结肠癌组织微小RNA-3607-3p、细胞周期蛋白E2表达及其与患者术后5年预后关系研究

目的:探讨结肠癌组织微小RNA-3607-3p(miR-3607-3p)、细胞周期蛋白E2(CCNE2)表达及其与患者术后5年预后的关系。方法:选取行结肠癌根治术治疗的88例结肠癌患者癌组织和癌旁组织。RT-qPCR法测定组织miR-3607-3p、CCNE2 mRNA表达。免疫组化法检测组织CCNE2蛋白表达。随访术后5年内结肠癌患者生存情况,根据生存情况将患者分为生存组(48例)和病死组(40例)。分析miR-3607-3p、CCNE2 mRNA与TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移的相关性。Cox回归分析结肠癌患者术后5年预后的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-3607-3p、CCNE2 mRNA对患者术后5年内生存的预测价值。结果:结肠癌组织miR-3607-3p表达水平低于癌旁组织,CCNE2 mRNA表达水平和CCNE2蛋白阳性表达率高于癌旁组织(均P<0.05)。miR-3607-3p低表达和CCNE2 mRNA高表达患者TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移的占比更高(均P<0.05)。结肠癌组织miR-3607-3p与CCNE2 mRNA、TNM分期、淋巴结转移呈负相关,与肿瘤分化程度呈正相关(均P<0.05)。CCNE2 mRNA与TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关(均P<0.05)。miR-3607-3p高表达、CCNE2 mRNA低表达患者5年总生存率高于miR-3607-3p低表达、CCNE2 mRNA高表达患者(均P<0.05)。病死组TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移的患者占比更高(均P<0.05)。病死组结肠癌组织CCNE2 mRNA和蛋白阳性表达率高于生存组,miR-3607-3p低于生存组(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、肿瘤低分化、有淋巴结转移、miR-3607-3p低表达、CCNE2 mRNA高表达、CCNE2蛋白阳性表达是影响结肠癌患者术后5年生存的独立危险因素(均P<0.05)。结肠癌组织miR-3607-3p、CCNE2 mRNA两者联合预测患者术后5年内生存的曲线下面积(AUC)高于miR-3607-3p、CCNE2 mRNA单独预测的AUC(均P<0.05)。结论:结肠癌组织miR-3607-3p呈低表达,CCNE2呈高表达,两者与患者术后5年预后有关,有望成为结肠癌患者术后5年内生存的预测指标。

长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18通过微RNA-497-5p/细胞周期蛋白E1轴调节弥漫性大B细胞淋巴瘤的增殖、凋亡和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcDNA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系。结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与siHCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1。结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡。

细胞周期蛋白E1基因在卵巢癌诊治中的作用

肿瘤细胞中基因拷贝数变异可影响细胞稳态,导致细胞恶变。细胞周期蛋白E1基因(CCNE1)编码细胞周期蛋白E1(Cyclin E1),CCNE1扩增或过表达改变Cyclin E1的表达,并影响其他基因的表达,参与多种恶性肿瘤的发生、发展。CCNE1扩增或过表达与卵巢癌的发生、耐药、靶向治疗及预后密切相关。该文综述CCNE1表达在卵巢癌诊治中的作用,以期有助于探寻新的卵巢癌治疗方法。

斑节对虾细胞周期蛋白E基因的克隆与表达分析

为了解细胞周期蛋白E(cyclin E)基因在斑节对虾(Penaeus monodon)发育过程中的作用,构建和测序了斑节对虾全组织cDNA文库,获得了斑节对虾细胞周期蛋白(Pmcyclin)E的部分表达序列。通过RACE技术克隆得到1条全长1 706 bp的cDNA序列。Pmcyclin E开放阅读框(ORF)为1 263 bp,编码420个氨基酸。生物信息学分析表明,该氨基酸序列含有周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区并含有N-糖基化位点及磷酸化位点。经BLAST同源性分析表明,该基因编码蛋白与红火蚁(Solenopsis invicta)、切叶蜂(Megachile rotundata)等多种节肢动物细胞周期蛋白E有很高的同源性。组织分布分析表明,该基因在斑节对虾精巢、卵巢、肠、脑、肝胰腺、胃和心脏组织中均有表达,其中卵巢中表达量较高,而心脏、胃及肝胰腺中表达量相对较低。分别对蜕皮抑制激素(MIH)注射和眼柄切除的对虾进行表达分析,发现眼柄切除后,Pmcyclin E大量表达,而注射MIH后细胞Pmcyclin E的表达量相对降低。结果表明,细胞cyclin E基因在斑节对虾卵巢发育过程中起重要作用,且眼柄切除对细胞cyclin E的表达具有影响,该结果为进一步探究斑节对虾卵巢的发育机理提供了理论依据。

