紫铆因通过激活SIRT1介导FOXO1/NF-κB信号通路改善坐骨神经损伤

目的探讨紫铆因诱导SIRT1激活对大鼠坐骨神经损伤的影响及其可能的机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、坐骨神经损伤组和紫铆因组,每组10只。分别于建立大鼠坐骨神经损伤模型手术当天、术后第7天和第14天检测各组大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数;术后第14天取材,通过HE染色观察各组大鼠坐骨神经病理学改变,通过TUNEL实验检测各组大鼠坐骨神经细胞凋亡水平,通过Western blotting检测各组大鼠坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43、SIRT1、FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平。结果与坐骨神经损伤组大鼠相比,紫铆因组坐骨神经损伤大鼠BBB运动评分和坐骨神经功能指数增加,坐骨神经病理损伤改善,坐骨神经细胞凋亡水平降低,坐骨神经BDNF、MBP、GAP-43和SIRT1蛋白表达水平增高,FOXO1、Keap1和NF-κB蛋白表达水平降低。结论紫铆因可通过上调坐骨神经损伤大鼠SIRT1表达抑制FOXO1/NF-κB信号通路激活,继而改善大鼠坐骨神经病理损伤。

紫铆因通过抑制p53信号通路对抗丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡

目的探讨紫铆因对丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡的影响及作用机制。方法采用不同剂量的紫铆因预处理1 h后,1.5 mmol·L^(-1)丙酮醛诱导PC12细胞凋亡,MTT及LDH比色法分析细胞存活率及细胞毒性;PI及Hoechst 33342双染法分析细胞凋亡及坏死;逆转录PCR检测促凋亡基因p53、caspase-9和抗氧化基因SOD2的表达;免疫印迹法检测p53、caspase-9的蛋白表达。结果不同剂量的紫铆因预处理PC12细胞1 h后,可明显对抗丙酮醛引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,减少细胞核固缩、碎裂,抑制促凋亡基因p53、caspase-9的过表达,提高抗氧化基因SOD2的表达。结论紫铆因能明显对抗丙酮醛诱导的PC12细胞凋亡,作用机制与其抗氧化活性,降低促凋亡基因p53、caspase-9的表达有关。

紫铆因抑制膀胱癌细胞增殖的体内外研究

目的观察紫铆因对膀胱移行细胞癌细胞BLS增殖的影响以及对膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法不同浓度紫铆因处理细胞,四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT)及平板克隆形成实验观察细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,蛋白印迹检测核转录因子κB(NF-κB)p65核内表达及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化程度,并检测NF-κB下游靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1)及环氧合酶-2(COX2)的表达。建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤,采用腹腔注射的给药途径,测量移植瘤的体积和重量。结果紫铆因抑制了膀胱癌细胞增殖并诱导G2/M期细胞周期阻滞。紫铆因处理后NF-κB p65的核内表达及ERK1/2的磷酸化程度下降(P<0.05),Cyclin D1及COX2基因表达下调(P<0.05),体内实验发现紫铆因治疗组较对照组皮下移植瘤的生长明显受抑制(P<0.05)。结论紫铆因具有抗膀胱癌细胞增殖作用,可能与其抑制ERK及NF-κB信号激活有关。

紫铆因靶向EGFR和AuroraA/B信号通路抑制非小细胞肺癌的研究

紫铆因抗多种肿瘤的生物学活性已被广泛研究,但其抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的分子机制还不清楚。研究中,通过MTS和软琼脂集落实验检测紫铆因对非小细胞肺癌细胞停泊依赖和停泊非依赖增殖的影响,利用免疫印迹检测紫铆因处理后非小细胞肺癌表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号通路的磷酸化状态,同时采用流式细胞术检测紫铆因对非小细胞肺癌细胞周期演进的影响。研究发现紫铆因剂量依赖性抑制A549和H1650细胞增殖,在抑制EGFR信号通路磷酸化活化的同时下调EGFR总蛋白及EGFR在胞膜和胞核的表达,而且紫铆因下调AuroraA/B和H3-S10磷酸化,促进A549细胞G2/M期阻滞。结果表明紫铆因可通过靶向EGFR和AuroraA/B信号通路抑制非小细胞肺癌。

