女贞子中主要活性成分红景天苷和特女贞苷的逆转铁过载促进骨形成相互作用研究

目的评价女贞子中主要活性成分红景天苷和特女贞苷的逆转铁过载促进骨形成抗绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis,PMOP)效应,并探讨其相互作用关系。方法建立柠檬酸铁铵诱导的斑马鱼骨质疏松模型,分别评估红景天苷(1、5、25、50、100μmol/L)、特女贞苷(1、5、25、50、100μmol/L)及其两种成分混合溶液(1∶1)对骨矿化的影响;茜素红染色后以骨骼染色面积和累积光密度评价其骨矿化程度,并运用等效线法和等辐射分析法评价红景天苷、特女贞苷抗PMOP的相互作用。结果红景天苷、特女贞苷及其混合溶液均有较好地逆转铁过载所致的骨形成抑制作用,且在1~100μmol/L内呈现显著的浓度依赖性;在等效线法中,经半数有效浓度(EC50)计算得混合组γ>1,表明二者无明显的协同作用;在等辐射分析法中,混合组中相应成分的EC50比值分数总和为1.16,其复合点落在95%可信限内(P>0.05),表明两者呈相加作用关系,且未见明显协同作用。结论红景天苷和特女贞苷均可逆转铁过载诱导的骨形成抑制,且当红景天苷和特女贞苷联合使用时,两者呈相加作用。

红景天苷调节OPG/RANKL通路对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征大鼠骨质流失的影响

目的探究红景天苷(Sal)调节骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/核因子κB受体激活剂配体(receptor activator of nuclear factorKB ligand,RANKL)通路对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)大鼠骨质流失的影响。方法将大鼠随机分为control组、OSAS组、Sal-L、Sal-M、Sal-H组(分别灌胃Sal 17.5、35、70 mg/kg),每组12只。除control组,其余组均采用缺氧和复氧循环复制OSAS大鼠模型。分别利用骨密度仪、三点弯曲实验、Micro CT测定大鼠股骨骨密度、生物力学及微结构变化;ELISA法检测血清骨钙素(osteocalcin,BGP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原交联C-末端肽(cross linked C-telopeptide of type I collagen,CTX-I)水平;RT-PCR检测股骨中OPG、RANKL mRNA水平;Western blot检测股骨OPG/RANKL通路蛋白表达。结果与control组比较,OSAS组大鼠骨密度、最大强度、最大负荷、骨小梁骨体积分数(Tb.BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、BGP、ALP、OPG mRNA及蛋白表达、OPG/RANKL比值降低,CTX-I、RANKL mRNA及蛋白表达升高(P<0.05);与OSAS组比较,Sal-L、Sal-M、Sal-H组大鼠骨密度、最大强度、最大负荷、Tb.BV/TV、Tb.N、Tb.Th以及BGP、ALP、OPG mRNA和蛋白表达、OPG/RANKL比值依次升高,CTX-I、RANKL mRNA及蛋白表达依次降低,其中Sal-H组上述变化最为显著(P<0.05)。结论Sal通过升高OPG表达,降低RANKL表达,促进骨形成,抑制骨吸收,从而减少OSAS大鼠骨质流失。