细胞周期蛋白E和p27在鲍温样丘疹病和外生殖器表皮原位癌中的表达

目的:探讨细胞周期相关因子细胞周期蛋白E及其依赖性蛋白激酶抑制蛋白p27,在高危型人乳头瘤病毒(HPV)相关的鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌中的变化及意义。方法:采用通用型引物聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对51例外生殖器部位上述病变进行HPV DNA的检测和分型,应用免疫组化方法检测病变中细胞周期蛋白E和p27的表达。结果:40例鲍温样丘疹病、5例生殖器鲍温病及6例Queyrat增殖性红斑HPV DNA的阳性率分别为55.0％、100.0％和33.3％,HPV16为主要型别;高危型HPV相关的病变中细胞周期蛋白E的表达明显高于正常上皮,且HPV阳性组明显高于HPV阴性组,而p27表达明显低于正常上皮,且HPV阳性组明显低于HPV阴性组。上述疾病中细胞周期蛋白E与p27的表达呈负相关。结论:HPV16感染与鲍温样丘疹病及外生殖器表皮原位癌的发生有密切关系,并可能通过影响细胞周期蛋白E和p27表达及两者的相互作用引起感染上皮的增生及恶变。

细胞周期蛋白E2基因mRNA在胃癌组织中的表达

目的了解细胞周期蛋白E2(Cyclin E2)基因mRNA在胃癌组织中的表达情况及Cyclin E2与临床肿瘤病理的关系,探讨Cyclin E2在胃癌发生、发展、侵袭与转移中的作用。方法收集40例手术切除并经病理检查证实的胃癌组织标本,用于RNA提取。按Lauren方案分为肠型胃癌11例,弥漫型胃癌29例;按有无胃周围淋巴结转移分为转移组28例,非转移组12例。临床分期采用UICC的TNM方案,Ⅰ、Ⅱ期13例,Ⅲ、Ⅳ期27例。用RT-PCR法检测胃癌组织Cyclin E2基因mRNA表达。结果肿瘤组织表达Cyclin E2 mRNA均明显高于正常对照组织(P<0.05)。在肿瘤组织中可见Cyclin E2 mRNA在有淋巴结转移的肿瘤组织表达明显高于非淋巴结转移的肿瘤组织(P<0.01),TNM分期中Ⅲ、Ⅳ期者Cyclin E2 mRNA表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(P<0.05)。肿瘤组织中Cyclin E2 mRNA表达与性别及Lauren分型无关(P>0.05)。结论Cyclin E2基因可能促使胃癌转移,其表达水平可能有助于临床分期。

益气化瘀解毒方对慢性萎缩性胃炎癌前病变的疗效及对细胞周期蛋白E表达和肿瘤标记物的影响

目的:探讨益气化瘀解毒方对慢性萎缩性胃炎癌前病变的疗效及对细胞周期蛋白E表达和肿瘤标记物的影响。方法:选择2015年1月—2016年6月在医院接受治疗的90例气虚血瘀型萎缩性胃炎癌前病变患者为研究对象,按照随机数字表法分为对照组(45例)和观察组(45例),对照组给以常规治疗,观察组在对照组基础上给予口服益气化瘀解毒方,3个疗程后观察临床疗效,胃痛、纳差、乏力、嗳气、便溏中医证候积分,免疫组化法检测细胞周期蛋白E(Cyclin E)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,ELISA法检测血清肿瘤标志物白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:治疗3个疗程后,观察组总有效率93.33%高于对照组的75.56%(χ~2=5.414,P=0.020)。观察组的胃痛、纳差、乏力、嗳气、便溏中医证候积分均低于对照组(P<0.05)。观察组患者的胃组织Cyclin E和MMP-9蛋白表达低于对照组,而E-cadherin蛋白表达高于对照组(P<0.05)。观察组患者血清肿瘤标志物IL-2、IL-10和TNF-α高于对照组,而IFN-γ低于对照组(P<0.05)。结论:益气化瘀解毒方对慢性萎缩性胃炎癌前病变具有较好的临床疗效,可降低中医证候积分,降低细胞周期蛋白E表达,改善患者病情进展。

