创伤性脑组织匀浆对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响

目的:骨髓间充质干细胞在脑组织匀浆诱导环境下可以转化为神经元样细胞,损伤脑组织匀浆的骨髓间充质干细胞培养液中,不仅有脑组织中提取的生长因子,而且有骨髓间充质干细胞分泌的多种生长因子,共同刺激骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化。实验观察了创伤后24h和正常脑组织匀浆诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的差别。方法:实验于2007-03/08在河北医科大学解剖教研室细胞培养中心完成。①实验材料:体质量100～150g的健康SD大鼠由河北医科大学实验动物中心提供,4～6周龄,清洁级。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:取1只SD大鼠,麻醉后分离股骨和胫骨,用培养基冲洗骨髓腔,离心弃上清液,加入含体积分数为0.10胎牛血清的L-DMEM培养基重悬,接种于培养瓶培养并传代,于倒置显微镜下观察细胞形态。采用Gruncr改良法制作中度脑损伤大鼠模型,取伤后24h和正常大鼠脑组织匀浆,对体外培养的第3代骨髓间充质干细胞进行诱导。③实验评估:在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,并应用免疫细胞化学技术检测细胞内神经元特异性烯醇化酶的表达,比较创伤后和正常脑组织匀浆两组诱导率差别。结果:骨髓间充质干细胞经创伤性脑组织匀浆培养基诱导24h后,细胞的胞体变大,36h后部分细胞分化,回缩成圆形或梭形,48h后部分细胞可见两个或多个突起伸出,类似神经元。免疫细胞化学技术检测显示,创伤性脑组织匀浆培养基诱导组神经元特异性烯醇化酶阳性表达为(54.28±6.03)%,正常脑组织匀浆诱导分化率较前者低,神经元特异性烯醇化酶阳性表达为(32.76±3.25)%,细胞生长状态略差。结论:脑组织匀浆可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,创伤性脑组织匀浆可明显促进其分化。

自体神经组织匀浆修复面神经缺损的实验研究

目的:观察聚四氟乙烯膜管内植入自体神经组织匀浆桥接兔面神经缺损的修复效果,寻找修复面神经的新方法。方法:36只成年新西兰大白兔,均制成双侧面神经颊支8mm缺损的模型,用聚四氟乙烯膜管内植入自体神经组织匀浆桥接每只动物右侧面神经缺损作为实验组,单纯膜管桥接左侧为对照组。分别于术后4、8、12周行神经电生理测试后,处死动物,切取再生的神经组织标本进行大体观察、HE染色,普通光镜观察。结果:电生理测试显示,匀浆组术后4周,电刺激通过神经缺损区可引起肌收缩,空管组未引出肌动作电位。术后8、12周两侧均有动作电位引出,但匀浆组的神经传导速度明显大于空管组。光镜观察,匀浆组在术后各个时期神经再生情况均优于对照组,术后8周匀浆组管内充满再生神经纤维和髓鞘,排列较规则、整齐,呈束状分布,束间新生血管丰富;空管组有极少量再生神经纤维通过缺损区,纤维排列较紊乱。结论:自体神经组织匀浆进行神经再生室内移植,可获得比空膜管桥接面神经缺损更好的修复效果。

