葛根素、柚皮苷对成骨细胞增值及分化的影响

目的:观察葛根素、柚皮苷对体外培养小鼠成骨细胞增值、分化的影响。方法:应用CCK-8法观察葛根素和柚皮苷对体外培养小鼠成骨细胞增值的影响,应用ALP法观察葛根素和柚皮苷对体外培养小鼠成骨细胞分化能力的影响。结果:在成骨细胞增值方面,葛根素和柚皮苷对成骨细胞增值均有明显促进作用,但柚皮苷对成骨细胞增值能力的影响要优于葛根素对其能力的影响;在成骨细胞分化方面,葛根素和柚皮苷均能提高成骨细胞的ALP活性,但柚皮苷对其的影响要优于葛根素对其的影响。结论:葛根素与柚皮苷对成骨细胞增值和分化均有促进作用,但柚皮苷对成骨细胞的增值分化的影响要优于葛根素。

细胞外信号调节激酶在增生性瘢痕中表达与细胞增值的关系

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1、2)传导通路对增生性瘢痕的影响。方法用免疫组化方法检测p-ERK和PCNA在增生瘢痕中的表达变化规律。结果p-ERK和PCNA蛋白在病理性瘢痕中与非病理瘢痕、正常皮肤差异有显著性(P<0.05)。相关性分析有显著性(P<0.05)。结论病理性瘢痕的形成可能与激活ERK1/2信号传导通路,促进成纤维细胞增殖有关。

RNA干扰靶向抑制PI3Kp85α蛋白对大肠癌细胞增值的影响

目的:探讨RNA干扰靶向抑制PI3K p85α蛋白表达对大肠癌细胞增值的影响。方法:设计4条shRNA干扰载体及1条阴性对照载体,分别稳定转染大肠癌SW480细胞。用Western Blot筛选出一组抑制效率最高的细胞进行CCK-8细胞增值实验。结果:转染shRNA/324干扰载体的SW480细胞PI3K p85蛋白表达显著降低,抑制率约90%,选择该组细胞作为有效干扰组。CCK-8细胞增值实验显示,接种48h、72h及96h后,干扰组细胞生长速度明显低于对照组细胞(P<0.05)。结论:PI3K p85α蛋白表达缺失可降低大肠癌SW480细胞的增值速度,PI3K p85可能是大肠癌靶向治疗的新靶点。

siRNA靶向沉默B7-H4基因对人前列腺癌DU145细胞增值和凋亡的影响

目的研究siRNA沉默B7-H4基因对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响。方法以脂质体Lipofectami-neTM2 000(Lipo)为载体转染siRNA-B7-H4至DU145细胞,应用RT-PCR和Western Blot检测B7-H4表达水平,CCK-8法检测细胞增殖的变化,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白组和阴性对照组(NC)相比,转染B7-H4-siRNA的细胞B7-H4 mRNA和蛋白表达明显减少(P<0.05),DU145转染B7-H4 siRNA后,增殖能力减弱,凋亡显著。结论通过B7-H4-siRNA抑制DU145细胞B7-H4的表达,可以抑制细胞增殖,促进其凋亡,表明B7-H4在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用。

KLF10对微动促进成骨细胞增殖、分化的作用及机制

目的 本研究探讨锌指蛋白转录因子10(KLF10)在微动对成骨细胞的作用及其机制。方法 利用小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1细胞,经静态或机械力作用培养,通过QPCR和Western blotting检测细胞KLF10的mRNA的表达及蛋白水平;为了建立稳转敲低KLF10细胞系,将对照组及两个KLF10敲低组转入MC3T3-E1细胞内,应用Western blotting检测敲低效率;分成静态培养组、KLF10敲低静态组、机械力组、机械力+KLF10敲低组,通过CCK8、流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡情况;Western blotting检测各组细胞内骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)及Runt相关转录因子2(Runx-2)蛋白表达情况。结果 与静态培养相比,在机械力作用下,MC3T3-E1细胞中KLF10 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与对照组相比,两个敲低组(siRNA KLF10-1,siRNA KLF10-2)KLF10的蛋白表达降低,其中一个siRNA KLF10-2效果明显(P<0.01);与静态组比较,siRNA KLF10-2静态培养组细胞的增殖水平非常显著降低(P<0.001);机械力组细胞的增殖水平升高(P<0.05);机械力+siRNA KLF10-2组细胞的增殖水平显著降低(P<0.01);与静态组比较,siRNA KLF10-2静态培养细胞的凋亡非常显著增多(P<0.001);机械力组细胞的凋亡降低(P<0.05);机械力+siRNA KLF10-2组细胞的凋亡显著增多(P<0.01);与静态组比较,siRNA KLF10-2静态培养组细胞的OPN、OCN、RUNX-2的蛋白表达非常显著降低(P<0.001);机械力组细胞的OPN、OCN、RUNX-2的蛋白表达升高(P<0.05);机械力+siRNA KLF10-2组细胞的OPN、OCN、RUNX-2的蛋白表达降低(P<0.01)。结论KLF10在微动促进成骨细胞增殖、分化的过程中起着重要作用。

