丙型肝炎病毒核心蛋白上调细胞周期调节蛋白Weel基封表达研究

目的：了解丙型肝炎病毒核心蛋白和细胞周期调节蛋白Weel基因表达的关系，研究HCV核心蛋白在HCV致病的分子生物学机制中的作用．方法：应用聚合酶链反应(PCR)扩增Weel基因启动子，命名为Weep．以T-A克隆法，将Weep基因片段连入载体pGEM-T．将获得的质粒pT-Weep，与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和XhoI双酶切后构建Weel启动子报告载体pCAT3-Weep，分别以重组报告载体pCAT3-Weep和pcDNA3．1(-)-core瞬时转染HepG2细胞，以转染pCAT3basic的HepG2细胞为阴性对照，48h后收获细胞．应用酶联免疫黏附方法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性，以了解HCV核心蛋白对Weel基因启动子的反式激活作用．结果：构建的表达载体pcDNA3．1(-)-core和报告载体pCAT3-Weep经过序列分析和酶切鉴定正确．pCAT3-Weep和pcDNA3．1(-)-core瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3空载体的3．4倍，pCAT3-Weep的2．3倍．结论：丙型肝炎病毒核心蛋白可反式激活Weel基因启动子，进而上调细胞周期调节基因Weel的表达。

高氧对新生大鼠肺细胞周期调节基因表达的影响

目的 探讨高氧对新生大鼠肺内细胞周期调节基因 (p2 1WAF/CIP1 )表达的影响。方法 采用Spraque -Dawley新生大鼠95 %氧暴露建立高氧肺损伤模型。应用RT PCR技术检测肺组织p2 1WAF/CIP1 mRNA水平 ,凝胶电泳条带用成像系统照相定量分析结果 ,分别计算PCR产物条带与 β actincDNA条带光密度值的比值 ,作为p2 1WAF/CIP1 基因的相对表达量。结果 新生大鼠暴露于95 %氧浓度环境中 12、2 4、48、72、96h肺组织中p2 1WAF/CIP1 mRNA表达显著增加 ,2 4h后新生大鼠肺p2 1WAF/CIP1 mRNA虽略有下降 ,但一直维持在高表达状态 ,与空气对照组相比差异有显著意义 (同一时间点的高氧组与空气对照组比较的t、P分别如下 :t=6.498 P <0 .0 0 1;t=2 7.2 0 0 P <0 .0 0 0 1;t=10 .164 P <0 .0 0 1;t=10 .481 P <0 .0 0 1;t =6.496 P <0 .0 0 1)。结论 在高浓度供氧下通过上调p2 1WAF/CIP1 基因的表达 ,阻断G0 /G1 期的肺泡上皮细胞向S期的转换 ,抑制肺泡上皮细胞生长和增殖 ,从而导致肺生长发育受阻和肺损伤。因此促进肺泡上皮细胞的生长可能成为治疗慢性肺病患儿的一种新途径。

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的:观察庆大霉素对体外培养的肾小管上皮细胞凋亡的诱导作用;研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cy-clin E、CDK_2和p27^(Kipl)蛋白表达的改变,并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法:0.2～3.2 mg/ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96 h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带,流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96 h时细胞内cyclin E、CDK_2和p27^(Kipl)的蛋白表达。结果:庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用,庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性;庆大霉素致细胞周期停滞于G_1期。随着庆大霉素浓度的增加,细胞内cy-clin E和 CDK_2蛋白表达逐渐下调,而p27^(Kipl)蛋白表达则逐渐上调。结论:庆大霉素诱导的LLC-PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclin E和 CDK_2表达下调以及p27^(Kipl)表达上调有关。

