红花黄色素调节TGF-β1/Smads通路对糖尿病心肌病大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨红花黄色素(SY)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的影响及潜在机制。方法:采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素腹腔注射的方法复制DCM大鼠模型,设正常(Normal)组、模型(Model)组、SY组、转化生长因子-β1(TGF-β1)抑制剂SB431542组和SY+SB431542组,每组8只。SY组1次/d腹腔注射10mg/kg SY,SB431542组1次/d灌胃0.1mg/kg SB431542,SY+SB431542组1次/d腹腔注射10mg/kg SY+灌胃0.1mg/kg SB431542,Normal组和Model组1次/d腹腔注射生理盐水。治疗14d后,测定空腹血糖(FBG)水平,通过心脏超声检测心功能,酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、基质裂解素2(ST2)水平,计算心脏指数(CI),苏木素-伊红(HE)、马森(Masson)染色观察心肌组织病变和纤维化状况,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测TGF-β1、果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白2/3(Smad2/3)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad7、胶原Ⅰ型和Ⅲ型(Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ)蛋白表达。结果:与Model组比较,SY组、SB431542组和SY+SB431542组大鼠FBG水平明显降低(P<0.05);心功能明显改善[左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS)明显升高,左心室收缩/舒张末期内径(LVIDs、LVIDd)明显降低(P<0.05)];血清LDH、cTnI、AngⅡ、ST2水平、CI均明显降低(P<0.05);心肌纤维断裂,细胞空泡样变、坏死、数量减少,胞核深染等病变以及心肌纤维化状况均明显改善,胶原容积分数(CVF)明显降低(P<0.05);心肌组织TGF-β1、Collagen-I、Collagen-Ⅲ表达量及p-Smad2/3∕Smad2/3比值明显降低,Smad7表达量明显升高(P<0.05)。SY+SB431542组对各检测指标的影响均明显优于SY组和SB431542组(P<0.05)。结论:SY具有抑制DCM大鼠心肌纤维化的作用,可能与下调TGF-β1/Smads通路,减轻细胞外基质沉积(ECM)有关。

羟基红花黄色素A减轻双环己酮草酰二腙小鼠髓鞘脱失的机制

背景:在中枢神经系统脱髓鞘疾病的发生发展过程中,小胶质细胞导致的神经炎症是主要病理特征,因此抑制炎症反应对缓解髓鞘脱失非常重要。羟基红花黄色素A有保护血脑屏障、抑制神经元的凋亡、改善神经功能的作用。目的:探究羟基红花黄色素A抑制双环己酮草酰二腙诱导的小鼠髓鞘脱失的作用机制。方法:①体内实验:将30只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、双环己酮草酰二腙组和羟基红花黄色素A组3组,后2组小鼠喂养含0.2%双环己酮草酰二腙的饲料6周建立脱髓鞘小鼠模型,正常组小鼠喂养正常饲料;在第4周末,给予羟基红花黄色素A组小鼠腹腔注射20 mg/(kg·d)羟基红花黄色素A,正常组和双环己酮草酰二腙组小鼠腹腔注射生理盐水,持续2周。旷场实验、高架十字迷宫实验评价小鼠的行为学变化;黑金染色和髓鞘碱性蛋白、降解髓鞘碱性蛋白免疫荧光染色检测胼胝体髓鞘脱失情况;离子钙结合接头分子1免疫荧光染色和ELISA法分别检测小胶质细胞的活化和炎症因子的表达;Western Blot法检测各组小鼠脑中Toll样受体4、髓样分化因子88、核因子κB p65蛋白的表达水平;②体外实验:采用脂多糖诱导建立BV2小胶质细胞炎症模型。将BV2细胞分为正常组、脂多糖组(1μg/mL)和脂多糖(1μg/mL)+羟基红花黄色素A(25μmol/L)组,采用ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达水平。结果与结论:①对比正常组,双环己酮草酰二腙组小鼠焦虑情况严重、自主运动能力异常,胼胝体区髓鞘大量脱失,髓鞘碱性蛋白平均荧光强度显著降低,降解髓鞘碱性蛋白平均荧光强度显著升高,离子钙结合接头分子1阳性小胶质细胞数量增多,脑内白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平升高,Toll样受体4、髓样分化因子88、核因子κB p65的蛋白表达水平明显升高。羟基红花黄色素A治疗后,小鼠上述症状和各项指标均发生相反的变化。②羟基红花黄色素A显著抑制由脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的表达。③上述结果说明羟基红花黄色素A能够显著改善双环己酮草酰二腙诱导的小鼠髓鞘脱失,作用机制与Toll样受体4/髓样分化因子88/核因子κB p65信号通路抑制小胶质细胞活化介导的炎症反应有关。

