细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1靶向微小RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法 收集南阳市中心医院2017年1月2019年1月收治的37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将MDA-MB-453细胞分为CDKN2B-AS1阴性对照(si-NC组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA(si-CDKN2B-AS1组)、CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p阴性对照(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及CDKN2B-AS1小分子干扰RNA+miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂(si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用RT-qPCR法对CDKN2B-AS1及微小RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及MTT实验;采用Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测CDKN2BAS1对miR-339-5p的靶向调控。结果 在乳腺癌组织中CDKN2B-AS1表达水平上调[(2.23±0.08)比(1.00±0.06)](P<0.05)。抑制CDKN2B-AS1可增加G0期细胞比例[(43.29±3.76)%比(30.25±3.01)%]、P21表达水平升高,S期细胞比例[(21.91±3.10)%比(34.19±3.32)%]、细胞存活率[(53.02±5.38)%比(100.00±7.12)%]、迁移、侵袭数以及Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。CDKN2B-AS1靶向调控miR-339-5p,抑制miR-339-5p逆转抑制CDKN2B-AS1对MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论 抑制CDKN2B-AS可抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控miR-339-5p表达。

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因和妊娠糖尿病的关系

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A/2B基因(CDKN2A/2B)和妊娠糖尿病(GDM)的相关性,为GDM的早期诊断和治疗提供依据。方法选取本院2014年12月-2015年12月收治的GDM患者56例(GDM组)进行研究,同时选取正常糖耐量孕妇108例(正常组)以及2型糖尿病患者98例(T2DM组)进行对比,所有受试者均进行清晨空腹采血后进行DNA的提取,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,观察三组受试者CDKN2A/2B基因分布频率情况,并对CDKN2A/2B基因多态性与GDM的相关性进行分析。结果三组受试者中CDKN2A/2B基因rsl0811661位点均存在于TT、TC、CC三种基因型。TT基因分布频率,GDM和T2DM组显著高于正常孕妇组,差异有统计学意义;而GDM组和T2DM组相比,差异无统计学意义。正常组CC分布频率显著高于GDM组和T2DM组,差异有统计学意义;GDM组和T2DM组CC分布频率差异无统计学意义。三组TC分布频率相似,组间差异无统计学意义。正常组等位基因T的分布频率(34.3%)显著低于GDM组(58.9%)和T2DM组(60.2%),差异有统计学意义;但GDM组与T2DM组间的基因型和等位基因频率分布相近,组间差异无统计学意义。相关性分析发现,rs10811661危险等位基因T与GDM具有显著的相关性(r=4.227,P<0.05)。结论 CDKN2A/2B基因rs10811661位点存在基因多态性,其等位基因T可能为GDM的风险最高的等位基因,CDKN2A/2B基因可能是GDM的易感基因之一,可能为GDM和T2DM共同的易感基因。

微小RNA-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期

目的探讨卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma,KS)相关疱疹病毒(KSHV)编码的微小RNAs(miR),如miR-K1-5p,对KS细胞周期的调控作用及其机制。方法该研究进行于2020年1—12月,人脐静脉内皮细胞购自美国ScienCell。生物信息学软件预测miR-K1-5p的靶基因。双萤光素酶试验验证miR-K1-5p的靶基因[细胞周期素依赖性激酶抑制剂4(CDKN4)]。将miR-K1-5p模拟物转染后,行蛋白质印迹法(Western blotting)和q-PCR检测,分析G1/S期相关基因CDKN4、细胞周期蛋白A/细胞周期素依赖性激酶2(Cyclin A/CDK2)、细胞周期蛋白D2/细胞周期素依赖性激酶4(Cyclin D2/CDK4)的表达。碘化丙啶(PI)染色检测miR-K1-5p对内皮细胞(HUVECs)周期的影响。结果miR-K1-5p靶向CDKN4(miR-K1-5p mimics+CDKN4-WT组、mimics NC+CDKN4-WT组、miR-K1-5p mimics+CDKN4-MUT组、mimics NC+CDKN4-MUT组萤光素酶活性分别为0.42±0.05、0.81±0.04、0.82±0.03、0.80±0.05),负性调控CDKN4的表达(P<0.001),正性调控Cyclin A/CDK2和CyclinD2/CDK4的表达(P<0.05)。此外,miR-K1-5p可以加速细胞周期进程,促进G1/S期转换[S+G2期/G1+S+G2期:mimics组(23.37±0.29)%比mimics NC组(15.00±0.75)%,G1期:mimics组(76.63±0.28)%比mimics NC组(85.00±0.76)%,S期:mimics组(15.34±0.36)%比mimics NC(8.45±0.20)%,G2期:mimics组(8.02±0.17)%比mimics NC组(6.55±0.80)%]。结论miR-K1-5p调控G1/S期相关基因的表达影响内皮细胞周期。

