托里透毒汤口服联合紫草纱条引流促进肛周脓肿术后创面愈合的研究

目的探讨托里透毒汤方口服联合紫草纱条创面引流促进肛周脓肿患者术后创面愈合和影响炎性因子表达研究。方法选取医院2019年6月—2022年1月收治的174例肛周脓肿术的患者为研究对象,随机分为观察组(58例)、对照组A(58例)和对照组B(58例),术后所有患者给予常规处理,对照组A增加紫草纱条创面引流治疗,对照组B增加凡士林纱条创面引流治疗,观察组增加托里透毒汤方口服与紫草纱条创面引流联合治疗。比较3组患者术后第1、7、14天时疼痛程度、创面症状评分、创面愈合情况、炎性因子水平及治疗效果。结果术后第7、14天观察组血清P物质(Substance P,SP)、五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)水平均低于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A第7、14天各水平均低于对照组B(P<0.05);术后第7、14天观察组分泌物评分、水肿评分均低于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A7 d、14 d各评分均低于对照组B(P<0.05);观察组第7、14天创面缩小率高于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A第7、14天缩小率均高于对照组B,治疗后观察组创面腐肉全部脱落时间与创面愈合时间均短于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A各时间均低于对照组B(P<0.05);术后第7、14天观察组血清肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、C反应蛋白(C-reactive Protein,CRP)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)炎性因子水平均低于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A第7天、14天各水平均低于对照组B(P<0.05);治疗后观察组患者总有效58例(100.00%)显著比对照组A患者54例(93.10%)和对照组B患者50例(86.21%)高(P<0.05),对照组A总有效率比对照组B高,但两组比较差异不存在统计学意义(P>0.05)。结论托里透毒汤口服联合紫草纱条创面引流可以促进术后创面愈合,降低炎性因子水平,缩短康复进程,值得推广。

紫草素调控Hippo信号通路抑制鼻咽癌细胞株生物学功能及其机制研究

目的探讨紫草素介导Hippo信号通路对鼻咽癌(NPC)细胞株CNE2生物学功能的影响。方法于2021年1—12月使用含不同浓度紫草素培养液(0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L)培养对数生长期人鼻咽癌细胞(CNE2细胞)48 h,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞存活率;流式细胞术、平板克隆、伤口愈合及Transwell实验分别检测CNE2细胞凋亡、集落形成、迁移及侵袭情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测细胞yes相关蛋白1(YAP1)、具有PDZ结合基序的转录共激活子(TAZ)mRNA相对表达情况;蛋白质印迹法检测YAP1、yes相关蛋白1(p-YAP1)、TAZ、磷酸化具有PDZ结合基序的转录共激活子(p-TAZ)、N-钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vim)及E-钙黏蛋白(E-cad)蛋白表达情况。结果与0 mg/L浓度紫草素CNE2细胞存活率(100%)、集落形成数(514.67±25.81)个、划痕愈合率(88.58±3.40)%、侵袭细胞数(233.67±15.01)个、YAP1与TAZ mRNA及蛋白(1.01±0.02、1.00±0.01、0.68±0.04、0.51±0.03)比较,2 mg/L浓度紫草素[(92.70±5.92)%、(452.33±22.72)个、(69.91±3.03)%、(195.33±18.15)个、0.93±0.02、0.91±0.05、0.56±0.03、0.44±0.02],4 mg/L浓度紫草素[(81.75±3.83)%、(308.33±22.12)个、(53.61±3.21)%、(153.33±10.02)个、0.81±0.03、0.76±0.04、0.45±0.03、0.30±0.03],8 mg/L浓度紫草素[(54.93±3.89)%、(173.67±13.65)个、(30.32±1.68)%、(92.67±6.66)个、0.65±0.03、0.54±0.04、0.31±0.03、0.24±0.02],16 mg/L浓度紫草素[(33.89±2.14)%、(85.33±13.05)个、(18.31±1.42)%、(52.33±6.03)个、0.41±0.02、0.30±0.02、0.18±0.02、0.16±0.02]降低(P<0.05),CNE2细胞凋亡率、p-YAP1与p-TAZ及E-cad蛋白相对表达水平均随紫草素作用浓度增大而升高(P<0.05);紫草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论紫草素可抑制NPC细胞株CNE2细胞恶性生物学功能,其作用机制可能与抑制Hippo信号通路核心下游信号因子YAP1、TAZ蛋白激活,阻止上皮间质转化(EMT)有关。

