难治性癫痫儿童血浆激肽释放酶、组织蛋白酶B的表达及其临床意义

目的:探讨难治性癫痫儿童血浆激肽释放酶(KLK)、组织蛋白酶B(catB)表达及其临床意义.方法:选取2017年3月至2019年3月河南中医药大学第五临床医学院收治的难治性癫痫患儿43例为研究对象,纳入研究组.选择同期在本院治疗的治疗有效癫痫患儿,同期在本院体检的健康儿童作为对照,分别纳入治疗有效组(n=35)及对照组(n=50).①对3组受试儿血浆KLK、catB,白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平分别进行统计学分析.②分析研究组患儿血浆KLK、catB水平,分别与其血浆IL-8、IL-6、TNF-α水平的相关关系.③受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC),对难治性癫痫的诊断截断值、诊断灵敏度及特异度.④采取多因素非条件Logistic回归分析难治性癫痫临床诊断的独立影响因素.结果:①研究组患儿血浆KLK、catB、IL-6、IL-8、TNF-α水平,均显著高于对照组、治疗有效组,并且差异均有统计学意义(P<0.05).②研究组患儿血浆KLK、catB水平与其IL-6、IL-8、TNF-α水平,均呈正相关关系(r=0.625、0.628、0.657,0.634、0.619、0.664,P<0.05).③血浆KLK、catB水平ROC曲线的AUC分别为0.889、0.856,对难治性癫痫的诊断截断值分别为3.99 U/mL、3.66 U/mL,二者单独诊断难治性癫痫的灵敏度分别为72.10%、72.10%,特异度分别为92.00%、94.00%;二者联合诊断的AUC为0.950,灵敏度为86.00%,特异度为90.70%.④血浆KLK高表达(OR=2.652,95%CI:1.668~4.218,P<0.05),以及catB高表达(OR=2.635,95%CI:1.704~4.075,P<0.05),均是导致患儿发生难治性癫痫的独立危险因素.结论:难治性癫痫儿童血浆KLK、catB水平高表达,对难治性癫痫患儿的临床诊断具有重要参考价值.

组织蛋白酶B及其组织抑制剂在卵巢恶性肿瘤组织中表达及其意义的研究

目的:探讨组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)及其组织抑制剂(cystatin C,CC)在卵巢肿瘤组织中的表达,及其与卵巢恶性肿瘤临床病理特征和预后的关系。方法:应用RT-PCR方法检测47例卵巢恶性肿瘤、21例良性卵巢肿瘤和20例正常卵巢组织中CB及CC的表达情况,进行阳性率及相对表达含量的比较,并将其结果与临床病理学资料进行统计学分析。结果:CB在卵巢恶性肿瘤中的表达水平(0.8792±0.82081)明显高于良性肿瘤中的表达水平(0.3911±0.32814),P=0.006。其相对表达含量与腹水量有关。CC卵巢恶性肿瘤中的表达水平(1.5306±1.84967)明显高于良性肿瘤中的表达水平(0.6903±0.50520),P=0.018。其相对表达含量在病理分级、肝转移、大网膜转移以及腹水方面,差异均有统计学意义,P<0.05。多因素生存回归分析显示,CB可以作为卵巢癌预后的独立因素。结论:CB及CC可能与卵巢癌的侵袭转移有关。

烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达

利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。

日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果 用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论 Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。

组织蛋白酶B研究进展

组织蛋白酶B(cathepsinB:EC3.4.22.1)是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶,其作用非常广泛,参与机体多种生理、病理过程.尤为重要的是,它能促进肿瘤细胞浸润转移,因此成为目前诊断、治疗恶性肿瘤的研究热点.综述了组织蛋白酶B的生物学特性、基因与蛋白结构特点、表达调控机制,以及应用方面的研究.

