陡脉冲电场对肝癌细胞线粒体跨膜电位的影响

为研究陡脉冲电场的凋亡效应,以人肝癌细胞为实验对象,采用激光共聚焦扫描显微镜观察陡脉冲电场作用下细胞内线粒体跨膜电位的实时变化。实验结果表明,陡脉冲电场能使线粒体跨膜电位下降,较高的电压峰值、较窄的脉冲宽度(600 V/100 ns)比较低的电压峰值、较宽的脉冲宽度(200V/1.6μs)能使线粒体跨膜电位更快地下降,并且在停止施加陡脉冲电场后线粒体跨膜电位仍然在不断下降,进而有可能使线粒体跨膜电位崩溃,从而诱导肝癌细胞凋亡,为陡脉冲杀伤肿瘤细胞提供了理论依据。

6-姜酚诱导白血病细胞凋亡中细胞内活性氧及线粒体跨膜电位的改变

目的:研究细胞内活性氧(ROS)及线粒体跨膜电位(ΔΨm)在6-姜酚诱导慢性粒细胞白血病K562细胞、人急性T淋巴细胞白血病MOLT4细胞凋亡中的变化,探讨线粒体途径在白血病信号转导中的作用。方法:用不同浓度6-姜酚作用K562细胞和MOLT4细胞,以2,7-二氯荧光素(2,7-d ichloro fluoresce inc iactate,DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,罗丹明-123为反映线粒体膜电位荧光探针,流式细胞仪检测ROS水平和线粒体膜电位的变化。结果:不同浓度6-姜酚作用K562细胞后,ROS水平显著高于对照组(P<0.01),ΔΨm显著低于对照组(P<0.01)。姜酚作用MOLT4细胞后,ROS显著高于对照组(P<0.05)。结论:6-姜酚能诱导白血病细胞株K562及MOLT4细胞ROS水平升高,降低细胞ΔΨm,通过线粒体途径介导白血病细胞凋亡。

心复康口服液对心衰大鼠线粒体跨膜电位及心肌能量代谢的影响

目的:探讨益气温阳活血化瘀方药心复康口服液对腹主动脉部分缩窄致充血性心力衰竭(CHF)模型大鼠心肌细胞线粒体跨膜电位(MMP)变化以及心肌能量代谢的影响.方法:将120只成年雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(SH组)、腹主动脉缩窄模型组(CAA组)、心复康治疗组(XFK组).采用腹主动脉部分缩窄法制作CHF大鼠模型,用高效液相法(HPLC)测定心肌高能磷酸盐的浓度,观察比较3组大鼠第6,8周测定的心肌高能磷酸盐的浓度.应用流式细胞仪检测心衰大鼠心肌线粒体MMP改变.结果:①各组大鼠心肌高能磷酸盐含量的变化:造模后6,8wk时CAA组高能磷酸盐ATP,ADP含量降低,AMP含量升高(P<0.01).XFK组心衰大鼠6,8wk测定ATP,ADP,AMP和TAN的含量均较模型组明显改善(P<0.01),8wk时XFK组各项指标较CAA组心衰大鼠心肌磷酸盐改善更加明显(P<0.01).XFK治疗组大鼠8wk时测定ATP,ADP,AMP和TAN的含量优于6wk(P<0.05).②各组心肌MMP的变化:6wk与8wk结果均显示,CAA组较SH组MMP显著下降(P<0.01),XFK组较CAA组MMP显著升高(P<0.01).8wk与6wk时MMP相比,CAA组、SH组、XFK组MMP无明显变化(P>0.05).结论:益气温阳活血化瘀中药心复康口服液能够明显改善CHF大鼠心肌线粒体MMP,并能改善能量代谢.

叠氮钠对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞线粒体跨膜电位的影响

目的 观察线粒体呼吸链复合体 IV（即细胞色素 C氧化酶）抑制剂叠氮钠 (NaN3)对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响，探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y细胞共同孵育，用微测量法测定线粒体复合体 IV活性，噻唑兰（ MTT）法测定细胞存活率，激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测线粒体跨膜电位变化。 结果 16～ 64 mmol/L叠氮钠与培养的 SH-SY5Y细胞共孵育 1 h，细胞线粒体细胞色素 C氧化酶活性下降； 16～ 128 mmol/L叠氮钠作用 1～ 8 h，细胞存活率下降，呈时间及剂量依赖性；叠氮钠使细胞线粒体跨膜电位的荧光强度值下降，尤以细胞突起内降低最为显著，门控内正常细胞数减少。结论 叠氮钠与培养的 SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞共孵育导致细胞损伤，其机制是使细胞线粒体跨膜电位下降，能量合成障碍，最终导致细胞死亡。