紫草素(shikonin)抗奥密克戎毒株的实验研究及机制分析

目的探讨右旋体紫草素(shikonin)抗奥密克戎毒株的药理作用和对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性。方法使用奥密克戎毒株BA.2.2转染的Vero细胞模型检测shikonin的抗病毒活性;利用体外主蛋白酶荧光偏振模型测试shikonin对于新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性,实验以奈玛特韦为阳性对照化合物。结果Vero细胞模型药理活性测试发现shikonin具有抑制奥密克戎毒株核酸复制的作用;而在体外荧光偏振模型活性测试实验中,shikonin在20、50μM药物浓度并未表现出对主蛋白酶的显著抑制活性。结论紫草素(shikonin)在细胞水平的实验中表现出抗奥密克戎毒株的药理活性,但其可能是主蛋白酶的非特异性抑制剂,抗病毒的作用机理极可能为抑制新型冠状病毒RNA聚合酶。

紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的探讨紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制。方法将对数生长期MGC803细胞随机分为空白对照组、紫草素组、紫草素+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组和紫草素+LY294002组。空白对照组细胞在无药培养基中培养,紫草素组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素的培养基中培养,紫草素+IGF-1组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素和终浓度10μmol·L^(-1) IGF-1的培养基中培养,紫草素+LY294002组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素和终浓度30μmol·L^(-1) LY294002的培养基中培养。培养24 h后,采用细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、激活型caspase-3(cleaved caspase-3)、cleaved caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、磷酸化PKB(p-PKB)蛋白表达。结果紫草素组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率显著低于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率均显著高于紫草素组(P<0.05)。紫草素组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著低于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著高于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著低于紫草素组(P<0.05)。紫草素组MGC803细胞中Bcl-2蛋白相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05),Bax、Cyt C、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比值显著高于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞中Bcl-2蛋白相对表达量显著高于紫草素组(P<0.05),Bax、Cyt C、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比值显著低于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞中Bcl-2蛋白相对表达量显著低于紫草素组(P<0.05),Bax、Cyt C、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比值显著高于紫草素组(P<0.05)。紫草素组MGC803细胞中p-PI3K、p-PKB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB比值显著低于空白对照组(P<0.05),紫草素组和空白对照组MGC803细胞中PI3K、PKB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞中p-PI3K、p-PKB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB比值显著高于紫草素组(P<0.05),紫草素+IGF-1组与紫草素组MGC803细胞中PI3K、PKB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞中p-PI3K、p-PKB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB比值显著低于紫草素组(P<0.05),紫草素+LY294002组与紫草素组MGC803细胞中PI3K、PKB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论紫草素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路有关。

紫草素调控白细胞介素-6治疗肺动脉高压的机制研究

目的:探讨紫草素通过抑制白细胞介素(IL)-6及其下游信号通路逆转肺动脉高压(PAH)大鼠血流动力学和血管重构的机制。方法:24只SD大鼠随机数字表法分为对照组(CON组)、野百合碱肺动脉高压组(MCT-PAH组)、肺动脉高压紫草素干预组(MCT-PAH+SH组),每组8只。造模28 d后检测各组大鼠肺动脉血流动力学、右室肥厚指数,HE染色鉴定肺动脉形态学变化,Western blot和免疫组化检测IL-6、IL-21、CD163等分子的表达及定位。结果:与CON组相比,MCT-PAH组大鼠肺动脉血流加速时间(PAAT)缩短,心脏右室内径(RVID)增宽,三尖瓣瓣环收缩期位移(TAPSE)减低,右室肥厚指数增加,右室收缩压(RVSP)升高,肺动脉血管壁明显增厚,且以中膜肥厚显著。与MCT-PAH组相比,MCT-PAH+SH组大鼠PAAT延长,RVID略减少,TAPSE增加,右室肥厚指数改善,RVSP降低且肺血管肥厚程度改善。免疫荧光结果显示MCT-PAH组大鼠肺小动脉中IL-6的表达水平较CON组升高,MCT-PAH+SH组较MCT-PAH组下降。Western blot结果显示MCT-PAH组大鼠肺组织IL-6、IL-21表达水平较CON组增加,MCT-PAH+SH组较MCTPAH组下降。MCT-PAH组大鼠肺血管壁CD163表达水平较CON组明显升高,MCT-PAH+SH组较MCT-PAH组显著减低。结论:紫草素干预改善PAH大鼠右心血流动力学及肺血管重构,其机制可能与抑制IL-6及其下游分子IL-21、CD163相关。