紫铆因改善化疗损伤卵巢功能的研究

目的探讨紫铆因对化疗所诱导大鼠卵巢功能损害的改善作用及其可能的作用机制。方法选择雌性Wistar大鼠随机分为对照组、化疗组、联合治疗组(环磷酰胺+紫铆因)和紫铆因组,每5天测重;苏木精-伊红染色观察卵泡发育和各级卵泡计数;Elisa法检测雌激素、孕激素水平;Western blot检测Sirt1和Cleaved Caspase 3蛋白表达水平。结果化疗组大鼠体重、卵巢质量明显小于对照组,联合治疗组则明显高于化疗组。化疗组大鼠动情周期紊乱,联合治疗组阴道细胞涂片表现为规律的动情周期。化疗组卵巢结构破坏,始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡均少于其他三组。联合治疗组血清E2水平显著高于化疗组,FSH水平显著低于化疗组。Western blot结果显示化疗组Sirt1蛋白水平低于对照组,Cleaved Caspase 3蛋白水平高于对照组,相反,联合治疗组的Sirt1蛋白水平高于化疗组,Cleaved Caspase 3蛋白水平低于化疗组。结论紫铆因可以改善化疗对大鼠卵巢功能的损害,其作用机制可能与上调Sirt1抑制细胞凋亡相关。

紫铆因对宫颈癌细胞系Hela细胞的影响

目的研究紫铆因对宫颈癌细胞系Hela细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外培养Hela细胞,MTT法检测20μM紫铆因作用Hela细胞不同时间(24、48和72h)和不同浓度(0、5、10、20、40和80μM)作用48h对Hela细胞活性的影响;流式细胞仪检测不同浓度紫铆因对Hela细胞凋亡和周期的影响;Western blot检测细胞周期蛋白cyclinB的表达。结果 20μM紫铆因分别作用Hela细胞24h细胞存活率为(73.25±9.48)%、48h为(56.20±4.60)%、72h为(32.98±6.75)%,Hela细胞的存活率随着作用时间的延长而下降(P均<0.05)。不同浓度的紫铆因作用于Hela细胞48h后,Hela细胞的存活率分别是(90.83±4.45)%、(68.97±3.53)%、(56.20±4.60)%、(38.48±5.17)%、(12.64±2.65)%,与对照组(0μM)比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。流式细胞仪检测结果示:各组的早期凋亡率(第二象限)、晚期凋亡率(第四象限)及总凋亡率均高于对照组(P均<0.05)。10、20和40μM紫铆因分别孵育Hela细胞48h后,各组的晚期凋亡率和总凋亡率分别是(28.00±2.52)%和(48.8±6.59)%、(38.77±2.30)%和(66.46±4.69)%、(56.80±2.56)%和(81.02±1.17)%,组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论紫铆因可以抑制Hela细胞的增殖,促进其凋亡,该作用可能与cyclinB参与的细胞周期调控相关。

紫铆因对食管鳞癌细胞增殖和存活影响的初步研究

研究紫铆因对人食管鳞癌细胞增殖和存活的影响。通过MTS和软琼脂集落实验检测紫铆因对食管鳞癌增殖的抑制,生化分析仪检测紫铆因对食管鳞癌糖酵解的影响,并利用免疫印迹检测紫铆因对食管鳞癌细胞增殖和凋亡激活相关蛋白分子的表达。结果发现紫铆因剂量依赖性抑制KYSE150和Eca109细胞增殖,下调EGFR信号通路活化,抑制HK2的表达及糖酵解。一定浓度的紫铆因能诱导食管鳞癌细胞发生凋亡,caspase3和PARP被剪切,Bcl-2和Mcl-1表达下调,但Bcl-XL未见明显改变。结果证明紫铆因抑制食管鳞癌的增殖,可能与EGFR信号通路和糖酵解被抑制,及促存活蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达下调有关。

紫铆因对食管鳞癌细胞增殖和存活影响的初步研究

研究紫铆因对人食管鳞癌细胞增殖和存活的影响.通过MTS和软琼脂集落实验检测紫铆因对食管鳞癌增殖的抑制,生化分析仪检测紫铆因对食管鳞癌糖酵解的影响,并利用免疫印迹检测紫铆因对食管鳞癌细胞增殖和凋亡激活相关蛋白分子的表达.结果发现紫铆因剂量依赖性抑制KYSE150和Eca109细胞增殖,下调EGFR信号通路活化,抑制HK2的表达及糖酵解.一定浓度的紫铆因能诱导食管鳞癌细胞发生凋亡,caspase3和PARP被剪切,Bcl-2和Mcl-1表达下调,但Bcl-XL未见明显改变.结果证明紫铆因抑制食管鳞癌的增殖,可能与EGFR信号通路和糖酵解被抑制,及促存活蛋白Bcl-2和Mcl-1的表达下调有关.