羟基红花黄色素A抑制糖氧剥夺/复糖复氧处理后神经元焦亡的作用

背景:羟基红花黄色素A具有抗缺血、抗氧化、抗血栓及抗炎等作用,其是否影响糖氧剥夺/复糖复氧处理后神经元焦亡,目前尚不清楚。目的:探讨羟基红花黄色素A对神经元焦亡的干预作用及机制。方法:取对数生长期的HT22细胞,随机分为5组:正常组、模型组、羟基红花黄色素A组、Colivelin组、Colivelin+羟基红花黄色素A组。利用糖氧剥夺/复糖复氧处理HT22细胞建立神经元焦亡模型,然后给予STAT3激动剂Colivelin、羟基红花黄色素A干预。干预后JC-1探针检测线粒体膜电位变化,活性氧试剂盒检测细胞内活性氧含量,GSDMD/TUNEL染色观察细胞焦亡情况,免疫荧光检测STAT3、GSDMD蛋白表达,RT-PCR检测STAT3、NLRP3、Caspase-1 mRNA表达,Western blot检测p-STAT3、NLRP3、GSDMD、Cleaved-caspase-1、白细胞介素1β蛋白表达。结果与结论:①与正常组相比,模型组焦亡细胞数量增多,p-STAT3、NLRP3、Cleaved-caspase-1、GSDMD、白细胞介素1β蛋白表达显著升高;与模型组相比,羟基红花黄色素A组焦亡细胞数量减少,焦亡相关蛋白的表达显著降低;②与模型组相比,Colivelin组细胞焦亡加剧,线粒体膜电位降低,活性氧含量增加,STAT3、NLRP3、Caspase-1 mRNA表达升高,p-STAT3、NLRP3、GSDMD、Cleaved-caspase-1、白细胞介素1β蛋白表达升高;与Colivelin组相比,Colivelin+羟基红花黄色素A组上述指标均有好转。结果表明:羟基红花黄色素A通过STAT3信号通路抑制糖氧剥夺/复糖复氧后HT22细胞焦亡发挥神经保护作用。

TGFβ1/Smads信号通路抗纤维化抑制心室重构及红花黄色素干预作用的研究

目的 研究红花黄色素对心肌梗死后的心室重构及TGFβ1/Smads信号通路的影响。方法 结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,假手术组开胸显露左冠状动脉前降支但不行结扎。建模成功大鼠随机分为模型组,红花黄色素高、中、低剂量组,氯沙坦组,给药4周。观察心脏形态结构变化;分析血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)含量变化;Westem blot检测心肌组织转化生长因子β1(TGFβ1)、SMAD2/3、P-SMAD2/3蛋白表达量。结果 与假手术组比较,模型组心脏体积变大,梗死区面积大,左室壁凹陷,变薄;与模型组比较,给药组左心室壁没有明显凹陷,梗死区范围和体积变小;血清MDA降低,SOD、GSH-Px和CAT活性增强(P<0.05);与模型组比较,给药组心肌组织TGFβ1及SMAD2/3蛋白表达下降(P<0.05)。结论 红花黄色素能够减轻心室重构,缓解氧化应激,可能是通过抑制TGFβ1/Smads信号通路而实现。

羟基红花黄色素A通过靶向MD2减轻LPS诱导的心肌损伤

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)能否通过靶向髓样分化蛋白2(MD2)减轻小鼠心肌细胞炎症损伤及细胞凋亡。方法 利用不同浓度的HSYA(0.1、1、10μmol/L)预处理小鼠心室肌细胞2 h,脂多糖(LPS)(5μg/m L)干预4 h后进行检测,进一步通过分子对接技术明确HSYA与MD2的结合方式及结合位点,免疫沉淀检测HSYA对TLR4/MD2复合物生成的影响,并通过Western blotting进行作用机制探究。结果 与对照组相比,LPS能够诱导心肌细胞凋亡,促使细胞内及线粒体内活性氧(ROS)的释放,促使炎症因子白介素6(IL-6)的释放,但白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)并没有明显变化。与LPS诱导组相比,HSYA能够有效抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡、ROS释放及炎症因子损伤;分子对接结果提示HSYA能够与MD2的疏水口袋结合,HSYA能够剂量依赖性地减少TLR4/MD2复合物的生成,提示HSYA与TLR4竞争性结合MD2蛋白。采用Westrn blotting检测TLR4、MD2、NF-κB p65磷酸化蛋白的表达,结果显示HSYA以浓度依赖的方式降低了LPS诱导的TLR4和MD2、NF-κB p65磷酸化蛋白表达。结论 HSYA能够通过靶向MD2(TLR4/MD2复合物介导),减轻LPS诱导的炎症损伤,发挥降低心肌细胞炎症损伤及凋亡的作用。