肛痈促愈汤联合紫草纱条创面引流对肛周脓肿患者术后创面愈合的影响

目的观察肛痈促愈汤联合紫草纱条创面引流应用于肛周脓肿患者术后创面愈合的效果。方法选取2021年9月至2023年9月成都大学附属医院肛肠科收治的肛周脓肿患者100例,随机数字表法分为对照组与试验组,每组各50例。对照组患者于肛周脓肿根治术后实施常规处理,试验组则在常规处理基础上加用肛痈促愈汤口服结合紫草纱条创面引流,治疗时间为3周。比较2组治疗后创面愈合情况、疼痛程度、创面肉芽生长情况、血清炎症因子[血清淀粉样蛋白A(SAA)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)]、血管内皮生长因子(VEGF)及表皮生长因子(EGF)。结果试验组腐肉完全脱落时间、创面愈合时间均短于对照组,治疗7 d后创面愈合率高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。治疗7 d后2组的疼痛视觉模拟法评分(VAS)、创面肉芽生长情况评分均明显低于治疗1 d后,且试验组治疗7 d后疼痛VAS评分、创面肉芽生长情况评分显著低于对照组同期,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗3周后2组的SAA、CRP、WBC水平均显著低于治疗1 d后,VEGF、EGF水平均显著高于治疗1 d后,且试验组治疗3周后SAA、CRP、WBC水平显著低于对照组同期,VEGF、EGF水平显著高于对照组同期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肛痈促愈汤结合紫草纱条创面引流应用于肛周脓肿患者术后创面愈合效果较好,可缓解创面疼痛,加快创面愈合,减轻炎症反应,促进组织再生修复。

紫草油联合凝胶体位垫对俯卧位全身麻醉患者压疮的效果研究

目的探究紫草油联合凝胶体位垫对俯卧位全身麻醉患者压疮的效果。方法回顾性选取2019年12月至2022年12月新疆医科大学附属中医医院收治的100例俯卧位全身麻醉手术患者作为研究对象,根据治疗方法不同将患者进行分组:对照组(n=50)和研究组(n=50)。对照组患者术中采用凝胶体位垫,研究组患者术中采用紫草油联合凝胶体位垫。比较两组患者发生压疮的情况与压疮个数、面积以及压疮分级,并对患者术后的疼痛及舒适度情况进行比较,观察并记录其临床指标。结果两组患者头面部、髂嵴、前胸部、膝部、脚趾的压疮发生情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05),研究组患者的平均损伤个数、平均损伤面积分别为(2.34±0.98)个、(1.56±0.61)cm^(2),均低于对照组[(3.11±1.23)个、(2.15±0.87)cm^(2)],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者压疮分级情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者术后即刻,术后12、24 h的视觉模拟评分法(VAS)评分分别为(3.08±0.56)、(2.37±0.98)、(1.34±0.36)分,均低于对照组[(4.22±0.87)、(3.67±1.12)、(1.84±0.67)分],差异均有统计学意义(P<0.05),但两组患者术后72 h的VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组术后即刻,术后12、24、72 h的生理、心理精神、环境及社会文化方面的舒适度评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后持续性疼痛发生情况、住院时间、住院费用比较,差异均无统计学意义(P>0.05);研究组患者护理满意度为(88.26±4.98)%,高于对照组[(75.26±2.69)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论在对俯卧位全身麻醉患者手术治疗时,采用紫草油联合凝胶体位垫进行治疗可以有效减少患者的住院时间及住院花费,缓解患者术后的疼痛程度,提高其舒适度,可应用于临床。

