不同理化因子对新疆紫草愈伤组织生长及紫草宁衍生物合成的影响

本文报道了不同理化因子对新疆紫草(Arnebia euchroma)愈伤组织生长及紫草宁衍生物生物合成的影响。试验结果表明,有利于愈伤组织生长和色素形成的合适温度为25℃;培养基pH值的最适范围为5.3—5.8;白光对愈伤组织的生长和紫草宁衍生物的形成具有强烈的抑制作用;培养基中添加0.2mg/L的IAA和0.5mg/L的KT对愈伤组织的生长具有促进作用;IAA和KT对紫草宁衍生物合成无促进作用,并随两者浓度的提高,培养物中紫草宁衍生物的含量与产量逐渐降低。

硬紫草细胞悬浮培养和紫草宁及其衍生物的形成

硬紫草细胞悬浮培养形成紫草宁及其衍生物时,细胞生长曲线呈扁平的S形。细胞停止生长后,紫草宁及其衍生物大量形成,二者的动态变化呈负相关。测定了此过程中培养液的无机元素和可溶性糖含量、溶氧、pH值以及细胞形态的变化情况,可作为硬紫草细胞大规模培养的参考。

紫草宁形成相关的基因克隆及其代谢工程

紫草是我国重要的中草药材 ,其中紫草宁是主要的药用成分。目前 ,组织培养技术已经能够工业化生产紫草宁药物。近年来 ,人们运用分子生物学方法和技术 ,从紫草培养细胞中分离和鉴定的一些与紫草宁形成相关的基因克隆 ,并且开展了紫草宁代谢工程的研究。综述了这两方面的主要研究进展 ,并对其后续的基础和应用研究进行了展望。

紫草组织培养中细胞发育时期与紫草宁形成关系的研究

目的 植物细胞初生代谢是次生代谢的基础 ,与细胞的发育状态有关。从几个方面探讨细胞发育状态与色素形成能力的关系。方法 研究了接种量对营养生长期间细胞生长的影响 ,比较了营养生长阶段不同生长时期细胞的色素形成能力 ,并检查了各发育时期细胞的分裂指数 ,同时测定了紫草宁合成阶段色素合成的时间进程。结果接种量约每毫升培养基 0 .0 83～ 0 .117g愈伤组织时 ,细胞生长良好。营养生长阶段细胞的发育时期和生理生化状态与色素合成的能力密切相关。细胞分裂高峰期以后 ,细胞合成紫草宁的能力开始增加 ,细胞营养生长静止期色素合成能力达到饱和。色素形成时期色素合成曲线同细胞生长曲线一样呈 S型。以上结果揭示 ,细胞首先满足自身基本的生命活动 ,在此基础上才能积累中间或次生代谢物 ,因而细胞的发育时期与色素的形成能力密切相关。

大孔吸附树脂分离有机溶剂相中的紫草宁

研究了大孔吸附树脂提取有机溶剂相中紫草宁的方法，包括树脂的筛选，紫草宁浓度对吸附的影响，解吸剂的选择。确定了适宜的吸附和解吸条件。

米根霉诱导因子对紫草细胞培养中紫草宁色素分泌的影响

在紫草细胞培养中，加入采根霉粗提物可显著提高紫草宁色素产量，并可加快胞内色素分泌到培养液中的速率和数量。在细胞培养的第6天加入米根霉诱导因子时，其促进紫草宁色素分泌的作用最大，培养液中紫草宁色素含量是对照的2．24倍。此外，同时加入正十六烷和米根霉诱导因子对紫草宁色素的分泌具有协同作用。

紫草宁脂质体质量控制和抑制HUVEC细胞VEGF基因表达的研究

目的探讨紫草宁脂质体的质量控制方法及其对HUVEC细胞VEGF基因表达水平的影响。方法采用大豆卵磷脂、胆固醇等膜材料将药物紫草宁包囊在脂质体中,对其外观大小、Zeta电位、含量、包封率进行质量控制,将紫草宁脂质体放置不同的环境中进行稳定性考察。采用Q-PCR技术研究紫草宁及其脂质体对HUVEC细胞VEGF基因水平的影响。结果紫草宁脂质体的颗粒小于220 nm;Zeta电位大于30 mv;三批样品含量为0.22 g/L,0.21 g/L,0.21 g/L;包封率分别为51.50%,81.31%,96.72%;紫草宁脂质体在4℃环境下较为稳定。紫草宁及其脂质体对HUVEC细胞VEGF基因表达有下调作用。结论紫草宁及其脂质体通过抑制VEGF基因,从而抑制VEGF蛋白的表达,最终抑制血管新生。紫草宁脂质体的抑制作用较紫草宁弱,是脂质体中的紫草宁从中缓慢释放的结果。