两种肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的比较

背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确。目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环境诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的能力。方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制备SD大鼠肝纤维化模型,取肝纤维化大鼠及正常大鼠肝脏制备肝组织匀浆上清。将第3代人脐带间充质干细胞进行分组诱导培养:1标准对照组:加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。2纤维化肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及50 g/L纤维化肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。3正常肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及100 g/L正常肝组织匀浆的DMEM/F12培养基。诱导开始后于倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;取标准对照组及诱导7 d的匀浆组细胞采用Western Blot法检测CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表达情况,采用ELISA法测定各组细胞培养液中白蛋白水平。结果与结论:与标准对照组长梭形成纤维样细胞相比,诱导7 d时,肝纤维化匀浆组及正常匀浆组细胞形态变化明显,呈类圆形,胞体丰满。与标准对照组相比,两匀浆组细胞均可表达肝细胞标志物CK18和AFP。标准对照组细胞可表达少量CYP2E1,两匀浆组细胞表达CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝细胞功能蛋白,且CYP2E1的表达量较标准对照组明显增加(P<0.01),而两匀浆组间上述蛋白的相对表达量差异无显著性意义(P>0.05)。同时,两匀浆组细胞分泌白蛋白的能力较标准对照组亦明显增强(P<0.01),两匀浆组相比差异无显著性意义(P>0.05)。实验结果显示正常肝组织和纤维化肝组织微环境均可诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化,在达到相同诱导效果时,纤维化肝组织所需组织液浓度更低,提示纤维化肝组织微环境可能更有利于人脐带间充质干细胞向肝细胞分化。

神经组织匀浆对面神经再生影响的实验研究

研究在桥接面神经的自体静脉管腔内分别加入自体周围神经组织及异体胚胎小脑组织的匀浆，观察其对面神经管状化移植再生的影响。对如何应用简单的方法来改进非神经组织的移植效果进行了初步探讨。动物均采用自身左右对照，术后２０周进行电生理及组织学观察，初步的结果显示：周围神经组织匀浆侧运动传导速度，远端神经有髓纤维总数高于盐水侧，具有显著性差异。异体胚胎小脑组织匀浆促进神经再生的作用不明显。

聚四氟乙烯膜管内植入自体神经组织匀浆桥接面神经缺损

目的评价聚四氟乙烯(e-PTFE)膜空管单纯桥接及e-PTFE膜管内植入自体神经组织匀浆修复面神经缺损的修复效果。方法切除8 mm长兔左侧面神经上颊支造成面神经缺损,以e-PTFE膜管内植入自体神经组织匀浆和e-PTFE膜空管单纯桥接修复面神经缺损,分别于术后8周、12周行神经电生理、组织形态学检查。结果术后12周时,自体神经组织匀浆组面神经传导速度为(28.55±3.21)m/s,而空管组为(21.30±3.64)m/s;组织学上,自体神经组织匀浆组膜术后12周神经纤维排列整齐,延续连贯;空管组神经纤维排列较紊乱,结缔组织增生明显。结论使用自体神经组织匀浆进行神经再生室内移植可获得比单纯空管桥接组更好的神经修复效果。

人直肠癌组织匀浆上清液对树突状细胞内皮化的影响

目的:观察人直肠癌组织匀浆上清液对人外周血来源的树突状细胞(DC)内皮化的影响。方法:用ELISA方法检测直肠癌组织、癌旁组织匀浆上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的含量。采集健康男性志愿者外周血单个核细胞,常规方法培养,分别在第1、3、7、10和14天收集细胞,流式细胞仪动态监测CD1a、CD31和CD34的表达。分3组培养DC细胞,分别在第3和7天加入直肠癌组织匀浆上清液、癌旁组织匀浆上清液及等体积生理盐水(对照组)。用免疫细胞化学方法检测3组细胞的CD1a、CD31及CD34双阳性和血管内皮细胞Ⅷ因子(vWF)的表达。结果:直肠癌组织匀浆上清液VEGF-A的含量[(0.837±0.345)μg/L]高于癌旁组织匀浆上清液[(0.236±0.216)μg/L](t=4.668,P<0.001)。不同培养时间收集的DC表面分子CD1a、CD31和CD34的阳性表达率差异均有统计学意义(F分别为1832.478、20.410和49.137,P均<0.001)。第3和7天,癌及癌旁组织匀浆上清液组CD1a+CD31+、CD1a+CD34+的表达率均高于对照组(F分别为342.21、544.70、107.09和189.72,P均<0.001);且癌及癌旁组织匀浆上清组第3天CD1a+CD31+、CD1a+CD34+的表达均高于第7天(t分别为13.110、25.480、9.115和21.550,P均<0.001)。癌[(6.3±1.1)个/HPF]、癌旁[(6.0±0.6)个/HPF]组织匀浆上清组vWF的表达均高于对照组[(0.8±0.1)个/HPF](F=176.57,P<0.001),但前2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:直肠癌组织匀浆上清液可促使未成熟DC发生内皮化。