滇紫草中肝毒性吡咯里西啶生物碱的含量分析

目的:建立液质联用法分析滇紫草中印美定、石松胺、蓝蓟定及其氮氧化物的含量。方法:采用沃特世HSS T3(长度100 mm、直径2.1 mm,粒径1.8μm)为色谱柱,以各含0.05%甲酸的乙腈水系统为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1);进样量为1μL;电喷雾离子源,正离子多反应监测模式测定。结果:滇紫草中4种成分分别在0.972~97.2 ng·mL^(-1)、0.988~98.8 ng·mL^(-1)、1.024~102.4 ng·mL^(-1)、0.996~99.6 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(r>0.9990),回收率分别为93.5%、89.2%、88.1%和85.4%,RSD分别为3.5%、4.2%、3.2%和4.3%。结论:该方法专属性强,准确性好,可用于滇紫草中吡咯里西啶生物碱类成分的检测。

紫草素调节Nrf2/HO-1信号通路对实验性大鼠肉芽肿性小叶性乳腺炎的治疗作用研究

目的探究紫草素(Shikonin,SHI)通过调节核因子-红细胞2型相关因子2/血红素加氧酶(Nrf2/HO-1)信号通路对肉芽肿性小叶性乳腺炎模型大鼠的影响及作用机制。方法建立肉芽肿性小叶性乳腺炎(GLM)大鼠模型,将大鼠分为对照组(Control组)、模型组(GLM组)、紫草素低剂量组(SHI-L组,17.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI)、紫草素中剂量组(SHI-M组,35 mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI)、紫草素高剂量组(SHI-H组,70mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI)和紫草素高剂量+Nrf2抑制剂ML385组(SHI-H+ML385组,70 mg·kg^(-1)·d^(-1)SHI+14 mg·kg^(-1)·d^(-1)ML385)。HE染色观察乳腺组织病理变化情况;ELISA检测乳腺组织中IL-1β、TNF-α、IL-8、T-AOC、SOD、GSH、MPO、NAGase和ROS水平;免疫荧光检测NLRP3表达;Western blotting检测Nrf2和HO-1蛋白表达。结果与Control组相比,GLM组大鼠乳腺小叶完全被破坏、大片结节样慢性肉芽肿炎性病灶生成,乳腺小叶组织边界不清,腺叶内出现空泡,伴有大量淋巴细胞及中性粒细胞浸润;IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MPO和NAGase水平、NLRP3阳性表达率显著增加(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。与GLM组相比,SHI-L组、SHI-M组和SHI-H组乳腺组织病变逐渐减轻;IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MPO和NAGase水平、NLRP3阳性表达率依次降低(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1蛋白表达依次升高(P<0.05)。与SHI-H组相比,SHI-H+ML385组乳腺组织病变加重;IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MPO和NAGase水平、NLRP3阳性表达率显著增加(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论紫草素发挥抗炎抗氧化作用改善大鼠肉芽肿性小叶性乳腺炎,其机制可能与激活Nrf2信号通路,上调HO-1表达有关。

“仙鹤草-鱼腥草-紫草”角药治疗放射性肠炎的潜在靶点及作用机制研究

目的:基于网络药理学和分子对接技术探究“仙鹤草-鱼腥草-紫草”角药治疗放射性肠炎的潜在靶点及作用机制。方法:首先运用TCMSP和Genecards、OMIM数据库分别筛选药物、疾病的潜在靶点并取两者交集基因,导入String12.0数据平台构建蛋白互作网络,运用Cytospace3.9.1软件构建“药物-成分-疾病”靶点网络,基于DAVID数据库采用R语言进行交集靶点KEGG与GO富集分析。结果:从3味中药中筛选出22种活性成分,与放射性肠炎共有160个交集基因,预测潜在核心作用成分有鞣花酸、山柰酚、儿茶素、木犀草素、槲皮素;主要潜在核心靶点基因有TP53、AKT1、JUN、TNF、IL-6等。富集分析示作用机制主要与氧化应激、免疫应答、炎症反应、抗肿瘤等多种信号通路相关。分子对接显示核心靶点基因与核心活性成分具有高度亲和性。结论:“仙鹤草-鱼腥草-紫草”角药可能通过炎症反应、免疫应答、氧化应激、血管生长等相关基因发挥多靶点、多机制治疗放射性肠炎。

