高效液相色谱法测定不同产地羌活中紫花前胡苷的含量

目的 :测定不同产地羌活中紫花前胡苷含量。方法 :高效液相色谱法。结果 :紫花前胡苷回归方程为Y =- 95 0 9.1+1912 70 9.8X ,r =0 .9998,线性范围 0 .16～ 0 .6 4μg ,平均回收率 99.3% ,RSD 2 .6 4%。 结论 :方法简单、快速、重现性好。

紫花前胡苷抑制哮喘小鼠气道炎性反应和NF-κB信号传导通路

目的观察紫花前胡苷抗过敏性哮喘鼠气道炎性反应作用。方法 BALB/c小鼠被随机分为对照、模型、紫花前胡苷和地塞米松4组。除对照组外,所有小鼠腹腔注射和雾化吸入卵清蛋白以致敏和诱导气道炎性反应。于每次雾化前1h,给紫花前胡苷组灌胃10 mg/kg紫花前胡苷;给地塞米松组腹腔注射1 mg/kg地塞米松。动物肺功能仪分析气道高反应性;细胞计数器和Diff-Quick染色计数支气管灌洗液中白细胞总数及分类;酶联免疫吸附法检测血清或BALF中炎性介质的水平;苏木精-伊红染色法观察气道病理改变;电泳迁移率和免疫印迹法检测肺组织NF-κВ信号通路中蛋白的活力和表达。结果与对照组比较,模型组呈现明显的气道炎性反应,气道反应性显著增高(P<0.05);血清或BALF中IgE、IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增加(P<0.01);细胞系P65、p-P65的水平显著增加(P<0.05);细胞质P65和IκBα显著减少,NF-κB DNA-结合力显著增加(P<0.05)。与模型组比较,紫花前胡苷能够显著抑制气道炎性反应和气道高反应(P<0.05);降低血清或BALF中IgE、IL-4、IL-5和IL-13的水平(P<0.01);抑制细胞系P65、p-P65水平(P<0.05);增加细胞质P65、IκBα蛋白和减弱NF-κB DNA-结合力(P<0.05)。结论紫花前胡苷具有抗过敏性哮喘鼠气道炎性反应。

HPLC法测定白花前胡中白花前胡丙素和紫花前胡中紫花前胡苷的含量

目的 :建立高效液相色谱法测定白花前胡根中白花前胡丙素 (dl-praeruptorinA ,Pd -Ia)和紫花前胡根中紫花前胡苷 (nodakenin ,NDK)含量的方法。方法 :色谱柱Shim -PackCLC -ODS ,Pd -Ia的流动相为甲醇 -水 (79∶2 1)和NDK的流动相为乙腈 -甲醇 -水 (2 0∶5∶75 ) ,流速为 1 0mL·min- 1 ,紫外检测波长分别为 32 3和 334nm。结果 :Pd -Ia及NDK的线性范围分别为 0 0 8～ 0 8μg和 0 0 1～ 0 10 μg ,相关系数均为 0 9999,平均回收率分别为 98 5 3%～ 99 2 7%和 97 6 0 %～99 87% ,RSD小于 2 %。结论 :方法准确 ,简便 ,快速 ,灵敏度高 ,对常用中药前胡的质量控制有较重要意义。

紫花前胡苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的研究中药狭叶羌活和宽叶羌活主要化学成分之一的紫花前胡苷(ND)在大鼠体内的药代动力学。方法♂SD大鼠(200～220)g随机分组,每组5只,单次尾静脉注射,给药量为80mg.kg-1,从眼眶静脉丛分时取血、处理。采用反相高效液相色谱法、恒速洗脱,应用外标法测定ND在SD系大鼠血浆中的浓度,应用3P87软件计算主要药代动力学参数。结果在所建立的方法学下,ND的保留时间为6.7min;标准曲线为Y=2.0×10-4X+0.4(r=0.9999),在0.2～80mg.L-1的血浆浓度范围内呈良好的线性关系;血浆中最低检测浓度为0.01mg.L-1(S/N=3),最低定量浓度为0.1mg.L-1(S/N=10);在1.0、10.0和40.0mg.L-1低、中、高3个浓度下的提取回收率为76.23～83.72;日内和日间RSD均小于5.60%(n=3)。在室温和冷冻—解冻试验中,ND具有良好的稳定性。按80mg.kg-1单剂量单次静脉给药后,ND在大鼠体内的药代动力学过程符合开放二房室模型,主要药代动力学参数t1/2α、t1/2β、AUC、Vc、Vp、Vss和CL分别为7.02min、219.27min、1384.34mg.min.L-1、0.92L.kg-1、6.04L.kg-1、6.96L.kg-1和0.06L.kg-1.min-1。结论所建立的方法快速、准确、简便,能够满足ND药代动力学研究要求。按80mg.kg-1单剂量单次静脉给药后,ND在大鼠体内分布广泛,消除速度中等。