急性冠脉综合征患者血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184水平与介入治疗后冠状动脉再狭窄发生的相关性研究

目的分析急性冠脉综合征(ACS)患者血清长链非编码RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B基因反义RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)、微小RNA-184(miR-184)水平与经皮冠状动脉介入(PCI)治疗后冠状动脉再狭窄(RS)发生的相关性。方法选取2020年2月至2023年3月在该院行PCI治疗的288例ACS患者,根据术后6个月复查造影结果分为RS发生组96例和RS未发生组192例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184相对表达水平;采用Pearson相关性分析血清lncRNA CDKN2B-AS1与miR-184相关性;影响ACS患者PCI后RS发生的因素采用多因素Logistic回归分析;以受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184对ACS患者PCI后RS发生的评估价值。结果与RS未发生组相比,RS发生组血清lncRNA CDKN2B-AS1水平显著升高,miR-184水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);两组超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素18(IL-18)、总胆红素(TBIL)及心肌肌钙蛋白I(cTnI)比较,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关性分析显示,ACS患者血清lncRNA CDKN2B-AS1与miR-184水平呈显著负相关(r=-0.427,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,lncRNA CDKN2B-AS1、hs-CRP、IL-18、cTnI是影响ACS患者PCI后RS发生的危险因素,miR-184、TBIL是影响ACS患者PCI后RS发生的保护因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184及二者联合对ACS患者PCI后RS发生评估的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.844、0.929,二者联合对ACS患者PCI后RS发生评估的AUC显著高于血清lncRNA CDKN2B-AS1、miR-184单独评估(Z_(二者联合-lncRNA CDKN2B-AS1)=4.490、Z_(二者联合-miR-184)=3.429,均P<0.05)。结论ACS患者血清lncRNA CDKN2B-AS1水平显著升高,miR-184水平显著降低,与ACS患者PCI后RS发生具有相关性,均是影响ACS患者PCI后RS发生的因素,且二者联合对ACS患者PCI后RS发生的评估效能更佳。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21^(WAF1/CIP1)表达

目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞 4、8、12、24、48 h, 提取细胞的总 mRNA和总蛋白, 采用RT PCR技术检测 p21WAF1/CIP1mRNA表达情况, 并用免疫印迹技术 (Western blot) 观察组蛋白 H3 的乙酰化水平变化及 p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化; 在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对 p21WAF1/CIP1 mRNA和 p21WAF1/CIP1 蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平, 促进细胞周期依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1的表达。

PRMT5和CDKN2B在宫颈癌组织的表达及临床意义

目的研究蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)在宫颈癌中的表达及临床意义。方法收集2019年3月—2020年3月南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科诊治宫颈癌患者88例。免疫组织化学法检测宫颈癌和癌旁组织中PRMT5、CDKN2B表达;采用Spearman相关分析PRMT5与CDKN2B表达的相关性;比较不同临床特征宫颈癌癌组织中PRMT5、CDKN2B表达的差异;Kaplan-Meier曲线评估PRMT5、CDKN2B表达对宫颈癌患者无进展生存预后的影响;多因素Cox回归分析宫颈癌患者无进展生存预后的影响因素。结果癌组织中PRMT5蛋白阳性率70.45%(62/88),高于癌旁组织6.82%(6/88)(χ^(2)=75.155,P<0.001)。宫颈癌组织中CDKN2B阳性率22.73%(20/88),低于癌旁组织79.55%(71/88)(χ^(2)=75.336,P<0.001)。宫颈癌中PRMT5与CDKN2B呈负相关(r=-0.734,P<0.001)。FIGOⅠB2~ⅡA期、有淋巴结转移宫颈癌组织中PRMT5阳性率高于FIGOⅠA~ⅠB1期、无淋巴结转移者,而CDKN2B阳性率则降低(χ^(2)/P=6.359/0.012、4.606/0.032、5.205/0.023、3.893/0.048)。PRMT5阳性组3年累积无进展生存率74.19%(46/62),低于PRMT5阴性组92.31%(24/26)(Log-Rankχ^(2)=4.386,P=0.017)。CDKN2B阴性组3年累积无进展生存率75.00%(51/68),低于CDKN2B阳性组95.00%(19/20)(Log-Rankχ^(2)=4.423,P=0.012)。FIGO分期ⅠB2~ⅡA期、合并淋巴结转移、PRMT5阳性、CDKN2B阴性是影响宫颈癌患者无进展生存预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.407(1.159~1.696),1.464(1.201~1.784),1.614(1.189~2.192),1.595(1.191~2.136)]。结论宫颈癌组织中PRMT5表达升高,CDKN2B表达降低,两者与宫颈癌患者的不良临床病理特征有关,是评估宫颈癌预后的标志物。