红景天苷下调组织蛋白酶B和NF-κBp65水平改善大鼠肺纤维化

目的:探讨红景天苷改善大鼠肺纤维化的相关机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、肺纤维化模型组、吡非尼酮组和红景天苷高剂量组、中剂量组、低剂量组。测定6组肺系数,血气分析,检测肺泡灌洗液中白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、乳清脱氢酶(LDH)含量,肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,血清III型前胶原(PC-III)和IV型胶原(COL4)含量,溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin,CB)和NF-κBp65表达的水平。结果:模型组肺系数明显高于空白组(P<0.05),而氧分压明显低于空白组(P<0.05);吡非尼酮组、红景天苷高、中、低剂量组肺系数相比模型组均下降(P<0.05),氧分压则升高(P<0.05)。模型组中ALB,ALP,LDH含量较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,ALB,ALP,LDH呈下降趋势(P<0.05)。模型组谷胱甘肽(GSH)含量较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,GSH含量呈下降趋势(P<0.05)。模型组肺组织中HYP及血清PC-III和COL4含量较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,HYP及血清PC-III和COL4含量呈下降趋势(P<0.05)。模型组CB和NF-κBp65表达较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,CB和NF-κBp65表达呈下降趋势(P<0.05)。结论:红景天苷能改善大鼠肺纤维化,其机制可能与降低大鼠肺组织的CB和NF-κBp65的表达有关。

祛湿化瘀方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠组织蛋白酶B和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的:研究祛湿化瘀方防治大鼠非酒精性脂肪肝的作用机制。方法:除正常对照组5只外,Wistar雄性大鼠30只运用四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)皮下注射联合高脂低蛋白饮食建立非酒精性脂肪肝模型。自造模2周后,随机分为模型组、祛湿化瘀方组和甘乐(复方二氯醋酸二异丙胺)组,每组10只,分别予祛湿化瘀方和甘乐10ml/kg灌胃。用药2周后取材,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量、肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量;并分析其指标间的相关性。蛋白印迹法检测肝组织组织蛋白酶B(cathepsin B,Ctsb)、磷酸化κB抑制蛋白(phospho-inhibitor kappa B,P-IκB)和TNF-α蛋白表达。免疫组织化学染色检测肝组织中Ctsb表达。结果:祛湿化瘀方可显著降低模型大鼠肝组织TG(P<0.05)、FFA(P<0.01)含量和血清ALT活性(P<0.05),而对照药物甘乐只显示有降低ALT活性(P<0.05)作用;模型组肝组织Ctsb、P-IκB、TNF-α蛋白表达均高于正常对照组,同时血清TNF-α水平显著上升;而祛湿化瘀方组的上述蛋白表达则低于模型组。肝组织TG与FFA含量、血清ALT活性呈正相关;血清TNF-α与肝组织FFA含量、血清ALT活性呈正相关。结论:祛湿化瘀方抑制肝脏脂肪沉积和炎症作用可能与其抑制FFA以减轻其下游"FFA-Ctsb-TNF-α"肝脂毒性通路有关。

腌干鲢鱼组织蛋白酶B、L活力变化的响应面法预测研究

以鲢鱼为原料,进行腌制和热泵干燥加工,研究内源组织蛋白酶B、L活性在加工过程中的变化。选取加工过程对鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)组织蛋白酶B、L活力影响较大的3个工艺参数(温度、pH值、盐质量分数)作为试验因素,并根据酶学特性和干燥过程中各理化指标的测定结果确定其试验水平。采用响应面法考察此3因素对组织蛋白酶B、L活性的影响,并根据回归方程对腊干鲢鱼加工过程中的组织蛋白酶活力进行预测。结果表明:回归方程可用于组织蛋白酶B、L实际活力预测;两种酶的潜在活力在加工过程中均呈下降趋势,加工结束时组织蛋白酶B和L的潜在酶活力分别为初始的43.18%和26.08%;通过回归方程对组织蛋白酶B、L在腌制前、腌制后、干燥2d、干燥5d、干燥7d实际活力进行预测,组织蛋白酶B实际酶活力分别为潜在酶活力的36.7%、39.9%、46.5%、46.5%和53.5%,而组织蛋白酶L则为6.6%、5.6%、10.4%、10%和12.6%。