乳腺癌MRI征象及与人类表皮生长因子受体2和增值细胞核抗原表达的相关性分析

目的分析乳腺癌MRI征象及与人类表皮生长因子受体2(CerbB-2)、增值细胞核抗原(Ki-67)表达的相关性。方法选取2018年1月至2020年12月于本院治疗的62例乳腺癌患者作为研究对象,所有患者均进行MRI检查,采用免疫组化检查患者的CerbB-2、Ki-67阳性表达,分析乳腺癌患者的MRI征象及与CerbB-2、Ki-67表达的相关性。结果62例乳腺癌患者中,患者病灶类型均为肿块;肿瘤直径>2 cm患者23例,直径≤2 cm患者39例;分叶状肿瘤患者14例,类圆形肿瘤患者15例,不规则形肿瘤患者33例;肿瘤边缘光滑患者8例,不规则形患者27例,毛刺状患者27例;强化均匀患者15例,不均匀患者34例,环形强化患者13例;淋巴结出现转移患者23例,未出现转移患者39例;强化曲线Ⅰ型患者7例,Ⅱ型患者15例,Ⅲ型患者40例;早期强化率>100%患者41例,50%~100%患者15例,<50%患者6例;21例CerbB-2阳性表达患者中,内部强化和淋巴结转移比较差异有统计学意义(P<0.05),50例Ki-67阳性表达患者中,肿瘤形态、肿瘤边缘、内部强化、淋巴结转移比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论MRI征象与CerbB-2、Ki-67的阳性表达存在一定的相关性,可根据肿瘤形态、肿瘤边缘、内部强化、淋巴结转移征象对乳腺癌患者的预后情况进行评估。

HRB2基因对细胞增值影响的研究

目的:研究HRB2基因对细胞增值的影响。方法:设计4对HRB2 RNA寡核苷酸片段,经退火制备的双链DNA oligo,连接经双酶切的线性化PLKO.1-TRC-SP6载体上,转化后经PCR鉴定,阳性克隆测序,质粒抽提,应用Lipofectamine2000将质粒导入293T细胞,包装成慢病毒,再感染靶细胞293T,用嘌呤霉素筛选15天后,收集细胞抽提RNA,实时定量RT-PCR检测HRB2 mRNA水平,评价干扰效果。Western免疫印迹进一步确认有效作用靶点。通过划痕愈合实验和绘制生长曲线研究HRB2基因对细胞增值的影响。结果:载体构建成功。包装成慢病毒感染293T细胞系,发现:2号和4号靶点敲减HRB2基因效率达84%和88%。差别有统计学意义。通过western进一步证实了2号和4号是抑制HRB2的有效作用靶点。划痕愈合实验和绘制生长曲线的结果显示2号和4号靶点细胞株细胞生长受到抑制,并且4号较2号稍明显。结论:成功构建并筛选了携带有人HRB2基因的shRNA慢病毒载体及有效靶点,研究发现HRB2基因对细胞增值产生了影响,这为进一步研究HRB2的生物学功能提供了实验平台。

