红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作及神经精神行为异常的性别差异

目的观察红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的癫痫大鼠模型神经精神行为表现,在此基础上比较不同性别大鼠在癫痫急性发作和缓解期感觉、运动及学习记忆行为学实验中表现的性别差异,并探讨其可能机制。方法4周龄健康SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组22只,雌雄各半。腹腔注射KA诱导癫痫模型,观察各组大鼠癫痫发作潜伏期及2 h内发作次数,采用Racine等级标准评定癫痫急性发作等级,并记录皮层脑电图;采用旷场实验、平衡木行走、高架十字迷宫、Y迷宫及新物体识别等行为学实验观察大鼠感觉、运动及学习记忆能力;ELISA法检测海马组织中γ-氨基丁酸(gama aminobutyric acid,GABA)水平,尼氏染色观察海马神经元损伤情况,Western Blot检测海马区Synapsin-1和Synaptotagmin 1蛋白表达。结果雄性及雌性SD大鼠在接受KA腹腔注射后均表现出典型的癫痫发作行为,但与雄鼠相比,雌鼠癫痫急性发作的潜伏期显著缩短(P=0.014)、2 h内发作总次数显著减少(P=0.019),且癫痫发作达到Ⅳ~Ⅴ级的时间早于雄性大鼠(P<0.01)。癫痫缓解期的行为学结果显示,与对照组比较,模型组大鼠在旷场实验中的总运动距离及中央区域运动距离增多,雌性模型大鼠的理毛次数显著减少(P<0.01)且与雄性模型大鼠比较具有显著性差异(P<0.01);在平衡木行走实验中完成任务所需时间及评分增加;在高架十字迷宫中雄性模型大鼠在封闭臂的探索次数增加;在Y-迷宫及新物体识别实验中的新异臂/物体优先指数减少。与对照组比较,模型组大鼠海马神经元损伤,且海马GABA浓度及Synapsin-1和Synaptotagmin 1的蛋白表达均显著下降,但无性别差异。结论KA腹腔注射可成功诱导大鼠癫痫模型,且不同性别大鼠在癫痫急性发作特点和缓解期感觉、运动行为学实验中的表现有所差异,但不同性别癫痫模型大鼠海马GABA浓度及突触可塑性相关蛋白表达无显著性差异。因而,导致KA诱导癫痫大鼠行为反应性别差异的机制有待深入探究。

重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因转染对红藻氨酸致痫大鼠行为及脑电图的影响

目的探讨重组腺相关病毒介导人源性神经肽Y基因(rAAV2/1-hNPY-EGFP)转染对红藻氨酸(kainicacid,KA)诱导大鼠癫痫发作行为和脑电图的影响。方法 66只雄性Wistar大鼠分为点燃组(n=54)和对照组(n=12)。点燃组以大鼠右侧海马CA3区注射0.4μg/μlKA1.5μl5次造成慢性癫痫大鼠模型后,又随机分为KA组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)组和神经肽Y(neuropeptide,NPY)组(n=18)。EGFP组脑室注射rAAV2/1-EGFP10μl,滴度为5×1011/ml;NPY组注射rAAV2/1-hNPY-EGFP10μl,滴度为5×1011/ml。分别于注射后2、3、4周,再次右侧海马CA3区注射1.5μlKA诱导癫痫发作,观察各组大鼠的行为和脑电图改变。结果对照组无癫痫发作;在发作级别、发作潜伏期、脑电痫波密度和脑电波幅方面,2、3周时NPY组与KA组、EGFP组相比无明显差异(P>0.05);4周时NPY组与KA组、EGFP组相比有明显差异(P<0.05),表现为发作级别降低,发作潜伏期延长,脑电痫波密度和脑电波幅均减少。结论 rAAV2/1-hNPY-EGFP基因转染可以抑制KA诱导的大鼠癫痫发作和海马神经元放电。