甲状腺乳头状癌组织中FSCN1、CDKN2B表达水平及其对患者预后的影响

目的:分析甲状腺乳头状癌组织中肌成束蛋白-1(fascin-1,FSCN1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)表达水平及其对患者预后的影响。方法:收集2017年10月—2019年10月潜江市中心医院病理确诊的104例甲状腺乳头状癌组织标本及癌旁组织标本。采用免疫组织化学染色法检测标本中FSCN1、CDKN2B表达水平,分析FSCN1、CDKN2B表达与甲状腺乳头状癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:甲状腺乳头状癌患者癌组织FSCN1阳性表达率(63.46%)高于癌旁组织(33.65%),CDKN2B阳性表达率(42.31%)低于癌旁组织(59.62%),差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、被膜侵犯、淋巴结转移甲状腺乳头状癌患者FSCN1、CDKN2B表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素结果显示,不同TNM分期、被膜侵犯、淋巴结转移、FSCN1及CDKN2B表达甲状腺乳头状癌患者3年生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05);多因素分析得出,淋巴结转移、被膜侵犯、TNMⅢ期、Ⅳ期、FSCN1阳性、CDKN2B阴性均是甲状腺乳头状癌预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:甲状腺乳头状癌患者癌组织FSCN1表达上调,CDKN2B表达下调,其表达水平不仅与TNM分期、被膜侵犯、淋巴结转移有关,同时可影响甲状腺乳头状癌患者预后。

RNA干扰INK4位点反义非编码RNA抑制人肺癌细胞系生长的分子机制

目的探讨INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)下调对CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇的调控及对人肺癌细胞生长的影响。方法通过RNA干扰下调人肺鳞状细胞癌细胞系H520中ANRIL的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰前后细胞中ANRIL mRNA的表达变化,绘制细胞生长曲线;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测RNA干扰前后细胞中细胞同期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达变化。结果 RNA干扰可显著下调ANRIL mRNA的表达(P<0.05),ANRIL下调能抑制人肺鳞状细胞癌细胞系H520的生长(P<0.05),引起CDKN2B、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 RNA干扰AN-RIL能抑制人肺鳞状细胞癌细胞的生长,ANRIL可能通过调控CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇起作用。

急性肾损伤组织中细胞周期调控蛋白的表达变化及其意义

目的观察细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)、p21在不同原因所致急性肾损伤(AKI)组织中的表达变化,并探讨其意义。方法选择行肾穿刺活检术的患者纳入研究,包括AKI患者108例和无器质性肾脏病变的肾功能异常的患者(对照组)39例。AKI患者中,肾毒性AKI 63例(肾毒性AKI组)、缺血性AKI 45例(缺血性AKI组)。取各组肾穿刺活检标本,采用免疫组织法检测Cyclin B1、CDK4、p21蛋白。结果肾毒性AKI组、缺血性AKI组的肾小管细胞和肾间质中p21、Cyclin B1、CDK4蛋白表达积分均高于对照组(P均<0.05)。肾毒性AKI组及缺血性AKI组肾组织中Cyclin B1、CDK4、p21蛋白表达积分相比,P均>0.05。结论 AKI组织中p21、Cyclin B1、CDK4蛋白表达上调,在肾毒性AKI和缺血性AKI中三种细胞周期调控蛋白表达变化的趋势一致;细胞周期调控蛋白的表达与AKI病因无关。

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

[目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。[方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型+si-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1组、模型+miR-NC组、模型+miR-98-5p模拟物组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。[结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P<0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。[结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。

