氧化苦参碱调控CDK4/cyclinD1通路诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的细胞周期调控机制

目的研究氧化苦参碱对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及CDK4/cyclinD1通路调控方面的作用,探讨其对前列腺癌可能产生的作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法观察前列腺癌PC-3细胞增殖情况;荧光染色观察前列腺癌PC-3细胞核形态改变情况;流式细胞仪观察前列腺癌PC-3细胞凋亡率与细胞周期情况;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)观察细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK4)、细胞周期蛋白(cyclin)D1基因表达情况;Western印迹观察CDK4、cyclinD1表达情况。结果与对照组相比,8μmol/L氧化苦参碱组作用72 h前列腺癌PC-3细胞的增殖活力最弱。荧光染色发现,氧化苦参碱使前列腺癌PC-3细胞核形态改变,且细胞核皱缩程度随氧化苦参碱浓度增加而加深。与对照组相比,氧化苦参碱组前列腺癌PC-3细胞的凋亡率显著上升且随浓度增加而显著上升(P<0.05);与对照组相比,2、4、8μmol/L氧化苦参碱组G1期比例明显增加,S期、G2的比例显著降低(P<0.05)。PCR法发现,与对照组相比,氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1 mRNA的表达明显下降且随浓度增加而下降,8μmol/L组下降最明显。氧化苦参碱组CDK4和cyclinD1蛋白表达水平较对照组降低,4μmol/L组降低最为显著(P<0.05)。结论氧化苦参碱抑制前列腺癌PC-3细胞增殖活力,诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡并在细胞增殖周期G1期中阻滞,其中的作用机制可能与CDK4/cyclinD1通路密切相关。

胃癌中细胞周期调控因子D1、E的表达及其意义

目的探讨细胞周期调控因子(cyclyinD1、cyclyinE)在胃癌中的表达及其意义。方法用免疫组化检测胃癌、不典型增生及正常胃黏膜中cyclyinD1、cyclyinE的表达状况。结果cyclyinD1在同病变组织中的表达率:进展期胃癌65.00%(26/40)、早期胃癌60.00%(12/20)、Ⅱ、Ⅲ期不典型增生45.00%(9/20)差异正常胃黏膜组织15.00%(3/20)。而cyclyinE的表达率分别为:进展期胃癌60.00%(24/40)、早期胃癌55.00%(11/20)、Ⅱ、Ⅲ期不典型增生35.00%(7/20)及正常胃粘膜组织20.00%(4/20)。胃癌和胃黏膜不典型增生组织的cyclyinD、1cyclyinE的表达与正常胃黏膜组织相比差异有显著性(P<0.01及P<0.05);cyclyinD1在胃癌中的表达与分化及TNM分型无关,而cyclyinE与肿瘤分化程度、浸润深度及肿瘤分期相关。结论细胞周期调控因子cyclyinD1、cyclyinE的过度表达与胃黏膜上皮组织的过度增生及胃癌的发生有密切关系,检测cyclyinE作为胃癌的进展程度的一个指标。

细胞周期调控因子p27、Cyclin D1和DNA含量在食管癌中联合检测的意义

目的探讨食管癌中CyclinD1、p27的表达及与DNA含量联合测定的意义及相互关系。方法收集食管癌组织及癌周正常组织标本,应用免疫组织化学检测CyclinD1、p27蛋白表达,应用流式细胞术检测DNA含量。结果食管癌组织中CyclinD1和p27蛋白表达阳性率分别为45.8%和33.3%,CyclinD1表达阳性组的DNA含量显著高于CyclinD1表达阴性组分别为(1.54±0.21)和(1.08±0.43),(P<0.05),而p27表达阳性组的DNA含量和SPF值低于p27蛋白表达阴性组分别为(1.10±0.19),(5.56±5.18)%和(1.66±0.28),(19.78±6.12)%,(P<0.05)。结论CyclinD1、p27蛋白与食管癌的发生、发展有关,检测CyclinD1、p27及DNA含量可作为诊断和评估食管癌恶性程度的重要指标.