紫草膏在系统性血管炎伤口护理中的应用研究

目的探讨紫草膏在系统性血管炎伤口中的护理疗效。方法选取2023年1月至2024年1月在云南省第一人民医院接受治疗的160例系统性血管炎患者为研究对象,按照组间基线资料均衡可比的原则将其分为对照组和试验组,每组80例。对照组采用常规一般伤口护理方法,试验组用生理盐水清洁创面,对于有溃疡且分泌物较多的伤口,用无无菌生理盐水和无菌棉球轻柔擦拭创面,机械清理伤口分泌物,清理后分别用生理盐水和过氧化氢溶液冲洗创面,用无菌棉球擦干伤口周围皮肤,碘伏消毒创面,再以紫草膏涂于创面上,伤口暴露10分钟后予无菌纱布覆盖。结果采用紫草膏护理伤口显效患者数高于一般伤口护理显效患者数,总有效率显著高于一般伤口护理总有效率,P<0.05。结论采用紫草膏对血管炎伤口护理可促进伤口创面愈合,极大提高了系统性血管炎伤口愈合率,有效减轻患者疼痛,提高患者生活质量,将紫草膏应用于系统性血管炎伤口护理有较好的临床意义,可推广应用。

真菌诱导子调控紫草素合成的分子机制探究

为探讨真菌诱导子调控紫草素合成的分子机制,以新疆紫草无菌苗为试材,经尖孢镰刀菌、立枯丝核菌制备成的诱导子生物诱导后,对其根部进行RNA测序和分析。结果表明,与对照组比较,尖孢镰刀菌试验组差异表达基因1735个;立枯丝核菌试验组差异表达基因1043个。GO(gene ontology)分析发现,2个试验组差异表达基因主要富集在细胞过程、细胞组分中膜和分子功能中催化活性等生物学过程。KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)分析发现,2个试验组在植物与病原菌互作、植物激素信号转导途径和苯丙素合成等通路均有大量差异表达基因富集。2个试验组差异表达情况相同的转录因子主要包括bHLH、AP2/ERF-ERF和LOB等,并发现参与紫草素合成及其正向调控的AeGHQH、AeDSH1、AeAP、AePAL、AeDI2、AePGT、AeHMGR、AeG10H基因在2个试验组均上调表达,其中尖孢镰刀菌试验组上调表达较显著。以上结果从分子水平探究了新疆紫草对真菌诱导子生物诱导的响应机制,为未来真菌诱导子应用于新疆紫草种植生产奠定了理论基础。

生肌止痛方坐浴联合紫草纱条创面引流对小儿肛周脓肿术后患者的临床疗效

目的探讨生肌止痛方坐浴联合紫草纱条创面引流对小儿肛周脓肿术后患者的临床疗效。方法100例患者随机分为对照组和观察组,每组50例,对照组给予常规治疗,观察组给予生肌止痛方坐浴联合紫草纱条创面引流。检测创面水肿评分、创面分泌物评分、创面肉芽组织生长评分、FLACC评分、中医证候评分、创面愈合情况(渗出物消失时间、创面水肿消失时间、创面愈合时间)、PCT、TNF-α、sTREM-1、白细胞、SP、NPY、5-HT、肛门功能指标(直肠最大耐受容量、直肠肛管抑制反射阈、肛管高压带长度)变化。结果观察组创面愈合情况优于对照组(P<0.05)。术后14 d,2组创面水肿评分、创面分泌物评分、FLACC评分、中医证候评分、PCT、TNF-α、sTREM-1、白细胞、SP、NPY、5-HT降低(P<0.05),创面肉芽组织生长评分、直肠肛管抑制反射阈升高(P<0.05),直肠最大耐受容量减少(P<0.05),肛管高压带长度缩短(P<0.05),以观察组更明显(P<0.05)。结论生肌止痛方坐浴联合紫草纱条创面引流可抑制小儿肛周脓肿术后患者机体炎症,促进创面愈合,提升肛门功能。

