佳工艺下紫斑牡丹全花茶的营养成分。结果表明:选择初花期的紫斑牡丹全花,以纸杯护型的方法采用真空冷冻干燥法进行干燥,以程序为冷冻阶段-40℃,9.25 h→-30℃,3 h→-20℃,2 h→-10℃,1.5 h,升华干燥阶段0℃,2.5 h→5℃,2.5 h→10℃,2 h→15℃,2 h→20℃,2 h→30℃,2 h→35℃,2 h→40℃,5 h制得的全花茶效果最佳,其全花色泽靓丽、形态挺立,花茶口感醇正、感官评价高,营养成分丰富,其中可溶性蛋白、总酚、总黄酮、VC及亚麻酸等主要营养成分的含量均高于其他干燥工艺制作的牡丹花茶。

阜新地区油用紫斑牡丹育苗及林下栽培技术

油用紫斑牡丹是木本油料植物,被广泛应用于绿化、食品、医药等领域,深受广大消费者青睐。阜新地区是油用紫斑牡丹的适栽区,因油用紫斑牡丹具有抗寒、抗旱、耐贫瘠、易管理、结实率高、实生育苗简单等特点,其种植面积呈逐年增加的趋势。为促进阜新地区林业经济发展,笔者结合生产实践经验,对油用紫斑牡丹实生育苗、栽植、肥水管理、整形修剪、有害生物防治等技术进行总结。

紫斑牡丹籽粕总黄酮纯化工艺研究

选用D101、AB-8、NKA-9型大孔树脂进行静态吸附及解析性能试验,筛选出AB-8型大孔树脂进行动态试验研究,获得了紫斑牡丹籽粕中总黄酮的最佳纯化工艺条件。结果显示,利用AB-8型大孔树脂在上样液浓度为5 mg·mL^(-1)、p H值为5、流速为3 BV·h^(-1)、上样液体积为5 BV条件下进行吸附,在洗脱液为70%乙醇、洗脱液流速为1.5 BV·h^(-1)、洗脱液体积为7 BV条件下洗脱,纯化后紫斑牡丹籽粕总黄酮含量由8.54%提高到32.36%,该工艺可行性较高,可为紫斑牡丹籽粕中总黄酮纯化提供有效理论依据。

响应面法优化紫斑牡丹籽粕总黄酮提取工艺

以乙醇浓度、提取温度、提取时间及料液比为考察因素,以总黄酮提取率为指标,通过单因素试验和响应面法对紫斑牡丹籽粕总黄酮提取工艺进行了优化。结果表明,紫斑牡丹籽粕总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度67%、提取温度74℃、提取时间133 min、料液比1∶36(g∶mL)。在该工艺条件下,紫斑牡丹籽粕中总黄酮提取率达到8.63%,工艺可行性较高,可为紫斑牡丹籽粕中总黄酮提取提供有效参考依据。

紫斑牡丹整形修剪技术及效应分析

紫斑牡丹在临夏地区栽培广泛,但人们对于紫斑牡丹整形修剪重视不够,也未系统掌握紫斑牡丹整形修剪的理论及方法,为改变这一现状,就紫斑牡丹整形修剪理论、方法及效应加以总结阐述。实践表明,通过整型修剪使紫斑牡丹维持均衡适量的枝条和美观匀称的株型,改善牡丹树体营养结构和通风透光性,从而达到紫斑牡丹花芽饱满、花大色艳、花期延长、产量提升的效果。

紫斑牡丹及其一新亚种

本文回顾了有关紫斑牡丹的调查和分类历史。它曾被混同于Ｐ．ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ，Ｐ．ｐａｐａｖｅｒａｃｅａ及Ｐ．ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａｖａｒ．ｐａｐａｖｅｒａｃｅａ。它以叶２至３回羽状复叶，小叶１７～３３，花瓣白色，基部有大紫斑，花丝黄色，花盘和柱头淡黄色区别于近缘种。种下分化为两个异域的亚种；秦岭北坡的紫斑牡丹小叶全部或大部分分裂，是一个新亚种，Ｐ．ｒｏｃｋｉｓｕｂｓｐ．ｔａｉｂａｉｓｈａｎｉｃａ，而Ｐ．ｒｏｃｋｉｓｕｂｓｐ．ｌｉｎｙａｎｓｈａｎｉＴ．ＨｏｎｇｅｔＧ．Ｌ．Ｏｓｔｉ则是Ｐ．ｒｏｃｋｉｓｕｂｓｐ．ｒｏｃｋｉ的多余名。