中药胃康宁对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子的影响

目的观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2(Cyclin dependant kinase2,CDK2)Cdk4、Cdk6和p16INK4a、p27KIP1mRNA及其蛋白表达的作用。方法分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂对SD大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞,用流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4、Cdk6和p16INK4a、p27KIP1蛋白和mRNA的表达。结果中药胃康宁能将增殖过程中的MGC-803胃癌细胞阻滞于G0-G1期,使之不进入或延迟进入S期(即DNA合成期),抑制胃癌细胞的生长;免疫组化法结果显示,与空白对照组比较,中药胃康宁高、中剂量组CyclinE和Cdk2,CyclinD2和Cdk4、Cdk6蛋白均有明显升高,而p27KIP1、p16INK4a蛋白则显著降低(P<0·01);RT-PCR结果显示,中药胃康宁高、中剂量组均能明显降低CyclinD2、CyclinE、Cdk2和Cdk4、Cdk6OPTD值,同时升高p27KIP1、p16INK4aOPTDI值(P<0·01)。结论中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4和Cdk6的表达,同时增强胃癌细胞周期抑制因子p27KIP1、p16INK4a的表达,这可能是中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制。

p38MAPKs在细胞周期调控中的作用

p38丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinases ,MAPKs)作为MAPK家族的成员 ,传统认为它主要参与调控细胞应激反应和免疫反应。近年来发现它还参与调控细胞的增殖、凋亡和分化。在不同应激刺激下 ,p38MAPKs通过多条信号转导通路作用于细胞周期的各个检验点 ,抑制细胞增殖 ,阻滞细胞于不同周期。

细胞周期调控与肿瘤

细胞周期调控与肿瘤谭立军１沈忠英２汤雪明１作者单位：１．上海第二医科大学细胞生物学实验室（２０００２５）２．汕头大学医学院病理教研室细胞周期的研究长期以来一直是生命科学领域中的一项重要内容。它除了与细胞增殖直接相关外，还在一定程度上与细胞分化和凋亡相...

细胞周期调控系统相关因子 Cyclin D1-CDK4-p21在瘢痕癌中的表达及意义

目的细胞周期调控机制失调是细胞增生肿瘤发生的重要因素。文中探讨细胞周期调控系统相关因子Cyclin D1-CDK4-p21在瘢痕癌中的表达及意义。方法选取遵义医学院病理教研室和中山大学附属第五医院病理科2005-2011年石蜡包埋标本,分为瘢痕癌组、病理性瘢痕组和正常皮肤组。应用组织化学法,分别检测瘢痕癌、病理性瘢痕和正常皮肤组织中Cyclin D1、CDK4、p21蛋白的表达。采用核酸分子原位杂交技术检测Cyclin D1 mRNA、CDK4 mRNA、p21 mRNA在3组组织中的表达。对各项指标进行相关性分析,计算平均光密度(表达强度)和阳性面积(表达水平)。结果 1Cyclin D1、CDK4、p21蛋白和Cyclin D1 mRNA、CDK4 mRNA、p21 mRNA在瘢痕癌癌组织呈强阳性表达,在病理性瘢痕上皮中呈弱阳性表达,在正常皮肤表皮呈弱阳性或阴性表达。瘢痕癌组CDK4蛋白表达强度(0.273±0.024)及表达水平(0.159±0.036)较正常皮肤组(0.194±0.013、0.053±0.086)、病理性瘢痕组(0.214±0.026、0.061±0.014)升高,瘢痕癌组CDK4 mRNA表达强度(0.281±0.033)、表达水平(0.207±0.039)较正常皮肤组(0.195±0.012、0.067±0.027)、病理性瘢痕组(0.235±0.021、0.080±0.032)高,差异有统计学意义(P<0.01);瘢痕癌组Cyclin D1蛋白表达强度(0.262±0.023)、表达水平(0.141±0.036)较正常皮肤组(0.169±0.012、0.039±0.095)及病理性瘢痕组(0.176±0.039、0.065±0.013)高,瘢痕癌组Cyclin D1mRNA表达强度(0.264±0.031)、表达水平(0.201±0.041)较正常皮肤组(0.179±0.022、0.049±0.083)及病理性瘢痕组(0.193±0.021、0.068±0.035)高,差异均有统计学意义(P<0.01);瘢痕癌组p21蛋白表达强度(0.148±0.031)、表达水平(0.275±0.032)较正常皮肤组(0.052±0.020、0.197±0.036)及病理性瘢痕组(0.062±0.021、0.214±0.032)高;瘢痕癌组p21 mRNA表达强度(0.227±0.059)较正常皮肤组(0.072±0.044、0.203±0.024)、病理性瘢痕组(0.075±0.041、0.223±0.021)高,差异均有统计学意义(P<0.01);但病理性瘢痕组与正常皮肤组各项指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2相关性分析:在瘢痕癌组织中,Cyclin D1与CDK4、p21与CDK4的表达均呈正相关。结论瘢痕癌的发生与Cyclin D1、CDK4的异常表达有关,Cyclin D1可能是通过与CDK4结合形成复合物,促进细胞周期G1/S期转化,导致细胞异常增生,瘢痕癌发生。瘢痕癌中Cyclin D1-CDK4复合物活性的抑制调控,可能是CKI家族的其他成员或者有CKI家族以外的其他抑制调控因子。

