二化螟体内乙酰胆碱酯酶的分布及纯化方法

研究了二化螟Chilosuppressalis乙酰胆碱酯酶 (AChE)的体躯和亚细胞分布 ,并用凝胶过滤层析和 2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明 :二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部 ,而成虫胸部乙酰胆碱酯酶的活性最低 ,显著低于头部和腹部。成虫体内AChE的活性明显高于幼虫。在亚细胞的分布上 ,乙酰胆碱酯酶主要位于膜上 (86 % ) ,近 46 %的活性存在微粒体中。在 3种纯化乙酰胆碱酯酶的方法中 ,以 3 羧基苯基 乙基二甲基铵作配体的亲和层析法纯化效果最佳 ,乙酰胆碱酯酶的最高纯化倍数为 5 36 0 5倍 ,产率 30 46 %。

致病疫霉的分离培养和单孢纯化方法

由致病疫霉引起的晚疫病是番茄、马铃薯上最严重的病害之一,近年来为害日益严重,引起了广大植病工作者的重视.开展病原菌生理小种鉴定、致病性测定、室内药剂筛选、抗药性监测、病原菌的遗传变异和抗病育种等许多研究工作都要用到病原菌种[1～5],而且在研究真菌的遗传和变异、特征和同宗或异宗配合等现象时,还要求菌种从单个孢子繁殖而来[5],但由于致病疫霉的寄生性很强,很难分离培养和得到纯菌株[1,6].笔者在前人研究的基础上,进行了进一步的探索,以期找出更简便、更有效的方法,解决致病疫霉分离纯化困难的问题.

人、猪、鼠血管内皮及平滑肌细胞培养与纯化方法的改进

对培养和纯化猪主动脉内皮细胞、人脐静脉内皮细胞、猪和鼠主动脉平滑肌细胞的方法进行改进。对其鉴定方法进行了讨论。用胶原酶或胰酶消化法 ,或机械法分别从猪主动脉、人脐静脉、鼠主动脉获得内皮细胞和平滑肌细胞进行培养 ,用光学相差显微镜、免疫组化的方法进行鉴定。结果显示 ,相差显微镜观察 :人脐静脉内皮细胞接种后 2～ 3小时贴壁 ,继而铺开生长。在视野内形成散在细胞团。细胞呈铺路石样排列的单层。随着传代次数增多 ,可见核分裂、双核及多核。猪血管内皮细胞呈鹅卵石样 ,多角形 ,生长分裂旺盛时可见两个或多个核。猪和鼠的平滑肌细胞在相差显微镜下外观为长梭形 ,细胞生长致密时排列成束 ,相互平行 ,并且重叠生长 ,表现为典型的“波峰”与“浪谷”状。猪血管内皮细胞 Di I- Ac- L DL 染色 ,在荧光显微镜下显示特征性的黄绿色荧光。人 因子抗原免疫组化检测人脐静脉内皮细胞 ,显微镜下可见核周胞浆呈现阳性反应。免疫组织化学法进行平滑肌细胞 α-肌动蛋白染色 ,显微镜下见细胞浆内着色。本文介绍的培养及纯化猪血管内皮细胞、猪平滑肌细胞。

天然药物——多糖的主要生物活性及分离纯化方法

多糖具有复杂的多方面的生物活性和功能。本文综述了多糖的抗肿瘤、抗病毒、抗炎等方面的主要生物活性。多糖是大分子物质,且不同于蛋白质等大分子,它的分离纯化方法与手段有其特殊性,而通过分离纯化获得的均一的多糖组分又是进行结构分析、药理和构效关系等研究的首要条件。本文根据文献报道并结合本实验室的工作经验对多糖的各种分离纯化方法进行了介绍。