羟基红花黄色素A干预脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞脂质运载蛋白2的表达

背景:缺血性脑卒中严重威胁人类健康,缺血缺氧后星形胶质细胞大量表达脂质运载蛋白2加重脑损伤,但其具体机制并不清楚。羟基红花黄色素A具有抗缺血、抗氧化、抗血栓及抗炎等作用,其是否影响脑缺血缺氧后星形胶质细胞表达脂质运载蛋白2,目前尚不清楚。目的:探究羟基红花黄色素A对脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞中脂质运载蛋白2表达的影响及机制。方法:(1)将30只成年SD大鼠随机分成3组:假手术组、大脑中动脉闭塞再灌注组、羟基红花黄色素A组,后2组建立大脑中动脉闭塞再灌注模型,羟基红花黄色素A组在再灌注后以12 mg/kg的剂量腹腔注射羟基红花黄色素A。采用Longa评分法评估神经功能缺损程度,采用TTC染色法测定脑梗死体积,Western blot和免疫荧光检测JAK2/STAT3通路及脂质运载蛋白2的表达,ELISA法检测白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平。(2)将星形胶质细胞分为4组:正常组、糖氧剥夺复糖氧组、羟基红花黄色素A组、AG490组,后3组建立糖氧剥夺复糖氧模型,在糖氧剥夺期间分别用75μmol/L羟基红花黄色素A、10μmol/L酪氨酸磷酸化抑制剂AG490处理星形胶质细胞8 h,进一步验证羟基红花黄色素A对脂质运载蛋白2的作用机制。结果与结论:(1)与假手术组相比,大脑中动脉闭塞再灌注组大鼠脑梗死体积明显增加,并伴有神经功能损伤加重(P<0.01),羟基红花黄色素A治疗可以减小脑梗死体积,改善神经功能(P<0.01);(2)大脑中动脉闭塞再灌注组p-JAK2、p-STAT3和脂质运载蛋白2的表达高于假手术组(P<0.01),羟基红花黄色素A治疗后抑制了p-JAK2、p-STAT3和脂质运载蛋白2的表达(P<0.01);(3)大脑中动脉闭塞再灌注组炎性因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平高于假手术组(P<0.01),羟基红花黄色素A治疗后抑制了白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达(P<0.01);(4)体外实验糖氧剥夺复糖氧组p-JAK2、p-STAT3、脂质运载蛋白2的表达高于正常组(P<0.01),加入AG490后JAK2、STAT3磷酸化降低,脂质运载蛋白2表达被抑制(P<0.01)。结果表明,羟基红花黄色素A可能通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制缺血缺氧后星形胶质细胞中脂质运载蛋白2的表达,从而减轻脑损伤。

基于代谢组学和网络药理学探讨羟基红花黄色素A治疗脓毒症急性肝损伤作用机制

目的采用代谢组学与网络药理学方法探讨羟基红花黄色素A(HSYA)治疗脓毒症急性肝损伤作用机制。方法将50只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(10只)、脓毒症组(20只)和HSYA组(20只),采用盲肠结扎穿刺法构建脓毒症急性肝损伤小鼠模型,HSYA组造模后2 h皮下注射HSYA(2.25 mg/kg)。检测小鼠血清炎症因子含量及肝功能,HE染色观察肝组织病理变化,超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对肝组织进行代谢组学分析,多元数据统计方法筛选差异代谢物,采用网络药理学预测HSYA治疗脓毒症急性肝损伤潜在靶点,并对潜在靶点进行GO和KEGG通路富集分析,用Metabo Analyst 5.0数据库对模型组和HSYA组差异代谢物与潜在靶点进行匹配,构建靶点-代谢物-代谢通路网络,使用AutoDock Vina软件对HSYA与核心靶点进行分子对接,最后采用RT-qPCR验证核心基因表达。结果HSYA能降低模型小鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,恢复肝功能,减轻肝组织病理损伤。代谢组学筛选出26个向假手术组回调的差异代谢物,包括氟芬那酸、白叶藤碱、邻苯二甲酸、甲氰菊酯等,主要涉及不饱和脂肪酸的生物合成、α-亚麻酸代谢等5条代谢通路。网络药理学分析得到HSYA治疗脓毒症急性肝损伤潜在靶点81个,涉及2735个GO条目、124条信号通路;联合分析共匹配到5个差异代谢物,对应IL1B、STAT3、PTGS2、TP53等14个靶点参与HSYA对脓毒症急性肝损伤代谢紊乱的调控。分子对接结果显示,HSYA与IL1B、STAT3、PTGS2、TP53有良好的结合活性。RT-qPCR结果显示,HSYA能抑制肝组织IL1B、STAT3、PTGS2基因表达。结论HSYA可能通过调节IL1B、STAT3、PTGS2基因表达抑制炎症因子释放,维持机体代谢稳态,从而减轻脓毒症急性肝损伤。