赤峰地区紫斑牡丹的引种与抗寒性研究

从甘肃兰州引入赤峰地区紫斑牡丹11个品种的2年生嫁接苗和5年生实生苗,进行了3年驯化栽培与适应性观察,并与中原牡丹‘洛阳红’对比,开展了抗寒性研究。结果表明:1)紫斑牡丹能够适应赤峰地区的气候环境,经适当防寒后能够正常露地越冬生长,其生长量从引种后第2年迅速增加,第3年除个别品种外均能正常开花,与原产地相比,萌动期(3月末至4月中旬)晚近1个月,开花期(5月中下旬)晚20d左右,从萌动至开花时间缩短,休眠期(11月上旬至次年3月末、4月中旬)明显加长;2)紫斑牡丹叶片栅栏组织与海绵组织厚度比与抗寒性关联,可作为鉴别品种抗寒性的解剖学指标;3)紫斑牡丹叶片相对电导率随处理温度降低而升高,电导率低的品种抗寒性强;4)紫斑牡丹的适应性与抗寒性均较中原牡丹‘洛阳红’强,但明显存在品种差异,供试品种适应性与抗寒性依次为‘蓝荷’>‘玫瑰红’>‘紫冠玉珠’>‘青春’>‘紫楼闪金’>‘桃花三转’>‘玉瓣绣球’>‘高原圣火’>‘和平莲’>‘雪里藏金’>‘红莲’>‘洛阳红’。

野生紫斑牡丹和四川牡丹种子萌发特性及与其致濒的关系

野生牡丹种子一般较小，而且不同产地之间形状、大小差异较大。其萌发特性与栽培牡丹相比也有较大差异：萌发期长达半年以上，且萌发温度在１０～１５℃为宜，超过２０℃则明显不利于生根及上胚轴生长。四个不同分布地的四川牡丹种子萌发率较一致，均在６０～７７％之间。三个不同产地的紫斑牡丹种子萌发率则相差甚远，分布于甘肃文县的萌发率达７６％，而分布于陕西略阳和湖北神农架的萌发率则分别只有１２％和４．４％，出苗率则更低。本文认为紫斑牡丹的种子特性是其在自然界处于濒危状态的重要原因之一。

甘肃紫斑牡丹茎扦插繁殖技术初探

通过基质、设施条件、外源激素种类和质量浓度、处理时间等不同试验,分析研究紫斑牡丹扦插存活、生根的外部因素和内部因素,以及扦插基质、外源激素等不同条件对扦插生根的影响。同时,从解剖学出发,分析生根抑制物质对紫斑牡丹扦插生根的影响。结果表明,9—11月份是紫斑牡丹扦插的最佳时期;扦插温度与湿度条件是生根和存活重要影响因素之一,但对生根效应不显著;外源激素的种类对生根影响不显著,800～1 000 mg·L-1的IBA处理插条能够获得相对较高的存活率;扦插时出现的褐变问题,是影响扦插生根的又一重要因素;扦插后插条的维管形成层细胞发生分裂,细胞质变浓,细胞排列变得紧密,有些细胞群由内向外生长穿过形成层、皮层直到突出表皮。通过探讨、分析插条存活与生根的因素,为紫斑牡丹茎扦插繁殖提供理论依据。