红景天苷对大鼠蛛网膜下腔出血早期脑损伤保护作用的研究

目的探究红景天苷对大鼠蛛网膜下腔出血后脑组织水肿、炎症反应、神经元凋亡的影响及其机制。方法将144只雄性SD大鼠随机分为4组,每组36只。模型组及红景天苷组大鼠通过颈内动脉穿刺法构建蛛网膜下腔出血模型。模型构建成功后,红景天苷组大鼠给予红景天苷50 mg/(kg·d)腹腔注射,每24 h注射1次,空白组、假手术组大鼠于同时间点给予等量的生理盐水腹腔注射。分别于腹腔注射24 h、48 h、72 h后对各组大鼠进行改良Garcia评分及脑组织含水量测量;取腹腔注射72 h后大鼠脑组织,尼氏染色观察神经元结构形态,TUNEL染色观察神经元凋亡情况,RT-PCR法检测损伤脑组织中核因子E 2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA表达情况,ELISA法测定损伤脑组织中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果腹腔注射24 h、48 h、72 h后,模型组和红景天苷组改良Garcia评分均明显低于同时期空白组及假手术组(P均<0.05),脑组织含水量均明显高于同时期空白组及假手术组(P均<0.05);腹腔注射24 h、48 h后,模型组改良Garcia评分、脑组织含水量与红景天苷组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);腹腔注射72 h后,红景天苷组改良Garcia评分明显高于模型组(P<0.05),脑组织含水量明显低于模型组(P<0.05)。尼氏染色显示,空白组及假手术组神经元规整,可见大量尼氏体;模型组神经元形态结构紊乱,尼氏体减少;红景天苷组神经元受损较轻,尼氏体较模型组增多。模型组脑组织中Nrf2、HO-1 mRNA相对表达量均明显低于空白组及假手术组(P均<0.05),红景天苷组脑组织中Nrf2、HO-1 mRNA相对表达量均明显高于模型组(P均<0.05)。假手术组、模型组、红景天苷组神经元凋亡指数和脑组织中IL-6、IL-1β、TNF-α含量均明显高于空白组(P均<0.05),红景天苷组神经元凋亡指数和脑组织中IL-6、IL-1β、TNF-α含量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论红景天苷可通过上调Nrf2/HO-1表达,减轻蛛网膜下腔出血后脑组织水肿、脑组织炎症反应,减少神经元细胞凋亡。

红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制

目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。结论SAL可能通过激活cAMP/PKA/CREB通路,促进抗凋亡蛋白和神经保护因子表达,缓解CIS引起的CHC和SGN损伤。

基于FGF2表达探讨红景天苷对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用及对NLRP3炎症小体的影响

目的探讨红景天苷对阿霉素诱导的心脏毒性的保护作用及分子机制。方法①将18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、红景天苷组,每组6只。对照组不做处理;模型组和红景天苷组分别于实验第1天、第2天、第4天尾静脉注射阿霉素6 mg/kg,红景天苷组在实验第1天时于阿霉素注射前腹腔注射红景天苷8 mg/kg。分别于实验第1天、第7天和第14天称量小鼠体重,超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)。实验第14天,处死小鼠后称心脏和左心室质量,测量胫骨长度,计算心脏质量/胫骨长度比值和左心室质量/胫骨长度比值,硫代巴比妥酸法测定心肌组织匀浆(总)、心肌组织线粒体部分、心肌组织细胞质部分中丙二醛(MDA)相对含量,DHE荧光探针法测定心肌组织匀浆(总)中活性氧(ROS)含量,Western blot法检测心肌组织中白细胞介素-1β前体(Pro-IL-1β)、IL-1β、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)前体(Pro-Caspase-1)、Caspase-1 p20蛋白表达情况。②取大鼠H9c2心肌细胞,实验设空白组(细胞不做处理)、阿霉素组(加入0.5μmol/L阿霉素处理48 h)、阿霉素+红景天苷组(加入0.5μmol/L阿霉素和10μg/mL红景天苷处理48 h)、阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组(加入0.5μmol/L阿霉素+10μg/mL红景天苷+0.1μg/mL FGF2抗体处理48 h),CCK-8测定细胞活力,Western blot法测定细胞中FGF2蛋白表达情况。结果①实验第1天、第7天和第14天,3组小鼠体重比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。实验第7天,模型组和红景天苷组小鼠LVEF均明显低于对照组(P均<0.05),模型组和红景天苷组比较差异无统计学意义(P>0.05);造模第14天,模型组小鼠LVEF、心脏质量/胫骨长度比值和左心室质量/胫骨长度比值均明显低于对照组(P均<0.05),红景天苷组均明显高于模型组(P均<0.05)。实验第14天,模型组小鼠心肌组织(总)MDA相对含量、心肌细胞线粒体部分MDA相对含量、心肌组织中ROS含量和心肌组织中IL-1β、NLRP3、Caspase-1 p20蛋白相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),红景天苷组上述各指标均明显低于模型组(P均<0.05);模型组小鼠心肌组织中Pro-Caspase-1蛋白相对表达量明显低于对照组(P<0.05),红景天苷组明显高于模型组(P<0.05);各组间心肌细胞胞质部分MDA相对含量和心肌组织中Pro-IL-1β相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。②阿霉素组细胞活力OD值和细胞中FGF2蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05);阿霉素+红景天苷组细胞活力OD值明显高于阿霉素组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组(P均<0.05);阿霉素+红景天苷组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组细胞中FGF2蛋白相对表达量均明显高于阿霉素组(P均<0.05),阿霉素+红景天苷组和阿霉素+红景天苷+FGF2抗体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论红景天苷可通过上调FGF2的表达抑制NLRP3炎症小体激活,减轻阿霉素诱导的心脏毒性。

