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用焦磷酸测序技术检测凡纳滨对虾组织蛋白酶基因单核苷酸多态性 被引量:4
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作者 曾地刚 陈晓汉 +5 位作者 彭敏 李咏梅 杨春玲 马宁 蒋伟明 黎铭 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期684-689,共6页
焦磷酸测序是一种新型的DNA测序技术,近年来开始应用于单核苷酸多态性(SNPs)检测。组织蛋白酶基因(Cathepsin-L,CTSL)在对虾的蜕皮周期中起重要的作用。本研究利用焦磷酸测序技术,对96个凡纳滨对虾的CTSL基因序列(GenBank登录号:AY3663... 焦磷酸测序是一种新型的DNA测序技术,近年来开始应用于单核苷酸多态性(SNPs)检测。组织蛋白酶基因(Cathepsin-L,CTSL)在对虾的蜕皮周期中起重要的作用。本研究利用焦磷酸测序技术,对96个凡纳滨对虾的CTSL基因序列(GenBank登录号:AY366355)的C681G SNP位点进行检测分型。结果发现C/C、C/G和G/G基因型,频率分别是0.81、0.16和0.03,频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。统计分析结果表明在该群体中C681G SNP和体重关系不显著(P>0.05)。研究结果显示焦磷酸测序技术是一种高效的SNP检测技术,可以在对虾的遗传研究中发挥重要作用。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 焦磷酸测序 组织蛋白酶基因 单核苷酸多态性
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凡纳滨对虾组织蛋白酶基因单核苷酸多态性的检测 被引量:2
2
作者 马宁 陈晓汉 +2 位作者 曾地刚 彭敏 李咏梅 《水利渔业》 北大核心 2008年第4期31-33,共3页
采用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾40份DNA样本的组织蛋白酶基因(GenBank登录号:Y13924)进行SNPs检测。共发现SNPs 20个,分别是:A150C、T226G、G240A、C429T、T453C、G537A、C597T、C645T、G798C、C831T、C955T、C963T、C977T、C982T... 采用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾40份DNA样本的组织蛋白酶基因(GenBank登录号:Y13924)进行SNPs检测。共发现SNPs 20个,分别是:A150C、T226G、G240A、C429T、T453C、G537A、C597T、C645T、G798C、C831T、C955T、C963T、C977T、C982T、G1001C、A1005T、C1117T、C1132T、G1367A、T1391C。其中6个SNPs是外显子中的错义突变,2个SNPs是外显子中的同义突变,12个SNPs是内含子中的突变。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 组织蛋白酶基因 单核苷酸多态性 直接测序法
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SeMNPV组织蛋白酶基因的克隆表达及其对病毒杀虫的影响 被引量:2
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作者 张海元 黄柏青 +1 位作者 梅春蕾 张忠信 《中国病毒学》 CSCD 2005年第5期534-538,共5页
对甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeMNPV)的组织蛋白酶(v-cath)基因进行了克隆,序列分析及原核表达。此基因编码区长1014bp,预计编码一个338个氨基酸的蛋白产物,其蛋白的大小约42kD。序列分析表明,SeMNPV的V-CATH与其它杆状病毒的同源蛋白具... 对甜菜夜蛾核型多角体病毒(SeMNPV)的组织蛋白酶(v-cath)基因进行了克隆,序列分析及原核表达。此基因编码区长1014bp,预计编码一个338个氨基酸的蛋白产物,其蛋白的大小约42kD。序列分析表明,SeMNPV的V-CATH与其它杆状病毒的同源蛋白具有相似的保守结构,保留有相同的酶活性位点。根据几种已知的杆状病毒组织蛋白酶序列构建进化树,发现SeMNPV的V-CATH位于NPV组中一个单独的分支,它可能拥有特殊的进化历程。使用1.2μL的表达组织蛋白酶菌液和SeNPV共感染3龄末甜菜夜蛾幼虫,幼虫病毒致死率提高9.21%,病毒致死时间提前12 h,原核表达的组织蛋白酶对病毒杀虫速度有一定的影响。 展开更多
关键词 组织蛋白酶基因 甜菜夜蛾核多角体病毒 序列分析 原核表达 进化树
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棉铃虫单核衣壳核多角体病毒组织蛋白酶基因的序列分析和进化研究 被引量:4