扶桑绵粉蚧组织蛋白酶B基因的克隆、原核表达和不同发育阶段表达分析

昆虫组织蛋白酶B在昆虫代谢过程中发挥重要作用。本研究利用RACE技术克隆了扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsis Tinsley组织蛋白酶B基因的开放阅读框(ORF)序列,命名为PsCb(GenBank登录号:JQ727999)。生物信息学分析表明,该基因的开放阅读框包含927bp的片段,编码308个氨基酸。多序列比对表明,该基因编码的蛋白在N端变异较大,在C端保守性高。组织蛋白酶B基因的系统进化树结果表明扶桑绵粉蚧组织蛋白酶独自成为一支。原核表达电泳检测到一条大约35kDa的目的条带,与预测的蛋白分子量相符。组织蛋白酶B基因在扶桑绵粉蚧各个虫态均有表达,卵期表达量相对较低,2龄若虫期达到最高峰,然后下降。本研究为进一步研究该基因的功能并开发出组织蛋白酶抑制剂,从而研制出扶桑绵粉蚧杀卵剂和胚胎发育抑制剂等提供理论依据。

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的 观察日本血吸虫 31k Da组织蛋白酶 B DNA疫苗 (Sj31B1 N)在小鼠体内的保护性免疫效果。方法 用 Sj31B1 N和 Sj31B1 N +p UC DNA疫苗肌注免疫 BAL B/ C小鼠 ,用空白质粒载体VR10 12做对照 ,在 0、4、8周共免疫 3次 ,每次免疫前及末次免疫后 4周从尾静脉采血收集血清 ,经EL ISA法检测小鼠血清抗体升高时 ,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠。结果 Sj31B1 N和 Sj31B1 N+p U C减虫率分别为 2 4.2 %和 2 2 .0 % ;肝卵减少率分别为 34 .9%和 39.5 % ,每雌肝卵减少率分别为 30 .4%和 35 .3%。结论 小鼠接种 Sj31B1 N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用。加质粒佐剂 p

冬虫夏草对糖尿病大鼠组织蛋白酶B及其抑制剂C表达的影响

目的应用虫草菌丝对糖尿病肾病(DN)模型大鼠进行干预,探讨其作用效果及可能的作用机制。方法将Wistar大鼠分成正常组和糖尿病(DM)组,DM组大鼠给予链脲佐菌素(STZ)55mg/kg腹腔内注射,成模后随机分为模型组和治疗组每组大鼠分别在第4、8、16周各处死10只,在处死前留取24h尿量测24h尿白蛋白和尿肌酐,留取血标本离心后测血肌酐,留取肾脏标本用免疫组化和实时荧光定量PCR方法测胱抑素(CC),组织蛋白酶B(CB),Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)的表达。结果与正常组比较模型和治疗组大鼠内生肌酐清除率(Ccr)和24h尿白蛋白第4周开始升高(P<0.01),免疫组化和PCR结果显示CB、CC、ColⅣ、FN在第8周出现明显上调(P<0.01或P<0.05),模型组CB在16w下调(P<0.01),与模型组相比,治疗组的CB,CC,ColⅣ,FN在前8周无显著变化,第16周CC,ColⅣ,FN表达下调(P<0.01或P<0.05),CB的表达上调(P<0.01)。结论虫草菌丝通过调节CB、CC的平衡来减少DN细胞外基质(ECM)的沉积,起到对DN的保护作用。