基于烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)探讨红景天苷在非酒精性脂肪性肝病小鼠模型中的保护作用

目的研究红景天苷对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的保护作用,并探讨其作用机制。方法将24只雄性KM小鼠随机分为正常组、高脂饮食(HFD)组、HFD+空白对照组、HFD+红景天苷组,每组6只,正常组小鼠予以普通饲料喂养,其余各组高脂饮食,造模14周开始给予100 mg·kg^(-1)·d^(-1)红景天苷灌胃给药,22周末取材。酶联免疫法测定血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C等相关生化指标;HE染色和NAFLD活动评分(NAS)观察小鼠肝组织病理。Western Blot检测肝组织内烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)、Sirt1、AMPKα、SREBP1的表达变化。多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常组比较,HFD组小鼠肝组织存在广泛较大的脂肪滴,脂肪变性明显,NAS评分升高(P<0.01),外周血AST、ALT、TG、TC、LDL-C的含量明显增高(P值均<0.05),HDL-C含量降低(P<0.05),肝组织内NAMPT、AMPKα、Sirt1的表达降低(P值均<0.05),SERBP1的表达增加(P<0.01)。而HFD+红景天苷组较HFD组、HFD+空白对照组肝组织空泡状脂滴分布、小叶内炎症减少,肝细胞气球样变减轻,NAS评分下降(P<0.01),外周血AST、ALT、TG、LDL-C的含量明显降低(P值均<0.05),HDL-C含量升高(P<0.05),NAMPT、AMPKα、Sirt1的表达增加(P值均<0.05),SERBP1的表达减少(P<0.01)。结论红景天苷能明显改善高脂饮食诱导小鼠NAFLD的病理状态,并通过增加NAMPT、Sirt1、AMPKα的表达,减少SERBP1的表达,发挥其对NAFLD的保护作用。

红景天苷对类风湿关节炎小鼠缺氧及炎性反应的作用机制

目的:缺氧是类风湿关节炎(RA)发展的重要因素,本研究旨在探究红景天苷改善RA模型小鼠缺氧和缓解炎症反应的效果和潜在机制。方法:C57BL/6小鼠被用于构建胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)模型小鼠,并随机分为空白组、模型组、对照组、实验组。HE染色用于评价滑膜组织病理改变。采用实时荧光定量聚合酶链式反应、酶联免疫吸附测定,探究红景天苷对炎症反应、氧化应激以及脯氨酰羟化酶结构域蛋白2(PHD2)/蛋白磷酸酶2A(PP2A)/促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号的调节。结果:与空白组相比,模型组、对照组、实验组滑膜组织存在显著的炎性浸润和缺氧反应。与模型组相比,实验组的HE染色结果表明红景天苷能明显抑制滑膜组织增殖和炎症细胞浸润(P<0.01)。ELISA结果表明红景天苷可以抑制促炎因子中肿瘤坏死因子、白介素-6的表达(P<0.01)。RT-qPCR结果显示红景天苷能够抑制缺氧诱导因子-1α并上调核因子E2相关因子2水平(P<0.01),抑制PHD2/PP2A/MAPK信号通路的激活(P<0.01)。结论:红景天苷能抑制CIA小鼠炎性反应和缺氧损伤,缓解RA的潜在机制与抑制PHD2/PP2A/MAPK信号通路激活相关。

