原代大鼠脑微血管内皮细胞培养方法的改进

血脑脊液屏障（blood brain barrier,BBB）是机体的内部屏障之一,由介于血循环与脑实质间的软脑膜、脉络丛的脑毛细血管壁和包于壁外的胶质膜所组成,是中枢神经系统的重要解剖结构基础[1]。血脑脊液屏障主要是由脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells,BMECs）和周细胞构成,星形胶质足突包绕毛细血管的外周,覆盖其95%～99%的表面积。

改良的异位子宫内膜细胞培养方法

目的探讨子宫内膜异位症患者异位内膜细胞原代培养方法，为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型。方法通过消化、过滤、沉降等方法，分离培养子宫内膜异位症异位内膜腺上皮细胞和间质细胞，光学显微镜观察离体细胞形态。结果①异位子宫内膜细胞培养的成功率为76．47％（13／17）；②改良的细胞培养方法，即胰蛋白酶-胶原酶共同消化法与胶原酶消化法成功率比较无显著性差异（X2=0．180，P=0．893）；③使用改良的酶消化法消化时间在4．075±0．215分钟，单纯胶原酶法则需14．144±7．624分钟，经比较有统计学意义（t=-13．732，P〈0．05）。结论使用改良的细胞培养方法不仅可以获得充分的细胞，而且可以节省时间和经费。

肺泡型细胞培养方法的改良及其应用

目的研究不同方法对体外培养肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织,低密度接种,常规浓度含血清培养和无血清培养,抗大鼠IgG包被与不包被,倒置显微镜观察细胞生长,检测细胞活力,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果两种方法消化、分离组织,肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡型上皮细胞功能的需要,从而简化了体外培养肺泡型上皮细胞的程序。

常用的细胞培养方法、污染及污染处理

细胞培养技术是生物工程中最基础最核心的技术,该文简述了常用的细胞培养方法、污染及污染处理供各单位借鉴。

检测重组细胞因子生物活性的细胞培养方法的探讨

目前有关造血的基因重组的细胞因子不断出现,如EPO、TPO、G-CSF、SCF及多种白介素等等。如何评价这些细胞因子的生物活性,已成为重要研究课题,基中对造血祖细胞的增殖分化的影响是一个重要的技术途径。本文就常用的几种体外培养体系及方法作一探讨,以提供检测基因重组细胞因子活性的有效方法。 ①培养体系的选择,大致分为二大类:琼脂培养法主要用于粒-巨噬系祖细胞CFU-GM;培养甲基纤维素法,用于CFU-E、BFU-E、

Matrigel三维细胞培养方法培养的原代乳腺癌细胞生长情况及对阿霉素敏感性观察

目的观察Matrigel三维细胞培养方法培养的原代乳腺癌细胞生长情况及其对阿霉素的敏感性。方法分别采用二维单层培养法、Matrigel三维细胞培养方法培养原代乳腺癌细胞。在培养的第1、3、5、7天,采用Olympus Ⅸ70倒置显微镜观察二维单层培养及三维培养条件下的原代乳腺癌细胞形态,采用CellTiter-Glo~发光法观察细胞生长增殖情况及其对阿霉素的敏感性,绘制原代乳腺癌细胞生长曲线及药敏曲线。结果二维单层培养的原代乳腺癌细胞贴壁生长,癌细胞聚集成巢状,呈多种形态。三维细胞培养的原代乳腺癌细胞聚集成紧密的多肿瘤细胞微球。二维单层培养第1、3、5、7天原代乳腺癌细胞的增殖倍数分别为1.00±0.00、1.39±0.29、2.08±0.25、3.26±0.41;三维培养第1、3、5、7天原代乳腺癌细胞的增殖倍数分别为1.00±0.00、1.25±0.08、1.79±0.10、1.58±0.02。随阿霉素浓度升高,二维单层培养及三维培养下的原代乳腺癌细胞增殖抑制率增高。但三维细胞培养的原代乳腺癌细胞增殖抑制率均低于二维细胞培养。结论 Matrigel三维细胞培养的原代乳腺癌细胞可聚集成紧密的球形,细胞增殖速度变慢,对阿霉素的敏感性降低。Matrigel三维细胞培养原代乳腺癌细胞效果较好。