红藻氨酸快速点燃大鼠癫痫模型的建立及其海马神经发生

目的建立红藻氨酸(kainite acid,KA)快速点燃癫痫模型,观察行为学、脑电图(electroencephalogrom,EEG)、海马病理改变及其神经发生。方法立体定向连续注射KA于侧脑室致痫。视频监测、深部EEG、Nissl染色、BrdU免疫组化染色。结果大鼠行为学及深部EEG呈急性期、静止期和慢性期3个阶段性变化。根据Racine行为学分级法,Ⅴ级8只,Ⅳ级12只,Ⅲ级2只,Ⅱ级2只;深部电极描记出起始于海马并向杏仁核、额叶皮质等传导癫痫样波;病理变化提示长期癫痫发作会导致海马锥体细胞逐渐变性、坏死、丢失。BrdU标记细胞主要分布于海马齿状回,并在癫痫发作后显著增多(P<0.01)。结论KA快速点燃大鼠模型为模拟颞叶癫痫的理想动模型,癫痫发作后神经发生显著增高。

蝎毒耐热蛋白对红藻氨酸诱导的海马NPY能神经元损伤的影响

目的:观察蝎毒耐热蛋白(SVHRP)对红藻氨酸(KA)诱导的原代培养海马神经肽Y(NPY)能神经元损伤的影响及其可能的分子机制。方法:制备原代培养10d的大鼠海马神经元并用神经元特异性MAP-2抗体进行鉴定,将鉴定成熟的神经元用终浓度为20μg/ml的SVHRP和10μmol/L的KA处理,共孵育24h后,分别用硫堇染色、MTT实验检测不同给药组残存神经元的数目和活力,用免疫细胞化学和RT-PCR技术检测NPY-IR和NPYmRNA的表达。结果:MAP-2-IR结果显示85%以上为阳性成熟神经元;硫堇染色显示,同模型组比较,模型给药组未见神经元形态异常,并且神经元数目未见明显减少(P<0.05);MTT实验显示,模型给药组海马神经元存活率较模型组明显增高(P<0.05);NPY-IR检测表明,模型组NPY阳性细神经元数目明显减少,模型给药组NPY阳性神经元数目明显多于模型组(P<0.01);RT-PCR实验表明,单独给药组海马神经元内NPYmRNA表达较其他三组明显增多(P<0.05)。结论:SVHRP对KA诱导的原代海马神经元的兴奋毒性损伤具有明显的保护作用,可能与SVHRP促进NPY合成有关。

红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作时海马mGluR5 mRNA表达变化的动态观察

目的 探讨红藻氨酸 (KA,10 mg·kg- 1 )诱导大鼠癫痫发作时海马代谢型谷氨酸受体 5亚型 (m Glu R5 ) m RNA表达变化的病理特征 .方法 采用同位素 S35 d ATP标记寡核苷酸探针原位杂交法检测大鼠癫痫发作前后海马 m Glu R5m RNA的表达变化 ,通过图像分析系统进行定量处理 .同时观察大鼠行为学及脑电变化 .结果 KA注射后大鼠均出现严重边缘性惊厥 ,脑电图表现为阵发性癫痫样放电 .正常大鼠海马中有丰富的 m Glu R5 m RNA表达 ,以齿状回和 CA1区表达较高 .KA注射后海马各区 m Glu R5 m RNA表达呈时间依赖性下调 ,CA1,CA3,CA4区表达在 2 h呈现出显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,齿状回区表达在 1h即有显著性差异 (P<0 .0 1) ,至 72 h各区表达均至最低 .结论 m Glu R5在癫痫发作后表达下降可能有助于限制神经元网络的异常兴奋性 。