多球壳菌素诱导系膜细胞凋亡及对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响

目的观察多球壳菌素(ISP-1)对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用,研究ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养大鼠GMC,加入100μmol/L ISP-1干预,分别于作用6、12、24、48 h后以流式细胞术检测GMC凋亡,Hoechst33258/PI染色观察凋亡细胞形态变化,琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象,并通过SuperArray Real-Time PCR细胞周期基因芯片测定ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,Western blotting法观察Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果ISP-1可显著诱导GMC凋亡,并呈一定的时间依赖性,作用48 h后细胞凋亡最显著,Hoechst33258/PI荧光染色法可见亮蓝色的凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现;PCR细胞周期基因芯片检测结果发现ISP-1可显著上调GMC Rad51、Atm、Brcal、Caspase3、cyclinA2、cyclinC、chek1、cyclinB1、cyclinB2、cyclinD2、cyclinF、Cdc25a和P27等一些与DNA损伤、凋亡和细胞周期调节蛋白相关的基因的表达;Western blotting发现ISP-1可显著上调GMC Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。结论ISP-1可时间依赖性诱导体外培养的正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关。

缺血性急性肾衰大鼠肾组织细胞周期调节蛋白表达的变化

目的 :探讨缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK 2的表达及与肾小管上皮细胞增生的关系。 方法 :建立缺血性急性肾功能衰竭大鼠模型 ,分别在第 0、2、7、10、14天处死。以生化法测定血清肌酐 (SCr)值 ,以免疫组织化学染色技术观察肾组织内细胞增生程度以及cyclinE和CDK 2的表达和分布情况。 结果 :大鼠SCr值在缺血再灌注第 2天开始显著增高 ,第 7天最高 ,第 10天开始降低 ,第 14天基本降至正常。对照组肾组织细胞增生指数 (PI)为 0 1% ,肾缺血后第 2、7、10和 14天PI分别为 14 8%、30 9%、2 3 6 %和12 4%。cyclinE和CDK 2蛋白在肾组织内分布于皮质肾小管 ,少数在间质 ,且肾缺血后第 2天表达弱阳性 (+) ,第7天表达强阳性 (+++) ,第 10天表达阳性 (++) ,第 14天表达弱阳性 (+) ;肾小球内基本无表达。 结论 :缺血性急性肾功能衰竭大鼠肾组织cyclinE/CDK 2蛋白表达增强与肾小管上皮细胞增生程度相一致。表明cyclinE和CDK 2是调控缺血性急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞增生的关键蛋白。

益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27表达的影响

目的观察中药复方益肾汤对糖尿病大鼠肾脏细胞周期调节蛋白p27表达的影响。方法将41只SD大鼠随机分为正常对照组与糖尿病组。后者以链脲佐菌素腹腔内注射诱导糖尿病大鼠模型,成模大鼠按干预方法不同分为:益肾汤、缬沙坦、糖尿病未治疗3组。干预8周,观察大鼠体重、肾重、血糖、24 h尿总蛋白、24 h尿白蛋白、尿素氮、肾组织p27表达等指标。结果与糖尿病未治疗组比较,益肾汤及缬沙坦组肾组织p27表达显著减少,尿白蛋白含量降低;肾组织p27的表达量与24 h尿白蛋白浓度呈显著正相关。结论益肾汤防治糖尿病肾病的作用与降低肾脏p27表达有关。

