响应面法优化紫贻贝脱腥及预处理加工工艺

近些年来,预制菜成为人们日常生活中的餐桌美食,为开发紫贻贝预制菜,以紫贻贝为原料,改善紫贻贝的腥味和预处理加工工艺。首先研究了紫贻贝原料的脱腥工艺,以感官指标为考察对象,通过单因素试验和响应面分析法优化工艺参数,最终确定100 mL脱腥液中含有料酒3.5 g、姜5 g、葱4 g和花椒1.1 g。在脱腥的基础上,以质构、蒸煮损失率和色差为指标,通过单因素试验和正交试验对紫贻贝预处理工艺进行研究,得到最佳工艺参数:腌制时间40 min、汆水时间4 min和汆水温度90℃。该试验为紫贻贝预制菜产品的开发提供了理论依据。

紫贻贝肽对细菌生物被膜诱导贻贝稚贝附着能力的影响

为了探究生物活性肽对海洋细菌生物被膜形成和贻贝稚贝附着的影响,实验首先通过紫贻贝肽直接刺激厚壳贻贝稚贝,观察其对稚贝附着的诱导能力;随后选用具有不同诱导能力的海洋细菌海假交替单胞菌和南海雷辛格氏菌,在形成生物被膜过程中分别添加不同浓度的紫贻贝肽,分析其对生物被膜形成及膜成分的影响,并进一步研究生物被膜的变化对厚壳贻贝稚贝附着的影响。结果显示,紫贻贝肽可显著诱导稚贝附着,1.0 g/L的紫贻贝肽诱导效果最高,且显著提高生物被膜细菌密度和被膜胞外蛋白含量;10.0 g/L的紫贻贝肽诱导效果最低,且显著降低生物被膜细菌密度和被膜胞外蛋白含量。研究表明,不同浓度的紫贻贝肽对细菌生物被膜产生不同的影响,从而使生物被膜诱导稚贝附着能力受到影响。综上,紫贻贝肽可以直接诱导厚壳贻贝稚贝附着,也能通过影响海洋细菌生物被膜的形成能力和被膜胞外蛋白含量间接影响厚壳贻贝稚贝附着。本研究可为探究生物活性肽的生理功能及其在贻贝稚贝附着阶段的调控提供新的思路。

紫贻贝产业现状及发展对策

紫贻贝作为一种优质海产品,其高蛋白、低脂肪以及富含多种营养物质的特性受到广泛认可。自引入我国以来,迅速受到国内市场的欢迎,随着市场需求不断增加,人工养殖业也迅速兴起,从东北大连地区迅速扩展至南方沿海地带。本文全面总结了紫贻贝养殖现状,系统分析了当前产业发展中存在的一些问题,并针对性地提出建议对策,以期促进紫贻贝养殖产业持续健康发展。

麻痹性贝毒PSP在紫贻贝体内的累积、转化与排出

于 1 998年 9月在青岛鲁迅公园附近礁石区采集紫贻贝 (Mytilusedulis) ,采用实验室培养的方法 ,初步研究了塔玛亚历山大藻 (Alexandriumtamarense,ATHK)产生的麻痹性贝毒 (ParalyticShellfishPoison ,PSP)在其体内累积、转化与排出的规律。结果表明 ,在累积实验阶段 ,紫贻贝内脏和肌肉中的PSP毒素含量均随实验时间的延长而逐渐增加 ,累积实验结束时 ,平均每只贝体内的PSP毒素含量为 1 3 40nmol,毒性水平为 1 2 2 4 μgSTXEq/1 0 0 g。紫贻贝内脏中的毒素含量远远高于肌肉 ,内脏中PSP毒素占贝体内PSP毒素总量的 97 5%。在 8天的排出实验阶段 ,贝体内的PSP毒素总量呈下降趋势 ,实验结束时 ,PSP毒素共排除了约 50 % ,每天排除率约为 9%。