Box-Behnken响应面法优化羟基红花黄色素A纳米粒处方工艺及体外释放评价

目的优化羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)纳米粒制备工艺,并对其进行体外释放评价。方法以乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA]为载体,利用改良的复乳法制备HSYA纳米粒,通过Plackett-Burman设计实验联用Box-Behnken响应面法优选最佳制备工艺;利用粒径测定仪、TEM扫描电镜仪、傅里叶红外光谱(FT-IR)仪、X-射线粉末衍射(XRD)仪对纳米粒进行表征;并对其进行4℃储藏稳定性、生理介质中稳定性、冻干保护剂及体外释放率考察。结果优选出纳米粒最佳工艺处方为:pH为6.95,投药量为2.8 mg,载体用量为18.2 mg;在此条件下制备出的纳米粒粒径为(176.4±1.29)nm,多分散系数(Polydiseperse Index,PDI)为(0.152±0.014),Zeta电位为(-17.6±0.46)mV,包封率为(78.5±0.49)%,载药量为(7.3±0.07)%,纳米粒形态圆整,分散性好;在4℃储存环境下、不同生理介质中稳定性良好,最佳冻干保护剂为1%葡萄糖;纳米粒48 h体外释放率为85%。结论该优化方法合理可靠,所得纳米粒稳定性良好,具有一定的缓释作用,体外释放符合一级动力学模型。

羟基红花黄色素A对自发性高血压大鼠肾损伤的保护作用

采用生化检测、HE染色和免疫组化技术,研究了羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rat,SHR)血清生化、氧化应激和肾脏病理的影响.结果表明:与SHR模型组相比,不同剂量HSYA可调节SHR的血清REN、AngⅡ、ALD、ACE、TNF-α和IL-6含量,提高肾组织中SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,上调HMGCS2蛋白表达,改善肾脏病理程度.

红花黄色素对菊花永生花的染色工艺优化

为探究4个单因素对红花黄色素染色菊花的工艺影响,以脱水脱色菊花为试材,从传统染料植物红花中提取黄色素后冷冻干燥,对菊花进行染色;通过紫外—可见光谱法对红花黄色素定性测试其最大吸收波长,并测量染色后的颜色坐标和响应值K/S值;通过Box-Behnken中心组合试验设计,以K/S值为响应值进行响应面(RSM)分析,优化红花黄色素染菊花永生花工艺条件。结果显示:红花黄色素的最大波长为406.5 nm。红花黄色素染色菊花的最佳条件为:染色时间1.0 h,染色温度30℃,色素质量浓度8 g·L^(-1),染液pH值6。在此条件下,染出的菊花呈亮黄色,形态较好,染色均匀,观赏度较高。可得结论,天然红花黄色素具有较高的稳定性和匀染性,适宜菊花永生花的工业化生产。