卡介菌多糖核酸注射液辅助ALA-PDT治疗尖锐湿疣疗效及对患者血清LTN TGF-β1免疫功能细胞周期调节通路的影响

目的探讨卡介菌多糖核酸注射液辅助5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣患者的疗效和安全性,以及对血清淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β1水平、免疫功能、细胞周期调节通路有丝分裂抑制因子p16、G1/S-特异性周期蛋白-D1、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb表达的影响.方法将60例尖锐湿疣患者按简单随机化分组法分为两组,每组30例,均予以5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法治疗,观察组在此基础上予以卡介菌多糖核酸注射液治疗8周,治疗后观察1a.比较两组治愈率、复发率,治疗前后检测两组血清淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β、全血CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+水平及细胞周期调节通路有丝分裂抑制因子p16、G1/S-特异性周期蛋白-D1、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb表达,随时记录治疗后出现的不良反应.结果(1)观察组治愈率(96.7%)显著高于对照组(73.3%),复发率(3.3%)显著低于对照组(26.7%)(P<0.05).(2)治疗后两组血清淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β1及CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+水平较治疗前显著升高(P<0.01),观察组各项指标显著高于对照组(P<0.05或0.01);两组有丝分裂抑制因子p16、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb表达均较治疗前显著升高(P<0.01),观察组显著高于对照组(P<0.01),两组全血CD8^+水平、G1/S-特异性周期蛋白-D1表达均较治疗前显著降低(P<0.01),观察组显著低于对照组(P<0.01).(3)观察组不良反应发生率(6.7%)与对照组(3.3%)比较差异无统计学意义(P>0.05).结论卡介菌多糖核酸注射液辅助5-盐酸氨酮戊酸光动力疗法治疗尖锐湿疣患者具有协同增效作用,可提高治愈率,减少疾病复发,增强患者免疫功能,安全性高,下调G1/S-特异性周期蛋白-D1表达,上调有丝分裂抑制因子p16、人视网膜母细胞瘤抑制蛋白pRb、淋巴细胞趋化因子、转化生长因子β1表达可能是其发挥疗效的作用机制.

喉鳞状细胞癌患者视网膜母细胞瘤蛋白和细胞周期调节蛋白D1异常表达

目的:探讨喉鳞状细胞癌(LSCC)患者视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)和细胞周期调节蛋白D1(Cyclin D1)的异常表达及其相关性。方法:选择36例喉部疾病手术患者,包括LSCC(LSCC组)、声带息肉(息肉组)和癌前病变(癌前组)各12例,各组均于手术后取病变组织,采用Western-blotting检测pRb和Cyclin D1蛋白表达水平,统计学分析各组两指标差异及相关性。结果:与息肉组比较,癌前组pRb表达水平降低(P<0.01),Cyclin D1表达水平升高(P<0.01);与癌前组比较,LSCC组pRb水平更低(P<0.01),Cyclin D1水平更高(P<0.01)。三组pRb与Cyclin D1蛋白水平均呈显著负相关(r分别为-0.94、-0.83和-0.92,P均<0.01)。结论:LSCC的发生和发展与pRb表达降低和Cyclin D1表达增加有关。

补肾促卵颗粒对体外受精-胚胎移植技术周期颗粒细胞家族特异性受体α-1和细胞周期调节蛋白B1表达的影响

制约妊娠率的研究之一就是卵母细胞质量的提高。胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）家族特异性受体α-1（GFRα-1）表达于在小鼠、猪等哺乳动物卵母细胞和颗粒细胞[1]。Aravin-dakshan等[2]认为卵母细胞通过间隙连接的建立通过受体GFR-1调控着GDNF在颗粒细胞上的表达。

系膜细胞增殖与细胞周期调节蛋白

系膜细胞增殖是多种肾小球疾病的共同特征。包括免疫介导的肾小球疾病如IgA肾病、膜增殖性”肾小球肾炎、狼疮肾炎；代谢性肾病如糖尿病肾病；血流动力学异常介导的肾病如5／6肾切除等。继发于系膜细胞增殖的细胞外基质（ECM）增多和肾小球滤过功能下降是慢性肾脏病（CKD）进展的重要原因。因此。调控系膜细胞增殖具有重要的意．义。针对不同类型的损伤，肾脏的各种固有细胞可表现为增殖、肥大、凋亡、分化等。而不同细胞的不同反应决定了这种肾小球损伤的组织病理学和临床表现特征。这些细胞反应乍看上去毫不相关．实际上．细胞的最终命运是在细胞周期水平由共同的调控者——细胞周期调节蛋白决定的。