紫贻贝(Mytilus edulis)对4种重金属的生物富集动力学特性研究

应用半静态双箱模型室内模拟了紫贻贝对 4种重金属 (As、Hg、Cd、Pb)的生物富集实验 ,通过非线性拟合得到了紫贻贝富集重金属的吸收速率常数k1 、排出速率常数k2 、生物富集因子BCF、生物学半衰期B1 / 2 等动力学参数。实验海水盐度为 32、温度分别为( 1 2 .34± 2 .2 8)℃和 ( 6.63± 3.1 2 )℃、溶氧量 >6.5mg/L。得到的Hg、Cd、Pb的动力学参数k1为 8.71 2— 30 1 .5 ;k2 为 0 .0 0 942 5— 0 .0 30 64;BCF为 783.4— 1 1 75 4 ;B1 / 2 为 2 2 .62— 73.5 4。比较结果得出 :吸收速率常数k1 及生物富集因子BCF均随着外部水体浓度的增加而减小 ,在平衡状态下生物体内金属含量CAmax随着外部水体浓度的增加而增加 ,且基本呈正相关 ,说明紫贻贝是比较理想的重金属Hg、Cd、Pb污染的指示生物。紫贻贝排出Cd的生物学半衰期要长于金属Hg、Pb、As。

汞、硒暴露对紫贻贝(Mytilus edulis)抗氧化酶系统的影响

为了研究重金属汞及微量元素硒对海洋贝类的毒性效应,揭示汞、硒在生物体内的相互作用机制,用汞和硒对指示生物紫贻贝(Mytilus edulis)进行单一及联合亚慢性暴露实验。设置对照组(0μg·L-1)、汞暴露组(25μg·L-1Hg2+)、硒暴露组(4μg·L-1Se4+)以及硒汞联合暴露组(25μg·L-1Hg2++4μg·L-1Se4+)4个实验组,并分别在暴露期间的第0、2、4和6天定时采集样本,测定紫贻贝鳃SOD、GPx及CAT3种抗氧化酶活性。将实验数据进行ANOVA分析处理后,结果表明:与对照组相比,汞暴露组SOD和GPx均呈现先显著升高(p<0.05或p<0.01)后降低(p<0.01或p<0.001)的趋势,CAT则从第4天开始显著降低(p<0.05);硒暴露组中SOD活性始终高于对照组(p<0.001),GPx活性在第2天也显著升高(p<0.001),CAT活性始终与对照组相近;硒汞联合作用与汞暴露组相比,SOD、GPx和CAT活性在不同时间点均有显著升高(p<0.05),而与硒暴露组相比,3种酶活性均低于硒单独暴露的水平。说明汞在短期能够诱导抗氧化酶活性,随着暴露时间的延长,则表现出明显的抑制作用;微量硒能够增强抗氧化酶系统活性,对汞导致的氧化损伤具有拮抗作用。

紫贻贝和厚壳贻贝杂交及F1代杂交优势初探

2005-2007年对紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)和厚壳贻贝(Mytilus coruscus)种间进行了杂交生产性试验,通过亲贝强化培育、确认雌雄亲贝、改革育苗水体交换方法、投喂混合单细胞藻类、流水培养附着稚贝等技术,获得F1代。结果表明,正交F1代幼虫的成活率明显高于反交F1代和厚壳贻贝,在幼虫培育前期与紫贻贝的成活率相当,但随着幼虫的发育有高于紫贻贝的趋势。正交F1代幼虫的壳长和壳高在培育阶段的前期生长与紫贻贝相当,低于厚壳贻贝,高于反交F1代;但后期的生长明显增快,并高于反交F1代和其他两种贻贝。各试验组贻贝海区养殖的成活率在90%以上,正交F1代最高,显著高于反交F1代。各试验组生长特性,正交F1代>紫贻贝>厚壳贻贝>反交F1代。其中正交F1代获附着稚贝3.77×109ind。正交F1除在孵化率上低于紫贻贝、厚壳贻贝外,在壳长、壳高、成活率等方面指标具有一定杂交优势,而反交F1代的杂交优势不明显。