固定化紫草细胞生产紫草宁衍生物

用海藻胶包埋紫草细胞,在紫草色素生产培养基M_9中,常温、黑暗下培养不同时间,收集培养液并提取色素,进行紫外—可见全波长分光光度扫描和TLC分析。结果表明:固定化紫草细胞可连续分泌紫草色素,其主要成分与天然成分基本相同,产量已达到一定水平。此外对海藻胶包埋条件、固定化珠粒的稳定性以及1L固定化植物细胞反应器生产紫草色素工艺进行了讨论。

理化因素对新疆紫草培养细胞紫草宁形成的影响

研究了在促进剂Ｃｕ２＋和抑制剂２，４－Ｄ及光的作用下，对产色素培养细胞紫草宁形成的影响。对４，１５，２５，３５和４５ｄ的紫草培养细胞的电镜观察和细胞超微结构分析的结果表明，１５ｄ加促进剂Ｃｕ２＋的新疆紫草培养细胞形成的色素颗粒（紫草宁）最多，４ｄ和加抑制剂２，４－Ｄ的培养细胞中均无明显的色素颗粒。

紫草宁生物合成相关的代谢酶及基因

紫草是一种重要的中草药材,其培养细胞在M9培养基中可以大量生产主要的药物成分紫草宁。本文主要论述了在紫草细胞中与紫草宁形成相关的代谢酶和基因方面取得的研究进展,分别讨论了这些代谢酶和基因克隆的功能及表达特性,对植物次生代谢、紫草宁次生药物的生产调控及其代谢工程等研究具有重要的意义。

不同营养因子对新疆紫草悬浮培养细胞生长及紫草宁衍生物形成的影响

报道了不同碳源、维生素、氨基酸、钙盐及肌醇对新疆紫草悬浮培养细胞生长及紫草宁衍生物形成的影响。蔗糖是最适碳源、最佳浓度为３％。Ｂ族维生素对细胞生长及紫草宁衍生物形成的促进效果不大。酪氨酸以及甘氨酸会抑制产物的形成；而１０－５ｍｏｌ／ｌ的Ｌ－苯丙氨酸以及１０－７—１０－６ｍｏｌ／ｌ维生素Ｃ可明显提高紫草宁衍生物的含量及产量。肌醇对细胞生长的影响不大，但２００ｍｇ／ｌ肌醇可促进产物的形成。适于细胞生长及紫草宁衍生物形成的钙源分别为３３２ｍｇ／ｌＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ和１４００ｍｇ／ｌＣａ（Ｎｏ３）２·４Ｈ２Ｏ。文末列出了改良的生长培养基及其配方。

用原地浸取及海藻酸钙固定法提高紫草细胞中紫草宁的产量

本文研究了用海藻酸钙小球固定法进行紫草细胞的培养利用原地浸取法提高紫草宁产量的途径。

pH值、激素对新疆紫草悬浮培养细胞生长及紫草宁衍生物合成的影响

报道了不同ｐＨ值、激素对新疆紫草悬浮培养细胞生长及紫草宁衍生物合成的影响。结果表明，新疆紫草细胞具有自我调节其培养液ｐＨ值的功能。适合于细胞生长及紫草宁衍生物形成的ｐＨ值为５．６±０．４０。ＢＡＰ、２，４－Ｄ、ＮＡＡ或ＩＢＡ对细胞生长无显著的促进作用，且都会抑制紫草宁衍生物的形成。在生长培养基中添加１．０ｍｇ／ｌ ＩＡＡ和０．５ｍｇ／ｌＫＴ可促进细胞生长，而在生产培养基中附加０．１ｍｇ／ｌＫＴ和０．７５─１．０ｍｇ／ｌＩＡＡ则有利于紫草宁衍生物含量及产量的提高。