紫铆因抗急性淋巴细胞白血病细胞的体外作用及机制研究

目的探讨紫铆因对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞增殖及细胞凋亡的体外作用及其机制。方法采用Ficoll-Paque分离液分离4例初发ALL患儿骨髓原代细胞及4例正常儿童骨髓单个核细胞并购买HK-2、Nalm-6、Jurkat、sup-B15及MOLT-3 ALL细胞株;用MTS技术检测紫铆因对细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测紫铆因对细胞凋亡的影响,并用蛋白印迹技术(Western Blot)检测cleaved caspase-3、Bim、Puma及cleaved PARP的表达。结果紫铆因对正常单个核细胞无明显抑制增殖作用,对人ALL原代细胞及ALL细胞株均具有明显的抑制增殖作用,并呈现出剂量效应和时间效应关系;紫铆因能逆转氟美松耐药细胞株对氟美松的敏感性;紫铆因能明显促进人ALL细胞株的细胞凋亡,并且随着紫铆因剂量的增加,细胞凋亡越明显;随着紫铆因浓度的增加,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bim、Puma及cleaved PARP表达量也逐渐增多。结论紫铆因对ALL细胞包括氟美松耐药细胞株具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。

紫铆因通过自噬途径促进骨肉瘤细胞凋亡及机制研究

目的研究紫铆因对骨肉瘤细胞凋亡及自噬的影响,并探讨自噬在紫铆因抗骨肉瘤中的作用。方法分别以不同浓度紫铆因作用骨肉瘤细胞24h和30μmol/L紫铆因作用骨肉瘤细胞不同时间,使用CCK-8试剂盒测定细胞活性变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase3及自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1的表达情况;TUNEL染色检测骨肉瘤细胞的凋亡情况;透射电子显微镜检测自噬泡的产生;最后分别用自噬激动剂和自噬抑制剂预处理后再加入紫铆因作用于骨肉瘤细胞,并重复上述实验。结果紫铆因作用后,骨肉瘤细胞的活性明显下降,Bax、Cleaved caspase3、Beclin-1、LC3 Ⅱ的表达增加,而Bcl-2、p62的表达降低,骨肉瘤细胞出现明显的凋亡现象,透射电子显微镜观察到紫铆因处理组有较多自噬泡产生;使用自噬抑制剂预处理骨肉瘤细胞后,紫铆因对骨肉瘤的凋亡效果被逆转,而使用自噬激动剂预处理骨肉瘤细胞后,紫铆因使骨肉瘤细胞凋亡的效果进一步增强。结论紫铆因可以降低骨肉瘤细胞活性并促进其凋亡;同时紫铆因可以激活自噬,促进骨肉瘤细胞凋亡。

紫铆因对骨肉瘤细胞凋亡和转移的影响及其机制

目的:研究不同浓度的紫铆因对U2OS骨肉瘤细胞的凋亡及侵袭转移作用的影响,并探讨其相关的作用机制。方法:U2OS骨肉瘤细胞在不同浓度的紫铆因作用下处理24 h,CCK-8细胞活性试剂盒测定U2OS骨肉瘤细胞活性的变化;Western blot法测定U2OS骨肉瘤细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,侵袭转移相关蛋白MMP-2、MMP-9,PI3K-Akt细胞信号通路相关蛋白的表达情况;Tunel法检测U2OS细胞的凋亡情况。结果:25、50、100μmol/L紫铆因处理组与0μmol/L紫铆因组比,细胞活性差异均有统计学意义(P<0.05);50、100μmol/L紫铆因处理组与0μmol/L紫铆因组比,Bax的表达量增加,Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达量降低,PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达量下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:紫铆因可以促进U2OS骨肉瘤的凋亡并抑制其侵袭转移,这种作用可能是通过抑制PI3K-Akt信号通路来实现的。