降脂消斑片对鹌鹑动脉粥样硬化模型心肌及肝脏组织匀浆脂质含量的影响

目的:观察降脂消斑片对鹌鹑动脉粥样硬化(AS)模型心肌及肝脏组织匀浆脂质含量的影响。方法:采用单纯高脂饲料喂养方法复制鹌鹑AS模型。分别给予降脂消斑片高、中、低剂量及阳性对照药物辛伐他汀片、脂降宁片治疗,观察对心肌及肝脏组织匀浆脂质含量的影响。结果:与模型组比较,降脂消斑片高、中剂量组具有降低肝组织、心肌组织匀浆脂质含量的作用,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:降脂消斑片能降低鹌鹑AS模型的心肌及肝脏组织匀浆脂质含量。

组织匀浆腺苷酸环化酶的简易测定法

作者参考 Clement-Cormier 方法,建立了一种简便的组织匀浆腺苷酸环化酶测定方法。该法用非同位素标记的 ATP 代替同位素标记的 ATP 为酶的作用底物,直接用蛋白竞争结合法测定酶的反应产物,cAMP 计算出酶的活性。该法除简化了操作程序外,还可避开同位素标记的 ATP 的不稳定性和较繁琐的分离过程对测定的影响。

实验性脑损伤脑组织匀浆SOD、MDA的含量改变及意义

42只 SD大鼠 ,分为对照组、假手术组、手术组 ,Feeney' s自由落体撞击伤方法成功建立了创伤性脑损伤模型 ,并测定了脑组织匀浆不同时期超氧化物歧化酶 ( SOD)丙二醛 ( MDA)的含量改变 ,和脑组织含水量的变化 ,同时测定了血浆 MDA的含量改变。结果 :脑外伤后脑组织匀浆 MDA血浆 MDA及脑组织含水量均升高 ,而脑组织匀浆 SOD降低 ,P<0 .0 5。脑组织含水量与脑组织匀浆 MDA、SOD分别呈正、负相关关系。提示 :脑外伤后确曾发生明显的脂质过氧化反应 ,并与脑水肿互为因果关系。早期补充外源性自由基能减轻脑外伤继发性损害。

游离铁在脊髓组织匀浆脂质过氧化中的作用

目的 观测游离铁在脊髓组织匀浆脂质过氧化中的作用。方法 SD大鼠脊髓组织匀浆中分别加入Ringer’s液、枸橼酸亚铁溶液 (10 μmol)或去铁胺溶液 (6 μmol) ,在 37℃恒温水浴中孵育 2h ,测定加入不同浓度Fe2 + 及去铁胺对脊髓组织匀浆MDA的影响。结果 脊髓匀浆混合液孵育 2h后 ,随着Fe2 + 浓度的增加MDA不断增加 ;当Fe2 + 浓度为 2 0 μmol时MDA浓度最高 ,随后逐步降低 ;加入去铁胺组与相同Fe2 + 浓度不加去铁胺组比较可明显减少MDA的产生。结论 游离铁能显著增强脊髓匀浆的脂质过氧化 。

8Hz和16Hz单次次声作用后大鼠肺组织匀浆中细胞因子TNF-α及IL-8的变化

目的 观察次声作用后肺组织匀浆中细胞因子TNF -α及IL - 8的变化。方法 SD大鼠 12 0只随机分为正常对照组、次声作用组 ,置本校研制的次声压力仓内致伤。次声作用组以 8Hz和 16Hz次声 ,声压分别为 90、10 0、110、12 0、130dB的强度 ,每次作用 2h。结果 8Hz 90～ 130dB单次作用后TNF -α及IL - 8无明显变化。 16Hz 90dB次声单次作用即可引起肺组织匀浆中TNF -α及IL - 8的变化 ,与正常对照组相比有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 在一定作用强度范围内 ,可较明显地反应其频率作用的特性。