软肝冲剂对肝硬化大鼠p^(21)及细胞周期调控的影响

目的:研究软肝冲剂对CCl_4肝硬化大鼠p^(21)mRNA表达及细胞周期各时相DNA含量的影响,从mRNA、DNA水平探讨软肝冲剂阻止肝硬化的作用机理。方法:采用RT-PCR及流式细胞计数仪分别检测CCl_4肝硬化大鼠P^(21)mRNA表达、DNA含量。结果:软肝冲剂能降低CCl_4肝硬化大鼠p^(21)mRNA表达,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01),大剂量组的疗效与小剂量组比较无明显差异(P>0.05)。正常肝组织p^(21)mRNA呈相当低水平表达,其表达相对值为(0.17±0.06)U。定量DNA图像分析发现模型组中处于G1期的细胞数要明显多于其他各组(P<0.01),软肝冲剂大剂量组中处于G1期的细胞数要明显少于软肝冲剂小剂量组(P<0.01)。结论:软肝冲剂能调节p^(21)基因表达,调节细胞周期,促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成。

肿瘤抑制基因Rb与细胞周期调控研究新进展

Ｒｂ 与人类多种肿瘤发生关系密切， 是一种重要的肿瘤抑制基因． Ｒｂ 蛋白参与细胞周期调控， 与ｐ１６、ＣＤＫ４／６、ｃｙｃｌｉｎＤ１ 等形成复杂的反馈调节网络， 在Ｇ１／Ｓ关卡调控中处于中心环节， 决定着细胞周期的进程．Ｒｂ 又是核内信号与胞外信号相互作用的界面， 受到胞内外多种因素的调控， 使Ｒｂ 功能与细胞生长、分化状态相适应．

细胞周期调控与肿瘤的发生发展

九十年代，随着对细胞周期调控认识的不断深人，出现了“癌症可能是一类细胞周期疾病（cellcy－cle出sc。se广的观点。因为在绝大多数肿瘤细胞都存在着若干细胞周期调控基因的改变’。本文将以此为基点，结合最近的新进展，对细胞周期调控机制与肿瘤发生、发展之关系，作?..

细胞周期调控因子在分化型甲状腺癌中的表达及相关性研究

目的:研究细胞周期调控因子p16、p27和CyclinD1在分化型甲状腺癌中的蛋白表达情况,及其在分化型甲状腺癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化S-P法对40例分化型甲状腺癌包括甲状腺乳头状癌和滤泡癌以及30例甲状腺腺瘤组织中p16、p27和CyclinD1的蛋白表达情况进行检测。结果:p16、p27和Cy-clinD1三种蛋白在40例分化型甲状腺癌的阳性表达率分别为57.5%、70.0%和62.5%;p16蛋白的阳性表达量与分化型甲状腺癌的颈淋巴结转移之间具有相关性(P<0.05);p27蛋白的阳性表达量与分化型甲状腺癌的颈淋巴结转移和原发灶的大小及包膜侵犯之间具有相关性(P<0.05);CyclinD1蛋白的阳性表达量与分化型甲状腺癌的颈淋巴结转移和原发灶的包膜侵犯之间具有相关性(P<0.05);p16的阳性表达与CyclinD1的阳性表达之间具有相关性(P<0.05),且呈负相关关系(rs=-0.283);p27的阳性表达与CyclinD1的阳性表达之间具有相关性(P<0.05),且呈负相关关系(rs=-0.279)。结论:p16、p27和CyclinD1三种蛋白的异常表达共同参与了分化型甲状腺癌的发生发展,可能成为判断分化型甲状腺癌恶性程度、转移及预后的指标。