杏仁核注射红藻氨酸诱导的边缘叶发作癫痫大鼠海马Bad去磷酸化和Bcl-2表达上调

应用红藻氨酸(kainicacid,KA)诱导的大鼠边缘叶发作癫痫模型,检测Bad(Bcl-2-associateddeathprotein)、14-3-3、磷酸化Bad、Bcl-XL和Bcl-2在癫痫大鼠海马神经元的表达。单侧杏仁核内注射KA诱导癫痫发作,持续记录脑电和局部脑血流(regionalcerebralbloodflow,r-CBF),发作1h后静脉注射30mg/kg安定终止发作,然后分别用cresylviolet染色和TUNEL染色观察海马神经元存活和凋亡的变化;用免疫荧光、Westernblot和免疫沉淀检测海马Bad、14-3-3、磷酸化Bad、Bcl-XL和Bcl-2的表达。结果表明,发作终止8h时出现TUNEL阳性细胞,24h时达高峰;发作诱导Bad去磷酸化,去磷酸化的Bad与分子伴侣蛋白14-3-3解离,然后Bad与Bcl-XL结合;磷酸化Bad表达减少而Bcl-2表达增加;发作前后r-CBF无明显变化。以上结果提示,癫痫发作诱导Bad的去磷酸化和Bcl-2表达上调,Bad的去磷酸化可能具有损伤作用,而Bcl-2的表达上调则对癫痫神经元损伤具有保护作用,但与脑缺血无关。

杏仁核注射红藻氨酸诱导大鼠边缘叶癫痫发作时海马中Smac和XIAP蛋白的表达

应用红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠边缘叶癫痫发作模型,检测第二个线粒体源的半胱天冬蛋白酶激活物/直接与凋亡抑制蛋白结合的低等电点蛋白(second mitochondrial activator of caspases/direct inhibitor of apoptosis protein-binding protein oflow isoelectric point[PI],Smac/DIABLO)和X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在癫痫大鼠海马神经元表达。单侧杏仁核内注射KA诱导癫痫发作,1 h后用安定终止发作,然后分别用TUNEL染色和cresvl violet染色观察海马神经元存活和凋亡的变化,用免疫荧光和Western blot检测海马Smac/DIABLO、XIAP和半胱天冬蛋白酶-9(caspase-9)的表达。结果表明,发作终止2 h时KA注射同侧海马CA3区细胞浆内Smac/DIABLO蛋白表达增加,4h时caspase-9出现裂解片断,8 h时出现TUNEL阳性细胞,24 h时达高峰。脑室内注射caspase-9抑制剂z-LEHD-fluoromethylketone(z-LEHD-fmk)可减少TUNEL阳性细胞,增加存活神经元。发作后KA注射同侧海马CA3区神经元caspase-9免疫反应性增强,Smac/DIABLO和XIAP弥散于整个神经元内。对侧海马未检测到TUNEL阳性细胞及Smac/DIABLO和XIAP蛋白的上述变化。以上结果提示,癫痫发作可诱导Smac/DIABLO蛋白从?

红藻氨酸诱导性癫痫中IL-6与c-Fos表达的比较

目的 探讨红藻氨酸 (KA)诱导性癫痫发作中相关脑区白细胞介素 6(IL 6)表达的时空规律和细胞学特征及其与c Fos的比较。方法 采用惊厥剂量KA(1 0mg·kg- 1 ,ip)诱导大鼠癫痫发作 ,记录行为 ,并分别取KA处理后 1 5、30min ,1、3、6、1 2及 2 4h的大鼠脑片 ,用免疫组化方法观察海马结构、梨状区及大脑皮层等相关脑区IL 6免疫反应 (IL 6ir)的变化特征 ,并与相应时空内的c Fos免疫反应 (Fos ir)相比较。结果 IL 6和c Fos均出现了在癫痫发作早期的快速表达 ,但IL 6ir的早期反应更为明显。KA后 1 5min海马结构内若干血管壁出现了明确的IL 6ir,30min时海马各亚区、梨状区、大脑皮层部位开始出现较强的IL 6ir阳性神经元 ,其数量明显多于阳性胶质细胞 ,KA后 3h以上各脑区IL 6ir进一步增强 ,6h后阳性神经元免疫反应性减弱 ,1 2～2 4h继续减弱 ,但阳性胶质细胞数量及IL 6ir强度变化不明显。与IL 6ir相比 ,Fos ir的变化较为短暂并且强度较弱 ,KA后 30min ,齿状回颗粒细胞层、海马各亚区锥体细胞层及梨状区等部位出现了微弱的Fos ir。结论 KA诱导癫痫发作过程中IL 6在相关脑区神经元内的表达迅速增加 ,明显早于c Fos。