细胞周期蛋白E1基因表达上调与胃癌发生的关系

目的在基因和蛋白水平检测胃癌组织中细胞周期蛋白E1(CCNE1)的表达,研究其与临床病理参数的相关性,探讨其与胃癌发生发展之间的关系。方法通过Oncomine(肿瘤微阵列数据库)分析CCNE1在胃癌中的表达。采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术检测34例配对样本中CCNE1的mRNA的表达水平。采用组织芯片/组织微阵列技术结合免疫组化方法检测CCNE1在34例配对样本中的蛋白表达情况。结果胃癌原发灶CCNE1 mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.001),在胃癌组织中CCNE1 mRNA表达水平在Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期均呈现显著上调(P=0.042,P=0.016)。在胃癌原发组织中CCNE1蛋白阳性表达率[41.2%(14/34)]显著高于癌旁正常组织[0(0/34)]及胃炎组织[0(0/34)],P<0.01。CCNE1蛋白表达水平在不同分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移肿瘤的表达不同,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CCNE1表达上调可能与胃癌的发生、发展密切相关,提示CCNE1的检测可能为胃癌的诊断和预后提供参考。

食管上皮癌变过程中细胞周期蛋白E细胞周期蛋白依赖性激酶2表达及DNA含量的研究

本文探讨食管上皮癌变过程中DNA含量的变化．以及细胞周期蛋白E（cyclinE）和细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase2，CDK2）表达的变化及其意义。

细胞周期蛋白E及相关因子表达与肾癌发生、侵袭及转移的相关性研究

目的探讨肾癌细胞周期蛋白E(cyclinE)、周期依赖性激酶2(CDK2)和周期依赖性激酶抑制因子P27的表达状况及其意义。方法应用免疫组化SP法及RT-PCR检测37例肾癌组织、13例癌周正常肾组织中cyclinE、CDK2和P27蛋白及mRNA表达。并将上述指标与临床病理特征进行统计学分析。结果肾癌组织中cyclinE、CDK2阳性表达率分别为51.4%、43.2%,明显高于癌旁正常肾组织(P<0.05),并且随肿瘤分级及分期的升高、肿瘤转移而升高;两者mRNA含量变化同蛋白表达水平相符;相反,P27在肾癌和癌旁正常肾组织中表达量分别为48.6%、69.2%,二者差异显著(P<0.05),P27表达随肿瘤分级及分期升高、肿瘤的远位转移出现降低趋势。结论cyclinE、CDK2、P27参与了肿瘤形成及侵袭过程,是反映肾癌生物学特征有价值的标志物。

养心通脉片对家兔动脉硬化血管中细胞周期蛋白E及其依赖性激酶2的影响

目的:观察细胞周期蛋白E(Cyclin E)及其依赖性激酶(CDK)2在家兔动脉粥样硬化(AS)血管组织中的表达及养心通脉片的干预作用。方法:参照"高脂饲养喂饲法"造模,设养心通脉片组和辛伐他汀片组、模型组(高脂饮食喂养)和健康对照组,分别用养心通脉片、辛伐他汀片稀释液及蒸馏水灌胃。30 d后,采用免疫组化法检测四组血管组织中CyclinE和CDK2的表达强弱。结果:养心通脉片组CyclinE和CDK2的表达明显低于模型组(P<0.01或<0.05),而与健康对照组、辛伐他汀片组比较差异无显著性;但辛伐他汀片组CyclinE和CDK2的表达显著高于健康对照组(P<0.05)。结论:动脉粥样硬化与Cyclin E和CDK2表达增加有关,养心通脉片能调节Cyclin E和CDK2的表达,从而可能抑制细胞的异常增殖,有效地逆转或消退动脉粥样硬化斑块。

细胞周期蛋白E在哮喘大鼠肺组织中的表达及其与气道重塑的关系

目的:通过测定哮喘大鼠肺组织中细胞周期蛋白E(cyclin E)的表达,研究cyclin E在哮喘气道重塑中的作用。方法:20只Wistar大鼠随机分为哮喘组和对照组,每组10只。用鸡卵清白蛋白(OVA)溶液致敏及激发复制哮喘模型。HE染色观察气道炎症;图像分析测量气道管壁厚度;流式细胞仪测定外周血单个核细胞细胞周期时相分布;免疫组化法检测cyclin E的表达情况;实时定量(real-time)RT-PCR测定肺组织中cyclin E mRNA水平表达;Western blotting法检测肺组织中cyclin E蛋白的表达。结果:哮喘组大鼠支气管管壁厚度较对照组增加(P<0.01);哮喘组外周血单个核细胞S期、S+G2/M期百分率均较对照组增加,而G0/G1期百分率较对照组降低(均P<0.01);哮喘组肺组织中cyclin E mRNA和蛋白水平的相对表达量较对照组高(均P<0.01);肺组织中cyc-lin E蛋白的相对表达量与支气管管壁厚度呈正相关(P<0.01)。结论:Cyclin E在哮喘大鼠肺组织中表达增加,其表达的上调可使细胞周期的G1期缩短,进而可能通过促进细胞的分裂增殖而参与哮喘气道重塑的发生发展。