果蝇zeste基因增强子的人类同源物2促进小细胞肺癌化疗耐药的作用及其分子机制

目的:观察果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)对小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)化疗耐药的影响并研究其潜在分子机制。方法:首先使用RT-PCR和蛋白印迹方法检测SCLC初治和耐药患者组织标本、敏感细胞株(H446)和耐药细胞株(H446DDP)的EZH2表达差异;再通过CCK8方法检测敲低EZH2后的耐药SCLC细胞株对化疗药物半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)值变化;最后通过RNA测序和验证方法筛查EZH2的下游靶基因以及CHIP-qPCR方法检测EZH2敲低后其靶基因启动子区的EZH2表达变化。结果:SCLC化疗耐药患者EZH2阳性表达水平(80%)高于化疗敏感患者,耐药细胞株(H446DDP)的EZH2 mRNA和蛋白表达水平均高于敏感细胞株(H446)(P<0.01,P<0.001);敲低EZH2表达后,耐药SCLC细胞株对化疗药物IC50值降低;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-1A(Cyclin-Dependent Kinase Inhibitor 1A,CDKN1A)表达增加,且CDKN1A基因启动子EZH2蛋白沉积显著减少。结论:EZH2促进SCLC化疗耐药,其分子机制与EZH2靶向调控CDKN1A基因表达相关。

MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡。方法通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组。使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组。同时将正常培养的心肌细胞作为Con组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量。结果与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNACDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论抑制miR-148b-3p的表达可通过靶向调控CDKN1B表达从而促进LPS诱导的心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡。

子宫内膜癌组织LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A表达及临床意义

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录本1(CARLo-5)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)的表达及临床意义。方法选取2016年1月—2018年1月广州市番禺区中心医院妇科诊治EC患者80例,采用荧光定量PCR检测癌组织及癌旁组织中LncRNACARLo-5相对表达量,免疫组化检测癌组织及癌旁组织中CDK2、CDKN1A蛋白表达。分析癌组织LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表达与临床病理参数的关系。Spearman秩相关分析LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表达的相关性。Kaplan-Meier生存分析不同LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表达对EC患者预后的影响。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A及三者联合检测对子宫内膜癌的诊断价值。结果与癌旁组织比较,EC癌组织LncRNACARLo-5表达升高(t/P=34.923/0.000);癌组织CDK2棕黄色阳性染色主要位于肿瘤细胞的细胞核,CDK2高表达率高于癌旁组织(χ^(2)/P=30.000/0.000);CDKN1A棕黄色阳性染色主要位于腺上皮细胞核,CDKN1A高表达率低于癌旁组织(χ^(2)/P=28.853/0.000)。癌组织LncRNACARLo-5、CDK2及CDKN1A表达与临床分期、肌层浸润深度及淋巴结转移相关(LncRNACARLo-5:t/P=3.987/0.000、3.025/0.003、3.975/0.000;CDK2:χ^(2)/P=7.317/0.007、27.423/0.000、5.602/0.018;CDKN1A:χ^(2)/P=5.897/0.015、6.663/0.010、6.312/0.012)。LncRNACARLo-5与CDK2表达呈正相关(r/P=0.472/0.000),与CDKN1A表达呈负相关(r/P=-0.455/0.000),CDK2与CDKN1A表达呈负相关(r/P=-0.439/0.007)。EC癌组织LncRNACARLo-5高表达、CDK2高表达及CDKN1A低表达的EC患者生存预后较差。LncRNACARLo-5、CDK2、CDKN1A及三者联合预测子宫内膜癌的曲线下面积(AUC)分别为0.807、0.775、0.747、0.841,三者联合检测对子宫内膜癌具有较高的诊断价值。结论EC中LncRNACARLo-5、CDK2表达上调,而CDKN1A表达下调,三者表达与肿瘤临床分期、肌层浸润深度及是否伴淋巴结转移有关,是EC患者不良生存预后的肿瘤标志物。