响应面法优化紫贻贝蛋白酶解工艺条件

分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶7种蛋白酶对紫贻贝蛋白的酶解工艺条件进行研究。根据水解度和感官评定的结果,确定中性蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶可以作为紫贻贝蛋白酶解的外加蛋白酶。将上述4种蛋白酶进行两两复配,通过试验确定复合蛋白酶与中性蛋白酶按1:1进行复配,可作为紫贻贝蛋白酶解的最适复配酶。采用响应面优化分析得出复配蛋白酶最佳酶解条件为酶解时间2h、pH7、酶解温度50℃、酶添加量0.4%,在此条件进行实验,测得水解度为70.25%,游离氨基酸总量增加了388.46%。

紫贻贝酶解物中降血压肽的超滤分离

采用不同截留分子质量的超滤膜对紫贻贝酶解物进行超滤分离,确定了一级超滤的条件,并比较超滤前后酶解物的ACE抑制活性、分子量分布及组成变化。结果表明:采用操作压力138kPa,操作温度25℃,料液浓度15g/L的超滤条件,截留分子质量为10ku的超滤膜能将紫贻贝酶解物的ACE抑制率提高到89.42%,IC50也降低到40.03μg/mL;同时,一级超滤能够有效截留多糖化合物,而富集多肽,但对于表观分子量分布没有显著影响。

基于线粒体COI序列分析对紫贻贝群体遗传多样性的研究分析

本文采用线粒体COI基因序列分析对我国沿海6个紫贻贝群体124个个体的遗传多样性和群体结构进行了初步研究。在紫贻贝6个群体中共发现13个单倍型和33个核苷酸多态位点。青岛群体单倍型数目是最多的,温州群体、丹东群体和宁德群体次之。6个紫贻贝群体的基因多样性为0.569～0.821,核苷酸多样性为0.015 5～0.051 0,表现出较低的遗传多样性。紫贻贝不同群体之间的遗传分化较小,所有群体之间没有发生显著的遗传分化。分子方差分析表明,紫贻贝的变异主要存在于群体内。该研究为紫贻贝的可持续开发和资源保护提供了一定的理论依据。

紫贻贝消化系统的组织学和组织化学研究

对紫贻贝消化系统进行了组织学和组织化学研究。紫贻贝消化系统由消化腺──肝胰腺和消化道──食道、胃（包括晶杆囊）、肠和直肠组成。消化腺为复管腺，腺上皮有消化细胞和嗜碱性细胞两种类型。消化道管壁由粘膜层、粘膜下层和外膜组成，无肌层。粘膜上皮主要为单层柱状纤毛细胞。组织化学研究表明：消化腺嗜碱性细胞富含蛋白质和RNA，消化细胞富含脂类和多种酶类：蛋白酶、非特异性酯酶、脂酶、酸性磷酸酶及碱性磷酸酶。消化道中酶的种类及活性低于消化腺。

高效液相色谱法快速测定紫贻贝中的牛磺酸

目的:建立用高效液相色谱(HPLC)快速测定紫贻贝中牛磺酸含量的方法。方法:应用邻苯二甲醛(OPA)为衍生试剂进行柱前衍生,采用甲醇、乙腈和水(10:10:80,v/v/v)为流动相,色谱柱为Agilent Zorbax300SB-C18(4.6mm×250mm,5μm),荧光检测:Ex为330nm,Em为530nm,柱温30℃,流速0.8mL/min,进样20μL分析检测牛磺酸含量。结果:牛磺酸在4.0～20.0μg/mL浓度范围内有良好线性关系,相关系数R2为0.9998,回收率范围在96.65%～101.20%,RSD=1.57%。结论:该方法的样品前处理与衍生化简便、易操作,牛磺酸出峰时间为6.752min,其含量为3673.631mg/kg,有良好的精确度和准确度,分析时间短,可快速检测紫贻贝中的牛磺酸。