紫铆因抑制人胰腺癌细胞增殖和促进细胞凋亡的机制研究

目的旨在探讨紫铆因对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的作用及调控机制。方法采用磺酰罗丹明B比色法观察紫铆因对胰腺癌PANC-1细胞增殖能力的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度(5.56、16.70、50μmol/L)紫铆因对PANC-1细胞凋亡的影响;蛋白质印迹(Western blotting)检测紫铆因对胰腺癌PANC-1细胞MET表达的调控情况。结果紫铆因(5.56、16.70、50μmol/L)明显抑制胰腺癌细胞的生长,且随着药物浓度的增加其对胰腺癌PANC-1细胞株的生长抑制作用显著上升(P <0.01)。50μmol/L的紫铆因和50μmol/L的吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞株的生长能力影响差异无统计学意义(P> 0.05)。紫铆因(5.56、16.7、50μmol/L)能抑制胰腺癌细胞株PANC-1的细胞凋亡率(P <0.05),并且50μmol/L的紫铆因和50μmol/L的吉西他滨对胰腺癌细胞的凋亡能力影响差异无统计学意义(P> 0.05)。紫铆因(1.86、5.56、16.7、50、150μmol/L)抑制胰腺癌细胞株PANC-1中MET蛋白的表达,并随着浓度的增加抑制程度也随之增加(P <0.05)。结论随着浓度的增加,紫铆因抑制MET蛋白表达情况随浓度增加而增强,同时生长抑制能力和促进凋亡能力也随浓度增加而增加。

AMP依赖的蛋白激酶/叉头转录因子O3a信号通路及氧化应激介导紫铆因诱导人食管癌细胞凋亡作用的研究

目的探讨紫铆因(Butein)诱导人食管癌EC109细胞凋亡的作用及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/叉头转录因子O3a(FOXO3a)信号通路、氧化应激在该过程中发挥的作用。方法常规培养EC109细胞,分别给予Butein处理,首先检测EC109细胞的活力、迁移能力、氧化应激水平及凋亡指标Caspase 3的活性。采用Western blot法检测细胞内AMPK、FOXO3a的磷酸化水平及凋亡调节蛋白Bim、Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达水平。用Compound C阻断AMPK后检测相关指标。建立裸鼠皮下肿瘤模型,给予Butein和Compound C处理,检测裸鼠体重和肿瘤体积。结果 Butein处理后,细胞活力下降(P<0.05);细胞间距增加(P<0.05);Caspase 3活性、NADPH氧化酶活性、ROS含量升高(P<0.05);总GSH下降,提示凋亡增加、氧化应激增强;p-AMPK磷酸化水平、p-FOXO3a磷酸化水平升高(P<0.05);Bim、Bax表达升高(P<0.05);Compound C处理逆转了这一过程。裸鼠皮下肿瘤检测发现Butein抑制在体肿瘤增殖,阻断AMPK可以逆转该抑制作用。结论 Butein能显著促进食管癌EC109细胞凋亡。该作用可能是通过激活AMPK/FOXO3a信号通路来实现的。

紫铆因抑制内质网应激恢复内皮细胞线粒体稳态的机制研究

目的探讨紫铆因(BUT)抑制内质网应激信号通路发挥保护血管内皮细胞抗氧化应激诱导凋亡的作用。方法构建低氧诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤模型,应用不同浓度BUT(2、4、8μmol/L)处理细胞48 h后,CCK-8法测定细胞活性;TUNEL染色法标记凋亡细胞情况;分别应用DCFH-DA和JC-1染色检测细胞内活性氧(ROS)及线粒体膜电位(MMP)水平;Western blotting法检测内质网应激和凋亡通路主要蛋白变化。此外,联合应用内质网应激特异性激动剂毒胡萝卜素(Tg)后,重复上述检测。结果相对于对照组,低氧损伤降低细胞活力并促进细胞凋亡。同时,低氧损伤诱导MMP发生去极化反应,进而导致细胞内ROS堆积。分子水平研究显示,低氧损伤激活内质网应激信号通路并上调凋亡蛋白的表达。不同浓度的BUT呈“剂量依赖性”地抑制内皮细胞凋亡、稳定MMP水平、清除细胞内ROS堆积、恢复内质网功能,最终逆转细胞死亡(P<0.05)。应用Tg联合处理后进一步证实,BUT对内皮细胞的抗低氧作用明显减弱(P<0.05)。结论BUT通过抑制内质网应激信号通路,稳定线粒体功能,进而清除细胞内ROS蓄积并阻断凋亡过程,介导HUVECs抗低氧损伤的作用。