组织蛋白酶B抑制剂CA-074Me对小鼠病毒性心肌炎的干预作用

目的观察组织蛋白酶B(cathepsinB)抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠的干预作用。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(N组,n=10)、心肌炎对照组(V组,n=15)、低剂量干预组(L组,n=15)及高剂量干预组(H组,n=15)。后三组经腹腔接种柯萨奇病毒(CVB3m)诱发急性心肌炎,L组和H组于病毒接种后第2d分别腹腔注射CA-074Me0.4mg/kg和4mg/kg,均连续使用7d(2～8d),第15d处死全部存活小鼠并取其心脏,采用RT-PCR和免疫组化等方法半定量分析各组小鼠心肌组织中cathepsinB基因转录及蛋白表达水平。结果V组与N组比较,心肌中cathepsinBmRNA及蛋白表达水均明显增加(P<0.05);L组与V组比较,心肌中cathepsinBmRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),小鼠生存率虽然有所升高,但差异无显著性(P>0.05);H组与V组相比,心肌组织中cathepsinBmRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01),心肌损害减轻,小鼠生存率明显升高,差异有高度统计学意义(P<0.05)。结论CA-074Me通过抑制cathepsinB的表达,减轻心肌损害,提高感染小鼠的存活率,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。

暗纹东方鲀肌肉组织蛋白酶B提取工艺优化

为获得暗纹东方鲀组织蛋白酶B的最佳提取工艺条件,在单因素试验的基础上,通过Plackett-Burman设计对影响组织蛋白酶B活力的因素进行筛选,结果表明:料液比、磷酸盐缓冲液p H值和硫酸铵饱和度这3个因素显著影响酶活力,然后用响应面分析法确定了主要影响因素的最佳提取条件为:料液比1∶2.1、磷酸盐缓冲液p H 7.0、硫酸铵饱和度99.2%,在此条件下组织蛋白酶B活力的预测值为32.65 U/g,实测值为32.52 U/g,相对误差为0.39%。说明建立的模型切实可行,为进一步研究组织蛋白酶B的提取工艺提供理论依据。

组织蛋白酶B特异性siRNA对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B基因表达的影响

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B(CB)基因表达的影响。方法:设计并用体外转录方法合成针对CB基因的siRNA,转染EC9706细胞(设10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L3个转染浓度),分别培养24h、48h、72h(实验组),采用免疫细胞化学及原位杂交方法检测转染细胞中CB蛋白和mRNA表达的变化,并设正常对照、空白对照、无关对照。结果:不同浓度siRNA转染24h、48h、72hEC9706细胞CB蛋白表达量均较正常、空白及无关对照降低(P<0.05),以转染72h的抑制效应最为明显,但3者相比差异无统计学意义(P>0.05)。3个时间段内随浓度增加siRNA抑制效应增强,3者相比差异有统计学意义(P<0.05),正常对照、空白对照、无关对照均未表现出对CB蛋白表达的抑制效应。转染siRNA后部分细胞形态发生改变。结论:特异性siRNA能有效抑制EC9706细胞中CB蛋白和mRNA表达。

日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶基因的获得及结构与功能分析

目的 从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)中国大陆株 (chinesemainlandstrain)成虫cDNA文库中获得日本血吸虫新基因 -组织蛋白酶B内切酶基因 (CathepsinBendopeptidase) ,利用生物信息学技术对其结构和功能进行分析和预测。方法 从已构建好的日本血吸虫成虫cDNA文库中挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并进行生物信息学分析和登录 ;使用NCBI,SAPS ,TMHMM ,Signal,PsortII,Protscale和Scanprosite等软件对新基因的结构和功能进行分析和预测。结果 对 382个阳性克隆进行测序 ,获得部分新基因 ,其中包括组织蛋白酶B内切酶基因(AY2 2 6 984 )。利用Internet在线分析和相关生物信息学软件对新基因的结构和功能进行了分析和预测。结论 日本血吸虫组织蛋白酶B内切酶基因所编码蛋白为一跨膜蛋白 ,含有半胱胺酸蛋白酶结构域 ,可能对宿主血红蛋白具有降解作用 ,从而在日本血吸虫生长。

胃癌组织中组织蛋白酶B的表达研究

组织蛋白酶Ｂ（ＣａｔｈｅｐｓｉｎＢ，简称ＣＢ）是细胞溶酶体巯基蛋白酶，可降解Ｌａｍｉｎｉｎ、Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、Ⅳ型胶原等细胞外基质成分，继而破坏一系列组织屏障，参与肿瘤的浸润转移［１］。国外对肠癌、乳腺癌、前列腺癌中ＣＢ作用研究较多，而对胃癌中...