扶正透邪解毒化瘀方对不同时间点老年肺炎大鼠炎症及免疫功能的影响

目的:探讨扶正透邪解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌肺炎老年大鼠炎症反应与免疫功能的态影响。方法:将实验老年大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、西药对照组、中药组、中药提前给药组、中西医结合观察组,动态观察不同时间点各组老年大鼠炎症指标的变化及淋巴细胞增殖水平的变化。结果:中药提前给药组及中西医结合观察组疗效显著,中药组对感染早期的炎症水平改善明显;中西医结合观察组可使T淋巴细胞增殖能力趋于正常;中药提前给药组、中西医结合观察组能抑制感染后B淋巴细胞的增殖并使其趋于正常。结论:扶正透邪解毒化瘀方能够调节感染早期老年大鼠机体过度的免疫炎症反应,中西医结合治疗能够纠正多重耐药铜绿假单胞菌感染后紊乱的免疫状态,中药提前给药能够对多重耐药铜绿假单胞菌感染后的炎症反应及免疫紊乱起到一定的预防及治疗作用。

药用植物淫羊藿与富血小板血浆协同对软骨细胞的增殖作用

观察淫羊藿和富血小板血浆(PRP)对SD大鼠软骨细胞增殖作用的影响,探讨两者对软骨细胞的协同作用。取3周龄SD大鼠的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MTT法、流式细胞术对细胞增殖作用进行检测。结果表明:(1)PRP对软骨细胞增殖有显著的促进作用(P<0.01);(2)淫羊藿对软骨细胞有一定的增殖作用,但不显著;(3)淫羊藿联合PRP对软骨细胞的增殖作用显著下降,效果低于淫羊藿或PRP组(P<0.01)。淫羊藿联合PRP对软骨细胞有显著抑制作用(P<0.01),推断淫羊藿某些成分抑制了PRP中生长因子的活性,从而减弱了PRP对软骨细胞的作用,该推断有待进一步研究确认。

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞生长的影响

目的 探讨在碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)作用下 ,人牙周膜细胞 (PDLC)的增殖、DNA合成状况的变化。方法 以常规体外组织块细胞培养法获得PDLC ,采用MTT法和3 H TdR掺入法测定bFGF对PDLC的影响 ,实验结果A值和CPM值经方差分析。结果 各实验组与对照组之间均有显著性差异 ,bFGF能显著提高PDLC的增殖活性及DNA合成 ,其效应随bFGF浓度增大而增大 ,10 0 0ng/ml范围内未见抑制现象 ,最大效应一半的浓度约为10 0ng/ml。结论 bFGF能促进PDLC增殖及DNA合成 。

红景天甙对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞ERK活性的影响

目的:探讨红景天甙对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖、细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)磷酸化蛋白表达水平的影响。方法:采用MTT比色及Westernblot法分别检测细胞增殖及磷酸化ERK2蛋白。结果:乙醛刺激HSC增殖、处于活化状态的磷酸化ERK2蛋白表达水平增加;红景天甙0.25mg/ml,0.5mg/mL,1.0mg/ml,1.5mg/ml,2.0mg/ml,2.5 mg/ml均能抑制乙醛刺激HSC增殖,1.5mg/ml红景天甙可明显抑制乙醛刺激的P-ERK2蛋白水平。结论:红景天甙明显抑制乙醛刺激的HSC内P-ERK2水平可能为其抑制HSC增殖的重要机理之一。

藳本内酯和丁烯酉夫内酯对bFGF诱导的大鼠平滑肌细胞异常增殖的抑制作用(英文)

目的研究藳本内酯和丁烯酉夫内酯与大鼠主动脉平滑肌细胞的亲合活性,及其对主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法采用大鼠主动脉细胞膜色谱模型观察本内酯和丁烯酉夫内酯的保留特性;培养并分离纯化大鼠主动脉平滑肌细胞,采用bFGF诱导平滑肌细胞增殖,以MTT比色法检测本内酯和丁烯酉夫内酯对平滑肌细胞增殖的抑制作用。结果本内酯和丁烯酉夫内酯与大鼠主动脉平滑肌细胞膜有亲和性,其保留行为与钙离子受体拮抗剂维拉帕米相似;本内酯和丁烯酉夫内酯不会引起正常大鼠主动脉平滑肌细胞增殖,但能明显抑制bFGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖。其有效浓度分别为5.5和11.1μmol.L-1(P<0.05)。结论本内酯和丁烯酉夫内酯与大鼠主动脉平滑肌细胞具有亲和力,能抑制血管平滑肌细胞的异常增殖。