三氧化二砷诱导K562细胞线粒体跨膜电位的变化及其机制研究

目的 了解三氧化二砷 (As2 O3)诱导慢粒细胞系K562细胞株凋亡是否与线粒体跨膜电位 (△Ψm)改变有关及其可能机制。方法 联合应用As2 O3和巯基还原剂———二巯基苏糖醇 (DTT)、谷胱甘肽 (GSH)耗竭剂———丁硫堇 (BSO)处理K562细胞株 ,通过测定细胞内荧光染料碘化丙啶 (PI) /Rhodamine1 2 3(Rh1 2 3)的色强度分析线粒体跨膜电位 (△Ψm) ,通过测定细胞活力、亚G1期细胞含量及形态学观察等鉴定细胞凋亡。结果 As2 O3砷可明显诱导K562细胞线粒体△Ψm下降。BSO可加强As2 O3砷诱导的K562细胞凋亡和线粒体△Ψm下降 ,而DTT则有部分拮抗作用。在 2× 1 0 - 6 mol/LAs2 O3处理 72h的K562细胞 ,细胞膜完整但线粒体△Ψm下降的凋亡细胞 (PI- Rh1 2 3- )达 (2 6 .0± 2 .5) % ,当 1× 1 0 - 3mol/LBSO同时处理时 ,PI- Rh1 2 3- 细胞和凋亡细胞数上升达 (37.2± 5 .7) %和 (39.1± 4 .5) % ;而当 2× 1 0 - 4mol/LDTT同时处理时 ,PT- Rh1 2 3- 细胞和凋亡细胞数分别降至 (1 1 .5± 1 .3) %和 (1 5 .4± 3 .5) %。结论 线粒体跨膜电位下降是As2 O3砷诱导K562细胞凋亡的关键环节 ,其机制可能与巯基氧化有关 ,巯基可能是As2 O3诱导细胞凋亡的重要分子靶子。

苦参碱对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响

目的研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,随机分组,实验组细胞加入苦参碱溶液,对照组细胞加入等量培养液。采用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术分别检测MCF-7细胞凋亡及线粒体跨膜电位。结果 苦参碱对MCF-7细胞有明显的凋亡促进作用,0.25～2 mg/m苦l参碱处理组细胞早期凋亡发生率介于(4.17±0.25)%～(19.63±0.17)%之间,与对照组自发早期凋亡率(1.10±0.08)%相比均有显著差异(P<0.05),并随药物浓度的提高,凋亡的发生率也相应增高,呈正相关;苦参碱能够使线粒体跨膜电位(△ψm)降低,与药物浓度呈负相关。结论 苦参碱对乳腺癌MCF-7细胞有明显的促凋亡作用,可能是通过某些途径引起线粒体跨膜电位的下降,进一步导致MMP通道开放的结果。

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞的促凋亡作用及其对线粒体跨膜电位的影响分析

目的研究苦参碱对人乳腺癌(michigan cancer foundation-7,MCF-7)细胞的促凋亡作用及对线粒体跨膜电位的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,观察组细胞中加入不同浓度的苦参碱溶液,对照组细胞中加入等量的培养液。MCF-7细胞的凋亡与细胞线粒体跨膜电位采用流式细胞仪检测,MCF-7细胞的抑制率采用MTT的方法检测。结果苦参碱处理24h后观察组的MCF-7细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且随着浓度的升高而升高;苦参碱对于MGF-7细胞抑制率的结果显示,随着时间与浓度的增加苦参碱对于MGF-7细胞抑制率效应也随之增强,且差异有统计学意义(P<0.05);苦参碱处理24 h后的罗丹明染色阳性数低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),表明线粒体跨膜电位与浓度呈负相关。结论苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞有促凋亡的作用,其促凋亡的作用可能是通过降低线粒体跨膜电位而使MMP的通道打开。