小麦胚乳A、B型淀粉粒分离纯化方法研究

为了能够准确研究小麦籽粒胚乳中A、B型淀粉粒的形成机理、化学组分及理化特性,对前人分离提纯A、B型淀粉粒的方法进行改进,提出了适于小麦A、B型淀粉粒分离提纯的常量法和微量法。用4个不同淀粉含量类型的小麦品种籽粒对此方法进行验证,结果表明4个品种A、B型淀粉粒在常量法中的分离纯度分别达到79.46%~85.23%和90.27%~96.43%,在微量法中的分离纯度分别达到92.68%~96.70%和96.48%~99.00%。在常量法和微量法中,A型淀粉粒的分离纯度与品种淀粉含量成正相关,B型淀粉粒分离纯度与品种淀粉含量成负相关;而A、B型淀粉粒在两种方法中的分离产率与品种淀粉含量没有显著关系。

肾综合征出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗纯化方法的研究

目的 建立简便、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。方法 采用超滤浓缩、醋酸锌沉淀和柱层析（亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析）等方法，对出血热原代地鼠肾细胞灭活疫苗进行提纯对比试验。结果 用超滤浓缩和Sepharose 4FF凝胶柱层析或用醋酸锌沉淀和凝胶柱层析，纯化的疫苗均可达到质量标准，而用 cellufine sulfate gel亲和层析和离子交换层析均不理想。结论 建立了经济、适合大规模肾综合征出血热灭活疫苗的纯化方法。

植物胆碱酯酶提取纯化方法研究

比较了几个小麦品种中胆碱酯酶的活性,筛选出“辽春10号”小麦品种为胆碱酯酶制备适宜的酶源。以“辽春10号”小麦为试材,测试分析了提取液种类、用量及其pH值,过滤方式和离心分离条件等对粗酶液胆碱酯酶活性的影响;研究了胆碱酯酶的硫酸铵最大盐溶、盐析饱和度,以及硫酸铵分段盐析、透析和凝胶柱层析对胆碱酯酶纯化效果的影响,确定了胆碱酯酶提取纯化方法。

重组人源性抗HBsAg Fab抗体纯化方法的比较研究

抗HBsAgFab抗体被认为在预防和治疗HBV引起的肝病中具有重要的作用。为了建立稳定的、适于生产应用的重组人源性抗HBsAgFab抗体的纯化工艺 ,本实验对不同纯化方法进行了比较研究。比较了抗Fab抗体亲和层析、ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析等 3套纯化工艺在酵母发酵生产的重组人源性抗HBsAgFab抗体纯化中的效率。结果显示 ,抗Fab抗体亲和层析柱纯化酵母表达的重组Fab ,纯度为 96 8% ,但回收率偏低 ,只有30 %～ 4 0 %。ScFv单克隆抗体亲和层析纯化的重组Fab ,纯度为 97 5 % ,回收率达 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较小规模的生产应用。离子交换层析纯化的重组Fab ,纯度为 97% ,回收率为 75 %～ 85 %。该工艺能很好的适应较大规模的生产应用。以上结果表明 ,应用ScFv单克隆抗体亲和层析和离子交换层析纯化技术均能很好的纯化出重组人源性抗HBsAgFab抗体 ,这两种纯化工艺不仅大大节约纯化成本 ,且纯化效率和回收率有很大提高。

原代小胶质细胞及神经元细胞培养不同纯化方法的比较

目的探讨建立简便高效的原代小胶质细胞及神经元培养和纯化方法。方法神经元与胶质细胞混合培养后,采用温和胰酶消化法、恒温振荡法、利多卡因分离法及手摇法分离纯化小胶质细胞,无血清培养法及阿糖胞苷法分离纯化神经元,细胞计数、流式细胞术及细胞化学染色鉴定小胶质细胞及神经元。结果手摇法分离纯化小胶质细胞与温和胰酶消化法、恒温振荡法、利多卡因分离法比较,细胞产量更高、活性更好;无血清培养法培养神经元比阿糖胞苷法细胞纯度更高、活性更好,形成神经网络结构的时间也更早。结论手摇法分离纯化小胶质细胞是产量最高、简便、经济的方法,而无血清培养法更能提高神经元的纯度及活性。