海参肠道组织蛋白酶B粗酶提取条件的优化

为了获得具有较高活力的海参肠组织蛋白酶B,研究了其粗酶的提取条件。以Z-Arg-Arg-MCA为特异性底物,采用荧光光度法测定了酶活力。对提取海参肠组织蛋白酶B的浸提缓冲液、浸提时间和硫酸铵饱和度进行优化。结果表明,采用含5 mmol/L L-半胱氨酸、1 mmol/L EDTA、0.2%TritonX-100的50 mmol/L pH5.0的NaAc-HAc缓冲液浸提7 h后,选择80%饱和度的硫酸铵进行沉淀,能够有效地从海参肠道中提取组织蛋白酶B;同时研究了巯基保护剂对酶活力的影响。结果表明,巯基保护剂可提高酶的活力,这符合组织蛋白酶B结构中含有巯基的特性。在提取粗酶的过程中,添加巯基保护剂可有效地保证酶活力。

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶B mRNA表达的影响

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌中组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)mRNA表达的影响。方法Balb/c小鼠100只随机分为6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1mL灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VM模型,VM小鼠随机分为VM对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预VM组,分别以生理盐水、1%、3%、9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT-PCR半定量检测心肌CBmRNA表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20)vs45%(9/20),χ2=6.14P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组比较CBmRNA表达水平及心肌病变积分在F组显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对VM小鼠CBmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制CB表达,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。

亚硝酸盐胁迫对凡纳滨对虾肝胰腺抗氧化酶、热休克蛋白和组织蛋白酶B基因表达量的影响

用实时荧光定量PCR技术研究在20 mg/L亚硝酸盐胁迫下,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和硫氧还蛋白(TRx)等抗氧化相关酶以及热休克蛋白HSP70、组织蛋白酶B(CTSB)的基因表达量变化。结果表明,与对照组相比,在胁迫24 h时Mn-SOD基因表达量显著升高,CAT基因表达量在12~48 h升高,GPx基因表达量在24和48 h时升高,TRx基因表达量24 h时升高,而后在48和72 h时降低,Hsp70基因表达量在48和72 h时升高,CTSB基因表达量在48 h和72 h时升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在亚硝酸盐胁迫下,抗氧化酶相关基因、Hsp70和CTSB基因的表达量均被显著诱导进行免疫防御,4种抗氧化相关基因和Hsp70、CTSB基因对亚硝酸盐胁迫敏感度不同,在抗亚硝酸盐胁迫过程中有一定协同作用。

组织蛋白酶B表达与食管鳞癌浸润转移的关系

目的:探讨组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)表达与食管鳞癌发生、发展及浸润转移的关系。方法:应用免疫组化SP法和原位杂交方法检测49例食管癌组织及其相应的癌旁非典型增生组织和正常组织中CB蛋白及mR-NA的表达。结果:正常食管粘膜CB蛋白及mRNA均阴性表达,转移组癌组织及非典型增生组织CB蛋白及mRNA阳性表达率明显高于无转移组,两组间相比差异有显著性(P<0.05)。浸润至外膜组癌组织、非典型增生组织中CB蛋白和CBmRNA的阳性表达率均高于浅肌层组、深肌层组,差异有显著性(P<0.05);深肌层与浅肌层相比,差异无显著性(P>0.05)。转移组及无转移组癌组织CB蛋白及mRNA阳性表达率均高于相应的癌旁非典型增生组织,差异有显著性(P<0.01)。结论:人食管鳞癌组织CB蛋白及mRNA均呈高表达,CB表达与食管癌的发生、发展及浸润转移有关。