脑组织匀浆诱导人脐带间充质干细胞分化为神经样细胞

目的模拟体内微环境,研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)在脑组织匀浆诱导下向神经样细胞的分化程度。方法体外分离、培养、扩增hUCMSCs,流式细胞仪鉴定其表面抗原CD29、CD44、CD45、CD105、CD34、HLA-DR;制备大鼠脑组织匀浆与hUCMSCs共培养,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,并应用免疫细胞化学技术检测共培养3 d后细胞内神经干细胞表面标志物巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果脑组织匀浆培养hUCMSCs后,细胞表达nestin、NSE及GFAP,而正常培养的hUCMSCs不表达。结论脑组织匀浆可以诱导hUCMSCs向神经样细胞分化。

山萝卜酸对不同组织匀浆中MDA生成的影响

蒙古山萝卜Scabiosa camosa Fisch是传统蒙医治疗肝病的特色药材，蒙医学认为：该药微甘、性凉，人肝、肺。清热解毒，清肝明目，祛火消积，清利湿热；用于治疗肝热症、肝中毒、肝性消瘦、黄疸性肝炎、肝火头痛、跟结膜炎、中毒、呼吸道感染的药材^本文报道不同组织匀浆制备方法对丙二醛（MDA）生成及蒙古山萝卜酸对MDA的作用。

损伤肝组织匀浆与骨髓间充质干细胞的分化

背景:目前认为,骨髓间充质干细胞能否分化为肝细胞与微环境关系密切。目的:探讨急性酒精性肝损伤组织匀浆对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用。方法:分别用正常和损伤肝脏组织匀浆诱导骨髓间充质干细胞分化,在第0,3,7,10,14,21天用RT-PCR和Westernblot法检测甲胎蛋白、白蛋白的表达。结果与结论:骨髓间充质干细胞在正常及损伤的肝脏组织匀浆诱导下均表现为类上皮样改变。两组均从第3天开始检测到甲胎蛋白的表达,并在第7天左右达到高峰,之后表达逐渐减少,第14天时量很少;在第7天检测到白蛋白的表达,且随时间延长表达量逐渐增加,mRNA水平与蛋白水平表达一致。表明肝细胞在诱导培养下逐渐从幼稚到成熟。但正常和损伤肝组织匀浆诱导的肝细胞甲胎蛋白和白蛋白的表达量差异无显著性意义(P>0.05)。结果说明急性酒精性肝损伤组织匀浆可以诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化,其诱导效果与正常肝脏组织匀浆相近。