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作者 刘岚 陈新文 +4 位作者 孙修炼 Hilary Lauzon Just M. Vlak Basil M. Arif 胡志红 《中国病毒学》 CSCD 2001年第3期229-235,共7页
对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (HaSNPV)的组织蛋白酶 (ν cath)基因进行了序列分析 ,此基因编码区长 10 98bp ,预计编码一个 36 6个氨基酸的蛋白产物。序列分析表明 ,HaSNPV的V CATH蛋白与其它杆状病毒的同源蛋白具有相似的保守结构并... 对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒 (HaSNPV)的组织蛋白酶 (ν cath)基因进行了序列分析 ,此基因编码区长 10 98bp ,预计编码一个 36 6个氨基酸的蛋白产物。序列分析表明 ,HaSNPV的V CATH蛋白与其它杆状病毒的同源蛋白具有相似的保守结构并保留有相同的酶活性位点 ,根据已知的杆状病毒组织蛋白酶序列构建了ν cath基因的进化树 ,发现HaSNPV的ν cath位于NPV组中一个单独的分枝 ,结合ν cath基因在棉铃虫病毒基因组中的位置与其它NPV有较大不同 ,推测HaSNPV的ν cath基因可能拥有特殊的进化历程。 展开更多
关键词 棉铃虫 单核衣壳核多角体病毒 组织蛋白酶基因 核苷酸序列分析 进化树
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家蚕组织蛋白酶L(BmCathepsin L)基因鉴定、表达及其功能分析 被引量:3
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作者 潘光照 张奎 +6 位作者 李重阳 赵羽卒 申利 徐曼 苏晶晶 林西 崔红娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期3236-3246,共11页
【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB... 【目的】鉴定克隆家蚕组织蛋白酶L基因BmCathepsin L(BmCat L),分析其序列和表达特征。分析家蚕组织蛋白酶L在大肠杆菌诱导下m RNA表达量的变化趋势,为进一步研究家蚕组织蛋白酶L的功能打下基础。【方法】基于家蚕基因组数据库(Silk DB)中序列BGIBMGA006893设计引物,利用RACE技术克隆家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA全长序列,通过在线工具对基因结构和蛋白质分子量及等电点进行预测;在NCBI数据库下载其他物种组织蛋白酶L同源序列,利用Clustalx(1.83)和MEGA 6.0软件进行同源比对并构建进化树。运用RT-PCR和qRT-PCR对其时空表达特征进行分析。选取该基因的特异性片段,经PCR扩增,测序验证后将其连接至pET-28载体,转化至Rosseta感受态表达菌株,经IPTG在适宜温度条件下诱导,获得组织蛋白酶L重组蛋白。然后再利用镍离子亲和层析法对该蛋白进行纯化,获得纯度较高的重组蛋白。最后利用大肠杆菌对家蚕血液系统进行攻毒,检测家蚕组织蛋白酶L基因的表达水平。【结果】通过查询家蚕基因组数据库和生物信息学分析得出,家蚕组织蛋白酶L基因定位于家蚕第10号染色体上,基因编号为BGIBMGA006893,nscaf2860。基因开放阅读框全长687 bp,编码228个氨基酸,含有保守的Pept_C1结构域。通过在线网站预测,得出该蛋白酶的分子量为26.132 k D,等电点为4.57。进化分析表明该基因与同为鳞翅目昆虫的草地贪夜蛾和黑脉金斑蝶亲缘关系最为接近。RT-PCR显示该基因集中表达于血细胞,在血液不同龄期也较高表达。用His抗体检测经纯化后的蛋白,最终成功孵育出纯化后的蛋白条带;大肠杆菌个体攻毒免疫试验检测显示,其mRNA表达水平随攻毒时间呈现抛物线式的显著性变化规律,从而揭示出BmCat L与家蚕免疫系统的关联性。【结论】克隆获得家蚕组织蛋白酶L基因的cDNA序列,发现其特异性高表达于血细胞。通过原核表达和蛋白纯化成功获得了该基因的重组蛋白。大肠杆菌的刺激能够显著上调其表达,推测组织蛋白酶L可能参与家蚕免疫反应。 展开更多
关键词 组织蛋白酶L基因 家蚕 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫应激
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凡纳滨对虾组织蛋白酶L基因的单核苷酸多态性分析 被引量:3
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作者 马宁 陈晓汉 +2 位作者 曾地刚 彭敏 李咏梅 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期503-506,共4页