托里透毒汤口服联合紫草纱条引流促进肛周脓肿术后创面愈合的研究

目的探讨托里透毒汤方口服联合紫草纱条创面引流促进肛周脓肿患者术后创面愈合和影响炎性因子表达研究。方法选取医院2019年6月—2022年1月收治的174例肛周脓肿术的患者为研究对象,随机分为观察组(58例)、对照组A(58例)和对照组B(58例),术后所有患者给予常规处理,对照组A增加紫草纱条创面引流治疗,对照组B增加凡士林纱条创面引流治疗,观察组增加托里透毒汤方口服与紫草纱条创面引流联合治疗。比较3组患者术后第1、7、14天时疼痛程度、创面症状评分、创面愈合情况、炎性因子水平及治疗效果。结果术后第7、14天观察组血清P物质(Substance P,SP)、五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)水平均低于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A第7、14天各水平均低于对照组B(P<0.05);术后第7、14天观察组分泌物评分、水肿评分均低于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A7 d、14 d各评分均低于对照组B(P<0.05);观察组第7、14天创面缩小率高于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A第7、14天缩小率均高于对照组B,治疗后观察组创面腐肉全部脱落时间与创面愈合时间均短于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A各时间均低于对照组B(P<0.05);术后第7、14天观察组血清肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、C反应蛋白(C-reactive Protein,CRP)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)炎性因子水平均低于对照组A与对照组B(P<0.05),对照组A第7天、14天各水平均低于对照组B(P<0.05);治疗后观察组患者总有效58例(100.00%)显著比对照组A患者54例(93.10%)和对照组B患者50例(86.21%)高(P<0.05),对照组A总有效率比对照组B高,但两组比较差异不存在统计学意义(P>0.05)。结论托里透毒汤口服联合紫草纱条创面引流可以促进术后创面愈合,降低炎性因子水平,缩短康复进程,值得推广。

紫草素调控Hippo信号通路抑制鼻咽癌细胞株生物学功能及其机制研究

目的探讨紫草素介导Hippo信号通路对鼻咽癌(NPC)细胞株CNE2生物学功能的影响。方法于2021年1—12月使用含不同浓度紫草素培养液(0、2.0、4.0、8.0、16.0 mg/L)培养对数生长期人鼻咽癌细胞(CNE2细胞)48 h,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞存活率;流式细胞术、平板克隆、伤口愈合及Transwell实验分别检测CNE2细胞凋亡、集落形成、迁移及侵袭情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测细胞yes相关蛋白1(YAP1)、具有PDZ结合基序的转录共激活子(TAZ)mRNA相对表达情况;蛋白质印迹法检测YAP1、yes相关蛋白1(p-YAP1)、TAZ、磷酸化具有PDZ结合基序的转录共激活子(p-TAZ)、N-钙黏蛋白(N-cad)、波形蛋白(Vim)及E-钙黏蛋白(E-cad)蛋白表达情况。结果与0 mg/L浓度紫草素CNE2细胞存活率(100%)、集落形成数(514.67±25.81)个、划痕愈合率(88.58±3.40)%、侵袭细胞数(233.67±15.01)个、YAP1与TAZ mRNA及蛋白(1.01±0.02、1.00±0.01、0.68±0.04、0.51±0.03)比较,2 mg/L浓度紫草素[(92.70±5.92)%、(452.33±22.72)个、(69.91±3.03)%、(195.33±18.15)个、0.93±0.02、0.91±0.05、0.56±0.03、0.44±0.02],4 mg/L浓度紫草素[(81.75±3.83)%、(308.33±22.12)个、(53.61±3.21)%、(153.33±10.02)个、0.81±0.03、0.76±0.04、0.45±0.03、0.30±0.03],8 mg/L浓度紫草素[(54.93±3.89)%、(173.67±13.65)个、(30.32±1.68)%、(92.67±6.66)个、0.65±0.03、0.54±0.04、0.31±0.03、0.24±0.02],16 mg/L浓度紫草素[(33.89±2.14)%、(85.33±13.05)个、(18.31±1.42)%、(52.33±6.03)个、0.41±0.02、0.30±0.02、0.18±0.02、0.16±0.02]降低(P<0.05),CNE2细胞凋亡率、p-YAP1与p-TAZ及E-cad蛋白相对表达水平均随紫草素作用浓度增大而升高(P<0.05);紫草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论紫草素可抑制NPC细胞株CNE2细胞恶性生物学功能,其作用机制可能与抑制Hippo信号通路核心下游信号因子YAP1、TAZ蛋白激活,阻止上皮间质转化(EMT)有关。