洛伐他汀对BRCA1高表达MCF-7乳腺癌细胞周期调控蛋白的影响

目的 探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀 (lovastatin ,LOV)对BRCA1基因高表达MCF 7乳腺癌细胞株细胞周期调控蛋白表达的影响。方法 将BRCA1基因进行扩增、鉴定后 ,运用脂质体转染MCF 7乳腺癌细胞 ,通过MTT比色法检测细胞增殖功能 ,RT PCR方法检测细胞周期调控蛋白cyclinD1、cyclinD3、CDK2、CDK4的mRNA以及Westernblot检测cy clinD1、CDK4蛋白表达水平。结果 LOV处理后 ,细胞的增殖能力减弱 ,cyclinD1、cyclinD3、CDK2、CDK4mRNA表达及cy clinD1、CDK4蛋白表达均降低 ,其中 ,以BRCA1基因高表达MCF 7乳腺癌细胞株经LOV处理后变化更为显著。结论 BR CA1基因在LOV诱导的细胞周期蛋白抑制中可能起重要作用 ,其高表达增强了MCF

分块PCA提取细胞周期调控基因的研究

用主成分分析(PCA)方法处理基因表达微阵列数据能够实现基因选择、基因表达模式提取、基因分类等,有其独特的优点。然而,PCA方法却存在容易丢失重要信息的弱点。为了克服这一方法的弱点,提出分块PCA,并以此为基础形成一种提取细胞周期调控基因的新方法。通过理论分析和对酵母微阵列数据的仿真实验研究,表明这种方法可行、有效,能够全面地提取出隐含在方差较小变量中的细胞周期调控基因,并能够给予实验结果较好的生物意义解释,在微阵列数据处理中具有应用前景。

细胞周期调控与肿瘤

Cyclin、CDK、CKI是细胞周期调控的内源性分子,三者在细胞周期中相互协调并与细胞信号转导通路之间形成复杂的调控网络,与细胞增殖、细胞分化及细胞凋亡相关联。现发现肿瘤中存在相应基因的突变和表达失调,这些改变直接、间接导致细胞周期紊乱,与肿瘤发生密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点。

CyclinE-CDK2相关蛋白与细胞周期调控

细胞周期蛋白(cyclin)E和周期蛋白依赖性激酶(CDK)2的复合物CyclinE-CDK2为细胞从G1期进入S期的关键激酶复合物,在细胞从G1期进入S期过程中起着至关重要的作用。它通过磷酸化其下游一系列底物如Rb、CDC6、NPAT和P107等而使细胞启动DNA合成,从而使细胞不可逆转地进入S期。CyclinE-CDK2除了受到其下游RB/E2F通路的正调控外,同时也受细胞中其他一些因子的调控,如CIP/KIP家族蛋白的负调控作用,以及Skp2-SCF介导的泛素化降解作用等。

细胞周期调控对大鼠全脑缺血后海马迟发性神经元死亡的影响EFFECTOFCEL

目的 观察细胞周期调控对大鼠全脑缺血再灌流后海马区迟发性神经元死亡 (delayed neuronal death,DND) 以及星形胶质细胞的活化、增殖的影响。方法 建立大鼠短暂性全脑缺血再灌流模型, 利用尼氏染色、TUNEL、免疫组织化学方法观察再灌流后细胞周期素依赖的蛋白激酶 (cyclin depedent kinase, CDK) 抑制剂 Olomoucine 对海马DND以及星形胶质细胞活化增殖的影响。结果 全脑缺血再灌流后 3d、7d、30d海马神经元明显脱失, 部分 CA1、CA2区神经元凋亡; 星形胶质细胞数目增多, GFAP表达上调, 应用Olomoucine后TUNEL阳性神经元数目明显减少, 幸存神经元数目增加; 星形胶质细胞数目无明显增多, GFAP表达明显下调。结论 CDK抑制剂 Olomoucine可有效抑制大鼠全脑缺血后海马神经元DND以及星形胶质细胞活化增殖。