大鼠心肌细胞培养方法的改良及PE诱导心肌肥大

心肌肥大是指心室体积和重量的增加，是心肌细胞对外界环境改变的一种适应性反应，可在短时问内增加心输量、提高泵血功能，使机体适应外界环境的变化。但心肌细胞持续肥大，会导致心肌收缩力下降，最终引起心力衰竭。心肌肥大作为心血管疾病中危害人类健康的主要因素之一，探讨其发病机制，对于预防和治疗心肌肥大具有重要意义。大鼠心肌细胞对于研究心肌肥大非常重要，可使某种单个影响因素只作用于相互分离的心肌细胞，简化研究系统的复杂性。这对于研究治疗心肌肥大药物的药理学作用极其重要，有利于深入研究其药理学方面的分子机制，为今后的临床应用提供有力证据。现今研究者多数是使用胰酶消化液多次反复消化来分离心肌细胞。该方法由于胰酶对心肌细胞有很大损伤，影响了心肌细胞的生长。使用胶原酶替代胰酶进行大鼠心肌细胞消化提取，可获得具有较高细胞活力的心肌细胞。

改良羊水细胞培养方法在产前诊断中的应用

目的探讨并分析改良羊水细胞培养方法在产前诊断中的应用效果。方法便利选择2019年1—11月来该院妇产科临床资料上显示有遗传性染色体不良妊产或高危者等的200例孕妇作为研究对象,使用改良的传统羊水培养方式和改良的原位细胞培养方式进行培养,分析培养后羊水细胞培养的具体情况。结果对200例进行培养,培养成功了190例,成功率为95.00%,其中培养的时间为4~6 d。对可行染色体核型190例分析发现,出现染色体异常核型现象的有18例,且染色体异常检出率为9.47%,其中,平衡易位有5例,占染色体异常的27.80%;三体综合征有7例,占染色体异常的38.89%;其他结构异常的6例,占染色体异常的33.33%。结论改良的传统羊水培养方式和改良的原位细胞培养方式均提高了收获的成功率,减少了细胞培养的时间,且检测分析的染色体核型比较多。因此改良的传统羊水培养方式和改良的原位细胞培养方式能够提高培养率,提高对胎儿染色体疾病临床诊断的准确率,因此改良羊水细胞培养方法值得在临床产前诊断中应用。

应用细胞培养方法和核酸杂交试验从启东来源毛蚶中检出甲型肝炎病毒

应用细胞培养方法和核酸杂交试验从1988年1月份上海市各区搜集及同年3月份启东产地采集的毛蚶混合浓缩标本中均分离到甲肝病毒(HAV)和检测到 HAV RNA,表明启东产地的毛蚶确污染有 HAV。根据研究中核酸杂交试验的敏感性估算每只毛蚶约污染有2～8 TCID_(50)的 HAV。进一步证实了1988年春季上海地区的甲肝大流行与摄食不洁毛蚶有关。

BXSB狼疮小鼠胸腺上皮细胞培养方法的建立

目的 :比较不同培养条件下原代狼疮小鼠胸腺上皮细胞生长情况。方法 :分别采用剪切法、剪切加胶原酶消化法、剪切加胰蛋白酶消化法建立培养体系获取自发性系统性红斑狼疮小鼠 (BXSB小鼠 )胸腺上皮细胞 ;用光镜、免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定。结果 :含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出较纯的胸腺上皮细胞 ;剪切法成纤维细胞污染较多 ,剪切加胰蛋白酶消化法细胞生长状态较差 ,经剪切加胶原酶消化的BXSB胸腺植块 ,生长状态好 ,成纤维细胞污染少 ;当原代培养的细胞长满瓶壁的 90 %左右时可传代 ,角蛋白染色阳性细胞纯度达 95 %以上。结论 :剪切加胶原酶消化法仅用含血清的培养基即可培养出符合实验要求的 BXSB小鼠胸腺上皮细胞 ,是低成本、简便易行的系统性红斑狼疮模型鼠胸腺上皮细胞培养体系。

新的干细胞培养方法可能绕过伦理屏障

据Medscape．com10月17日报道（原载Nature2005），开发有用的两种新的培养可生育胚胎干细胞的方法有可能平息舆论。一种方法是利用单个细胞可以在繁殖的八细胞阶段被安全提取而对胚胎没有任何伤害，这是一项已经被用于对培植前基因缺陷的基因诊断。另一种方法是用“选择性核转移”，培养不能植入子宫壁的胚胎。