红景天苷对类风湿关节炎患者血清脯氨酸羟化酶2及蛋白磷酸酯酶2A和丝裂原活化蛋白激酶表达水平的影响

目的分析红景天苷对类风湿关节炎(RA)患者血清脯氨酸羟化酶2(PHD2)及蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达水平的影响。方法选取青海省中医院2022年12月至2023年7月收治的RA患者96例。采用随机数字表法分为对照组和观察组,各48例。对照组采用常规西医治疗,观察组在常规西医治疗的同时予以红景天苷治疗,2组均治疗3个月。比较治疗前后2组中医证候评分、临床症状与体征、实验室检查指标[包括红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)]、临床疗效,健康状况评定量表(HAQ)与28个关节疾病活动度评估(DAS28)评分,血清PHD2、PP2A、MAPK水平与基因表达,不良反应。结果治疗后2组主症、次症评分均低于治疗前且观察组均低于对照组(均P<0.05)。治疗后观察组临床症状与体征均轻于对照组,ESR、CRP、RF和anti-CCP水平均低于对照组(均P<0.05)。观察组总有效率高于对照组[95.8%(46/48)比80.4%(37/46)](P=0.020)。治疗后观察组HAQ与DAS28评分均低于对照组[(5.0±1.0)分比(7.2±1.2)分、(3.1±0.5)分比(4.1±0.7)分](t=9.528、7.444,均P<0.001)。治疗后观察组PHD2、MAPK水平及基因表达均低于对照组,PP2A水平及基因表达均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组不良反应发生率差异无统计学意义(P=0.528)。结论红景天苷治疗RA可增强临床效果、减轻患者症状、改善实验室指标且安全。推测与降低PHD2和MAPK表达、增加PP2A表达有关。

红景天苷通过抑制TLR 4/NF-κB通路抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化

【目的】本文旨在探讨红景天苷对血管平滑肌细胞钙化的作用及机制。【方法】本研究采用人血管平滑肌细胞钙化模型,用不同浓度的红景天苷处理细胞,茜素红染色及钙离子浓度定量检测细胞钙化,Western blot检测红景天苷对成骨样分化蛋白Runt相关转录因子2(RUNX2)和骨形态发生蛋白2(BMP2)的影响;检测红景天苷对Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)和磷酸化的核因子κB p65(p-NF-κB p65)的影响;检测红景天苷对白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)的影响。采用TLR4小干扰RNA(si-TLR4)处理血管平滑肌细胞,研究TLR4介导红景天苷对平滑肌细胞钙化的抑制作用。【结果】茜素红染色及钙离子浓度定量结果提示不同浓度的红景天苷改善高磷诱导的人血管平滑肌细胞的钙化(P<0.05)。与高磷模型组相比,红景天苷(250μmol/L、500μmol/L)下调成骨样分化蛋白RUNX2(P<0.05)和BMP2(P<0.05);250μmol/L、500μmol/L浓度的红景天苷还下调高磷诱导的TLR4(P<0.05)和p-NF-κB p65(P<0.05)的表达,而对NF-κB p65影响无显著差异(P>0.05);红景天苷(250μmol/L、500μmol/L)抑制炎症因子IL-1β(P<0.05)、IL-6(P<0.05)的蛋白水平。此外,茜素红染色及钙定量提示,红景天苷可增强敲低TLR4对高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化的抑制作用(P<0.05)。【结论】红景天苷可通过抑制TLR4/NF-κB通路抑制高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化。

基于组学方法探讨红景天苷与胃癌铁死亡的相关性分析

目的:基于网络药理学、临床数据生物信息学及分子对接探讨红景天苷调控胃癌的铁死亡机制。方法:借助Symmap和UniProt数据库检索获得红景天苷的药物靶点,通过ferrDb数据库获得铁死亡相关基因,利用GeneCards、OMIM、TTD等数据库获得胃癌相关疾病靶点,Cytoscape 3.9.1软件构建“成分-靶点”网络,STRING数据库及Cytoscape构建蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。借助数据库UALCAN分析红景天苷靶向铁死亡核心基因的转录水平,Kaplan-Meier plotter分析核心基因表达与患者生存之间的关系。通过DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology,GO)功能和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。采用RCSB与AutoDock Vina 1.1.2软件完成红景天苷与核心基因的分子对接,验证其与靶点基因的结合活性。结果:红景天苷靶向基因60个,其中铁死亡基因20个;DDIT3、GSK3B、HIF1A、MAPK1、MTOR(FRAP)、PARP1、PIK3CA、RELA(NFKB3)、SIRT1、VEGFA、PRKAA1、MAPK3、PRKAA2基因mRNA在胃癌组织中异常表达(P<0.05),其中DDIT3、MAPK3、VEGFA、PRKAA2、RELA(NFKB3)、HIF1A、MAPK1、PIK3CA、SIRT1、PRKAA1、PARP1 mRNA异常表达与胃癌患者预后相关(P<0.05);GO分析主要富集于细胞分裂、细胞增殖、凋亡等调控,KEGG分析主要富集于PI3K-Akt、HIF-1、FoxO等信号通路、凋亡、自噬、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、活性氧化学致癌、癌症通路、肿瘤中PD-L1表达和PD-1检查点通路及长寿调节通路等。分子对接结果显示红景天苷与PARP1、PRKAA1、HIF1A、MAPK1、RELA(NFKB3)、MAPK3、PIK3CA均有强烈的结合活性(分数<-6.0),与PRKAA2、SIRT1、VEGFA、DDIT3具有较好的结合活性(-6.0<分数<-4.0)。结论:红景天苷调控胃癌的铁死亡机制具有多靶点、多途径的协同作用特点,主要作用于DDIT3、MAPK3、VEGFA、PRKAA2、RELA(NFKB3)、HIF1A、MAPK1、PIK3CA、SIRT1、PRKAA1、PARP1靶点,调控PI3K-Akt、HIF-1、FoxO等信号通路发挥作用。