红藻氨酸诱导PC12细胞凋亡及阿魏酸对神经元的保护作用

目的:探讨阿魏酸(ferulic acid,FA)对红藻氨酸(kainic acid,KA)诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法:采用50μmol/L KA诱导PC12细胞凋亡建立阿尔茨海默病神经细胞模型,然后将处理后的PC12细胞分为KA模型组和KA+FA(25、50和100μmol/L)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常对照组。采用MTT比色法检测PC12细胞的存活率;采用免疫细胞化学法观察PC12细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax和细胞色素C(Cyt C)的表达;annexinⅤ+PI双染流式细胞术检测PC12的细胞凋亡率;蛋白免疫印记技术检测PC12细胞中Bcl-2、Bax和Cyt C的表达水平。结果:MTT法和免疫细胞化学检测显示,与正常组相比,模型组PC12细胞的存活率明显下降,且细胞中Bcl-2表达减少(P<0.01),而Bax和Cyt C表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01),流式细胞术检测细胞的凋亡率显示,模型组细胞的凋亡率显著上升(P<0.01)。蛋白印迹术检测显示,模型组细胞中Bcl-2表达量减少,Bax和Cyt C表达量升高,与正常组比较差异显著(均P<0.01)。当采用FA干预后,与模型组相比,25、50和100μmol/L组细胞的存活率明显上升,细胞凋亡率减少,而且能增加Bcl-2阳性百分率和表达水平,明显减少Bax和Cyt C阳性百分率和表达水平,使Bcl-2/Bax比值增加(P<0.05或P<0.01)。结论:KA在50μmol/L时可明显诱导PC12发生凋亡,FA在25～100μmol/L时能显著抑制KA诱导的PC12细胞凋亡,其神经保护机制可能是通过抑制Bax和Cyt C的表达,升高Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路而提高神经细胞的存活率。

NO对红藻氨酸癫痫发作和IL-6表达的影响

目的 探讨脑内一氧化氮 (NO)介质对癫痫发作及白细胞介素 6(IL 6)表达的影响。方法 采用红藻氨酸 (KA)诱导大鼠癫痫发作 ,以一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂L 硝基精氨酸 (L NNA)和NO前体L 精氨酸 (L Arg)进行干预 ,从行为学评估及形态学的角度 ,对KA癫痫发作和IL 6的相关变化做了观察。结果 一次惊厥剂量的KA (1 0mg·kg- 1 )可使动物发生明显的时间相关性癫痫发作 ,并伴随着海马结构、梨状区及大脑皮层等相关脑区IL 6免疫反应(IL 6ir)的快速升高与增强。而经L NNA(50mg·kg- 1 )或与其等摩尔量的L Arg(40mg·kg- 1 )预处理后 ,其癫痫行为发生了明显变化。L NNA促进和加重了癫痫发作 ,KA给药后 3h许多动物死亡 ,而L Arg可使癫痫发作行为减缓。与行为干预相对应 ,L NNA对海马结构等相关脑区内的IL 6ir有明显的上调作用 ,L Arg则显示出相反的效应。结论 内源性NO介质对KA癫痫发作具有抑制作用 ,对IL 6的快速表达具有下调作用 。

Fluoro-Jade B法显示神经毒物红藻氨酸和MPTP致小鼠基底神经核损伤引起神经元的变性死亡

目的探讨应用Fluoro-JadeB(FJB)染色法检测基底神经核神经元变性死亡的方法。方法制备纹状体定位注射红藻氨酸(KA)损伤大鼠模型、腹腔注射MPTP损伤小鼠模型、以及培养纹状体神经元KA损伤细胞模型,用FJB荧光染色显示和分析变性死亡的神经元。结果FJB染色可清晰地显示KA和MPTP致大、小鼠损伤引起的变性神经元胞体和部分突起。在脑组织切片上,KA模型纹状体内、MPTP模型黑质致密部内分布许多FJB染色阳性的变性神经元,而对照组动物未见变性神经元。在培养纹状体神经元体系内,FJB也能清楚地显示KA损伤后变性的神经元。单位面积内计数FJB阳性神经元占培养纹状体神经元总数的比率(均值±标准差),KA损伤组为(8·42±1·09)%,较对照组(3·42±0·45)%明显增多(P<0·01)。结论FJB方法快速、简便、经济、可靠。可以用于脑组织切片和培养细胞显示变性神经元,能成功检测出KA和MPTP损伤后基底神经核的变性神经元。