采用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾40份DNA样本的组织蛋白酶L基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测.经过对测序结果统计分析,共发现SNP 20个,分别是:A150C,T226G,G240A,C429T,T453C,G537A,C597T,C645T,G798C,C831T,C955T,C963T,C977T,C982... 采用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾40份DNA样本的组织蛋白酶L基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测.经过对测序结果统计分析,共发现SNP 20个,分别是:A150C,T226G,G240A,C429T,T453C,G537A,C597T,C645T,G798C,C831T,C955T,C963T,C977T,C982T,G1001C,A1005T,C1117T,C1132T,G1367A,T1391C.其中6个SNP是外显子中的错义突变,3个SNP是外显子中的同义突变,11个SNP是内含子中的突变.本检测为进一步进行凡纳滨对虾生长性状关联研究提供了有用信息. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 组织蛋白酶L基因 单核苷酸多态性
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肝片吸虫组织蛋白酶L基因的克隆、表达和免疫原性分析(英文) 被引量:2
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作者 李晓娟 闻晓波 +3 位作者 冉旭华 李树东 王春仁 朴范泽 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期195-199,共5页
目的克隆和表达肝片吸虫组织蛋白酶L基因(FhCL),分析其免疫原性。方法根据GenBank公布的FhCL基因序列设计引物,以肝片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增FhCL基因编码序列,PCR产物经TA克隆,通过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切和测序鉴定获得重组质粒... 目的克隆和表达肝片吸虫组织蛋白酶L基因(FhCL),分析其免疫原性。方法根据GenBank公布的FhCL基因序列设计引物,以肝片吸虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增FhCL基因编码序列,PCR产物经TA克隆,通过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切和测序鉴定获得重组质粒pMD18-T/FhCL,并将其亚克隆入原核表达载体pET30a(+),经PCR,以及BamHⅠ、HindⅢ双酶切和测序鉴定,构建原核表达质粒pET30a(+)-FhCL,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)pLysS,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并获得纯化的重组蛋白FhCL,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,以及蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白对感染肝片吸虫的山羊血清及免疫的SD大鼠血清的免疫反应性。结果PCR和BamHⅠ、HindⅢ双酶切均可见约1000bp的条带,测序结果显示重组质粒pET30a(+)-FhCL构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白相对分子质量约为Mr42000(含6个组氨酸标签),与目的蛋白相符,以包涵体形式表达。Westernblotting分析结果显示,纯化的重组蛋白FhCL可被感染肝片吸虫的山羊血清和免疫的SD大鼠血清识别,在目的条带Mr42000处见单一特异性条带,而阴性对照血清则无反应带。结论克隆及表达了肝片吸虫组织蛋白酶L编码基因,重组蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 肝片吸虫 组织蛋白酶L基因 克隆 原核表达
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基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因转染血管平滑肌细胞移植对急性心肌梗死后早期心肌重塑的影响 被引量:2
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作者 贾智博 田海 +3 位作者 刘开宇 孙露 蒋树林 李仁科 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期512-516,共5页