HPLC法测定红景天苷原料药中红景天苷的含量

目的 采用高效液相色谱(HPLC)法建立红景天苷原料药中红景天苷含量测定方法。方法 采用Phenomenex C8(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以甲醇∶水(20∶80)为流动相;检测波长220 nm;流速1.0 mL/min;柱温35℃;进样量20μL。结果 红景天苷在10.36~93.24μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,精密度良好,3批原料药中红景天苷的平均含量分别为99.38%、99.48%和99.66%,均>99.00%。结论 本文建立HPLC法测定红景天苷原料药含量的方法可靠、简便。

基于NLRP3/IL-1β/TGF-β1通路探讨低氧环境下红景天苷对糖尿病肾病大鼠足细胞焦亡损伤的拮抗效应

背景 红景天苷对糖尿病肾病(DKD)大鼠具有保护作用,但在低氧环境下是否同样起效及具体作用机制尚不明确。目的 观察低氧环境下红景天苷对DKD大鼠模型血生化指标、肾组织病理损伤、肾脏细胞焦亡相关蛋白表达情况,并探讨其作用机制。方法 2022年3月—2023年3月40只6周龄SPF级SD雄性大鼠,随机抽取8只作为对照组,其余大鼠造模。将24只DKD成模大鼠随机分为模型组、红景天苷组、红景天苷+Nod样受体蛋白3(NLRP3)激活剂组进行干预,每组8只。干预结束后腹主动脉取血进行生化指标检测,苏木素-伊红(HE)染色及透射电镜观察大鼠肾脏病理改变情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清白介素(IL)1β、IL-18水平。免疫印迹试验(Western bloting)检测肾组织半胱天冬酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)、NLRP3和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平。结果 造模后造模大鼠体质量低于对照大鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,模型组大鼠三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、尿微量白蛋白(UMA)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,红景天苷组大鼠BUN、UMA、Scr水平明显降低(P<0.05);与红景天苷组相比,红景天苷+NLRP3激活剂组大鼠UMA、BUN、Scr水平明显升高(P<0.05)。HE染色及透射电镜结果可见红景天苷组大鼠肾脏组织病理改变较模型组明显减轻,红景天苷+NLRP3激活剂组较红景天苷组加重。与对照组相比,模型组血清IL-1β、IL-18水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,红景天苷组大鼠血清IL-1β、IL-18水平明显降低(P<0.05);与红景天苷组相比,红景天苷+NLRP3激活剂组IL-1β、IL-18水平明显升高(P<0.05)。与对照组相对,模型组Caspase-1、GSDMD、NLRP3、TGF-β1蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组相对,红景天苷组Caspase-1、GSDMD、NLRP3、TGF-β1蛋白表达明显降低(P<0.05);与红景天苷组相对,红景天苷+NLRP3激活剂组Caspase-1、GSDMD、NLRP3、TGF-β1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 低氧环境下,红景天苷以不降低血糖和血脂为前提发挥了对DKD大鼠的治疗作用,考虑该作用可能与抑制NLRP3从而影响NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号通路,最终改善足细胞焦亡损伤密切相关。