细胞周期蛋白E基质金属蛋白酶-9生存素与PTEN在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期蛋白E(Cyclin E)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、生存素(Survivin)及染色体同源丢失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN)的表达与大肠癌临床病理特征的相关性,以期在分子水平上更准确地判断大肠癌患者的预后,寻找相应的基因治疗方法。方法采用免疫组织化学Envision两步法检测66例大肠癌组织标本中Cyclin E、MMP-9、Survivin及PTEN的表达情况,12份大肠健康黏膜组织作为健康对照。结果66例大肠癌中CyclinE、MMP-9、Survivin蛋白的表达阳性率分别为62%、76%、71%,明显高于正常大肠黏膜上皮的表达(8%、25%、0),两者比较差异有统计学意义(P<0.01);PTEN在大肠癌中的阳性表达率为53%,明显低于大肠健康黏膜中的表达(92%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。Cyclin E的异常表达与大肠癌Dukes分期及淋巴结转移相关(P<0.05);MMP-9的表达与浸润深度、组织分化程度、Dukes分期及淋巴结转移均相关(P<0.05);Survivin的表达与Dukes分期及淋巴结转移相关(P<0.05);PTEN表达与大肠癌浸润深度、Dukes分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。结论Cyclin E、MMP-9、Survivin及PTEN基因蛋白的表达与一些临床病理特征具有相关性,Cyclin E、MMP-9和Survivin基因的表达上调与PTEN基因表达下调可能在大肠癌的发生、发展进程中发挥协同作用,检测这4种基因蛋白对于评估大肠癌的生物学行为具有重要价值,有助于估计患者的预后,为临床治疗提供依据。

雌激素对人乳腺癌细胞周期蛋白E表达及血清饥饿时细胞存活力的影响

目的:探讨雌激素对人乳腺癌细胞周期蛋白E表达及在血清饥饿状态下细胞存活力的影响。方法:以MCF-7乳腺癌细胞为模型,采用蛋白印迹分析法检测乳腺癌周期蛋白与表达、显微镜下观察细胞变化、台盼蓝染色及细胞计数法测算细胞存活力。结果:雌激素(10 nmol/L)处理可引起乳腺癌细胞周期蛋白E的过度表达,与对照组比较,增高56.42%(P<0.05);在无血清培养条件下,雌激素能减少乳腺癌细胞死亡,增强细胞的存活力,与对照组比较,72 h细胞存活率增高19.86%(P<0.05)。结论:雌激素能显著上调周期蛋白E的蛋白表达,并增强乳腺癌细胞对血清饥饿的抵抗力。

反义细胞周期蛋白E真核表达载体的构建及其对体外人乳腺癌细胞的抑制作用

为了探讨细胞周期蛋白 E(cyclin E)与人乳腺癌细胞恶性特征间的相关性 ,利用反义 RNA抑制基因表达的技术 ,构建了细胞周期蛋白 E反义 RNA的真核表达载体并转入人乳腺癌细胞中 .通过 G41 8筛选出阳性克隆 ,经 PCR和 Western印迹检测 ,确定细胞中含有重组质粒 ,并且细胞周期蛋白 E蛋白的水平明显降低 ,由此获得了反义 RNA表达载体导致的细胞周期蛋白 E表达受抑制的细胞 .细胞模型建立后 ,观察分析了细胞形态 ,细胞生长的血清依赖性以及软琼脂成集落能力 ,与对照细胞相比所发生的变化 .结果显示 ,细胞周期蛋白 E受抑制后 ,乳腺癌细胞体积变大 ,细胞生长对血清依赖性增加 ,低血清培养到第 6d时 ,细胞密度约为对照细胞的五分之一 ,细胞成集落能力也显著下降 ,软琼脂中克隆形成率下降 57% .这些变化都表明乳腺癌细胞恶性程度由于细胞周期蛋白 E表达受抑制而减弱 ,可以推测 cyclin E与乳腺癌细胞的恶性增殖及非锚定依赖性生长有着明显的关系 .