目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变... 目的研究基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor-3of matrix metalloproteinases,TIMP-3)基因转染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)移植,对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)后早期心脏结构变化的影响,并探讨其可能的机制。方法取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。另取61只Wistar雌性大鼠建立左冠状动脉远端结扎的AMI动物模型,将存活的54只大鼠模型随机分为三组,每组18只。于冠状动脉结扎后立即向缺血部心室壁内注射含有1×106个TIMP-3基因转染VSMCs(A组)、1×106个VSMCs(B组)或不含细胞的PBS液(C组)各0.5ml。术后1周,进行心脏形态学检测观察大鼠心脏结构变化,免疫组织化学染色验证TIMP-3基因转染VSMCs在缺血心肌中的存活情况,Western blot法测定大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)蛋白的含量。结果成功分离、培养VSMCs,纯度达98%,TIMP-3基因成功转入VSMCs中。术后1周,A组大鼠梗死心肌面积占左室游离壁面积的百分比为28.73%±1.56%,小于B组39.63%±1.84%和C组46.32%±2.16%(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。A组大鼠左室容积指数为5.27±0.21mm3/g,小于B组6.69±0.34mm3/g和C组9.67±0.88mm3/g(P<0.01);B组小于C组(P<0.01)。免疫组织化学染色见TIMP-3基因转染VSMCs被成功植入缺血心肌并在其中存活。Western blot法示A组大鼠缺血心肌TIMP-3蛋白含量为300704.8±3692.8,高于B、C组的195548.8±3014.2及177991.1±2502.1(P<0.01);B组高于C组(P<0.01)。A组MMP-9蛋白含量为594827.4±5708.5,低于B、C组的921461.4±8887.4及1044445.0±8788.6(P<0.01);B组低于C组(P<0.01)。结论将TIMP-3基因转染的VSMCs移植入心肌缺血区可明显抑制AMI后早期心肌重塑。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶组织抑制因子3基因 急性心肌梗死 心肌重塑 细胞移植 基因治疗
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拟松材线虫组织蛋白酶基因的RNA干扰及功能研究 被引量:1
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作者 潘妍毅 黄麟 吴小芹 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期65-70,共6页
【目的】揭示拟松材线虫组织蛋白酶基因bmcath1生物学功能。【方法】采用dsRNA浸泡法对靶标基因进行基因干扰,观察拟松材线虫在活体和离体情况下的繁殖力、取食速率、性别比例、体积及致病力的变化情况。【结果】组织蛋白酶基因bmcath1... 【目的】揭示拟松材线虫组织蛋白酶基因bmcath1生物学功能。【方法】采用dsRNA浸泡法对靶标基因进行基因干扰,观察拟松材线虫在活体和离体情况下的繁殖力、取食速率、性别比例、体积及致病力的变化情况。【结果】组织蛋白酶基因bmcath1被干扰后,拟松材线虫繁殖力增强约75%,取食速率变快,致病力变强,并且拟松材线虫群体的雄、雌成虫比由3∶5变为6∶13,成虫所占的比例由8%提高至19%。【结论】组织蛋白酶基因bmcath1对拟松材线虫的繁殖力和致病力具有显著调节作用。 展开更多
关键词 拟松材线虫 组织蛋白酶基因 RNA干扰 繁殖力 致病力
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香蕉穿孔线虫组织蛋白酶B基因的克隆与分析
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作者 李丹蕾 李宇 +2 位作者 谢辉 徐春玲 黄欣 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期26-33,共8页