信号转导及转录激活因子3在紫铆因诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用的研究

目的探讨紫铆因(BTN)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用及信号转导及转录激活因子3(STAT3)在该过程发挥的作用。方法常规培养A549细胞,给予0、25、50μmol/L的BTN处理24 h,BTN 0μmol/L为对照组,检测各组细胞活力、凋亡、迁移、ROS含量及Caspase-3活性,STAT3通路(p-STAT3、STAT3)和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)含量变化。N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)5 mmol/L特异性抑制活性氧(ROS)生成后,BTN(0、50μmol/L)处理细胞24 h,重复上述检测。建立裸鼠皮下肿瘤模型,腹腔注射BTN(2、4 mg/kg),对照组注射等体积PBS,明确BTN抗肺腺癌的作用。结果与对照组相比,BTN(25、50μmol/L)有效抑制A549细胞活力和迁移(P<0.05),促进凋亡(P<0.05),显著增加ROS含量及Caspase-3活性(P<0.05)。Western blot结果显示,相比对照组,BTN处理抑制p-STAT3和Bcl-2表达(P<0.05),上调凋亡蛋白Bax表达(P<0.05)。相比BTN组,应用NAC后则抑制BTN促ROS生成(P<0.05),同时拮抗了BTN抑制STAT3磷酸化和促凋亡作用(P<0.05)。在体研究发现,相比对照组,BTN处理剂量依赖地抑制肿瘤生长,抑制STAT3磷酸化(P<0.05)。结论 BTN可有效抑制肺腺癌A549细胞活力、促进细胞凋亡,此作用可能与促ROS生成进而抑制STAT3磷酸化有关。

紫铆因通过调控lncRNA STXBP5-AS1/miR-892a轴对口腔鳞癌细胞的糖酵解、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨紫铆因对口腔鳞癌细胞(HSC-3)糖酵解、凋亡、迁移及侵袭的影响和机制。方法:不同浓度紫铆因处理HSC-3细胞,运用流式细胞术、Transwell实验检测细胞凋亡、迁移和侵袭。试剂盒检测葡糖糖消耗以及乳酸产生量。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测长链非编码RNA (lncRNA) STXBP5反义RNA1 (STXBP5-AS1)和miR-892a表达量。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析和验证STXBP5-AS1与miR-892a调控关系。转染STXBP5-AS1过表达质粒至HSC-3细胞,检测STXBP5-AS1过表达对细胞糖酵解、凋亡、迁移及侵袭的影响。转染STXBP5-AS1小干扰RNA至HSC-3细胞,检测抑制STXBP5-AS1表达对紫铆因处理的HSC-3细胞糖酵解、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果:紫铆因处理后HSC-3细胞葡萄糖消耗量、乳酸产生量、迁移和侵袭细胞数显著降低,凋亡率显著升高,STXBP5-AS1表达显著升高,miR-892a表达显著降低(P<0.05),并表现出一定剂量依赖效应。miR-892a是STXBP5-AS1的靶基因。过表达STXBP5-AS1后HSC-3细胞葡萄糖消耗量、乳酸产生量、迁移和侵袭细胞数显著降低,凋亡率显著升高,miR-892a表达显著降低(P<0.05)。抑制STXBP5-AS1表达可降低紫铆因处理对HSC-3细胞糖酵解、凋亡、迁移及侵袭的影响(P<0.05)。结论:紫铆因可抑制HSC-3细胞的迁移侵袭和糖酵解代谢,促进细胞凋亡,其机制可能与调控lncRNA STXBP5-AS1/miR-892a轴有关。

紫铆因通过调控miR-487a-3p表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭的机制

目的探讨紫铆因对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法选取43例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-487a-3p表达水平;乳腺癌MDA-MB-231细胞分为对照组、紫铆因-低、中、高组、miR-487a-3p组、miR-NC组、紫铆因+anti-miR-487a-3p组、紫铆因+anti-miR-NC组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖抑制率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数;细胞划痕实验检测划痕愈合率;Transwell法检测侵袭细胞数;Western印迹法检测蛋白表达。结果乳腺癌组织中miR-487a-3p的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。不同浓度紫铆因处理后,MDA-MB-231细胞的增殖抑制率、miR-487a-3p水平升高,克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9水平降低,均呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-487a-3p后,细胞增殖抑制率升高,克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及MMP-2、MMP-9水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲低miR-487a-3p减弱了紫铆因对MDA-MB-231细胞恶性行为的影响。结论紫铆因可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与上调miR-487a-3p表达有关。

紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响

目的探讨紫铆花素对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞HaCaT共培养细胞生物学活性的影响。方法建立A375细胞与HaCaT细胞的共培养细胞体系,实验分为对照组(等体积培养液),紫铆花素低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组,0.5,1.0,5.0μg/L)。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用流式细胞仪检测细胞的周期分布和线粒体膜电位;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测干细胞因子(SCF)和其受体c-Kit,以及小眼畸形相关转录因子(MITF)的mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞酪氨酸酶相关蛋白1,2(TRP-1,TRP-2)及SCF,c-Kit,MITF的蛋白表达水平。结果与对照组比较,中、高剂量组细胞的增殖率均显著升高(P<0.01);与对照组比较,各剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低,S期和G_(2)/M期细胞比例均显著升高(P<0.01),高线粒体膜电位细胞比例均显著升高(P<0.05或P<0.01),SCF,c-Kit,MITF的mRNA表达水平及SCF,c-Kit,MITF,TRP-1,TRP-2的蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论紫铆花素可能通过调节SCF,cKit,MITF的表达而影响A375细胞与HaCaT细胞共培养细胞的增殖、细胞周期和线粒体膜电位等细胞生物学活性。

叉头蛋白转录因子3a／p27激酶抑制蛋白1及氧化应激介导紫铆因抗肺腺癌的机制

目的观察紫铆因（Butein）的抗肺腺癌作用及叉头蛋白转录因子3a（FOX03a）／p27激酶抑制蛋白1（p27kipl）和氧化应激在该过程中的作用。方法常规培养A549细胞，分别给予25、50、100μmol／L的Butein处理24h后，检测细胞活力、细胞迁移能力、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3活性、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶活性、活性氧（ROS）含量、总谷胱甘肽（GSH）水平，从而明确Butein通过激活氧化应激抑制A549细胞。Westernblot法检测FOX03a、p27kipl、B淋巴细胞瘤-2（bcl-2）、bcl-2相关x蛋白（bax）的表达水平。进而采用小干扰RNA（siRNA）干扰法敲减FOX03a表达并检测FOX03a、p27kipl以及bax、bcl-2的表达水平，从而明确FOX03a／p27kipl通路在该过程中的作用。结果25、50、100μmol／L的Butein处理A549细胞24h后，细胞活力分别下降到（78．3±4．6）％、（63．5±4．8）％和（40．1±4．1）％（t=10．330，P=0．000），细胞划痕间距增大到（120．0±8．4）％、（150．0±10．6）％和（175．0±11.1）％（t=4．777，P=0．001）。Butein处理后Caspase-3、NADPH氧化酶的活性增强，ROS含量增多，总GSH减少。Westernblot结果显示Butein激活了FOX03a／p27kipl通路，上调了bax／bcl-2的比值。siRNA处理后阻断了FOX03a／p27kip1通路，逆转了Butein引起的bax的增多和bcl-2的减少。结论Butein能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖和迁移，该作用可能是通过激活FOX03a／p27kipl信号通路和细胞内氧化应激进而诱导细胞凋亡实现的。

紫铆因对糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的影响及机制

目的 探究紫铆因对糖尿病大鼠肝脏胰岛素抵抗的改善作用及可能机制。方法 SD大鼠随机分为对照组(Control组)、糖尿病组(DM组)、紫铆因低剂量组(Butein-L组)和紫铆因高剂量组(Butein-H组),每组10只。测量大鼠空腹血糖和口服糖耐量;ELISA检测大鼠血清胰岛素、总胆固醇和甘油三酯水平以及肝组织TNF-α和IL-6水平;检测肝糖原含量;计算大鼠胰岛素抵抗指数和胰岛素敏感指数;HE染色观察肝组织病理学变化;Western blot检测肝组织IRS-1和GLUT4蛋白表达;免疫荧光检测肝组织SIRT1和NF-κB蛋白表达。结果 紫铆因降低糖尿病大鼠空腹血糖、血清胰岛素和血脂水平,增加肝糖原含量,降低胰岛素抵抗指数,增加胰岛素敏感指数,改善肝组织病理损伤,降低肝组织炎症因子水平,增加肝组织IRS-1、GLUT4和SIRT1蛋白表达水平,降低肝组织NF-κB蛋白表达水平。结论 紫铆因改善糖尿病大鼠肝组织胰岛素抵抗,其机制可能与激活SIRT1/NF-κB信号通路有关。