三种典型POPs对紫贻贝不同组织DNA损伤的比较研究

采用彗星电泳技术,比较研究了Aroclor 1254、BaP、DDT三种典型POPs对紫贻贝(Mytilus edulis)鳃、性腺、消化腺细胞的DNA损伤效应的差异,以期为进一步评价这三种典型POPs遗传毒理机制及其预警监测提供科学依据。结果表明,Tail DNA%是评价DNA损伤的理想指标,另外,在急性毒性试验中,这三种POPs对紫贻贝鳃、性腺、消化腺细胞的DNA损伤作用均存在显著时间-剂量-效应关系,其中,BaP的DNA损伤作用最大,鳃和消化腺细胞对毒性作用较敏感。同时,对不同组织细胞的敏感性差异原因及其在环境监测中的应用进行了探讨。

紫贻贝EST-SNP的筛选及多态性检测

利用EST数据库开发SNP是筛选SNP标记的重要途径。本研究利用EST数据库开发紫贻贝的SNP标记,利用QualitySNP软件对紫贻贝已有的19 709条EST序列中含有4条以上同源序列的重叠群进行分析,在含有4条以上同源序列的963个重叠群中,筛选得到候选SNP位点4 833个,SNP的平均频率为129.1 bp,其中C/T和A/G突变较多,分别占总数的28.8%和27.4%。根据候选SNP位点设计30组引物,通过等位基因特异性PCR结合溶解曲线分析,在30个野生个体中进行基因分型验证,6组引物(20%)没有扩增产物,10组引物(33%)没有多态性,14组(47%)引物具有二等位基因多态性,稀有等位基因的频率为0.083～0.446,观测杂合度和期望杂合度的范围分别为0.166 7～0.615 4和0.155 4～0.503 2。序列比对结果显示,14组引物中的12个SNP位点位于基因编码区,并且全部为同义突变。研究结果表明,EST数据库中存在大量的SNP位点,差异熔解曲线法是一种高效便捷的SNP分型方法,所筛选的SNP标记可用于紫贻贝遗传学分析。

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性。采用正交实验方法,以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16(45)正交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGC80-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bcl-2表达的影响。结果表明:当料液比为1:4、pH为8.5、加酶量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5 h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1:4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温度为40℃、酶解时间为2 h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bcl-2的表达。紫贻贝酶解多肽具有抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。

重质原油和轻质原油水溶性组分对紫贻贝(Mytilus edulis)毒理效应的研究

近年来,海洋石油开采与运输泄漏、石油及产品离岸排放等事故逐年增多,对近海海域生态环境产生了巨大破坏。为探究重质原油和轻质原油对紫贻贝(Mytilus edulis)毒理效应,测定了不同浓度重质原油和轻质原油暴露下紫贻贝鳃和外套膜中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及体内石油烃的含量变化。结果显示,石油污染暴露下,紫贻贝腮和外套膜中CAT和SOD活性变化明显,与暴露浓度和暴露时间有关。CAT活性在轻质原油组随着浓度的增大,呈现下降趋势,且随着暴露时间的延长呈现先下降后上升趋势;在重质原油暴露组,随着浓度的增大,呈现先上升后下降趋势,且随着暴露时间的延长呈现先下降后上升趋势。SOD活性在轻质原油与重质原油暴露组,随着浓度的增大,呈现下降趋势,且随着暴露时间的延长呈现上升趋势并存在一定的剂量-效应关系。重质原油和轻质原油暴露168 h后紫贻贝体内总石油烃含量呈线性递增,生物富集系数(BCF)随着暴露浓度的增加不断减小并最终趋于平稳。结果表明,以紫贻贝腮和外套膜中SOD和CAT活性作为石油烃污染的生物标志物具有一定应用前景,紫贻贝对原油溶液中石油烃的生物富集作用可用来判断污染原油的来源和性质。