基于脂质代谢组学研究羟基红花黄色素A治疗高脂血症LDLR^(-/-)小鼠的作用机制

[目的]基于脂质代谢组学方法考察羟基红花黄色素A(HSYA)对高脂饲料诱导的LDLR^(-/-)小鼠高脂血症脂质代谢的影响及其机制。[方法]将28只雄性LDLR^(-/-)小鼠分为对照组与高脂组。对照组喂养普通饲料,高脂组喂养高脂饲料,6周后,高脂组按照血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量平均分为4组:模型组、辛伐他汀组、HSYA(3.8 mg/kg)低剂量组、HSYA(7.6 mg/kg)高剂量组。给药11周,给药期间同时给予高脂饲料饲养。全自动生化仪检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、LDL-C含量,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态,油红O染色观察小鼠肝脏组织脂肪蓄积情况,采用靶向脂质组学技术对LDLR^(-/-)小鼠血清中脂质进行测定。[结果]与对照组比较,模型组小鼠血清中LDL-C、TC、TG、AST、ALT含量升高(P<0.05),肝组织出现大小不等的脂滴浸润,肝细胞排列紊乱,大量脂质蓄积。与模型组比较,HSYA两组小鼠血清中LDL-C、TC、TG、AST、ALT含量降低(P<0.05),肝脏的脂肪变性、脂质蓄积等病理情况得到改善。脂质组学检测结果显示,模型组和对照组之间具有差异的脂质分子共有14种(VIP>1,P<0.05)。HSYA两组与模型组比较,17种脂质分子呈现相反的趋势并具有差异,分别为PE(18∶0/18∶1)、PE(18∶0/18∶2)、PE(18∶0/20∶3)、PE(18∶0/20∶4)、PE(O-18∶0/18∶1)、PE(O-18∶0/20∶4)、LPE(18∶1)、LPE(20∶4)、FFA(22∶4)、PI(18∶0/18∶2)、PI(16∶0/18∶1)、PI(18∶1/18∶1)、LPI(18∶0)、PG(18∶1/16∶1)、PG(18∶1/18∶1)、PG(18∶1/18∶2)、PA(18∶1/18∶1)(VIP>1,P<0.05)。[结论]研究利用脂质组学技术,发现HSYA可以通过调节高脂血症LDLR^(-/-)小鼠血清中脂质代谢水平,发挥治疗高脂血症的作用,为临床应用HSYA提供了新的参考依据。

羟基红花黄色素调节Sirt 3改善心脏缺血再灌注损伤中线粒体功能障碍

目的探讨羟基红花黄色素对脂多糖诱导的H9c2心肌细胞损伤线粒体功能保护作用及其对Sirt3的调节作用。方法H9c2心肌细胞株培养24 h后随机分为对照组、脂多糖造模组、脂多糖造模+Sirt3抑制剂组,羟基红花黄色素给药+模型组,羟基红花黄色素给药+Sirt 3抑制剂+模型组,给予脂多糖建立氧化应激损伤心肌细胞模型。采用乳酸脱氢酶检测试剂盒测定细胞培养液中乳酸脱氢酶含量;测定细胞中ATP含量,测定细胞中细胞色素C含量及线粒体呼吸链复合物含量;Western blot法检测Sirt 3及Bax表达量。结果与对照组比较,脂多糖模型组细胞色素C含量升高,细胞中谷氨酸脱氢酶,ATP及呼吸链复合物含量降低,Sirt3表达量略升高,Bax表达上升(P<0.05)与模型组比较,脂多糖造模+Sirt3抑制组线粒体各项损失指标明显加剧,而羟基红花黄色素给药+模型组中线粒体损伤指标明显恢复(P<0.05),而羟基红花黄色素+Sirt 3抑制剂组中线粒体损伤程度低于脂多糖造模+Sirt3抑制剂组(P<0.05),Sirt3蛋白表达较抑制组明显上升(P<0.05)。结论羟基红花黄色素降低脂多糖诱导的H9c2心肌细胞线粒体氧化损伤,该作用可能与羟基红花黄色素提高受损心肌细胞内Sirt3的表达量有关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究红花黄色素对不同月龄APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响

目的 采用3、6、9月龄APP/PS1转基因小鼠作为实验动物模型,明确红花黄色素(safflower yellow, SY)对不同疾病时期APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响,探究SY抗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的作用机制。方法 行为学实验观察SY对不同月龄APP/PS1小鼠学习记忆的影响;ELISA研究SY对不同月龄小鼠皮层炎症因子表达的影响,并采用Western blot检测小鼠小胶质细胞活化标志蛋白,进一步分析其作用机制。结果 SY提高了3、6、9月龄小鼠的学习记忆能力;降低脑组织中IL-6的含量,提高TGF-β1的含量;诱导各月龄小鼠脑组织中精氨酸酶-1(arginase-1, Arg-1)和髓样细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)的蛋白表达水平,同时下调诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、Toll样受体4(Toll-like receptors, TLR4)以及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的蛋白表达水平。结论 与3、9月龄小鼠相比,SY对6月龄APP/PS1小鼠的学习记忆能力改善效果最佳。SY通过诱导APP/PS1转基因小鼠脑组织中TREM2的表达,抑制TLR4/NF-κB通路激活,促进小胶质细胞表型向抗炎型转变,减轻慢性神经炎症反应,改善各月龄APP/PS1小鼠的学习记忆能力。