细胞周期蛋白E和肿瘤转移抑制基因nm23-H1与鼻咽癌

目的探讨细胞周期蛋白E(cyclin E)和肿瘤转移抑制基因nm23-H1在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测42例鼻咽癌和28例正常鼻黏膜上皮的病理组织切片标本中cyclin E和nm23-H1蛋白的表达。结果cyclin E蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率为59.5%(25/42),显著高于对照组中的17.9%(5/28);nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率为42.8%(18/42),显著低于对照组中的100%(28/28);cyclin E蛋白在低分化组和有淋巴结转移组中的阳性表达率分别为74.2%和77.8%,明显高于高、中分化组和无淋巴结转移组中的18.1%和26.7%;nm23-H1蛋白在低分化组和有淋巴结转移组中阳性表达率分别为25.8%和25.9%,明显低于高、中分化组和无淋巴结转移组中的90.9%和73.3%;cyclin E和nm23-H1在鼻咽癌组织中的表达呈负相关。结论cyclin E过表达和nm23-H1表达下调在鼻咽癌的发生、发展和转移中起重要作用。

细胞周期蛋白E和p53在肾癌中的表达及其意义

目的:探讨细胞周期蛋白E及p53基因产物在肾癌组织中表达的意义和相互关系。方法:采用免疫组化方法观察46例肾癌与15例正常肾组织的p53和cyc lin E的表达。结果:正常肾组织中p53和cyc lin E无表达,肾癌组织中p53和cyc lin E的阳性表达率分别为39.1%和34.8%(P<0.01),cyc lin E的阳性表达与肾癌临床分期、病理分级和病理类型无关(P>0.05),p53的阳性表达与肾癌临床分期密切相关(P<0.01)。p53和cyc lin E在肾癌中的阳性表达具有显著相关性(P<0.01),临床分期的患者5年生存率明显低于阴性者(P<0.05)。结论:p53在肾癌中的阳性表达与临床分期有关,p53和cyc lin E在肾癌中的共同阳性表达可能是判断肾癌预后的指标之一。

乳房外Paget病皮损中P27和细胞周期蛋白E表达

目的探讨P27和细胞周期蛋白E在乳房外Paget病中的表达特点及其意义。方法应用免疫组化二步法分别检测30例乳房外Paget病患者皮损及20例正常对照皮肤中P27和细胞周期蛋白E的表达情况。结果P127在乳房外Paget病组织中表达低于正常皮肤组织（x^2=7．031，P〈0．05）；细胞周期蛋白E在乳房外Paget病组织中表达高于正常皮肤组织（x^2=27．648，P〈0．05）。P27和细胞周期蛋白E呈负相关关系（r=-0．437，P〈0．05）。P27的表达与淋巴结转移无关（x^2=0．621，P〉0．05），细胞周期蛋白E的表达与淋巴结转移有关（x^2=6．102，P〈0．05）。结论P27的低表达和细胞周期蛋白E的过表达在乳房外Paget病的发生发展中可能起着十分重要的作用，并且细胞周期蛋白E与乳房外Paget病的淋巴结转移有关。

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

背景与目的:肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(cyclinE1)的过表达与预后密切相关。为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cyclinE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用。方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株。RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclinE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.88±0.04)及未转染组(0.90±0.03)(P<0.05)。经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.15±4.00)%(P<0.05)。生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05)。Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:肾癌cyclinE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据。

结肠癌组织中细胞周期蛋白E和增殖细胞核抗原表达的研究

目的研究细胞周期蛋白E(CyclinE)和增殖细胞核抗原(PCNA)在结肠癌组织中的表达及二者之间的关系。方法采用原位杂交法和免疫组化S-P法,对40例结肠癌、10例结肠腺瘤和10例结肠正常黏膜组织进行CyclinE mRNA和PCNA的检测。结果结肠癌组织中CyclinEmRNA的阳性表达率为62.5%,PCNA指数为(50.09±11.15),均显著高于结肠腺瘤和结肠正常组织(P<0.05);CyclinE mRNA表达阳性组的PCNA指数明显高于CyclinE mRNA阴性组(P<0.05);CyclinE mRNA与肿瘤的浸润深度、有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与肿瘤的分化程度、有无肝转移不相关(P>0.05);PCNA与肿瘤的浸润深度、分化程度及有无淋巴结转移密切相关(P<0.05),与有无肝转移无明显相关(P>0.05)。结论CyclinE可作为结肠癌的又一细胞增殖指标,其对结肠癌的发生、发展起重要作用。