白细胞介素8及其受体CXCR1对人牙髓干细胞增殖和迁移的影响

目的:观察人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)表面是否有Ⅰ型趋化因子受体(CXCR1)表达、人工重组白细胞介素8(IL-8)对hDPSCs迁移和增殖的影响。方法:采用间接免疫荧光技术检测hDPSCs上CXCR1的表达情况;采用CCK8、体外趋化实验观察不同浓度人工重组IL-8对hDPSCs迁移和增殖的影响。结果:在正常hDPSCs细胞膜表面有CXCR1的表达。200、500 ng/mL IL-8作用4 h可以显著趋化hDPSCs的迁移(P<0.05)。10、50、100 ng/mL IL-8作用48 h可促进hDPSCs增值(P<0.05)。结论:CXCR1在hDPSCs细胞膜上表达,IL-8能够促进hDPSCs的迁移和增殖。

干预细胞增殖分化的脉冲交流电刺激器的研究

目的:研制一个可干预细胞增殖、分化研究用的脉冲微电流刺激器。方法:由直流供电电源、占空比和频率可调的输出正负矩形波振荡器及恒流源组成电路。结果:经试验证明,电路的占空比可调,频率可在1Hz～10Hz之间可调,电流可在0μA～1100μA之间可调。结论:可以满足研究需要。

不同频率的周期性压力对兔软骨细胞影响的生物学研究

目的:通过观察不同频率的周期性压力对兔软骨细胞增殖及整合素α1β1分泌量的影响,研究不同频率的力学刺激对软骨细胞产生的生物学影响。方法:取兔四肢关节的软骨细胞,在体外进行培养。表型稳定的第3代细胞进行研究,设置常压培养A组和周期性压力B组,并将B组在压力为172kPa按照加压频率分组,加压频率B1组为0.2Hz,B两组0.5Hz,B3组1Hz,B4组2Hz,B5组5Hz。B组每天干预2h,连续干预3d。检测A和B组软骨细胞增殖情况和整合素α1β1的含量。结果:OD值A组为1.08±0.13,B1组为1.19±0.11,B两组为1.23±0.08,B3组为1.35±0.06,B4组为1.45±0.09,B5组为1.37±0.12。加压各组与对照组比较OD值升高,差异有统计学意义。B组各组间差异有统计学意义,峰值出现在B4组。A组整合素α1β1水平为3.02±0.26pg/mL,B1组为3.28±0.19pg/mL,B两组为3.43±0.11pg/mL,B3组为3.77±0.24pg/mL,B4组为4.01±0.09pg/mL,B5组为3.94±0.13pg/mL。加压各组与对照组比较整合素α1β1含量均有升高,差异有统计学意义差异(P<0.05)。B组各组间整合素差异有统计学意义,峰值出现在B4组。结论:相同大小(172kPa)不同频率的周期性压力刺激兔软骨细胞,均能促进软骨细胞增殖和增加整合素含量的作用,但并非频率越高作用越强。本实验中以2Hz频率的周期性压力作用最强。