CDKN2B-AS1基因多态性与子宫内膜异位症的相关性研究

目的:研究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B-反义RNA(CDKN2B-AS1)基因多态性与子宫内膜异位症(EM)的相关性。方法:选择2017年12月至2019年7月邯郸市中心医院和河北医科大学第四医院收治的子宫内膜异位症的患者112例为病例组,另取同期因宫外孕、输卵管黏连等手术患者112例为对照组,采用DNA PCR测序法检测所有受试者血液CDKN2B-AS1基因多态性,分析CDKN2B-AS1基因rs10965235位点多态性与EM临床分期的关系,采用Logistic回归分析CDKN2B-AS1基因多态性对EM易感性的影响。结果:病例组与对照组年龄、BMI、月经周期、CDKN2B-AS1 rs4977574位点等位基因A与G、AA与AG+GG基因型频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。CDKN2B-AS1基因rs4977574位点与AA基因型比较,AG+GG基因型与EM易感性无关(OR=1.105,95%CI:0.819-1.491;P=0.124)。与对照组比较,病例组CDKN2B-AS1基因rs10965235位点等位基因C、CC基因型频率高,等位基因A、CA+AA基因型频率低(χ2=4.397、4.075,P=0.036、0.044),差异有统计学意义。与Ⅰ~Ⅱ期比较,III^IV期EM患者CDKN2B-AS1基因rs10965235位点CC基因型频率高、CA+AA基因型频率低,差异有统计学意义(χ2=5.168,P=0.023)。CDKN2B-AS1基因rs10965235位点,与CC基因型比较,携带CA+AA基因型可降低EM易感性(OR=0.564,95%CI:0.347-0.917,P=0.000)。结论:CDKN2B-AS1基因rs4977574位点与EM易感性无关,rs10965235位点基因多态性与中国北方女性EM易感性有关。

miR-222在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖与迁移的影响

目的探究miR-222在膀胱癌与癌旁组织中的表达差异,并且初步探讨其对膀胱癌细胞增殖、迁移能力及凋亡的影响。方法选取2018年1月至2019年6月在上海市松江区中心医院确诊并手术的45例膀胱尿路上皮癌患者,留取癌组织标本及配对癌旁组织,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测两者中miR-222的表达情况;脂质体瞬时转染miR-222 mimics、miR-222 inhibitor及miR-222 inhibitorNC至膀胱癌T24细胞,以空白T24细胞为对照组,通过MTT法、Transwell迁移实验、流式细胞术检测miR-222对T24细胞增殖、迁移能力及凋亡情况的影响;采用双荧光素酶报告基因检测验证miR-222的靶基因,Westernblot分析miR-222假定靶基因CDKN1B的表达水平,并通过免疫组化检测膀胱癌及癌旁组织中的p27蛋白表达的差异。结果miR-222在膀胱癌组织中的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);体外细胞实验结果显示,与对照组相比,上调miR-222能提高膀胱癌细胞增殖能力和加快细胞迁移速率,并抑制癌细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05);下调miR-222能抑制膀胱癌T24细胞的增殖、迁移能力并诱导细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05);荧光素酶报告基因检测结果表明miR-222可以靶向调控CDKN1B基因的表达,Westernbolt结果证实上调miR-222后膀胱癌T24细胞中CDKN1B(p27)表达水平明显下降,免疫组化染色结果证实膀胱癌组织中CDKN1B低表达,进一步印证了miR-222对CDKN1B的负调控作用。结论miR-222在膀胱癌组织中表达明显上调,其在体外可促进膀胱癌细胞的增殖及迁移,抑制癌细胞凋亡;其机制可能与靶向调控CDKN1B的表达有关,有望成为膀胱癌检测的分子标记物和治疗靶点。

miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中的表达

目的研究miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白在卡波西肉瘤中表达的意义。方法利用生物信息软件miRDB和TargetScan Custom筛选miR-K1-5p的靶基因。使用生物信息数据库确定靶基因参与的信号通路,分析通路上的关键基因。应用免疫组化法检测靶基因及关键基因(miR-K1-5p相关的G1/S期基因)编码的蛋白在卡波西肉瘤和作为对照的血管瘤中的表达,并分析患者性别、年龄与蛋白表达以及各蛋白表达之间的相关性。结果细胞周期素依赖蛋白激酶抑制剂4(CDKN4)是miR-K1-5p的靶基因,参与细胞周期信号通路,通路下游关键基因为细胞周期蛋白A(CCNA)、细胞周期蛋白D2(CCND2)、周期素依赖性激酶2(CDK2)、周期素依赖性激酶4(CDK4)。免疫组化检测各基因编码的蛋白,CDKN4在卡波西肉瘤中的阳性率低于血管瘤,CCNA、CCND2、CDK2、CDK4在卡波西肉瘤中的阳性率高于血管瘤(P均<0.05);在卡波西肉瘤中CDKN4、CCNA、CCND2、CDK2和CDK4的表达与性别、年龄均无关(P均>0.05);在卡波西肉瘤中CDKN4与CCNA、CCND2、CDK2和CDK4的表达均呈负相关,CCNA、CCND2、CDK2、CDK4各蛋白之间的表达互为正相关(P均<0.05)。结论miR-K1-5p相关的G1/S期基因编码的蛋白(CDKN4、CCNA、CCND2、CDK2、CDK4)的异常表达在卡波西肉瘤发生、发展中可能发挥重要作用。