紫草素对人早幼粒细胞白血病细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨紫草素对人早幼粒细胞白血病细胞自噬和凋亡的影响及可能的机制。方法:取对数生长期的人早幼粒细胞白血病细胞NB4,将其分为对照组(未处理的NB4细胞)、紫草素组(0.3μmol/L紫草素处理)、740Y-P组(15μmol/L PI3K/Akt/m TOR通路激活剂740Y-P处理)、紫草素+740Y-P组(0.3μmol/L紫草素与15μmol/L 740Y-P共同处理),处理24 h后,用于后续实验,CCK-8法检测各组细胞活力,单丹磺酰戊二酸染色检测细胞自噬囊泡的聚集情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测各组细胞中Beclin1、LC3、p62、Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2及PI3K/Akt/m TOR通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,紫草素组NB4细胞内紫色点状荧光强度、细胞凋亡率及Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、cleaved caspase-3、Bax蛋白相对表达量升高,OD_(450)值(24、48 h)及Bcl-2、p62蛋白相对表达量降低(均P<0.05);与对照组比较,740Y-P组NB4细胞内紫色点状荧光强度、细胞凋亡率及Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、cleaved caspase-3、Bax蛋白相对表达量降低,OD_(450)值(24、48 h)及Bcl-2、p62蛋白相对表达量升高(均P<0.05);与紫草素组比较,紫草素+740Y-P组NB4细胞内紫色点状荧光强度、细胞凋亡率及Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、cleaved caspase-3、Bax蛋白相对表达量降低,OD_(450)值(24、48 h)及Bcl-2、p62蛋白相对表达量升高(均P<0.05)。与对照组比较,紫草素组NB4细胞中PI3K/Akt/m TOR通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt、p-m TOR蛋白表达显著降低,而740Y-P组显著升高(均P<0.05);与紫草素组比较,紫草素+740Y-P组NB4细胞中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR蛋白表达显著升高(均P<0.05)。结论:紫草素可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路促进NB4细胞自噬与凋亡。

基于TNFR/RIPK1通路探索紫草素对大鼠脊髓损伤的作用及机制

目的:初步探讨紫草素对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经功能恢复的影响及作用机制。方法:将96只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠分为4组:假手术组,即A组;假手术+紫草素组,即B组;脊髓损伤+二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组,即C组;脊髓损伤+紫草素组,即D组;每组24只。C、D组采用钳夹法制作大鼠急性SCI模型。所有大鼠硬膜下置管,A组不给药,B组和D组造模后30 min经导管注射紫草素100 mg·kg^(-1),C组注射等量DMSO,每日1次,至取材时间点。各组分别于造模后6、12 h和3 d每组取8只大鼠,行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分及造模后1、3、7、14、21d行斜板实验,再处死动物取脊髓组织。造模后1h每组大鼠腹腔注射碘化丙啶(propidine iodide,PI)1 mg·kg^(-1),术后24 h取材检测脊髓组织PI红染细胞数;24 h时取材采用苏木素-伊红(haematoxylin eosin,HE)染色观察脊髓损伤情况,尼氏(Nissl)染色观察神经元存活数量,使用Western-blot技术检测B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白及调亡相关蛋白受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein kinase1,RIPK1)的表达水平。结果:造模后A组和B组各时间点的BBB评分均正常,C、D组各时间点均低于A、B组,D组造模后12 h和3d的BBB评分高于同时间点C组(P<0.05)。造模后12 h,D组PI红染细胞较C组明显减少,神经元崩解减轻(P<0.05)。造模后24h,A组和B组脊髓组织HE和Nissl染色正常,D组脊髓组织损伤程度和存活神经元数量均优于C组(P<0.05)。Bcl-2、RIPK1蛋白在A组、B组表达很低;RIPK1在C组表达明显增高,在D组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在D组表达高于C组(P<0.05)。结论:紫草素可减轻大鼠急性SCI后的病理变化,改善行为学评分,促进脊髓神经功能恢复。其具体机制可能与抑制TNFR/RIPK1信号通路介导的坏死性凋亡有关。