细胞周期调节因子与肿瘤

本文对调节细胞周期一些重要因子在肿瘤细胞和正常细胞中的不同做一综述

泛素-蛋白酶体途径介导的细胞周期调节蛋白的水解

泛素-蛋白酶体途径高选择性地降解细胞在应激和非应激条件下产生的异常蛋白质,对维持细胞正常生理功能具有十分重要的意义。在蛋白质降解过程中泛素的重要作用越来越得到研究者的重视。许多研究表明泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白水解在真核细胞 G_1→S期过程中起着至关重要的作用。本文就细胞周期 G_1、S 期中由泛素介导的几种重要的细胞周期调节蛋白的水解作一综述。

PTEN蛋白在细胞周期调节中的作用

PTEN是第一个被发现的具有磷酸酶活性的抑癌基因,它能特异性地使3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)去磷酸化,拮抗三磷酸肌醇激酶(PI3K/AKT)信号转导系统,使细胞周期阻滞于G1期。也可通过灶性粘连激酶(FAK)途径和致细胞分裂素激活的蛋白激酶(MAPK)途径来调节细胞周期进展和细胞凋亡等,从而抑制多种肿瘤的发生和发展。在白血病细胞系中,PTEN基因通过直接或间接失活机制出现表达异常,其机制需进一步研究。

IL-13等因素对肾小球系膜细胞表达细胞周期调节负控蛋白p27的影响

目的 :探讨IL 13、ET 1、甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞表达细胞周期负控蛋白p2 7的变化。方法 :不同浓度IL 13 (10ng/mL、10 0ng/mL)、ET 1(10 7mol/L)、甲基强的松龙 0 5μg/mL、肝素钠 2 0 0mg/L和10 0 μg/L ,作用于培养的系膜细胞。流式细胞仪检测p2 7表达水平。结果 :IL 13 10ng/mL浓度组和 10 0ng/mL浓度组p2 7表达为 46 74± 3 2 5和 2 3 8± 2 56,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1,P <0 0 5) ,两不同浓度组之间差异有显著意义 (P <0 0 1)。ET 1刺激 14h和 18h后p2 7的表达分别为 14 76± 1 49和 12 18± 1 3 0 ,与对照组比较差异均有显著意义 (P <0 0 5,P <0 0 5)。甲基强的松龙 48h及 72h后p2 7表达为 9 9± 1 0 1和 9 12±0 93 ,与对照组比较明显降低 ,P <0 0 0 1。肝素钠 10 0mg/L浓度组和 2 0 0mg/L浓度组p2 7的表达分别为 2 6 94±1 2 3和 2 8 0 4± 0 99,较对照组明显升高 (P <0 0 5) ,不同浓度组间比较无明显差异。结论 :肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p2 7表达水平不同。p2

p16、cdk_4的细胞周期调节及在中耳胆脂瘤形成中作用的研究进展

p16、cdk4 在肿瘤分子生物学中的研究较成熟 ,但对中耳胆脂瘤作用的研究较少。现将近年有关抑癌基因p16细胞周期研究 ,中耳胆脂瘤上皮细胞增殖与凋亡的研究 ,以及p16及cdk4 在胆脂瘤形成中作用的研究进展作一综述。

细胞周期调节蛋白与肾脏疾病

细胞周期调控是肾脏疾病发病机制研究的新领域。细胞周期调节蛋白调控细胞的生长方式 。

细胞周期调节分子与胰腺癌发生、发展及预后的关系

细胞周期调节分子包括原癌基因、抑癌基因及细胞周期蛋白,调节着细胞的生长、增殖与凋亡,在肿瘤的发生、发展过程中均起着至关重要的作用。本文就RAS,mdm-2,cyclin,p53,p14,p16,p21,p27和smad4/DPC4等分子在胰腺导管癌中的表达情况及其与胰腺癌的发生、发展,对化疗的反应,生存期之间的关系作一综述。

细胞周期调节蛋白与腹膜纤维化

在腹膜透析的过程中,腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cell,HPMC）在高糖刺激下出现细胞肥大、胞核增多、细胞分裂停滞等改变,是进展至腹膜纤维化（peritoneal fibrosis,PF）的病变基础[1,2]。一般认为,腹膜纤维化的形成有腹膜上皮间质转分化（epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）、