红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化的保护作用

背景:目前已有研究表明红景天苷对多器官纤维化具有改善作用,但红景天苷对血管紧张素Ⅱ引起心肌成纤维细胞纤维化的保护作用尚不明确。目的:探究红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞氧化应激及细胞外基质沉积的保护作用及其作用机制。方法:血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化,实验分为5组:正常对照组;模型组(培养基血管紧张素Ⅱ终浓度为1μmol/L);红景天苷低剂量和高剂量组(加入红景天苷50,100μmol/L处理2 h,再加入血管紧张素Ⅱ共同孵育48 h);SIRT1抑制剂组(加入SIRT1抑制剂EX52710μmol/L处理2 h,再加高剂量红景天苷处理2 h,再加血管紧张素Ⅱ共同孵育48 h)。使用CCK8法检测各组细胞活力,Transwell检测细胞迁移率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平,试剂盒检测细胞内丙二醛含量、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性;采用Western blot和qRT-PCR法检测心肌成纤维细胞纤维化相关mRNA和蛋白的表达水平。结果与结论:①经Vimentin荧光鉴定实验细胞为心肌成纤维细胞;②与正常对照组相比,模型组细胞活力、细胞迁移率、活性氧水平、丙二醛含量显著增加,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性明显降低,LOXL2、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白ⅢmRNA和蛋白表达显著升高,SIRT1蛋白表达水平明显降低(均P<0.01);与模型组相比,红景天苷低、高剂量组上述指标呈现相反的变化(均P<0.05),且红景天苷呈剂量依赖性调控;与红景天苷组相比,SIRT1抑制剂组细胞迁移率、α-SMA蛋白表达水平显著增加(均P<0.001);③结果表明,红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞具有保护作用,能够剂量依赖性地抑制氧化应激和细胞外基质沉积。

红景天苷防治眼科疾病的研究进展

红景天苷是从红景天分离得到的一种苯丙素苷,具有耐缺氧、抗氧化、抗炎、保护神经、抗疲劳、抗衰老及调节免疫等广谱药理特性。红景天苷具有多靶点—多途径的整体调节特征,通过激活磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路和单磷酸腺苷活化蛋白激酶途径、B淋巴细胞瘤-2基因/B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白通路和内源性抗氧化酶的活性及环氧合酶/前列腺素E2信号通路保护糖尿病性视网膜病变视网膜血管内皮细胞、视网膜色素上皮细胞及Müller细胞;激活调控转化生长因子信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路和分泌性糖蛋白/β-连环蛋白通路,从而抑制青光眼小梁网细胞和神经节细胞凋亡,并调节眼内压的稳定;激活蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3信号通路抑制年龄相关性黄斑变性视网膜色素上皮细胞氧化损伤,降低血管内皮生长因子和缺氧诱导因子-1的表达水平抑制脉络膜新生血管的形成;发挥抗氧化活性,保护白内障晶状体上皮细胞免受氧化损伤;改善近视所致的巩膜缺氧;以及通过激活单磷酸腺苷活化蛋白激酶—沉默信息调节因子1信号通路促进自噬等来抑制机体氧化应激,缓解干眼症引起的角膜上皮细胞氧化损伤等。红景天苷在眼科应用研究涉及的范围越来越广,本文就国内、外红景天苷治疗相关眼科疾病的最新研究进展予以综述。

基于红景天苷对三阴性乳腺癌关键差异基因作用机制的生物信息学和分子对接技术分析

目的:通过生物信息学和网络药理学方法探讨红景天苷治疗三阴性乳腺癌(TNBC)的作用机制,阐明其产生治疗作用的主要靶点和信号通路。方法:通过基因表达综合数据库(GEO)获取数据集GSE45827,利用R软件包GSEABase进行基因集富集分析(GSEA),采用limma R软件包寻找相邻正常组织和TNBC组织之间的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析,将DEGs与药物靶点结合,导入基因/蛋白相互作用检索搜查工具String数据库,形成蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络。使用MCODE插件对PPI网络进行功能模块筛选,对SCORE值排名前2位的关键模块基因再次进行GO功能富集分析和KEGG信号通路富集分析。将2次KEGG富集分析所得通路与转录组数据GSEA富集分析结果取交集,获得红景天苷治疗TNBC的作用通路。使用CytoHubba插件计算出关键模块中最大团中心性(MCC)评分前10位的关键节点基因,即为核心基因。应用AutoDock Vina 1.1.2和PyMOL 2.3.0软件完成分子对接。结果:KEGG与GSEA富集分析的结果取交集得到13条共同通路,涉及细胞周期、细胞衰老和p53信号通路等。GO功能富集分析结果中所涉及的有丝分裂、核分裂和姐妹染色单体分离等生物学过程与细胞周期有密切关联,与KEGG富集分析结果一致。SCORE值排名第1位的关键模块中包含5个红景天苷药物作用靶点,分别为重组人细胞周期蛋白A2(CCNA2)、细胞周期检查点激酶1(CHEK1)、驱动蛋白家族成员11(KIF11)、DNA拓扑异构酶2(TOP2A)和胸腺嘧啶酸合酶(TYMS),将上述蛋白与红景天苷进行分子对接,结果均表现出很强的结合能力(结合能<-7.0 kcal·mol^(-1))。结论:红景天苷的紧密结合靶标位于TNBC的DEGs关键功能模块中,可以与CCNA2蛋白结合产生直接的调控作用,与KIF11、TOPA2、CHEK1和TYMS蛋白结合可针对TNBC的关键节点基因产生间接的调控作用,红景天苷有可能成为TNBC的临床治疗药物。