紫草素(shikonin)抗奥密克戎毒株的实验研究及机制分析

目的探讨右旋体紫草素(shikonin)抗奥密克戎毒株的药理作用和对新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性。方法使用奥密克戎毒株BA.2.2转染的Vero细胞模型检测shikonin的抗病毒活性;利用体外主蛋白酶荧光偏振模型测试shikonin对于新型冠状病毒主蛋白酶的抑制活性,实验以奈玛特韦为阳性对照化合物。结果Vero细胞模型药理活性测试发现shikonin具有抑制奥密克戎毒株核酸复制的作用;而在体外荧光偏振模型活性测试实验中,shikonin在20、50μM药物浓度并未表现出对主蛋白酶的显著抑制活性。结论紫草素(shikonin)在细胞水平的实验中表现出抗奥密克戎毒株的药理活性,但其可能是主蛋白酶的非特异性抑制剂,抗病毒的作用机理极可能为抑制新型冠状病毒RNA聚合酶。

紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的探讨紫草素对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及机制。方法将对数生长期MGC803细胞随机分为空白对照组、紫草素组、紫草素+胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组和紫草素+LY294002组。空白对照组细胞在无药培养基中培养,紫草素组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素的培养基中培养,紫草素+IGF-1组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素和终浓度10μmol·L^(-1) IGF-1的培养基中培养,紫草素+LY294002组细胞在含终浓度10μmol·L^(-1)紫草素和终浓度30μmol·L^(-1) LY294002的培养基中培养。培养24 h后,采用细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)、激活型caspase-3(cleaved caspase-3)、cleaved caspase-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、磷酸化PKB(p-PKB)蛋白表达。结果紫草素组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率显著低于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞增殖抑制率和凋亡率均显著高于紫草素组(P<0.05)。紫草素组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著低于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著高于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞划痕愈合率和侵袭细胞数显著低于紫草素组(P<0.05)。紫草素组MGC803细胞中Bcl-2蛋白相对表达量显著低于空白对照组(P<0.05),Bax、Cyt C、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比值显著高于空白对照组(P<0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞中Bcl-2蛋白相对表达量显著高于紫草素组(P<0.05),Bax、Cyt C、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比值显著低于紫草素组(P<0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞中Bcl-2蛋白相对表达量显著低于紫草素组(P<0.05),Bax、Cyt C、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白相对表达量及Bax/Bcl-2比值显著高于紫草素组(P<0.05)。紫草素组MGC803细胞中p-PI3K、p-PKB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB比值显著低于空白对照组(P<0.05),紫草素组和空白对照组MGC803细胞中PI3K、PKB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);紫草素+IGF-1组MGC803细胞中p-PI3K、p-PKB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB比值显著高于紫草素组(P<0.05),紫草素+IGF-1组与紫草素组MGC803细胞中PI3K、PKB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);紫草素+LY294002组MGC803细胞中p-PI3K、p-PKB蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-PKB/PKB比值显著低于紫草素组(P<0.05),紫草素+LY294002组与紫草素组MGC803细胞中PI3K、PKB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论紫草素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/PKB信号通路有关。

紫草素调控白细胞介素-6治疗肺动脉高压的机制研究

目的:探讨紫草素通过抑制白细胞介素(IL)-6及其下游信号通路逆转肺动脉高压(PAH)大鼠血流动力学和血管重构的机制。方法:24只SD大鼠随机数字表法分为对照组(CON组)、野百合碱肺动脉高压组(MCT-PAH组)、肺动脉高压紫草素干预组(MCT-PAH+SH组),每组8只。造模28 d后检测各组大鼠肺动脉血流动力学、右室肥厚指数,HE染色鉴定肺动脉形态学变化,Western blot和免疫组化检测IL-6、IL-21、CD163等分子的表达及定位。结果:与CON组相比,MCT-PAH组大鼠肺动脉血流加速时间(PAAT)缩短,心脏右室内径(RVID)增宽,三尖瓣瓣环收缩期位移(TAPSE)减低,右室肥厚指数增加,右室收缩压(RVSP)升高,肺动脉血管壁明显增厚,且以中膜肥厚显著。与MCT-PAH组相比,MCT-PAH+SH组大鼠PAAT延长,RVID略减少,TAPSE增加,右室肥厚指数改善,RVSP降低且肺血管肥厚程度改善。免疫荧光结果显示MCT-PAH组大鼠肺小动脉中IL-6的表达水平较CON组升高,MCT-PAH+SH组较MCT-PAH组下降。Western blot结果显示MCT-PAH组大鼠肺组织IL-6、IL-21表达水平较CON组增加,MCT-PAH+SH组较MCTPAH组下降。MCT-PAH组大鼠肺血管壁CD163表达水平较CON组明显升高,MCT-PAH+SH组较MCT-PAH组显著减低。结论:紫草素干预改善PAH大鼠右心血流动力学及肺血管重构,其机制可能与抑制IL-6及其下游分子IL-21、CD163相关。