脊髓损伤组织匀浆通过甲酰基肽受体2促进神经元突起的生长

背景:前期研究观察到神经干细胞新分化的神经元表达甲酰基肽受体2,并证实甲酰基肽受体2能促进神经干/祖细胞迁移,诱导向神经元分化。脊髓损伤组织中存在甲酰基肽受体2配体,然而不同的配体与甲酰基肽受体2结合可能导致不同、甚至相反的生物学效应。目的:探讨脊髓损伤产生的配体与甲酰基肽受体2作用后对神经元突起生长的影响。方法:采用酶消化法提取胎鼠大脑皮质神经元;制备SD大鼠脊髓损伤模型,提取损伤脊髓组织匀浆。①实验分组1:观察甲酰基肽受体2激活对神经元突起的影响,分组如下:对照组、甲酰基肽受体2阻断剂组(即添加WRW4)、脊髓匀浆组、脊髓匀浆+WRW4组;②实验分组2:观察甲酰基肽受体2激活后AKT和ERK信号通路阻断对神经元突起的影响,分组如下:对照组、AKT和ERK信号通路阻断剂组(即添加Ly294002+PD98059)、脊髓匀浆组、脊髓匀浆+Ly294002+PD98059组。神经元细胞贴壁24 h后,按上述分组处理7 d,免疫荧光染色共聚焦显微镜观察脊髓匀浆激活甲酰基肽受体2对神经元突起的影响;按上述分组处理30 min,Western blotting检测磷酸化蛋白水平;按上述分组处理24 h,Western blotting检测F-actin水平,观察在甲酰基肽受体2特异性阻断剂WRW4存在的情况下,对MAPK和PI3K/Akt通路中关键蛋白磷酸化的影响。结果与结论:①脊髓损伤组织匀浆液能够使神经元突起长度、初级分枝数、分枝节点数显著增加,这种增加效应大部分被甲酰基肽受体2受体特异性阻断剂WRW4阻断;②脊髓损伤组织匀浆液能够使神经元中ERK1/2和Akt的磷酸化增加,这种效应能够被WRW4阻断;③Akt信号通路阻断剂Ly294002和Erk信号通路阻断剂PD98059能够阻断脊髓匀浆的促进作用;④脊髓损伤组织匀浆能够使F-actin表达量明显增加,这种效应能够被甲酰基肽受体2特异性阻断剂WRW4所阻断;⑤这些实验结果说明,脊髓匀浆液能够通过激活甲酰基肽受体2促进神经元突起生长,这种作用机制可能与ERK1/2和Akt的磷酸化增加相关。

妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘组织匀浆中TNF-α水平的意义

目的:探讨TNF-α在妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)发病中的作用。方法:用ELISA法测定49例孕妇胎盘组织匀浆TNF-α的水平,其中正常妊娠组15例;ICP组34例,包括轻型14例,重型20例。结果:与正常妊娠组比较,ICP组胎盘组织匀浆中TNF-α水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);而在ICP患者中,重型组胎盘组织匀浆中TNF-α水平显著高于轻型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胎盘组织中TNF-α水平升高可能是ICP发病的一个重要环节。

吸入高浓度氧对大鼠脑组织匀浆内活性氧的影响

目的大鼠吸入一定时间的高浓度氧后,测定其脑组织匀浆内活性氧含量的变化,评价吸入高浓度氧的安全性。方法选用纯种wister大鼠60只,随机分为A、B、C、D、E5组,每组12只,其中A、B、C、D组为高氧组,分别放置于氧浓度为85%～100%的自制氧箱中,于实验4、8、12、16h后制取标本,E组为空气对照组。取脑组织低温高速粉碎、离心提取匀浆液,比色法测定脑组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)的浓度。结果与对照组相比,高氧各组脑组织匀浆中MDA、NO、NOS均显著升高(P<0.01?,并随吸氧时间的延长有升高的趋势;而SOD、GSH、CAT、T-AOC均显著降低(P<0.01?,并随吸氧时间的延长有降低的趋势。结论吸入高浓度氧导致脑内活性氧浓度的升高,应引起重视。

不同组织匀浆法对心肌组织线粒体提取质量的影响

目的:探讨不同的组织匀浆法对小鼠心肌组织线粒体提取质量的影响。方法:分别用研磨珠匀浆法、乳化分散仪法、玻璃匀浆器法对C57BL/6J小鼠的心肌组织进行匀浆,差速离心法分离线粒体;Western blot检测细胞质蛋白及线粒体蛋白表达水平;透射电镜观察分离后线粒体的形态结构;JC-1法检测线粒体膜电位。结果:3种组织匀浆法均能获得高纯度的线粒体,且提取效率差异无统计学意义(P>0.05)。与研磨珠匀浆法相比,乳化分散仪法和玻璃匀浆器法得到的线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。研磨珠匀浆法得到的线粒体超微结构完整,而乳化分散仪法与玻璃匀浆器法得到的线粒体部分结构不完整或破碎。结论:研磨珠匀浆法结合差速离心法分离的心肌组织线粒体,其形态结构完整、功能良好。