红景天苷改善镉致神经损伤的作用机制研究

目的揭示红景天苷对镉致神经细胞损伤的保护作用机制。方法利用镉诱导大鼠PC12神经细胞损伤模型,通过利用流式细胞仪和相关试剂盒,探究红景天苷在镉暴露条件下对细胞存活率、Caspase-3酶活性、细胞活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)产生、线粒体膜电位变化、细胞凋亡比例的调控作用。通过脂质组学分析,揭示红景天苷作用下的差异甘油磷脂。结果红景天苷能够显著改善镉暴露所致的细胞存活率下降,并有效抑制细胞Caspase-3酶活性的升高。同时,红景天苷显著抑制了镉诱导的细胞ROS产生,提高了线粒体膜电位,减少了早期凋亡细胞的比例,并增加了正常细胞的比例。此外,脂质组学分析显示,红景天苷处理后细胞中差异表达的甘油磷脂包括磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)(16:0/14:0)、PC(16:0/18:2)、PC(18:1/16:0)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl ethanolamine,PE)(16:0/18:1)、PE(16:0/18:2)、PE(18:0/18:2)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)(16:0/18:1)、PI(18:1/18:1)、PI(18:0/20:4)。结论本研究阐明了红景天苷可能通过抗氧化、抗凋亡等机制保护镉致神经细胞损伤,且其作用可能与部分甘油磷脂有关。本研究可以为开发红景天苷的保健新用途提供科学依据。

红景天苷及其苷元酪醇对三阴性乳腺癌细胞的抑制作用

乳腺癌是当今世界发病率和死亡率极高的癌症之一,目前,毒性小、副作用低、多靶点治疗且效果好的天然产物成为乳腺癌药物开发热点。红景天中存在两种具有良好的生物活性单体红景天苷及酪醇,该研究采用ORAC法确定其抗氧化能力,以三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231为实验模型,考察其抗增殖效果,通过细胞划痕实验、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期以及RT-qPCR进一步探究相关机制。结果表明,红景天苷及酪醇均能够显著抑制MDAMB-231的增殖,其EC50值分别为63.55、127.35μmol/L;细胞划痕实验表明它们能显著抑制细胞迁移,在36 h时高浓度组红景天苷和酪醇分别将细胞愈合率从72.16%降低至27.86%和32.69%;细胞周期和凋亡实验表明红景天苷和酪醇将细胞周期绝大部分阻滞在G2期并促进细胞凋亡;RT-qPCR实验发现红景天苷主要通过上调p53、p21基因,下调Bcl-2、Bcl-xL、CDK6基因发挥抗MDA-MB-231增殖效果,酪醇主要通过上调p53、p21、Bax基因发挥作用。上述结果为单体红景天苷和酪醇的生物活性研究提供理论支持,并为将来抗乳腺癌药物的开发提供理论依据。

红景天苷促进MC3T3-E1细胞成骨分化能力的体外实验

背景:骨缺损可直接影响牙齿种植的成功率及种植体的长期稳定性。研究显示红景天苷可促进成骨细胞增殖、分化,但对于其成骨分化相关通路具体研究不多。目的:体外细胞实验研究红景天苷对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响,并探究其对相关基因和蛋白表达的影响。方法:采用CCK-8实验和碱性磷酸酶实验筛选红景天苷(0.5,1,5,10,50μmol/L)促进MC3T3-E1细胞增殖和分化的最佳浓度。实验分为4组:对照组、红景天苷组、红景天苷+LY294002组、LY294002组,分别用成骨诱导液、含10μmol/L红景天苷、10μmol/L红景天苷+10μmol/L LY294002、10μmol/L LY294002的成骨诱导液进行培养,观察红景天苷及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对成骨相关基因和蛋白表达的影响。结果与结论:①CCK-8实验和碱性磷酸酶实验显示:红景天苷促进MC3T3-E1细胞增殖的作用在10μmol/L时最显著;②与对照组相比,红景天苷可以促进矿化、促进细胞黏附、减少细胞死亡,提高Runx-2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达(P<0.01),提高Runx-2和p-Akt蛋白表达(P<0.01);而添加PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002则可逆转以上结果;③结果表明,红景天苷能促进MC3T3-E1细胞矿化,并能促进成骨相关基因、蛋白的表达,这可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。