红花黄色素对糖尿病小鼠足溃疡创面愈合的影响及机制

目的探讨红花黄色素(SY)对糖尿病小鼠足溃疡(DFU)创面愈合的影响及分子机制。方法取45只C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。将糖尿病小鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY干预组及高剂量SY联合胰岛素样生长因子-1(IGF-1)组,每组9只。DFU模型制备前,模型组小鼠不给予干预处理,低剂量SY干预组和高剂量SY干预组分别腹腔注射5、20 mg·kg^(-1)SY,高剂量SY联合IGF-1组腹腔注射20 mg·kg^(-1)SY和0.03 mg·kg^(-1)IGF-1。除假手术组外,其余4组小鼠通过切开足背部皮肤制备DFU模型;假手术组不制作足背部皮肤伤口,余手术步骤与模型组一致。于造模后第14天,用电子秤测量各组小鼠的体质量,采集尾静脉血测定空腹血糖,并使用小型游标卡尺测量创面宽度,然后处死小鼠收集创面组织,采用苏木精-伊红染色检测各组小鼠创面组织病理学变化,反转录-实时荧光定量聚合酶链反应检测各组小鼠创面组织中血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原蛋白(collagen I)、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、晚期糖基化终产物(AGEs)mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法检测各组小鼠创面组织中增殖标志物Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡相关蛋白(caspase-3、caspase-6、caspase-7)、p85磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白的相对表达量,酶联免疫吸附试验检测各组小鼠创面组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-6水平。结果假手术组、模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY干预组及高剂量SY联合IGF-1组小鼠血糖和体质量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高剂量SY干预组小鼠创面组织愈合率显著大于模型组、低剂量SY干预组及高剂量SY联合IGF-1组(P<0.01)。模型组、低剂量SY干预组及高剂量SY联合IGF-1组创面组织愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量SY干预组小鼠创面组织中出现大量胶原纤维密集有序排列,并伴有大量新生血管;模型组、低剂量SY干预组及高剂量SY联合IGF-1组小鼠创面组织中胶原纤维稀疏,并伴有少量新生血管。高剂量SY干预组小鼠创面组织中PDGF、VEGF、α-SMA及collagen I mRNA相对表达量显著高于模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组(P<0.01);高剂量SY干预组小鼠创面组织中PTP1B和AGEs mRNA相对表达量显著低于模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组(P<0.01)。模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组小鼠创面组织中PDGF、VEGF、α-SMA、collagen I、PTP1B及AGEs mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量SY干预组小鼠创面组织中Ki-67和PCNA蛋白相对表达量显著高于模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组(P<0.01);caspase-3、caspase-6、caspase-7、p85 PI3K及p-AKT蛋白相对表达量显著低于模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组(P<0.01)。模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组中Ki-67、PCNA、caspase-3、caspase-6、caspase-7、p85 PI3K及p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。高剂量SY干预组小鼠创面组织中TNF-α、IL-1β及IL-6水平显著低于模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组(P<0.01)。模型组、低剂量SY干预组、高剂量SY联合IGF-1组小鼠创面组织中TNF-α、IL-1β及IL-6水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论高剂量SY干预可通过提高血管生成、胶原形成及细胞增殖,降低胰岛素抵抗、炎症反应和细胞凋亡来促进小鼠DFU创面愈合,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

基于网络药理学和分子对接研究红花黄色素延缓衰老的作用机制

目的使用网络药理学和分子对接方法探究红花黄色素延缓衰老作用。方法利用PubChem、PharmMapper、SwissTargetPrediction和TargetNet数据库查询红花黄色素相关基因;借助Uniprot数据库查询红花黄色素化合物对应基因名称;Cytoscape 3.9.0构建化合物-靶点网络;通过GeneCards、OMIM、TTD、DisGeNET和DrugBank数据库筛选衰老相关基因;取交集获取红花黄色素-衰老共同基因;利用R软件(clusterProfiler包)和微生信平台对交集靶点基因进行GO和KEGG通路富集分析;采用Cytoscape 3.9.0软件进行化合物-靶点-通路网络构建与可视化分析;绘制蛋白互作(protein proteininteraction,PPI)网络并获取核心基因;通过TRRUST和MetaScape数据库进行转录因子及相关调控基因富集;利用LeDock和PyMOL软件对化合物与核心靶点基因行分子对接;最后,利用DisGeNET数据库获取靶点类型信息。结果得到386个红花黄色素作用相关基因,913个衰老相关基因,两者交集靶点共71个。富集分析显示共涉及129条信号通路及1519种生物过程、107种分子功能、71种细胞组分;靶点主要涉及糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、癌症蛋白聚糖通路、MAPK信号通路,获得STAT3、PIK3CA、TP53、EP300、VEGFA、EGFR、PTPN11、JUN、CCND1和PTPN110个节点基因、53个相关转录因子;分子对接显示,红花黄色素4种化合物SYA、SYB、HSYA、AHSYB与核心靶点之间均具有稳定的结合能力;作用靶点类型主要涉及激酶、转录因子、信号分子、核酸结合蛋白、酶调制器等类型。结论红花黄色素抗衰老的作用是多靶点和多途径的,与衰老相关靶点共有71个交集靶基因,对这些靶基因进行GO功能富集分析,发现红花黄色素延缓衰老的基因功能;并进行KEGG通路富集分析,发现红花黄色素延缓衰老是一个多重复杂的过程,并且通过调节多个信号通路共同发挥作用。这为实验室及临床进一步探究药物抗衰老作用的机制提供了一定依据。