高效液相色谱法测定前胡属植物中紫花前胡苷的含量

目的 :建立高效液相色谱法测定前胡药材中紫花前胡苷的含量。方法 :Shim PackCLC ODS柱 ,流动相乙腈 甲醇 水 (2 0∶5∶75 ) ,紫花前胡苷为对照品 ,外标法峰面积定量 ,紫外检测 (λ =334nm)。结果 :6个不同品种前胡中的紫花前胡苷含量为 0 .0 0 5 %～ 3.0 90 %。结论 :紫花前胡苷不能作为评价前胡属植物的药用指标 ,但可以作为紫花前胡的质量控制标准。

紫花前胡苷抗宫颈癌细胞作用研究

目的探究紫花前胡苷抗宫颈癌HeLa细胞的作用效果及相关信号通路。方法HeLa细胞在0、0.1、1和10 mmol/L浓度的紫花前胡苷作用24 h后,通过CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平;通过蛋白免疫印迹法检测细胞内凋亡相关cleaved-caspase 3(cle-caspase 3)、Cytochrome C(Cyto C)、Bax、Bcl2蛋白水平变化,以及自噬相关p-mTOR、mTOR、P62、Beclin1、LC3蛋白水平变化;结合Ad-GFP-LC3B腺病毒转染检测细胞内LC3B聚集状态。结果对照组(0 mmol/L)、0.1mmol/L组、1 mmol/L组、10 mmol/L组的HeLa细胞凋亡率依次升高,分别为(14.93±2.95)%、(15.43±2.13)%、(21.63±3.19)%、(31.42±5.01)%,且在10 mmol/L浓度处理下升高最为明显(P<0.05)。10 mmol/L的紫花前胡苷作用24 h后,HeLa细胞内的促凋亡cle-caspase 3、Cyto C、Bax蛋白水平升高,抗凋亡蛋白Bcl2表达下降,自噬相关蛋白p-mTOR/mTOR水平下降,Beclin1以及LC3-Ⅱ累积增多,自噬流相关蛋白P62表达下降,LC3B在紫花前胡苷处理组中呈颗粒性聚集,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论紫花前胡苷具有较好的抗宫颈癌细胞作用,其机制可能与自噬相关细胞凋亡有关。

GC测定紫花前胡中紫花前胡苷元的含量

目的 建立GC测定紫花前胡根中紫花前胡苷元 (NDT)含量的方法。方法 采用SE - 30石英毛细柱(0 .2 2mm× 2 5m) ,液膜厚度 0 .2 5 μm ,FID检测器 ,以正二十五烷为内标物 ,并采用GC -MS联用技术 ,鉴定了样品中的NDT色谱峰和进行专属性考察。结果 NDT在 0 .0 89～ 1.0 6 2 μg之间有较好的线性关系 (r =0 .9999) ,NDT的加样回收率为 99.31%± 0 .33%。结论 该法简便、快速、准确。