红景天苷脂质体的构建及其对高糖诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用

目的 构建红景天苷脂质体(SAL-LIPS),对其进行评价,并研究SAL-LIPS在高糖(HG)环境下对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞氧化损伤的保护作用。方法 采用乙醇注入法制备SAL-LIPS,通过透射电镜观察其形态,测定粒径、多分散系数(PDI)并考察制剂的体外释放及稳定性。HG诱导ARPE-19细胞建立氧化应激细胞模型,检测不同浓度的SAL-LIPS对损伤细胞活力的影响,并检测不同组别细胞ROS水平、MDA含量、血管内皮因子(VEGF)和缺血诱导因子(HIF-1α)的表达。结果 制备的SAL-LIPS呈圆球状,平均粒径为(112.1±2)nm,平均PDI为0.204±0.02,与红景天苷原料药相比具有缓释作用,稳定性较好。在50~100 μmol·L^(-1)内SAL-LIPS可以显著改善HG诱导的ARPE-19细胞的活力。与空白对照组比较,HG组显著升高ARPE-19细胞内ROS水平、MDA含量,同时增强了VEGF和HIF-1α的表达;与HG组ARPE-19细胞比较,HG+低浓度SAL-LIPS组和HG+高浓度SAL-LIPS组显著降低了细胞内ROS水平、MDA含量,同时减少了VEGF和HIF-1α的表达。结论 所构建的SAL-LIPS具有良好的缓释作用和稳定性,可以改善HG诱导ARPE-19细胞发生的氧化应激,发挥抗氧化作用。

红景天苷抑制人血小板与乳腺癌MDA-MB-468细胞相互作用的实验研究

目的 研究红景天苷(Salidroside,Sal)对人血小板活化聚集的影响以及对人血小板与乳腺癌MDA-MB-468细胞相互作用的影响。方法 采集人全血并制备血小板悬液,采用不同浓度Sal处理后通过血栓弹力图(thromboelastogram,TEG)、流式细胞术检测Sal对血小板活化、聚集的影响。体外培养乳腺癌MDA-MB-468细胞,采用不同浓度Sal处理人血小板,使用凝血酶激活血小板,通过黏附实验和划痕实验分析Sal对血小板与MDA-MB-468细胞相互作用的影响。结果 TEG检测:空白对照组的ADP抑制率为(10.97±12.69)%,各浓度Sal干预组ADP抑制率均高于空白对照组(P<0.05);空白对照组的花生四烯酸(arachidonic acid,AA)抑制率为(8.11±7.84)%,5μmol/L Sal干预组为(25.96±15.18)%,2者比较有差异(P<0.05)。流式细胞术检测:40、60μmol/L Sal组血小板表面CD62P表达分别为(56.5±0.17)%和(65.50±0.36)%,与阳性对照组(76.53±0.49)%比较有差异(P<0.05);40、60μmol/L Sal组血小板表面PAC-1的表达分别为(62.20±0.10)%、(58.47±0.15)%,与阳性对照组(72.10±0.20)%比较有差异(P<0.05)。黏附实验:血小板可与MDA-MB-468细胞产生黏附作用,且活化血小板黏附能力更强。而Sal各组的黏附率较阳性对照组明显降低,与Sal浓度呈负相关。划痕实验:阳性对照组24 h细胞迁移率为(12.71±0.70)%,各浓度Sal处理组细胞迁移率分别为(4.51±0.44)%、(3.85±0.11)%、(5.37±0.36)%、(4.15±0.13)%、(3.55±0.38)%,与阳性对照组比较均降低(P<0.05)。Sal干预48 h后,10、20、40、60μmol/L Sal组细胞迁移率均降低,与阳性对照组比较有差异(P<0.05)。结论 Sal能够抑制凝血酶介导的活化血小板与MDA-MB-468细胞间的黏附及MDA-MB-468细胞的迁移。