基于生物信息学分析探讨羟基红花黄色素A通过JAK2/STAT3信号通路抑制缺血性脑卒中后神经元凋亡的机制

目的:利用生物信息学技术筛选并鉴定缺血性脑卒中(IS)的关键基因,基于基因富集分析结合相关实验探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对脑缺血损伤后神经元凋亡的影响及机制。方法:从GEO数据库获得IS相关的样本数据,进行差异表达基因(DEGs)分析及基因富集分析,获得关键基因与关键信号通路,并通过体内外实验进行相关验证。建立Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO/R),采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和免疫荧光检测Janus激酶2(JAK2)/信号传导转录激活因子3(STAT3)通路的磷酸化水平及凋亡相关蛋白的表达;线粒体膜电位探针检测线粒体膜电位情况进而明确细胞凋亡水平。利用HT-22海马神经元细胞建立糖氧剥夺/复糖氧模型(OGD/R),使用JAK2/STAT3信号通路抑制剂进一步验证HSYA对神经元凋亡的作用机制。结果:通过生物信息学分析研究GSE22255数据集发现23个显著上调的DEGs和2个显著下调的DEGs。富集分析发现其与脂多糖的反应、细胞凋亡的调控、炎症反应、急性炎症反应调节、分子干预信号通路相关。生物过程方面,通过建立特征基因功能网络发现,特征基因与急性炎症反应、凋亡信号通路的调节、脂多糖介导的反应、稳态分子的反应等功能相关。基因集富集分析显示,肿瘤坏死因子α(TNF-α)介导的核因子κB(NF-κB)信号通路、血红素代谢信号通路、细胞凋亡相关信号通路、JAK/STAT3信号通路、P53信号通路发挥着关键作用。筛选出JAK2/STAT3信号通路和凋亡相关通路为研究重点。与假手术组比较,MCAO/R组大鼠磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和促凋亡相关蛋白表达升高(P<0.001),抑凋亡相关蛋白表达降低(P<0.001)。HSYA干预后可抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化激活和神经元凋亡(P<0.01)。体外实验显示,OGD/R组JAK2/STAT3通路被磷酸化激活,促凋亡相关蛋白表达较Normal组升高(P<0.001),抑凋亡相关蛋白表达低于Normal组(P<0.001);加入抑制剂AG490后JAK2、STAT3磷酸化程度降低(P<0.01)。与Normal组比较,OGD/R组凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平升高(P<0.001),Bcl-2表达降低(P<0.001)。HSYA抑制了神经元的凋亡(P<0.01)。结论:JAK2/STAT3信号通路和凋亡相关信号通路在IS后发挥着关键作用,HSYA可能通过调控JAK2/STAT3信号通路,抑制缺血缺氧后神经元凋亡,从而减轻脑损伤。