肛痈促愈汤联合紫草纱条创面引流对肛周脓肿患者术后创面愈合的影响

目的观察肛痈促愈汤联合紫草纱条创面引流应用于肛周脓肿患者术后创面愈合的效果。方法选取2021年9月至2023年9月成都大学附属医院肛肠科收治的肛周脓肿患者100例,随机数字表法分为对照组与试验组,每组各50例。对照组患者于肛周脓肿根治术后实施常规处理,试验组则在常规处理基础上加用肛痈促愈汤口服结合紫草纱条创面引流,治疗时间为3周。比较2组治疗后创面愈合情况、疼痛程度、创面肉芽生长情况、血清炎症因子[血清淀粉样蛋白A(SAA)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)]、血管内皮生长因子(VEGF)及表皮生长因子(EGF)。结果试验组腐肉完全脱落时间、创面愈合时间均短于对照组,治疗7 d后创面愈合率高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。治疗7 d后2组的疼痛视觉模拟法评分(VAS)、创面肉芽生长情况评分均明显低于治疗1 d后,且试验组治疗7 d后疼痛VAS评分、创面肉芽生长情况评分显著低于对照组同期,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗3周后2组的SAA、CRP、WBC水平均显著低于治疗1 d后,VEGF、EGF水平均显著高于治疗1 d后,且试验组治疗3周后SAA、CRP、WBC水平显著低于对照组同期,VEGF、EGF水平显著高于对照组同期,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肛痈促愈汤结合紫草纱条创面引流应用于肛周脓肿患者术后创面愈合效果较好,可缓解创面疼痛,加快创面愈合,减轻炎症反应,促进组织再生修复。

紫草油联合凝胶体位垫对俯卧位全身麻醉患者压疮的效果研究

目的探究紫草油联合凝胶体位垫对俯卧位全身麻醉患者压疮的效果。方法回顾性选取2019年12月至2022年12月新疆医科大学附属中医医院收治的100例俯卧位全身麻醉手术患者作为研究对象,根据治疗方法不同将患者进行分组:对照组(n=50)和研究组(n=50)。对照组患者术中采用凝胶体位垫,研究组患者术中采用紫草油联合凝胶体位垫。比较两组患者发生压疮的情况与压疮个数、面积以及压疮分级,并对患者术后的疼痛及舒适度情况进行比较,观察并记录其临床指标。结果两组患者头面部、髂嵴、前胸部、膝部、脚趾的压疮发生情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05),研究组患者的平均损伤个数、平均损伤面积分别为(2.34±0.98)个、(1.56±0.61)cm^(2),均低于对照组[(3.11±1.23)个、(2.15±0.87)cm^(2)],差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者压疮分级情况优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者术后即刻,术后12、24 h的视觉模拟评分法(VAS)评分分别为(3.08±0.56)、(2.37±0.98)、(1.34±0.36)分,均低于对照组[(4.22±0.87)、(3.67±1.12)、(1.84±0.67)分],差异均有统计学意义(P<0.05),但两组患者术后72 h的VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组术后即刻,术后12、24、72 h的生理、心理精神、环境及社会文化方面的舒适度评分均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者术后持续性疼痛发生情况、住院时间、住院费用比较,差异均无统计学意义(P>0.05);研究组患者护理满意度为(88.26±4.98)%,高于对照组[(75.26±2.69)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论在对俯卧位全身麻醉患者手术治疗时,采用紫草油联合凝胶体位垫进行治疗可以有效减少患者的住院时间及住院花费,缓解患者术后的疼痛程度,提高其舒适度,可应用于临床。