为了获得香蕉穿孔线虫的组织蛋白酶B基因,分析该基因的序列、结构及其功能,为进一步研究植物寄生线虫组织蛋白酶的功能及其在线虫防治中的应用提供科学依据。我们应用SMART技术构建了香蕉穿孔线虫cDNA文库;采用SL法,克隆得到香蕉穿孔线... 为了获得香蕉穿孔线虫的组织蛋白酶B基因,分析该基因的序列、结构及其功能,为进一步研究植物寄生线虫组织蛋白酶的功能及其在线虫防治中的应用提供科学依据。我们应用SMART技术构建了香蕉穿孔线虫cDNA文库;采用SL法,克隆得到香蕉穿孔线虫组织蛋白酶B基因全长cDNA,通过测序获得1 257bp全长序列,命名为Rs-cb-1(GenBank:GU360972),该基因cDNA全长序列包括1 071bp的完整ORF,编码356个氨基酸,蛋白质相对分子质量为41 400。对该基因的序列结构及其编码的蛋白2级结构和三维结构与功能进行分析和预测结果表明,Rs-cb-1序列与其他寄生虫的组织蛋白酶B基因序列相比,该基因与秀丽小杆线虫组织蛋白酶B基因的亲缘关系最近;其编码蛋白主要为细胞外分泌蛋白,定位于微体(过氧化物酶体)、内质网膜和内质网管腔上,约有25个氨基酸跨膜区段位于蛋白质的C端,其表面电荷呈明显的极性分布;另外,通过同源建模获得该蛋白的三维结构预测图,这些结构与已报道的组织蛋白酶B生物学功能相符。本研究分离克隆得到的Rs-cb-1,是首个分离克隆得到的香蕉穿孔线虫组织蛋白酶B基因,从而为该线虫组织蛋白酶的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 香蕉穿孔线虫 组织蛋白酶B基因 基因克隆 CDNA文库 序列分析
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组织蛋白酶S基因启动子区-25G/A多态不是中国人群中冠心病的预测因子
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作者 马会利 赵吉 +7 位作者 罗尼亚 孙爱军 王克强 邹云增 王箴 王颖 黄薇 葛均波 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2008年第1期5-8,共4页
目的这项研究的目的旨在观察中国人群中,组织蛋白酶S(CTSS)基因-25G/A多态分布及其多态性与冠心病(CAD)危险性之间的关联。方法CTSS基因-25G/A多态性由多聚酶链式反应PCR及限制性内切酶降解方法获得。经冠脉造影检查明确的共659名冠心... 目的这项研究的目的旨在观察中国人群中,组织蛋白酶S(CTSS)基因-25G/A多态分布及其多态性与冠心病(CAD)危险性之间的关联。方法CTSS基因-25G/A多态性由多聚酶链式反应PCR及限制性内切酶降解方法获得。经冠脉造影检查明确的共659名冠心病患者(冠脉狭窄≥50%)及352名非冠心病患者(对照组)纳入这项研究。结果所有研究对象中的等位基因G和A的频率分别为0.630及0.370。在病例组及对照组之间未发现其CTSS-25G/A多态性频率(G:0.626 vs.0.633,P>0.05;A:0.374 vs.0.367,P>0.05)及基因型分布(G:83.4 vs.85.3,P>0.05;A:58.0 vs.58.5,P>0.05)存在显著性差异。使用逻辑回归对其他危险因素校正后,CTSS基因型与冠脉狭窄严重程度之间亦未发现存在关联(P>0.05)。结论在中国人群中,基因型AA较基因型GG和GA更为少见。对照组及冠心病组之间的等位基因频率及基因型分布均无显著性差异。CTSS- 25G/A多态性与冠状动脉狭窄的发生率及严重程度不相关。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 组织蛋白酶S基因 多态性
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海湾扇贝组织蛋白酶L基因编码区的克隆和分析 被引量:4
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作者 李娟 李莉 张国范 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期338-343,共6页
通过cDNA末端快速扩增技术(RACE),从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到了组织蛋白酶L基因(AiCL)的编码区全长,为1 095 bp,推测编码364个氨基酸。经比对与分析发现蛋白序列中存在4个组织蛋白酶L活性位点保守氨基酸:Q164,C170,H30... 通过cDNA末端快速扩增技术(RACE),从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到了组织蛋白酶L基因(AiCL)的编码区全长,为1 095 bp,推测编码364个氨基酸。经比对与分析发现蛋白序列中存在4个组织蛋白酶L活性位点保守氨基酸:Q164,C170,H309,N329;6个极为保守的半胱氨酸残基:C167,C201,C210,C243,C302,C351。预测其N端17个氨基酸为信号肽序列,C端ASYPTV可能也是分泌信号。AiCL成熟蛋白分子由219个氨基酸构成,前体肽的切割位点预计在A145和M146之间。序列同源性分析中,AiCL蛋白序列与软体动物同源蛋白最为相似,序列一致性在50%以上,在系统进化树中与其它无脊椎动物组织蛋白酶L聚合到一起。通过SWISS-MODEL构建的AiCL成熟蛋白三维模型表明该蛋白空间结构高度保守。根据其序列特征,推测AiCL可能具有水解多种肌蛋白的活性。 展开更多