羟基红花黄色素A对实验性自身免疫性肝炎小鼠的保护作用

目的 利用刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的肝损伤小鼠模型,研究羟基红花黄色素A(hydroxylsafflor yellow A,HSYA)对实验性自身免疫性肝炎小鼠的保护作用。方法 36只BALB/c小鼠随机分为6组,Sham组、Con A组、HSYA低剂量组(5 mg/kg)、HSYA中剂量组(10 mg/kg)、HSYA高剂量组(20 mg/kg)、Sham+HSYA高剂量组(20 mg/kg),每组小鼠各6只。将各组小鼠称质量并记录,通过腹腔注射给药的方式对其进行3 d HSYA预处理,处死小鼠前12 h,尾静脉注射Con A,制作实验性自身免疫性肝炎小鼠模型,最终以二氧化碳吸入法处死小鼠并取材备用。使用全自动生化分析仪检测各组小鼠血浆AST和ALT水平,并进行组间比较。肝组织进行苏木精-伊红染色,镜下观察肝脏组织学变化。应用ELISA检测血浆中TNF-α、 IL-17、IL-10水平。结果 Con A组小鼠体内TNF-α、 IL-17、IL-10水平(F=21.19、F=13.12、F=3.209,P均<0.05)及ALT、AST水平(F=274.33、F=214.91,P均<0.05)高于Shan组,并伴有肝细胞大片坏死。HSYA中剂量和HSYA高剂量组小鼠体内炎症因子水平及氨基转移酶水平低于ConA组,同时伴肝细胞坏死区域缩小。结论 Con A成功诱导小鼠肝组织损伤,HSYA对实验性自身免疫性肝炎小鼠具有保护作用。

穴位注射红花黄色素联合四逆酸枣仁合方在首发中风后不寐(肝郁血虚型)患者中的应用效果

目的 研究穴位注射红花黄色素联合四逆酸枣仁合方在首发中风后不寐(肝郁血虚型)患者中的应用效果。方法 选取158例首发中风后不寐(肝郁血虚型)患者作为研究对象,将其随机分为常规组、观察组,每组各79例。在常规西药治疗的基础上,常规组行穴位注射红花黄色素治疗,观察组行穴位注射红花黄色素联合四逆酸枣仁合方治疗,两组均治疗4周。比较两组治疗4周后的临床疗效和治疗前、治疗4周后中医证候积分、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)、脑卒中专用生活质量(SS-QOL)量表评分、血清神经递质水平、血清核转录因子-κB(NF-κB)、促食欲素A水平,以及不良反应发生率。结果 治疗4周后,观察组临床总有效率高于常规组(P<0.05);观察组中医证候积分、PSQI和血清去甲肾上腺素、P物质、NF-κB、促食欲素A水平均低于常规组,SS-QOL量表评分和血清多巴胺、5-羟色胺水平高于常规组(均P<0.05);两组不良反应总发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 穴位注射红花黄色素联合四逆酸枣仁合方治疗首发中风后不寐(肝郁血虚型)患者疗效显著,可有效地缓解临床症状,调节神经递质水平,促进病情恢复。

HPLC法测定参梅养胃颗粒(无蔗糖)中羟基红花黄色素A的含量

目的:建立HPLC法测定参梅养胃颗粒(无蔗糖)中羟基红花黄色素A的含量。方法:采用色谱柱ODS-C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm);以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)为流动相等度洗脱;检测波长403 nm;柱温25℃;进样量10μL;流速1.0 mL/min。结果:羟基红花黄色素A在0.0480~0.7196μg范围内线性关系良好,平均加样回收率(n=9)为101.74%, RSD值为1.6%。结论:该方法操作简便、准确、重复性好,测定结果稳定,可以作为参梅养胃颗粒(无蔗糖)中羟基红花黄色素A的含量测定方法。

羟基红花黄色素A抑制非小细胞肺癌增殖、迁移和体内成瘤的作用研究

观察红花花瓣提取物羟基红花黄色素A(hydroxysaffloryellowA,HSYA)对人非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299增殖、迁移及体内成瘤的影响。方法 实验分为空白对照组、HSYA10μmol/L组、HSYA100μmol/L组。选取非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299,空白组常规培养液培养,各组加入相应浓度HSYA培养,48小时后显微镜下拍照,CCK-8法检测细胞增殖能力变化,划痕愈合实验检测细胞迁移能力情况,裸鼠皮下成瘤实验检测体内成瘤能力情况变化。结果 HSYA处理48小时后,相比空白对照组,不同浓度的HSYA(10μmol/L、100μmol/L)处理均能显著抑制A549和NCI-H1299细胞生长,且呈浓度依赖性(P均<0.05);相比空白对照组,HSYA100μmol/L组处理后,A549细胞迁移速率减慢(P均<0.05);裸鼠皮下成瘤实验提示,相比对照组,HSYA(2.25mg/kg,1天2次,腹腔注射)后A549和NCI-H1299肿瘤生长减缓,肿瘤重量减少(P均<0.05)。结论 HSYA能显著抑制人非小细胞肺癌细胞A549和NCI-H1299增殖、迁移及体内成瘤能力,在非小细胞肺癌治疗可能具有一定的应用价值。