紫草素纳米结构脂质载体的制备与评价

目的 制备并优化紫草素纳米结构脂质载体(NLC),并对其进行表征、创面刺激性测试及抗炎活性评价。方法 通过饱和溶解度测定、脂质相容性和乳化能力筛选了紫草素NLC的处方。以粒径和多分散系数(PDI)为指标,考察紫草素NLC的制备方法,并采用该方法制备紫草素NLC,单因素法考察固液脂质比、总脂质用量、乳化剂用量和投药量的范围。通过正交试验考察固液脂质比、总脂质用量、投药量对PDI和载药量的影响,得到最优处方,并对其进行验证及表征。通过在大鼠背部表皮造成破损后连续给药,测试紫草素NLC的创面刺激性。采用脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型,以NO释放率为指标评价紫草素NLC的体外抗炎活性。结果 采用Transcutol P为液体脂质,固体脂质为双硬脂酸甘油酯,乳化剂为BRIJ?O20,采用薄膜水化法制备NLC,最优处方:乳化剂用量为6%,固液脂质比为4∶6,总脂质用量为6%,投药量为20 mg。大鼠背部破损皮肤均未见红斑或水肿,皮肤组织结构均基本正常,同时等剂量下的紫草素NLC抑制RAW264.7释放NO的能力存在比紫草素更强的趋势。结论 制得的紫草素NLC载药量高,粒径均一。紫草素被制成NLC后,对创面无刺激性,细胞毒性有所下降,同时具有较好的抗炎活性。

紫草素调节HIF-1α/NLRP3信号通路对蛛网膜下腔出血大鼠神经功能损伤的影响

目的探究紫草素调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠神经功能损伤的影响。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、YC-1(HIF-1α抑制剂,5 mg/kg)组、紫草素低剂量组(4 mg/kg)、紫草素高剂量组(25 mg/kg)、紫草素高剂量(25 mg/kg)+AG1(HIF-1α激活剂,10 mg/kg)组,每组15只。采用颈内动脉刺破法制备SAH模型。采用Zea-Longa评分法评估6组大鼠神经功能;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和IL-1β水平;HE染色观察大鼠海马组织形态学变化,TUNEL染色法检测海马神经元凋亡率;伊文思蓝染色检测血脑屏障通透性;商品化试剂盒检测大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(MDA)、丙二醛(CAT)水平,Western blot检测大鼠脑组织Bax、Bcl-2、HIF-1α、NLRP3蛋白表达。结果假手术组大鼠海马神经元形态结构正常;与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元有大量水肿、结构模糊,有细胞核溶解,变型固缩,部分细胞核消失,大鼠神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、海马神经元凋亡率、伊文思蓝渗出量、脑组织MDA水平、Bax、HIF-1α、NLRP3水平显著增加,脑组织SOD、CAT水平、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,紫草素低剂量组、紫草素高剂量组和YC-1组鼠海马神经元病理损伤显著改善,大鼠神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、海马神经元凋亡率、伊文思蓝渗出量、脑组织MDA水平、Bax、HIF-1α、NLRP3水平显著降低,SOD、CAT水平、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05);与紫草素高剂量组比较,紫草素高剂量+AG1组大鼠海马神经元病理损伤显著加重,大鼠神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、海马神经元凋亡率、伊文思蓝渗出量、脑组织MDA水平、Bax、HIF-1α、NLRP3水平显著增加,SOD、CAT水平、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论紫草素抑制HIF-1α/NLRP3信号通路以降低氧化应激和炎性反应,进而改善SAH大鼠神经功能损伤。

基于生物信息学和体外实验探讨紫草素潜在的抗肿瘤机制

目的:紫草素(SHK),一种紫草根部的萘醌类活性成分,具有抗肿瘤活性。本研究通过生物信息学方法和细胞实验,探索SHK在肝细胞肝癌(LIHC)、前列腺腺癌(PRAD)和结肠腺癌(COAD)中的新靶点。方法:通过人类基因数据库(GeneCard)及癌症基因图谱(TCGA)获得SHK与3种癌症的交集基因,并进行基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析、蛋白质-蛋白质相互作用(PPT)网络构建等。体外实验检测SHK对人肝癌细胞(HepG2)、人前列腺癌细胞(LNCaP C4-2)和人结肠癌细胞(HT-29)的抑制作用,并分析SHK对细胞凋亡及预测靶点基因表达的影响。结果:SHK显著抑制3种癌细胞增殖并通过调节周期素依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)等基因的表达实现抗肿瘤作用,且与生物信息学预测结果一致。此外,Kaplan-Meier生存曲线进一步表明CDKN1A等是SHK影响癌症患者生存的重要靶点;CDKN1A和B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)是SHK抑制肿瘤细胞增殖和侵袭的核心靶点。结论:SHK可通过人体抑癌基因(P53)/CDKN1A和BCL-2/BCL-2关联X蛋白(BAX)通路诱导癌细胞凋亡。本研究报道了SHK抑制肿瘤的作用靶点及潜在机制,为含SHK的中草药作为抗肿瘤的潜在药物提供了初步依据。