扶正抗癌方治疗非小细胞肺癌的网络药理学作用机制探讨

目的基于网络药理学方法探讨中药复方扶正抗癌方治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的作用机制。方法利用BAMAN数据库收集扶正抗癌方各味中药中的化学成分,再从BATMAN数据库检索各化学成分的靶标,收集打分(Score)大于20的化学成分及其预测的靶标,导入CytoScape Version 3.7.1软件,绘制成分-靶标网络图,得到该方的效应靶标。以"非小细胞肺癌"为关键词,从GeneCards数据库查找疾病靶标,绘制韦恩图。靶标导入DAVID数据库,进行GO富集分析和KEGG通路分析,设定阈值P<0.05。对KEGG通路中排名前20位的通路进行分析,并将结果导入R(i3863.5.2)和R Studio软件,绘制KEGG信号通路的气泡图。将作用靶标导入String数据库进行蛋白-蛋白相互作用分析,获取蛋白相互作用信息后,导入CytoScape 3.7.1软件构建蛋白-蛋白相互作用网络。提取成分-靶标网络图,计算其网络拓扑性质,前20位的化学成分即为该方治疗NSCLC的潜在有效成分。结果共检索出135个小分子成分,4898个基因靶标,共同靶基因663个,收集了Score≥20的关键基因164个,其中度值排名较靠前的蛋白TP53、TNF、TLR4、STAT2、SRC、PTGS2、NFKB1、MYC、JUN、IL1B、MTOR、FOS、CTNNB1、AKT1被认为是蛋白相互作用网络中的核心靶点;分析GO生物学过程、分子功能及细胞组分相关条目前10条及KEGG通路前20条,主要涉及癌症通路、PI3K-Akt信号通路及p53信号通路等。结论扶正抗癌方可能通过多成分、多靶点、多途径参与调控NSCLC细胞增殖与凋亡等多种生理过程,发挥对NSCLC的干预作用。

来源于人胎肝干细胞的肝癌细胞系建立及初步研究

目的:研究肝癌细胞发生发展及变化规律,探讨胎肝干细胞体外长期培养的变异归宿问题. 方法:原代分离培养人胎肝干细胞,从中筛选出一生长旺盛之集落,体外长期培养,并对其生物学特性进行初步鉴定.进行了细胞倍体分析;应用流式细胞仪分析了细胞周期;在Scid鼠体内接种细胞进行成瘤性验证. 结果:从人胎肝组织中成功分离出一胎肝干细胞集落,在体外长期培养下可分化为肝癌细胞.其细胞增值核抗原指数高达100%;倍体分析常见多倍体细胞;流式细胞仪分析细胞周期,结果G1期细胞约占48%,G2期细胞约占18%,S期细胞约占34%.Scid鼠体内成瘤实验显示,接种细胞后2-3 wk 成瘤,具有100%的成瘤性.显微镜下所见细胞大小不一,异型性明显,核仁大,核分裂活跃. 结论:人胎肝中存在具有干细胞特性的原始细胞,确实可分化为肝癌细胞.从人胎肝干细胞中分离培养出肝癌细胞对于肝癌发生发展及其变化规律的深入研究奠定了基础.

经癌胚抗原重组痘苗病毒转染的树突状细胞体外诱导特异性T细胞免疫

目的研究人癌胚抗原重组痘苗病毒(rV-CEA)转染外周血树突状细胞(DC)后能否在体外诱导CEA特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫。方法将rV-CEA转染外周血单核细胞来源的DC后用于激发同源的T细胞,检测其对T细胞的增殖作用以及对CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性,并与未经rV-CEA转染的DC激发的T细胞进行比较。结果经rV-CEA转染的DC激活的T细胞对CEA分泌性肿瘤细胞具特异性杀伤作用。结论rV-CEA转染的DC可以诱导CEA特异性T细胞活性。

用细胞周期分析结合免疫印迹方法检测微型浮游植物细胞增长率的研究

采用基于流式细胞仪的细胞周期分析和免疫印迹方法来研究浮游植物的细胞增长率.检测和分析同步化后的有害浮游植物Takayama pulchellum,可知T.pulchellum的S期大约出现在10h左右.免疫印迹检测的结果显示抗微小原甲藻(Prorocentrum minimum)和抗Pfiesteria piscicida的PCNA抗体与T.pulchellum无明显的阳性杂交信号出现,表明这2种PCNA抗体不能作为检测T.pulchellum PCNA表达的抗体.Rubisco抗体免疫印迹反应的信号强烈,但与细胞生长状态的相关关系不够明显,其特异性不高使其不能作为理想的指示细胞原位生长率的指标.

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对肺腺癌细胞株A549分化和增殖的影响

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-am ino-2-trifluorom ethyl-phenyl retinoate)对人肺腺癌细胞株A549生长抑制、分化的影响。方法4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯组及全反式维甲酸(ATRA)处理肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,苏木精—伊红(HE)染色观察肺癌细胞形态变化。结果4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯及ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,肺癌A549细胞在,发生了细胞胞体变小、分裂状态的细胞数减少等形态学变化。结论4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯及ATRA使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖并诱导其分化。