紫贻贝对石油烃的生物富集动力学参数的测定

应用 Banerjee( 1984 )实验方法 ,即通过水体中化合物浓度变化间接测定由于生物富集所产生的生物体内石油烃浓度变化 ,在此基础上建立了生物富集双箱动力学模型。根据该模型可以简单方便地测定海洋经济贝类对石油烃的生物富集动力学参数。应用该方法实验测定了紫贻贝 ( Mytilusedulis)对 3种石油烃 ( 0号柴油 ,90号汽油 ,大港原油 )的吸收速率常数 k1,释放速率常数 k2 和生物富集因子 BCF等毒性动力学参数。其中 k1为 15.4～ 119.0 /d,k2 为 0 .0 10～ 0 .0 4 3/d,BCF为 72 3～3876。结果表明 ,紫贻贝对 3种不同来源的石油烃的毒性动力学参数存在较大的差异 ,其中 BCF大小顺序为 :柴油 >汽油 >原油 ,这可能主要是由于柴油中所含的两环、三环芳烃 (如萘、菲等化合物 )浓度较高所致。

紫贻贝多糖提取及其体外抗氧化活性研究

采用水提、酸提、碱提三种方法提取紫贻贝多糖,提取率分别为7·9%、3·5%、8·3%。体外抗氧化活性研究结果表明:紫贻贝多糖对羟基自由基、超氧阴离子自由基和亚硝酸根均有清除能力,且随着多糖浓度增加呈相关关系,还原力测定也获得类似结果。不同提取方法获得的多糖样品抗氧化能力有差异,水提和碱提多糖要优于酸提多糖。

紫贻贝(Mytilus edulis)不同组织对镉的生物富集及释放特征

目的：探索紫贻贝不同器官对镉（Cd）的富集吸收及释放特征。方法：以紫贻贝为研究对象,采用静态水交换法进行染毒,原子吸收光谱检测Cd在紫贻贝不同器官中的含量变化情况。结果：富集第15 d,紫贻贝内脏团、前闭壳肌、后闭壳肌、外套膜和鳃中,Cd含量依次为145.560、11.826、28.143、22.394、66.113 mg/kg。4种器官对Cd的吸收速率常数（k）,在富集初期较高、中期有所减弱、后期再次升高;生物富集系数（BCF）随暴露Cd浓度增加而逐渐减小,且均表现为内脏团〉鳃〉后闭壳肌〉外套膜〉前闭壳肌。4种器官Cd量与富集时间之间关系,均符合Harris模型（Y=1/（a＋b Xc））,拟合R2范围为0.9286-0.9890。在释放阶段,4种器官中Cd含量均未表现出显著性下降趋势（p〉0.05）。结论：紫贻贝对Cd具有较强的生物富集能力,而其自然代谢释放能力较弱,为典型Cd净积累型生物。

燃料油在紫贻贝体内的积累及其特征

采用室内实验模拟的方式研究和讨论了紫贻贝软组织对１０＃船用柴油的积累及其特征．结果表明，在较低浓度含油海水中，石油烃在贻贝体内的积累量呈负指数增长形式，且在高浓度含油海水中较之在低浓度含油海水中其更容易达到积累平衡．贻贝体内石油烃积累量随海水中含油浓度升高和其个体增大而增加，且呈线性关系．海水中的石油烃经贻贝积累后，其荧光光谱显示，四、五环芳烃在其体内积累较少，而芳烃的色谱分析进一步证明了其对芳烃的积累有一定程度的选择性．贻贝对芳烃的积累明显高于脂肪烃；而在脂肪烃之间，对可分辨支链烃和不可分辨脂肪烃的积累则明显高于正构烷烃，但其对正构烷烃的积累无选择性．