大鼠骨髓单个核细胞诱导扩增为内皮祖细胞的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件

目的筛选大鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)诱导扩增为内皮祖细胞(BM-EPCs)的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件,构建一个高效、高产量、高纯度的骨髓来源BM-EPCs分离培养诱导扩增方法。方法取2周龄雄性SD大鼠,脱颈处死后分离大鼠双侧胫骨和股骨,收集骨髓细胞悬液。配制30%、50%、60%和70%浓度的Percoll细胞分离液,通过Percoll密度梯度离心法分离出大鼠BMMNCs种子细胞,并计算活细胞比例。将获得的BMMNCs分为1×10^(5)、5×10^(5)、1×10^(6)、2.5×10^(6)、5×10^(6)、1×10^(7)六个组别,分别接种于25 cm^(2)无菌培养瓶中,培养7 d后镜下观察各组细胞集落形成数目,并计算每10^(6)细胞的集落形成数。运用Graphpad prism9.5软件进行Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定相关性,根据其P值将有统计学差异的接种数目纳入范围,随后使用R语言编程定义计算函数,根据已知种子细胞总数及相关性函数限制下,通过迭代寻找最佳的BMMNCs细胞接种数目。分别配制20、50、100 nmol/L浓度的人纤连蛋白(FN)溶液,以不添加FN的空白溶液为对照,分别包被空白培养瓶2、6、12、24 h,将收集的48 h未贴壁BMMNCs接种于FN包被的各培养瓶中,静置培养3 d后计算各组集落形成数目,确定FN包被的最佳浓度与时间。接种48 h未贴壁BMMNCs于25 cm^(2)培养瓶底,使用EGM-2完全培养基定向诱导,于显微镜下观察集落形成及诱导扩增进程。取培养14 d的BM-EPCs,分别采用双阳性染色法和流式细胞术鉴定BM-EPCs的纯度。结果使用Percoll分离法可把BMMNCs细胞清晰的分为5层,其中30%与50%Percoll细胞分离层之间为BMMNCs活细胞比率最高。BMMNCs的最优接种数目为2.5×10^(6)个。以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h皆可有效促进细胞集落形成。细胞接种7 d后获得形态良好的铺路石样细胞并建立生长优势,表明BMMNCs已经诱导成为形态良好的BM-EPCs。Dil-Ac-LDL/FITC-UEA-1双阳性细胞占比为91.89%±5.77%,CD31+KDR阳性率为90.73%±0.61%、CD14阳性率为0.53%±0.17%、CD45阳性率0.77%±0.34%,说明获得的BM-EPCs纯度良好。结论大鼠BMMNCs诱导扩增为BM-EPCs过程中,可使用Percoll密度梯度离心法分离BMMNCs,BMMNCs的最优细胞接种数目为2.5×10^(6)个,细胞培养瓶包被条件为以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h,分离培养诱导获得的BM-EPCs形态和纯度均良好。

人外周血淋巴细胞培养上清液中IgG、IgA、IgM的ELISA测定方法

医学基础与临床研究中,常遇到检测人外周血淋巴细胞培养上清液中IgG、IgA、IgM的问题 国外已有多种方法,国内有关方面的报道目前较少。我们用国内现有市售材料为主,依标准ELISA法改良,成功地建立了本测定方法,现报道如下。

组织工程气管上皮细胞与成纤维细胞培养方法的改进

目的建立更简单、易行的组织工程气管上皮细胞与成纤维细胞培养方法。方法同时分离气管上皮细胞与成纤维细胞,共同培养,根据两种细胞对胰酶浓度耐受性不同的特性,分离气管上皮细胞与成纤维细胞,通过细胞生长曲线与MTT检测分析观察细胞的生长状态,并与常规方法培养的细胞进行比较。结果共同培养的两种细胞生长活性良好,用不同浓度胰酶消化后可完全分离两种细胞,分离后的细胞与常规方法培养的细胞生长曲线一致,MTT检测细胞增殖活性差异无统计学意义。结论该方法较常规方法简单、易行,是一种较好的体外一次获得两种细胞的培养方法。

Vero细胞微载体不同培养方法的评价

对三种不同培养方法进行细胞生长速度、密度、营养及代谢产物浓度的比较分析 ,以优化和筛选最佳培养条件与方式。用同体积生物反应罐 ,基本培养条件相同 ,采用批培养、再循环培养、灌流培养三种方式进行了Vero细胞微载体 (CytodexI)的周期培养。三种培养方法均达到预期效果 ,最终细胞密度分别为每毫升 2 .0 9× 10 6 、3 .3 7×10 6 、4 .3 4× 10 6 。灌流培养倍增水平最高 ( 5 .5 9) ,倍增时间最少 ( 3 0 .0 5h)。表明灌流培养优于再循环培养 ;而再循环培养兼容批培养及灌流培养的特点 ,又优于批培养。