左乙拉西坦对红藻氨酸致发育期癫痫幼鼠海马主穹窿蛋白表达的影响

目的:建立发育期慢性癫痫大鼠模型,观察海马主穹窿蛋白(MVP)的表达及左乙拉西坦(LEV)对其表达的影响。方法:腹腔注射红藻氨酸(KA)1 mg/kg(浓度0.5 mg/ml),建立大鼠慢性癫痫模型,注射后连续观察8 h,癫痫发作达5级以上并出现癫痫持续状态的大鼠,且两周后出现自发性反复惊厥发作者视为模型成功。将造模成功后的40只大鼠随机分为未治疗组(KA组)20只,左乙拉西坦治疗组(KA+LEV组)20只,另取40只大鼠腹腔注射生理盐水,并分为NS组20只、NS+LEV组20只。用药组均于癫痫自发性反复发作后开始用药,疗程为6周,然后将所有大鼠断头取脑,用免疫组化及RT-PCR法测定大鼠海马内MVP及其mRNA的表达。结果:(1)大鼠海马MVP的阳性细胞计数与MVP的mRNA表达趋势相一致。(2)NS组、NS+LEV组大鼠海马有少量MVP阳性细胞及mRNA表达,NS+LEV组MVP阳性细胞数及mRNA的含量与NS组相比差异无统计学意义(P>0.05);KA组MVP阳性细胞计数及mRNA的含量与NS组相比显著增高(P<0.05);KA+LEV组与KA组相比,MVP的阳性细胞及mRNA含量减少(P<0.05)。结论:MVP可能参与慢性癫痫耐药的发生,LEV可以控制大鼠痫性发作,并下调MVP的表达。

甘草黄酮对红藻氨酸致痫小鼠的抗癫痫作用研究

目的：明确甘草黄酮对红藻氨酸致痫小鼠在急性痫性发作期和自发性癫痫发作期的作用，并从神经元再生和苔藓纤维发芽探讨其可能机制。方法：雄性成年ICR小鼠经腹腔内单次注射红藻氨酸25 mg／kg诱导急性痫性发作，在红藻氨酸致痫前7 d（预防性给药）或致痫后24 h始（治疗性给药）给予小鼠甘草黄酮混合物灌胃（每天1次，连续7 d）。观察急性痫性发作的潜伏期、发作程度及持续时间；模型小鼠第2天起采用录像监控自发性癫痫的发作，一共6周；BrdU免疫组织化学和Timm染色分别检测神经元再生和苔藓纤维发芽。结果：预防性甘草黄酮低中高剂量给药对模型小鼠急性痫性发作的潜伏期、发作程度和发作持续时间均无明显影响；而甘草黄酮预防性用药和治疗性用药从造模后第三周起均能减少模型小鼠自发性癫痫发作频率[（0．58±0．15）次／d 和（0．38±0．38）次／d 与（1．23±0．23）次／d， P＜0．05）]。同时，甘草黄酮预防性和治疗性用药均能减少模型小鼠脑组织神经元再生（15．6±2．6和17．1±3．1与28．9±3．5， P＜0．05）和苔藓纤维发芽（1．33±0．31和1．56±0．42与3．0±0．37， P＜0．05）。结论：甘草黄酮对癫痫急性发作无影响，但对自发性癫痫形成具有一定防治作用，该作用可能与减少神经元再生和苔藓纤维发芽有关。