用GC/MS、GC分析中药前胡中白花前胡丙素、丁素和紫花前胡苷元

为快速鉴别中药白花前胡 (Peucedanum praeruptorum Dunn.)和紫花前胡 (Peucedanum decursivumMaxim .) ,用气相色谱 /质谱 (GC/ MS)、气相色谱法 (GC)分别定性、定量分析白花前胡丙素 (Pd- a)、丁素 (Pd- ) )和紫花前胡苷元 (Nodakenetin)。在白花前胡中检出白花前胡丙素 (M/ Z386 )和丁素 (M/ Z4 2 6 ) ,但未检出紫花前胡苷元 ;在紫花前胡中检出紫花前胡苷元 (M/ Z 2 4 6 ) ,但未检出白花前胡丙素和丁素。线性关系 :YPd- a=1.111XPd- a+0 .0 2 1(n =6 r=0 .9995 ) ,线性范围 :0 .175～ 1.919μg。 YPd- =1.189XPd- - 0 .0 13(n =6 r=0 .9996 ) ,线性范围 :0 .0 86～ 0 .95 0 μg。YNodakenetin =0 .90 1XNodakenetin- 0 .0 2 4 (n =6 r=0 .9999) ,线性范围 :0 .0 89～ 1.0 6 2μg。回收率 :白花前胡丙素 97.2 9% ,白花前胡丁素 98.81% ,紫花前胡苷元 96 .34%。分析结果表明 ,不同产地药材样品中各自特征成分含量不同 ,分析中未能找到白花前胡和紫花前胡苷元共有的相同的有效成分或指标性成分。表明可用 GC/ MS区分白花前胡和紫花前胡苷元 。

超临界二氧化碳萃取紫花前胡苷的工艺优化研究

目的以荧光分析法测定紫花前胡苷(NDK)含量为指标,比较紫花前胡中紫花前胡苷的溶剂热回流提取和超临界CO2萃取方法,优化最佳提取工艺。方法通过正交实验,采用超临界CO2提取技术对紫花前胡提取工艺条件进行考察,并与溶剂热回流提取结果比较,分析测定紫花前胡苷的含量。结果通过与传统提取方法进行比较,证明超临界CO2提取技术在紫花前胡苷的提取上具有明显优势。超临界CO2提取紫花前胡苷的最佳工艺为萃取压力20MPa,萃取温度50℃,CO2动态流量35L.h-1。结论不同工艺条件提取紫花前胡苷产率不同,萃取温度、萃取压力、CO2动态流量等工艺参数对实验指标有显著性影响。

紫花前胡苷经通过PI3K/AKT通路对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的:探究紫花前胡苷(NK)经磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)通路对结直肠癌(CRC)细胞生物学行为的影响。方法:将SW480细胞分为SW480组(SW480细胞未做任何处理)、NK低剂量组(L-NK组,40μmol/L NK)、NK中剂量组(M-NK组,60μmol/L NK)、NK高剂量组(H-NK组,80μmol/L NK)、H-NK+740Y-P组(80μmol/L NK+10μmol/L PI3K激活剂740Y-P处理SW480细胞)。平板克隆检测SW480细胞克隆能力;3-(4,5-二甲基噻唑-2)2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖能力;流式细胞术和Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡能力;细胞侵袭实验(Transwell)检测SW480细胞侵袭能力;MTT法检测SW480细胞黏附情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测黏附、凋亡以及通路相关蛋白水平。结果:与SW480组相比,L-NK组、M-NK组、H-NK组细胞核出现缩小、破碎现象,克隆数、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist相关蛋白1(Twist1)蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例依次显著降低(P<0.05),细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bcl-2关联X的蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达以及细胞黏附抑制率依次显著升高(P<0.05);与H-NK组相比,H-NK+740Y-P组克隆数、Bcl-2、N-cadherin、Twist1蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例显著升高(P<0.05),细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3、E-cadherin蛋白表达以及细胞黏附抑制率显著降低(P<0.05)。结论:NK可能通过下调PI3K/AKT通路抑制SW480细胞增殖和侵袭,促进其凋亡。

HPLC法测定羌活中紫花前胡苷的含量

目的:建立HPLC法测定羌活中紫花前胡苷含量的方法。方法:HPLC条件:色谱柱为Agilent HC-C18柱(5μm,4.6×250mm),流动相为甲醇-水(32∶68),流速为1.0ml.min-1,检测波长为335nm,柱温为35℃。结果紫花前胡苷范围为4.00μg.ml-1～100.00μg.ml-1,平均回收率为99.90%,RSD为1.50%。结论:该法操作简单,重现性好,结果准确,可作为羌活中紫花前胡苷的含量测定方法提供参考依据。

毛细管气相色谱法测定紫花前胡中紫花前胡苷元的含量

目的 建立毛细管气相色谱法 (GC)测定紫花前胡根中紫花前胡苷元 (NDT)含量的方法。方法 采用SE - 30石英毛细柱 (0 .2 2mm× 2 5m) ,液膜厚度 0 .2 5 μm ,FID检测器 ,以正二十五烷为内标物。 结果 NDT的标准曲线在 0 .0 89～ 1.0 6 2 μg(r=0 .9999)有较好线性关系 ,NDT的加样回收率为 (98.75± 0 .72 ) %,并采用GC -MS联用技术 ,鉴定了样品中的NDT色谱峰和进行专属性考察。结论 本法简便、快速、准确、灵敏度高 ,对于前胡的质量检测有一定参考价值。