关键词 海湾扇贝 组织蛋白酶L基因 克隆 序列分析
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烟草组织蛋白酶B基因的结构特征分析及mRNA表达 被引量:1
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作者 赵敏 汪长国 +5 位作者 刘劲 寇明钰 李宁 吴艳 戴亚 夏庆友 《烟草科技》 EI CAS 北大核心 2012年第4期72-75,共4页
为了明确烟草中组织蛋白酶B基因的功能,对烟草组织蛋白酶B基因(NbCathB)进行了序列分析。该基因ORF长951 bp,编码316个氨基酸。该基因蛋白质的预测分子量为35.2 kD,等电点为6.14。对NbCathB的基因结构分析显示,该基因具有8个外显子,外显... 为了明确烟草中组织蛋白酶B基因的功能,对烟草组织蛋白酶B基因(NbCathB)进行了序列分析。该基因ORF长951 bp,编码316个氨基酸。该基因蛋白质的预测分子量为35.2 kD,等电点为6.14。对NbCathB的基因结构分析显示,该基因具有8个外显子,外显子/内含子边界处均符合GT-AG规则。比较NbCathB和AtCathB基因,显示两者编码氨基酸序列一致性为61%。通过SMART软件分析,NbCathB和AtCathB基因的结构域很相似。在上清液、菌体、菌液以及水4种处理烟叶中的表达谱鉴定显示,在喷施MP制剂(巨大芽孢杆菌)菌体和菌液的烟叶中NbCathB的表达量明显高于在喷施MP制剂上清液的烟叶中的表达量,而在喷施水的烟叶中的表达量最低。说明NbCathB很可能发挥了AtCathB相同的作用。 展开更多
关键词 组织蛋白酶B基因 烟草 MP制剂
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日本囊对虾组织蛋白酶B基因的原核表达及纯化
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作者 黄媛 王艺磊 +4 位作者 张子平 岳亮 冯建军 郭松林 林鹏 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期86-92,共7页
采用原核表达的方法得到日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)组织蛋白酶B基因的重组蛋白。以日本囊对虾卵巢组织为试验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开... 采用原核表达的方法得到日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)组织蛋白酶B基因的重组蛋白。以日本囊对虾卵巢组织为试验材料,采用双标签(GST和His)的方法,用带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点以及6×His-tag的特异引物扩增Cathepsin B的开放阅读框,并连接至表达质粒pGEX-4T-2中。将重组表达质粒导入大肠杆菌BL21中,在30℃条件下,用终浓度为1mmol/L的IPTG(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside)诱导5h得到最佳诱导量,His亲和柱进行纯化,纯化蛋白依次于8、6、4、2、1、0 mol/L尿素缓冲液中梯度透析,得到复性后可溶于水的重组蛋白,经SDS-PAGE检测,得到单一条带,其分子质量约为63ku。取冻干后的蛋白制备多克隆抗体,抗体效价达50 000,经Western blot检测,同样可在63ku处得到该条带,表明制备的组织蛋白酶B(CB)多克隆抗体具有特异性,该抗体可特异识别CB蛋白。 展开更多
关键词 日本囊对虾 卵巢 组织蛋白酶B基因 原核表达 多克隆抗体
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红螯光壳螯虾组织蛋白酶L基因的克隆及维生素C对其表达的影响
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作者 吴东蕾 左迪 +2 位作者 黄有辉 马长安 赵云龙 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1818-1827,共10页