紫斑牡丹表型性状与SSR分子标记的关联分析

利用筛选出的11对多态性简单重复序列（SSR）标记对99份紫斑牡丹材料进行多态性扫描,在分析其遗传多样性和群体结构的基础上,采用TASSEL2.1软件的一般线性模型（GLM）进行标记与32个观赏性状的关联分析。结果表明：11个多态性SSR标记共检测到94个等位变异,平均每个位点检测到等位变异8.5个;引物的多态性信息含量（PIC）变幅为0.146~0.850,平均值为0.593;遗传多样性变幅为0.152~0.862,平均为0.630。群体结构分析将供试材料划分为3个亚群;通过关联分析,发现5个标记位点与6个性状显著关联（P〈0.01）,各标记位点对表型变异的解释率为30.4%~55.8%,其中FJ024285和FJ024294标记与株高相关联,FE528073与顶小叶长、柱头颜色和房衣颜色相关联,FJ024287与柄叶比相关联,EU678295与色斑大小相关联。研究表明：所选紫斑牡丹种质资源群体的群体结构简单、遗传变异较为丰富,适用于紫斑牡丹目标性状的关联分析。关联分析能够有效地找到与紫斑牡丹表型性状紧密连锁的SSR标记,用于分子标记辅助育种。

低温和赤霉素对紫斑牡丹种子萌发和幼苗生长的影响

本文研究了在容器栽培条件下,赤霉素(GA3)处理对紫斑牡丹种子生根的影响,不同主根长度、低温((3±1)℃)时间、赤霉素(GA3)浓度对种子发芽和幼苗生长的影响。结果表明:GA3能够促进种子生根,其中质量浓度为100 mg/L的处理效果最好;种子发芽过程中,主根长度与低温时间的交互效应对初萌期和发芽率存在极显著的影响;只有在主根生长超过40 mm时,低温和GA3处理才能有效地促进种子发芽,在此基础上,低温14 d结合100、200mg/L或者500 mg/L GA3处理为促进发芽的较好组合。当主根长度超过40 mm时,低温和GA3处理才能有效地促进幼苗的生长,以低温14 d结合500 mg/L GA3处理为最佳组合。综合分析表明,紫斑牡丹优化的种子播种育苗程序为:用100 mg/L GA3处理种子24 h后室温沙藏,待主根生长超过40 mm时播种,并置于低温(3±1)℃下处理14d,再用500 mg/L的GA3处理后,于温室中培养成苗。

紫斑牡丹关联分析群体的表型分析

在紫斑牡丹主栽区甘肃筛选出一个由150株实生单株组成的关联分析群体,在对共计32个性状进行调查的基础上,对表型进行了变异统计分析、主成分分析和相关性分析。结果表明:该群体22个数量性状变异极显著(P<0.01),性状变异系数为10%～30%;10个分类性状变异类型丰富,表型变异在紫斑牡丹中具有代表性;主成分分析表明枝芽性状和叶片长度是主要的性状变异,表型变异在群体内分布均匀、无明显层次结构,但性状间存在不同层次的相关性。上述结果表明该群体是进行紫斑牡丹关联分析研究的理想群体。

3个紫斑牡丹品种的抗寒生理特性研究

以兴高采烈、紫海银波、红珍珠3个引进的紫斑牡丹品种为试验材料,在哈尔滨冬季自然降温条件下(稳定降至-5～-10℃开始,每降5℃取样一次,至温度降到-25～-30℃),测定越冬枝条的可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸含量及SOD活性变化。结果表明,随着温度的降低,3个品种的各项指标测定结果都有不同程度的增加,且兴高采烈和紫海银波的各项指标测定值高于红珍珠,即兴高采烈和紫海银波表现为相对较强的抗寒特性。

紫斑牡丹引种及生物学特性

为丰富黑龙江省森林植物园的牡丹品种,2004年从甘肃省兰州市引种了紫斑牡丹,连续3 a对其物候、生长节律及花芽分化等进行了观测。结果表明:物候期延迟了大约30 d,枝条和叶片年平均生长量分别为26.3cm和27.8 cm(长)×20.4 cm(宽),花蕾平均大小为3.39 cm(纵径)×3.10 cm(横径),花径平均大小为13.5 cm,花芽分化正常。在引种地紫斑牡丹能够良好地生长并开花结实,具有较高的观赏价值和广阔的发展前景。