TNFα诱导激活NF-κB上调抑癌基因CDKN2B表达

NF-κB通过转录调控其靶基因,在肿瘤发生发展和精准治疗中起关键作用。过表达抑癌基因细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)可抑制肿瘤细胞增殖并诱导凋亡,但是否受NF-κB调节尚无报道。本文发现,NF-κB直接结合并上调CDKN2B基因:在TNFα处理的He La细胞内,CDKN2B的基因区覆盖大量NF-κB结合峰,其中富集倍数大于20的结合峰有14个。TRANSFAC软件分析发现,NF-κB结合峰内包含大量经典的κB位点。Ch IP-q PCR证明,TNFα诱导NF-κB结合CDKN2B基因。将NF-κB结合峰中心区DNA片段插入荧光素酶报告基因载体中,发现该DNA片段的插入使荧光素酶相对活性上调至7.88倍,TNFα处理又使其相对活性提高到2.37倍,且NF-κB/p65 siRNA显著干扰其相对活性的升高。免疫荧光检测显示,TNFα诱导激活NF-κB进入细胞核,而NF-κB/p65 siRNA阻止它入核。此结果提示,我们成功构建了具有NF-κB转录活性差异的细胞模型,q PCR检测两个已知的NF-κB靶基因NFKB2和STAT5A的表达,进一步验证该细胞模型构建成功。利用此细胞模型,发现受TNFα诱导激活的NF-κB,能够上调CDKN2B基因。总之,本文发现抑癌基因CDKN2B是NF-κB新的靶基因,NF-κB直接结合并上调CDKN2B基因在转录水平的表达。本研究为抑癌基因CDKN2B的抗肿瘤应用奠定了基础。

小儿急性髓性白血病的CDKN2A和CDKN2B的拷贝数变异情况分析

目的探讨小儿急性髓性白血病(p-AML)的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CDKN)2A和CDKN2B基因的拷贝数变异(CNV)情况。方法下载癌症基因组图谱TCGA数据库中1978例p-AML的标本全基因组或全外显子组测序的综合分析结果和相应临床病理特征,采用GISTIC2.0整合队列分析764例体细胞CNV表现,采用cBioPortal在线分析CDKN2A和CDKN2B参与的信号通路情况。结果764例体细胞CNV数据显示29553个基因存在CNV,发生率为0.1%~59.6%,主要类型为纯合删除(HOMDEL)和扩增(AMP),排名前10的癌症基因CDKN2A、CDKN2B、MTAP、PRSS1、IKZF1、PAX5、ETV6、MLLT3、LRP6和CDKN1B的发生率依次为36.1%(276/764)、33.6%(257/764)、26.6%(203/764)、25.3%(193/764)、12.8%(98/764)、11.5%(88/764)、10.5%(80/764)、9.9%(76/764)、8.4%(64/764)和7.5%(57/764);其中CDKN2A的CNV表现:缺失352例(Deep Deletion 276例+Shallow Deletion 76例)、正常(Diploid)392例和扩增19例(Gain 15例+Amplification 4例),而CDKN2B为缺失342例(Deep Deletion 257例+Shallow Deletion 85例)、正常(Diploid)399例和扩增22例(Gain 17例+Amplification 5例)。CDKN2A和CDKN2B CNV均与ETV6-RUNX1融合状态有关,且两者共同在细胞凋亡和细胞周期通路中发挥作用。结论p-AML的基因CNV情况较为普遍,其中发生率最高的癌基因CDKN2A和CDKN2B与常见t(12;21)(p13;q22)易位形成的ETV6/RUNX1融合基因有关,基因CNV情况在p-AML的诊治中有一定潜在价值,值得在临床上推广。