二氢杨梅素纯化方法的比较研究

用活性炭、水提醇溶、水提石油醚萃取、大孔吸附树脂吸附和高速逆流色谱等5种方法对藤茶中粗提二氢杨梅素进行纯化并对其结果进行比较研究,结果表明5种方法均能获得较高纯度有二氢杨梅素,不同方法各有优缺点。

番茄红素的生产和纯化方法的研究进展

番茄红素是类胡萝卜素的一种,它具有很强的抗氧化、防癌、抗癌的作用,是目前国际上功能食品成分研究中的一个热点。文章综述了番茄红素的生产方法:有机溶剂提取法、微生物发酵法、化学合成法以及番茄红素油树脂的浓缩纯化方法:溶剂法、皂化法、色谱法、结晶法。并对番茄红素的应用开发前景作出展望。

凝血酶分离纯化方法的研究进展

血浆中凝血酶是近年开发的一种新型止血剂。对其分离纯化的等电点沉淀法、柠檬酸钡吸附法和氢氧化镁吸附法做了综述。

聚合氯化铝中Al_(13)形态的分离纯化方法及特性

采用柱层析法、SO24-/Ba2+沉淀置换法和乙醇-丙酮混合溶剂法对聚合氯化铝(PAC)中的Al13形态进行了分离提纯,采用Al-Ferron逐时络合比色法,27AlNMR,TEM,SEM,电位测定法,粒度测定法等多种现代分析仪器和方法对不同分离提纯方法得到的Al13形态进行了分析表征和比较,并初步比较研究了Al13形态的水处理效果.实验结果表明,不同分离纯化方法得到的Al13形态具有不同的结构形貌、粒度分布、电性和水处理效果.乙醇-丙酮混合溶剂法得到的Al13形态具有良好的纯度和水处理效果.该研究初步证实了Al13是PAC中的最佳絮凝形态.

柴胡总皂苷纯化方法研究

目的以柴胡皂苷A和柴胡皂苷D含量为指标,考察柴胡总皂苷最佳纯化方法。方法采用正丁醇萃取、D-101及AB-8大孔吸附树脂法分离纯化柴胡总皂苷,采用HPLC法测定不同纯化方法所得的总皂苷中柴胡皂苷A和柴胡皂苷D的含量。结果正丁醇萃取、D-101及AB-8大孔吸附树脂法纯化柴胡总皂苷中胡皂苷A+D的含量分别为5.93 mg/g、5.04 mg/g和10.81 mg/g,胡皂苷A+D的重量分别为26.81 mg、19.22 mg和38.70 mg。结论在本实验所用的方法中,AB-8大孔树脂法是分离精制柴胡总皂苷的最佳方法,且树脂可重复利用,具有良好的应用前景。

体外培养雪旺氏细胞纯化方法的探讨

本文比较了雪旺氏细胞体外培养的主要纯化方法,单纯酶消化法、阿糖胞苷抑制法、差速贴壁分离法、低浓度酶传代法、综合纯化法,以寻找有效的纯化方法。结果显示,综合纯化法获得的SCs纯度最高。

成年猪胰岛分离纯化方法的改良

目的:改良成年猪胰岛分离纯化技术,以优化胰岛制备方法方法:采用体、尾部区段猪胰腺胰管内灌注复合胶原酶震荡消化(胶原酶V+DNA酶)和改进的Dextran不连续密度梯度离心法分离纯化猪胰岛,并进行生物学活性测定和形态学观察.结果:胰腺被消化组织平均15±3.4g,消化后胰岛获得量4130±976IE/g胰腺组织.纯化后胰岛获得量为2320±669IE/g胰腺组织,胰岛纯度80%左右.胰岛素释放试验结果显示分离纯化后胰岛功能良好.病理切片,HE染色显示细胞团结构完整,细胞核清晰可见,胞质丰富.结论:经本方法分离纯化获得的猪胰岛具有较高的产量和纯度、结构完整、功能良好,可满足大动物移植实验和临床移植的需要.