紫草素对脓毒症相关性脑病大鼠神经炎症的影响及机制研究

目的探讨紫草素调节环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路对脓毒症相关性脑病(SAE)大鼠神经炎症的影响及可能机制。方法将大鼠随机分为SAE组,紫草素低、中、高剂量组(1.33、2.66、5.32 mg/kg),紫草素高剂量+Roc A组(5.32 mg/kg紫草素+0.67 mg/kg cGAS-STING信号通路激活剂Roc A)和对照组,每组12只。除对照组外,其余各组大鼠均构建SAE模型,造模成功后开始给药,每天1次,持续14 d。给药结束后,通过Y迷宫实验、旷场实验分别评估大鼠的学习记忆能力、焦虑状态;观察其海马齿状回(DG)区神经元的病理变化;检测其海马DG区脑组织中CD86、CD206阳性细胞数以及白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-4、IL-10水平和cGAS、STING蛋白表达水平。结果与SAE组相比,紫草素低、中、高剂量组大鼠神经元损伤得到改善,“新臂”内活动距离百分比、中心区域停留时间、行走距离以及海马DG区脑组织中完整神经元数目、CD206阳性细胞数和IL-4、IL-10水平均显著增加/升高/延长(P<0.05),海马DG区脑组织中CD86阳性细胞数以及IL-1β、TNF-α水平和cGAS、STING蛋白表达均显著减少/降低/下调(P<0.05),且紫草素的作用呈剂量依赖性(P<0.05)。Roc A可显著逆转高剂量紫草素对SAE大鼠神经炎症的改善作用(P<0.05)。结论紫草素可能通过抑制cGAS-STING信号通路活性来改善SAE大鼠神经炎症。

模拟炎症微环境下紫草素对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的探究紫草素在牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的炎症微环境下对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响。方法从健康人牙周膜组织中分离培养人牙周膜干细胞,采用流式细胞术鉴定细胞表面标志物CD29、CD105、CD34、CD45。CCK-8法检测不同浓度紫草素对正常及模拟炎症微环境下人牙周膜干细胞增殖活性的影响:首先筛选出紫草素促进增殖人牙周膜干细胞作用的适宜浓度范围,再取牙周膜干细胞进行后续实验分组:空白组(单纯培养基)、紫草素组(实验药物浓度紫草素)、LPS组(牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS,10μg/mL)、紫草素+LPS组(实验药物浓度紫草素+P.g-LPS)。3 d时采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中IL-6、IL-18水平;7 d时进行碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶活性测试、21 d时进行茜素红染色检测成骨的分化能力;168 h时进行RT-PCR检测骨钙素、RUNT相关转录因子2、碱性磷酸酶等成骨基因的表达。结果分离培养的人牙周膜干细胞主要呈束状长梭形,流式鉴定结果表面标志物CD29(99.91%)、CD105(92.34%)、CD34(0.76%)、CD45(0.32%),证实分离细胞符合干细胞特性。CCK-8检测结果显示:正常状态下,与空白组相比,紫草素0.0625、0.125、0.25、0.5μmol/L组人牙周膜干细胞相对细胞活力升高(P<0.05);模拟炎症环境下,紫草素0.5μmol/L组人牙周膜干细胞活性最好(P<0.05)。同时与LPS组相比,0.5μmol/L浓度的紫草素可促进炎症状态下细胞迁移,降低炎症状态下IL-6、IL-18的水平(P<0.05),对炎症状态下人牙周膜干细胞成骨分化作用明显,可以增强炎症状态下骨钙素、RUNT相关转录因子2、碱性磷酸酶等成骨基因的表达(P<0.05)。结论模拟炎症微环境下,适当浓度的紫草素可降低炎症环境下IL-6、IL-18水平,同时具有一定促进人牙周膜干细胞增殖、迁移和成骨分化的作用,可作为慢性牙周炎防治的潜在备选药物。