HPLC法测定紫花前胡中紫花前胡苷的含量

目的:建立HPLC法测定中药紫花前胡中紫花前胡苷含量的方法,为其质量控制提供依据。方法:采用反相高效液相色谱法,Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(40:60),流速为1mL·min-1,检测波长334nm,柱温40℃。结果:紫花前胡苷在此色谱条件下获得良好分离,线性范围为25.0～300.0ng(r2=0.9999),平均回收率为98.6%,RSD1.8%。结论:首次建立了两相系统HPLC法测定紫花前胡药材中紫花前胡苷含量的方法,该方法准确,可靠,对紫花前胡药材及其制剂的质量控制有较重要意义,已被2010版《中国药典》采纳。

RP-HPLC法测定5种剂型的九味羌活制剂中紫花前胡苷、异欧前胡素

目的建立九味羌活（羌活、防风、苍术、黄芩、川芎、白芷、地黄、细辛和甘草）5种不同剂型（大蜜丸、小蜜丸、浓缩丸、水丸、颗粒剂）中紫花前胡苷和异欧前胡素的测定方法。方法 HPLC分析采用Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;乙腈-0.5%冰乙酸水溶液为流动相,非线性梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长330 nm。结果采用的方法对5种剂型中紫花前胡苷和异欧前胡素的测定均适用,其中紫花前胡苷在9.38～469.20 ng、异欧前胡素在12.56～167.48 ng范围内线性良好,相关系数均为0.999 9。结论本法分离效果好,专属性强,准确,可用于九味羌活系列制剂的质量控制。

紫花前胡苷调控EMT对宫颈癌细胞侵袭迁移的影响及其作用机制

目的探讨紫花前胡苷(NDK)通过调控上皮-间质转化(EMT)影响宫颈癌细胞侵袭迁移的可能机制,并分析其对miR-324-3P/WNT3a轴的影响。方法取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,分为4组:空白组(于37℃、5%CO_(2)、饱和湿度培养箱中培养)、miR-324-3P inhibitor组(转染hsa-miR-324-3p inhibitor)、NDK组(加入20 mmol/L浓度的NDK培养)、miR-324-3P inhibitor+NDK组(转染miR-324-3P inhibitor后加入20 mmol/L浓度的NDK培养),均处理48 h。采用Transwell实验检测各组细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力;qRT-PCR检测各组细胞中miR-324-3P、WNT3a mRNA表达水平;Western blotting检测各组EMT相关标志蛋白E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、WNT3a、β-catenin蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因检测miR-324-3P与WNT3a基因的靶向关系。结果与空白组比较,miR-324-3P inhibitor组HeLa细胞的穿膜细胞数增多,划痕愈合率增高,miR-324-3P mRNA表达水平下降,WNT3a mRNA表达水平升高,E-cadherin蛋白相对表达量降低,波形蛋白、N-cadherin、WNT3a和β-catenin蛋白相对表达量升高(P<0.05);而NDK组、miR-324-3P inhibitor+NDK组HeLa细胞的穿膜细胞数减少,划痕愈合率降低,miR-324-3P mRNA表达水平升高,WNT3a mRNA表达水平降低,E-cadherin蛋白相对表达量升高,波形蛋白、N-cadherin、WNT3a和β-catenin蛋白相对表达量降低(P<0.05);且NDK组上述各指标均低于miR-324-3P inhibitor+NDK组。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-324-3P mimic可降低WNT3a WT荧光素酶活性(P<0.05),但不影响WNT3a mut荧光素酶活性(P>0.05)。结论NDK可通过调控EMT抑制宫颈癌细胞的侵袭及迁移,其作用机制可能与调节miR-324-3P/WNT3a轴有关。