白藜芦醇对Aβ_(1-42)刺激HUVECs后凋亡因子Bcl-2/Bax及线粒体跨膜电位的影响

目的探讨白藜芦醇对Aβ1-42刺激HUVECs后凋亡因子Bcl-2/Bax及线粒体跨膜电位和核因子-κB转运的影响。方法 5×101μmol/L Aβ1-42刺激HUVECs 24 h,白藜芦醇干预,干预质量浓度分别为160、80、40和20μg/L,CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜下观察核因子-κB转运情况,罗丹明染色后观察细胞线粒体跨膜电位,Western blot检测胞质和胞核核因子-κB表达以及Bcl-2/Bax蛋白表达。结果与Aβ1-42组比较,白藜芦醇各组均提高Aβ1-42诱导的HUVECs活力,提高细胞线粒体跨膜电位,抑制NF-κB转运,减少胞NF-κB表达,减少Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值(P<0.05)。结论白藜芦醇对Aβ1-42致HUVECs损伤有保护效应,可能与抑制NF-κB转运,提高细胞线粒体跨膜电位,增加Bcl-2/Bax比值有关。

白藜芦醇对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡与线粒体跨膜电位影响

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响。方法 20μmol/LAβ25-35刺激PC12细胞后分别给予160,80,40,20μg/L,CCK-8法检测细胞活力,AnnexinV-FITC流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态,罗丹明染色后测线粒体跨膜电位。结果与模型组比较,白藜芦醇呈剂量依赖性的提高Aβ25-35诱导的PC12细胞存活率和线粒体跨膜电位,降低PC12细胞凋亡率,有统计学差异(P<0.05)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡有保护效应。

TRAIL诱导骨肉瘤HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位关系的研究

目的研究TRAIL诱导HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位(ΔΨm)关系。方法MTT法测定TRAIL对HOS-8603细胞的抑制率;将HOS-8603细胞分别用TRAIL、TRAIL+1.0μg/ml环孢菌素A(CsA)处理,然后用透射电镜观察HOS-8603细胞形态学变化;用流式细胞术分别测定亚G1期细胞百分率及PI和Rh123双染色后细胞的ΔΨm。结果MTT还原试验表明:作用24小时后,2.5μg/mlTRAIL的抑制率为29%;5μg/mlTRAIL的抑制率为83%。HOS-8603细胞经TRAIL作用后,透射电镜下观察到典型的凋亡形态特征;随着TRAIL作用时间增加,HOS-8603细胞凋亡数增加和ΔΨm降低(F=33.831P<0.01),两者呈直线相关。CsA不仅能抑制TRAIL诱导HOS-8603细胞ΔΨm降低,而且能减少凋亡细胞数的增加(t=7.103,P<0.01)。结论TRAIL诱导HOS-8603细胞凋亡的线粒体依赖途径是通过使线粒体膜通透性转运孔开放,ΔΨm降低来实现;CsA能部分抑制这些效应。

顺铂诱导骨肉瘤HOS-8603细胞凋亡并降低其线粒体跨膜电位

目的研究顺铂诱导HOS-8603细胞凋亡与线粒体跨膜电位(ΔΨm)关系。方法MTT法测定顺铂对HOS-8603细胞的抑制率;将HOS-8603细胞分别用顺铂、顺铂+1.0ug/ml环孢菌素A(CsA)处理,用透射电镜观察HOS-8603细胞形态学变化;用流式细胞术分别测定亚G1期细胞百分率及PI和Rh123双染色后细胞的ΔΨm。结果MTT还原试验表明,作用24小时后,1ug/ml和50ug/ml顺铂的抑制率分别为58.56%,90.69%;HOS-8603细胞经顺铂作用后,透射电镜下观察到典型的凋亡形态特征;随着顺铂作用时间增加,HOS-8603细胞凋亡数增加和ΔΨm降低(P<0.01),两者呈直线相关,CsA能部分抑制这些效应。结论顺铂诱导HOS-8603细胞凋亡的另一途径是通过使线粒体膜通透性转运孔开放,ΔΨm降低来实现的。

灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响

目的探讨灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响。方法采用线栓阻断大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。动物随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(I/R)、灵芝组(GA);于再灌注后3 h、12 h、24 h、48 h处死动物取材,流式细胞仪检测脑细胞凋亡率和线粒体跨膜电位。结果 (1)IR组和GA组与sham组比较,脑细胞凋亡率明显增高(P<0.01);再灌注3 hGA组与IR组比较,脑细胞凋亡率没有明显差异(P>0.05);再灌注12 h、24 h、48 hGA组与IR组比较,脑细胞凋亡率降低,有明显差异(P<0.01)。(2)IR组脑细胞线粒体跨膜电位在再灌注3 h、12 h、48 h较sham组显著下降(P<0.05),其中3 h值最低,其后逐渐升高,至48 h又出现后续性降低;GA组细胞线粒体跨膜电位在再灌注3 h较sham显著下降(P<0.01);GA组线粒体跨膜电位在再灌注12 h、48 h较IR组显著升高(P<0.05)。结论急性局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑细胞凋亡率升高,线粒体跨膜电位显著降低,灵芝具有降低凋亡发生率、改善脑组织细胞线粒体跨膜电位水平的作用。

灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响

目的探讨灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响。方法采用线栓阻断大脑中动脉闭塞法(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。动物随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(IR)、灵芝组(GA);于再灌注后3 h、12 h、24 h、48 h处死动物取材,流式细胞仪检测脑细胞凋亡率和线粒体跨膜电位。结果(1)IR组和GA组与Sham组比较,脑细胞凋亡率明显增高(P<0.01);再灌注3 h GA组与IR组比较,脑细胞凋亡率没有明显差异(P>0.05);再灌注12 h、24 h、48 h GA组与IR组比较,脑细胞凋亡率降低,有明显差异(P<0.01)。(2)IR组脑细胞线粒体跨膜电位在再灌注3 h、12 h、48 h较Sham组显著下降(P<0.05),其中3 h值最低,其后逐渐升高,至48 h又出现后续性降低;GA组细胞线粒体跨膜电位在再灌注3 h较Sham显著下降(P<0.01);GA组线粒体跨膜电位在再灌注12 h、48 h较IR组显著升高(P<0.05)。结论急性局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑细胞凋亡率升高,线粒体跨膜电位显著降低,灵芝具有降低凋亡发生率、改善脑组织细胞线粒体跨膜电位水平的作用。

支气管哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞线粒体跨膜电位变化及地塞米松对其干预的影响

目的探讨哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞线粒体跨膜电位、Fas/FasL变化以及地塞米松干预的影响。方法建立哮喘模型,收集激发后2、6、12、24、48 h淋巴液、血液、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage flu id,BALF)中淋巴细胞,流式细胞仪(FCM)检测淋巴细胞线粒体的跨膜电位(△.ψm),细胞免疫组化(SABC法)检测淋巴细胞表面Fas/FasL蛋白的表达。结果哮喘组淋巴液、血液、BALF淋巴细胞线粒体跨膜电位均较对照组和治疗组峰值升高(P<0.05),而对照组和治疗组之间则无显著性差异(P>0.05);与对照组、治疗组相比较,哮喘组淋巴液和BALF中淋巴细胞表面Fas、FasL蛋白光密度明显降低(P<0.001),而治疗组和对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论哮喘大鼠淋巴液、血液、BALF中均存在明显的淋巴细胞早期凋亡障碍和Fas/FasL表达降低,尤其是哮喘淋巴液中淋巴细胞凋亡障碍和Fas/FasL降低程度较其血液、BALF更为明显;地塞米松可能是通过提高哮喘Fas/FasL蛋白的表达来加速淋巴细胞凋亡而发挥治疗作用。

Aβ_(25-35)致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤关系研究

目的:探讨不同浓度Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位相关性。方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,Aβ25-35160、80、40、20、10、5、2.5μmol.L-17个浓度刺激PC-12细胞,CCK-8法观察细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察hochest33342/PI双染后细胞形态,罗丹明染色后荧光显微镜检测细胞线粒体跨膜电位变化。结果:同正常组比较,Aβ25-35刺激PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性,20μmol.L-1以上浓度Aβ25-35刺激12 h后PC-12细胞的细胞活力呈明显下降(P<0.05),凋亡率明显增加(P<0.05)。PC-12细胞有核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象,线粒体跨膜电位下降。20μmol.L-1以下各浓度组对PC12细胞活力、细胞凋亡率、线粒体跨膜电位无明显影响(P>0.05)。结论:Aβ25-35刺激PC-12后致细胞凋亡与线粒体跨膜电位下降呈正相关,20μmol.L-1刺激12 h即可致理想的PC12细胞凋亡模型。