神经生长因子对红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡和野生型P^(53)表达的影响

目的 探讨外源性神经生长因子 ( NGF)对癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡与野生型 P5 3 ( wt P5 3 )蛋白表达有无抑制作用。方法 采用 KA诱导癫痫发作大鼠模型。以 TUNEL方法标记 DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化 SP法检测 wt P5 3 蛋白。观察大鼠癫痫发作 4 0 h(注射 KA4 8h)后其海马 CA1神经细胞凋亡和 wt P5 3 蛋白表达情况及外源性 NGF对它们的影响。结果 大鼠急性癫痫发作后 ,其凋亡细胞和 wt P5 3 蛋白表达均明显增加 ,wt P5 3 蛋白表达与细胞凋亡呈正相关 ( r =0 .83 9,P <0 .0 1 ) ;给予 NGF,凋亡细胞数及 wt P5 3 表达均显著性降低 ( P<0 .0 1 )。结论 外源性 NGF对癫痫所致神经细胞凋亡有抑制作用 ,其抑制凋亡的分子机制可能是通过抑制 wt P5 3蛋白表达而实现的。

一次给予红藻氨酸对大鼠脑内细胞信息传递通路及癫痫敏感性的作用

本实验给大鼠皮下注射红藻氨酸（ＫＡ，１０ｍｇ／ｋｇ）诱发癫痫活动，７２ｄ后进行深部前梨状皮层（ｄｅｅｐＰｒｅｐｙｒｉｆｏｒｍｃｏｒｔｅｘ，ＤＰＣ）电点燃刺激（ｋｉｎｄｌｉｎｓ），该组动物点燃形成加速，或再给予同样剂量ＫＡ，其再次诱发的癫痈活动明显加重。ｃ－Ｆｏｓ免疫反应活性（ｃ－Ｆｏｓ－ｉｒ）作为神经元兴奋的标志，标绘再次诱发癫痫活动时大鼠脑内细胞信息传递通路，并与对照组，即７２ｄ前给予生理盐水（Ｎ．Ｓ，１ｍｌ／ｋｇ）动物比较。结果表明，两组动物脑内细胞信息传递通路相同，实验组动物海马（ＨｉＰｐｏｃａｍｐｕｓ）内ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｊｕｎ基因表达呈非同步加速；海马邻近脑区内嗅皮层（ｅｎｔｏｒｈｉｎａｌｃｏｒｔｅｘ，Ｅｎｔ）激活加速，海马及Ｅｎｔ等部位前脑啡肽原（ｐｒｏｅｎｋｅｐｈａｌｉｎ，ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ合成明显增加，提示一次给予ＫＡ诱发动物出现短暂癫痫活动后，可使该动物对癫痫刺激敏感性增强长期存在，这可能与脑内ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｊｎｎ表达非同步加速及快速启动前脑啡肽原基因表达有关。

动态观察红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡与wtp53表达的意义

目的 :探讨红藻氨酸 (KA)致痈大鼠海马神经细胞凋亡与野生型p5 3(wtp5 3)蛋白表达的关系。方法 :采用KA诱导癫痫发作大鼠模型。以TUNEL方法标记DNA片段 ,原位检测凋亡细胞 ;免疫组化SP法检测wtp5 3蛋白。结果 :注射KA 72h后 ,癫痫发作大鼠海马CA1区凋亡神经细胞达高峰及wtp5 3蛋白表达在 2 4h大量出现 ;wtp5 3蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。结论 :癫痫神经细胞凋亡与wtp5 3表达密切相关 ;痫性发作使wtp5 3表达上调 ,从而诱导神经细胞凋亡。

红藻氨酸致大鼠脊髓损伤过程中c-fos mRNA 和 Fos的表达变化

为探讨即早反应基因（ｉｍｍｅｄｉａｔｅｅａｒｌｙｇｅｎｅｓ，ＩＥＧｓ）在神经损伤过程中的变化规律，用原位分子杂交和ＰＡＰ免疫组织化学方法观察了大鼠脊髓内注射红藻氨酸（ｋａｉｎｉｃａｃｉｄ，ＫＡ）后１ｈ至１４ｄ的不同时间点，Ｌ１～３脊髓腹、背角神经元中ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ和Ｆｏｓ免疫阳性信号的变化。结果表明，ＫＡ致脊髓损伤后２～８ｈ脊髓腹角运动神经元中ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ的表达和Ｆｏｓ免疫组织化学阳性反应明显增强，１２ｈ恢复至正常水平，伤后３ｄ又明显增强；而脊髓背角神经元内仅在伤后２～６ｈ明显增加。提示ＫＡ对脊髓神经元的选择性毒性作用；运动神经元ｃ－ｆｏｓ表达的再次增强与ＫＡ所致神经元的不可逆变性有关，亦可看作是神经元损伤后死亡的先兆之一。