紫花前胡苷通过调控CXCL5-ERK/MEK信号轴发挥抗肝癌作用

本文探讨紫花前胡苷(nodakenin,NK)对肝癌细胞的作用及机制。不同浓度紫花前胡苷处理HepG2和MHCC-97H细胞,CCK-8检测细胞增殖变化,细胞划痕和Trans-wells实验观察细胞迁移和侵袭能力变化。紫花前胡苷能够显著抑制HepG2和MHCC-97H细胞增殖、体外迁移和侵袭;RNA-seq分析紫花前胡苷给药前后各基因表达,qRT-PCR、Western blotting和细胞免疫荧光进行验证分析,结果表明紫花前胡苷给药后趋化因子5(CXCL5)的表达显著降低,同时ERK和MEK磷酸化被抑制。综上所述紫花前胡苷通过下调CXCL5抑制ERK/MEK信号通路从而发挥抗肝癌作用。

高效液相色谱法同时测定舒筋活络丸中绿原酸、阿魏酸及紫花前胡苷

建立同时测定舒筋活络丸中绿原酸、阿魏酸、紫花前胡苷含量的高效液相色谱法。色谱柱采用Thermo ODS-2 C18(250 mm×4.6 mm 5μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长为321 nm。绿原酸、阿魏酸、紫花前胡苷分别在7.93~158.62μg/m L (r=0.999 7),2.12~42.43μg/m L (r=0.999 6),10.36~207.27μg/m L (r=0.999 7)范围内质量浓度与峰面积线性关系良好,平均加标回收率分别为101.92%,101.84%,98.42%(n=6),RSD分别为0.9%,1.5%,1.5%(n=6)。通过研究建立的方法操作简便,重复性好,结果稳定,可用于舒筋活络丸中绿原酸、阿魏酸、紫花前胡苷的含量测定。

高效液相色谱法测定不同产地羌活中紫花前胡苷的含量

目的 :测定不同产地羌活中紫花前胡苷含量。方法 :高效液相色谱法。结果 :紫花前胡苷回归方程为Y =- 95 0 9.1+ 1912 70 9.8X ,r =0 .9998,线性范围 0 .16～ 0 .6 4 μg ,平均回收率 99.3% ,RSD2 .6 4 %。结论 :方法简单、快速。

高效液相色谱-串联质谱法测定羌活中异欧前胡素和紫花前胡苷

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法测定羌活中异欧前胡素和紫花前胡苷含量。方法:羌活样品超声萃取甲醇稀释后分析。色谱分离采用C18反相色谱柱(150 mm×2.1 mm,3.5μm),流动相为0.1%乙酸水溶液和乙腈,梯度洗脱。串联质谱在多反应监测模式下检测目标分析物,以保留时间和特征离子对(母离子和2个碎片离子)信息比较进行定性和定量分析。结果:异欧前胡素和紫花前胡苷的检出限分别为0.03 ng·mL-1和0.015 ng·mL-1,定量限分别为0.10 ng·mL-1和0.05ng·mL-1,异欧前胡素和紫花前胡苷平均回收率分别为93.6%和94.5%,RSD分别为2.4%和2.6%。结论:该方法经方法学验证,可用于羌活中异欧前胡素和紫花前胡苷的分析。

HPLC-荧光检测法测定犬血中紫花前胡苷的浓度及其药代动力学初步研究

目的:建立HPLC-荧光法测定犬血浆中紫花前胡苷的浓度,初步研究紫花前胡苷在犬体内的药代动力学特征。方法:以乙腈为蛋白沉淀剂,以Hypersil BDS C18柱(200 mm#4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(45∶55);激发波长为360 nm;发射波长为395 nm。Beagle犬4只,单次静脉注射紫花前胡苷30 mg·kg-1,后肢静脉取血,采用HPLC测定血药浓度,并用DAS 2.0程序计算药代学参数。结果:Beagle犬血浆中内源性成分对测定无干扰,紫花前胡苷的线性范围为0.1～40.0μg·mL-1(r=0.9993),平均相对回收率为89.8%～100.7%,日内和日间RSD均<10%。紫花前胡苷在犬体内的药代动力学过程符合开放二房室模型,主要药代动力学参数t1/2α、t1/2β、V1、CL和AUC(0-t)分别为(0.536±0.085)h、(3.048±0.826)h、(0.446±0.038)L·kg-1、(0.417±0.108)L·h-1.kg-1和(68.966±16.181)mg·L-1.h。结论:本方法准确、灵敏、快速,适用于紫花前胡苷的血药浓度测定和药代动力学研究,为紫花前胡苷的开发和临床应用提供参考。