葛根芩连汤及其拆方对UC大鼠结肠平滑肌线粒体跨膜电位的影响

目的比较葛根芩连汤及其拆方对UC大鼠结肠平滑肌线粒体跨膜电位的影响,探讨葛根芩连汤中哪些药物或药物组合对UC大鼠结肠组织中平滑肌线粒体跨膜电位的影响最明显,并探讨其作用机制。方法 将120只大鼠随机分为8组,采用三硝基本磺酸(TNBS)/乙醇法建立UC模型,分别给予葛根芩连汤及其拆方连续灌胃4W后停药,流式细胞仪测线粒体跨膜电位。结果 模型组大鼠结肠平滑肌线粒体跨膜电位显著低于其它各组。全方组、全方去黄芩组、全方去甘草组明显高于模型组(P<0.01),其次为去葛根组、全方去黄连组、全方去葛根黄连组(P<0.05)。结论 葛根芩连汤及其拆方中对UC大鼠结肠平滑肌线粒体跨膜电位的影响最明显的药组是葛根、黄连、炙甘草的组合,葛根、黄连、炙甘草的组合具有较好的重建和修复结肠组织黏膜及恢复结肠平滑肌功能的作用。

支气管哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞线粒体跨膜电位以及Fas/FasL变化

目的探讨哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞跨膜电位(mitochondrial membrane potential,△.ψm)和淋巴细胞表面Fas、FasL表达水平,并与其血液、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)水平比较。方法流式细胞仪、免疫组化方法检测对照组和哮喘组激发后2、6、12、24、48h各时间点淋巴液、血液、BALF中淋巴细胞线粒体的跨膜电位、淋巴细胞表面Fas、FasL蛋白表达。结果哮喘组淋巴液、血液和BALF中淋巴细胞△.ψm峰值在各时间点均较对照组明显升高(P<0.01),Fas、FasL蛋白表达水平低于对照组水平(P<0.01);哮喘组淋巴液中淋巴细胞△.ψm在不同时间点均较血液水平明显升高(P<0.05),血液中淋巴细胞△.ψm与BALF水平间无显著性差异(P>0.05)。结论哮喘大鼠淋巴液、血液、BALF中均存在明显的淋巴细胞早期凋亡障碍和Fas/FasL表达降低,尤其是哮喘淋巴液中淋巴细胞凋亡障碍和Fas/FasL降低程度较其血液、BALF更为明显。

胃肠舒片对大白鼠胃肠平滑肌细胞线粒体跨膜电位的影响

目的研究胃肠舒片对大白鼠胃肠平滑肌细胞线粒体跨膜电位的影响。方法胃肠平滑肌细胞离体培养,分为5组:空白对照组、西沙必利组(0.51 mg/ml)、胃肠舒Ⅰ组(25 mg/ml)、胃肠舒Ⅱ组(50 mg/ml)、胃肠舒Ⅲ组(75 mg/ml),采用Celltiter-GloTM法和若丹明荧光法分别检测了胃肠舒片对大白鼠胃肠平滑肌细胞ATP和线粒体跨膜电位的的影响。结果胃肠舒片作用24 h后与对照组和西沙必利组相比能显著增高平滑肌细胞ATP的含量(P<0.05),随着胃肠舒用药浓度的增高ATP的含量也增高;流式细胞仪结果表明胃肠舒明显加大了胃肠平滑肌细胞的线粒体跨膜电位,并且随着胃肠舒用药浓度的增高,跨膜电位也增高。结论胃肠舒可能通过改变胃肠平滑肌细胞线粒体的跨膜电位促进了胃肠运动。

复方水蛭滴眼液对紫外线诱导的人晶状体上皮细胞线粒体跨膜电位的影响

目的 探讨复方水蛭滴眼液（SZ）防护紫外线（UV）照射诱导的人晶状体上皮细胞（human lens epithelia cell,HLEC）线粒体跨膜电位的影响.方法采用SZ与HLEC共同孵育,再用UV照射HLEC,以吡喏克辛滴眼液（PS）作为阳性对照,观察SZ对紫外线照射的HLEC线粒体跨膜电位的影响.结果 UV照射后细胞活性降低,线粒体膜电位水平下降,SZ可改善UV照射后线粒体跨膜电位下降水平.结论 UV照射可引起HLEC活性下降和线粒体跨膜电位水平下降,SZ对细胞的保护作用是通过提高HLEC活性,升高线粒体跨膜电位来实现的.