为深入了解红螯光壳螯虾组织蛋白酶L基因的表达特性及维生素C对其表达的影响,实验利用RACE-PCR技术及荧光定量PCR技术,从红螯光壳螯虾肝胰腺中克隆得到组织蛋白酶L基因cDNA全长序列,命名为CqCatL(GenBank登录号:KJ913663),同时检测了该... 为深入了解红螯光壳螯虾组织蛋白酶L基因的表达特性及维生素C对其表达的影响,实验利用RACE-PCR技术及荧光定量PCR技术,从红螯光壳螯虾肝胰腺中克隆得到组织蛋白酶L基因cDNA全长序列,命名为CqCatL(GenBank登录号:KJ913663),同时检测了该基因在红螯光壳螯虾各个组织及添加了不同浓度维生素C的组别中的表达。结果显示,该基因全长1 810 bp,开放阅读框长度为1 026 bp,编码341个氨基酸残基,预测的分子量和等电点(pI)分别为37.63 ku和5.17。同源性分析结果显示,该基因编码的蛋白与其他虾蟹类有较高的相似性,说明组织蛋白酶L基因在甲壳动物具有较高的保守性。组织荧光定量PCR结果显示,CqCatL基因在红螯光壳螯虾的多个组织中均有表达,其中肝胰腺中表达量最高,其次为血细胞,在肠及触角腺中也有一定量的表达。在基础饲料中添加不同水平的维生素C后,CqCatL基因的表达量也存在明显差异,其中维生素C添加量为400 mg/kg的组别中该基因的表达量最高。研究表明,组织蛋白酶L基因在红螯光壳螯虾的生长发育过程中有重要的作用,且其表达量受维生素C的影响。 展开更多
关键词 红螯光壳螯虾 维生素C 组织蛋白酶L基因 克隆 组织表达分析
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山羊组织蛋白酶L基因克隆、序列分析及组织表达研究
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作者 黄建文 王晓平 +1 位作者 王念璐 徐刚毅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期1-9,共9页
试验旨在克隆山羊组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)基因,并进一步探讨该基因结构与功能的关系,揭示其组织表达规律。本研究以天府肉羊为试验材料,运用同源序列克隆技术,对山羊CTSL基因进行克隆,并对其进行生物信息学分析及组织表达研究。... 试验旨在克隆山羊组织蛋白酶L(cathepsin L,CTSL)基因,并进一步探讨该基因结构与功能的关系,揭示其组织表达规律。本研究以天府肉羊为试验材料,运用同源序列克隆技术,对山羊CTSL基因进行克隆,并对其进行生物信息学分析及组织表达研究。结果表明,山羊CTSL基因编码区(CDS区)长1005bp,共编码334个氨基酸;山羊CTSL氨基酸与绵羊的同源性最高(99.10%),其次是牛(96.71%)、猪(90.12%)、人(76.95%)、大鼠(76.12%)、小鼠(75.82%)、青鳉鱼(66.17%)和斑马鱼(61.42%);经预测山羊CTSL可能含有1个Inhibitor_129结构域和1个Pept_C1结构域;山羊CTSL基因在11个组织中均有表达,但在肺脏和肾脏中的表达量显著高于在心肌、肝脏、脾脏、胸肌、腹肌、腿肌、膈肌、眼肌和比目鱼肌中的表达量(P<0.05)。 展开更多
关键词 山羊 组织蛋白酶L基因 克隆 序列分析 组织表达
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组织蛋白酶Z基因启动子部分位点在成人哮喘中的差异性甲基化表达及意义
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作者 张黎莎 杨贤苗 钱粉红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第7期874-878,共5页
目的探讨组织蛋白酶Z基因(CTSZ)启动子区位点(cg01623438,cg02744249)在哮喘患者中的差异性甲基化表达及其与哮喘控制状态和肺功能的相关性,并探讨在成人哮喘诊断中的应用价值。方法选取于我院就诊的哮喘患者30例为哮喘组,根据哮喘控制... 目的探讨组织蛋白酶Z基因(CTSZ)启动子区位点(cg01623438,cg02744249)在哮喘患者中的差异性甲基化表达及其与哮喘控制状态和肺功能的相关性,并探讨在成人哮喘诊断中的应用价值。方法选取于我院就诊的哮喘患者30例为哮喘组,根据哮喘控制评分将其分为三组,同时选取性别年龄匹配的同期健康体检成人30例为对照组。采集鼻黏膜上皮细胞,检测两位点甲基化水平并进行肺功能相关性分析,绘制ROC曲线分析其诊断应用价值。结果哮喘组两位点甲基化水平均低于正常对照组,且哮喘未控制组中甲基化水平最低,部分控制组次之,控制组最高。甲基化水平与肺功能改变呈负相关。单位点cg01623438的ROC曲线分析示,曲线下面积(AUC)为0.806(95%CI:0.683~0.896),敏感性为100%,特异性为50%(P <0.000 1);单位点cg02744249分析示AUC为0.749(95%CI:0.620~0.852),敏感性为43.3%,特异性为100%(P=0.000 1);两位点联合分析示AUC为0.827(95%CI:0.707~0.912),敏感性为66.7%,特异性为83.3%(P <0.000 1)。结论哮喘患者CTSZ启动子区出现明显低甲基化修饰,且与哮喘控制情况及肺功能存在一定相关性,提示可能对成人哮喘患者的诊断具有一定价值。 展开更多
关键词 哮喘 鼻黏膜上皮细胞 组织蛋白酶Z基因 DNA甲基化 肺功能
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与宿主昆虫液化相关的杆状病毒基因及其蛋白 被引量:5
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作者 金利容 刘凯于 胡秋婷 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期76-80,共5页
昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾... 昆虫被杆状病毒感染后会发生液化现象,这有利于病毒向周围环境扩散。目前在杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒NPV和GV中,发现与昆虫宿主液化相关的基因有组织蛋白酶基因V-cath基因和几丁质酶基因。V-cath基因表达产物在苜蓿银纹夜蛾多角体病毒(AcMNPV)中能特异性降解昆虫细胞内的肌动蛋白。几丁质酶不仅参与了虫体体表面几丁质的降解,同时还参与V-CATH蛋白前体的加工过程,起分子伴侣的作用。对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的研究表明其FP25K基因表达产物通过影响组织蛋白酶的释放与分泌而参与虫体液化。简要综述了此3种基因及其表达产物的结构、功能与特性,并讨论了它们在生产上的应用前景。 展开更多
关键词 宿主液化 组织蛋白酶基因 几丁质酶基因 FP25K基因
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金属蛋白酶组织抑制因子转染骨髓间充质干细胞静脉输入治疗缺血性心肌病 被引量:2
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作者 易海波 刘军 蒋丽华 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第36期6724-6729,共6页
背景:金属蛋白酶组织抑制因子1可能通过抑制基质金属蛋白酶活性降低干细胞侵袭能力,提高其归巢修复能力。目的:观察转染金属蛋白酶组织抑制因子1基因骨髓间充质干细胞移植修复损伤心肌的能力。方法:开胸结扎SD大鼠冠状动脉前降支建立心... 背景:金属蛋白酶组织抑制因子1可能通过抑制基质金属蛋白酶活性降低干细胞侵袭能力,提高其归巢修复能力。目的:观察转染金属蛋白酶组织抑制因子1基因骨髓间充质干细胞移植修复损伤心肌的能力。方法:开胸结扎SD大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,1周后随机分组:空白组经尾静脉内注射DMEM悬液;干细胞组经尾静脉内注射含1×107骨髓间充质干细胞的DMEM悬液;绿色荧光蛋白-干细胞组经尾静脉内注射转染带有绿色荧光蛋白基因慢病毒空载体的骨髓间充质干细胞(1×107)DMEM悬液;TIMP-1-shRNA-干细胞组经尾静脉内注射转染TIMP-1-shRNA的骨髓间充质干细胞(1×107)DMEM悬液。结果与结论:造模后,4组大鼠心脏功能受损,收缩能力下降,治疗4周后心脏功能均有不同程度改善:与空白组比较,干细胞组、绿色荧光蛋白-干细胞组、TIMP-1-shRNA-干细胞组心脏收缩功能明显提高(P<0.05),心肌梗死面积百分比明显缩小(P<0.05),梗死区毛细血管密度明显增加(P<0.05),且TIMP-1-shRNA-干细胞组改善程度优于干细胞组、绿色荧光蛋白-干细胞组(P<0.05)。说明转染金属蛋白酶组织抑制因子1基因的骨髓间充质干细胞移植能够明显改善损伤心肌功能,修复缺血性心肌病。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 金属蛋白酶组织抑制因子1基因 基因转染 心肌梗死 细胞移植 干细胞
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猪Cathepsin B基因和Cystatin B基因mRNA表达的发育性变化及组织差异 被引量:2
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作者 陈磊 王金勇 +1 位作者 李学伟 刘良 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期4341-4348,共8页
【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分... 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0~5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值出现较早,并在4月龄后再次出现急剧上升。CSTB mRNA表达量在梅山猪中表现出生初期较高,随后逐渐降低的表达模式,长白猪的表达模式则为出生后表达量急剧升高,2月龄达到峰值,随后逐渐降低。2品种猪背最长肌组织CTSB和CSTB mRNA表达量表现出显著正相关。【结论】CTSB和CSTB mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,2基因mRNA表达量呈显著正相关。 展开更多
关键词 组织蛋白酶B基因(CTSB) 胱抑素B基因(CSTB) 表达量 嫩度
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