红藻氨酸致痫大鼠海马区神经元凋亡的动态变化

目的探讨红藻氨酸(kainicacid,KA)诱导的大鼠癫痫状态海马神经元的形态学变化、凋亡情况及抗痫药物的神经保护作用。方法90只Wistar大鼠随机分为对照组、KA组和卡马西平(CBZ)组,后两组再按癫痫发作后1h、4h、12h、24h、48h和72h不同时点分为6个亚组。KA注射后,观察大鼠癫痫发作后的行为学变化;采用HE染色法观察大鼠癫痫状态海马CA1、CA3区神经元形态学改变;采用原位细胞凋亡检测法观察癫痫状态海马CA1、CA3区神经元凋亡情况。结果KA注射后,大鼠出现严重的惊厥;在癫痫发作后12h,海马CA1区、CA3区开始出现凋亡细胞[CA1区:KA组(6.53±1.36)个,CBZ组(5.85±1.68)个;CA3区:KA组(9.58±1.63)个,CBZ组(7.36±1.27)个],48h凋亡细胞达到峰值(P<0.01)[CA1区:KA组(42.263±3.28)个,CBZ组(35.39±2.36)个;CA3区:KA组(57.64±12.76)个,CBZ组(38.37±13.65)个]。经CBZ干预后凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论癫痫发作后的迟发性神经元死亡很可能是由凋亡引起的,CBZ可抑制癫痫状态海马神经元凋亡。

银杏叶提取物预处理对红藻氨酸致痫大鼠神经肽Y表达的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)预处理给药对癫痫大鼠的干预效应及其与神经肽Y(NPY)表达的关系,以探讨GBE的抗癫痫机制。方法雄性SD大鼠侧脑室注射红藻氨酸(KA)建立癫痫动物模型,将72只SD大鼠随机均分为假手术组(A组)、GBE对照组(B组)、癫痫模型组(C组)、GBE预处理组(D组),各组再分为造模成功后6、12、24 h处死这3个亚组,每个亚组6只大鼠。采用HE染色观察海马组织中神经元细胞形态变化,用免疫组织化学技术测定海马组织中NPY蛋白的表达。结果 D组大鼠癫痫发作级别及神经元损害较C组降低;C组3个亚组的大鼠海马组织中NPY蛋白表达较A组相对应的各亚组明显增多(P<0.05);D组中3个亚组大鼠海马组织中NPY蛋白的表达较C组相对应的各亚组明显增多(P<0.05);B组与C组相比相关指标均无统计学意义;同组内6、12、24 h 3个时间点NPY蛋白表达呈上升趋势。结论 GBE预处理给药有一定的抗癫痫作用,其抗癫痫的机制与减轻神经元的损害、减轻癫痫发作程度及NPY蛋白表达上调有关。

红藻氨酸致痫后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的反应性变化

目的研究红藻氨酸(Kainic acid, KA)诱导大鼠癫痫发作后海马内神经元和星形胶质细胞的反应变化情况。方法立体定向大鼠侧脑室内注射KA引起大鼠癫痫发作,用抗即早反应基因Fos蛋白和抗神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法,分别观察痫性发作后在各时间点反应性神经元和星形胶质细胞在海马各区的分布情况。结果KA诱导大鼠癫痫发作后,海马内Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多。癫痫发作30 min后GFAP开始增多,1 h达高峰;1 h 后Fos阳性产物开始增多,2 h达高峰。结论海马内反应性的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作后增加,反应性星形胶质细胞可能参与癫痫的发生及其调节。