海带硫酸多糖对人宫颈癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨海带硫酸多糖(LPS)对人宫颈癌细胞株HeLa的体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法:以不同浓度的LPS处理HeLacell,用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况,细胞染色法观察细胞凋亡的形态,用流式细胞仪记录细胞周期改变、bcl-2及NF-κBp65基因表达情况。结果:LPS使细胞增殖能力下降,细胞出现凋亡的形态学改变,细胞周期受到阻滞,bcl-2蛋白与NF-κBp65的表达随着LPS浓度的增加与作用时间的延长而降低。结论:LPS明显抑制人宫颈癌细胞株的生长,并通过影响bcl-2、NF-κBp65基因蛋白的表达促进宫颈癌细胞凋亡。

前列腺素E1对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景:目前还缺乏前列腺素E1对骨髓间充质干细胞增殖影响的研究。目的:观察前列腺素E1与骨髓间充质干细胞共培养对细胞增殖作用的影响。方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞。取第3代细胞利用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。以每孔1×104数量接种于96孔板,将前列腺素E1分别以0(对照组),1,2,5,10,20,40,100μg/L的浓度作用骨髓间充质干细胞72 h,以CCK-8法检测细胞增殖情况,观察最佳增殖浓度10%的前列腺素E1在不同时间(24,48,72 h)对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果与结论:P3代骨髓间充质干细胞表面阳性率CD11b/c为4.93%,CD29为99.93%,CD45为0.1%,CD90为99.58%,符合骨髓间充质干细胞特征。质量浓度为1,2,5,10,20,40,100μg/L的前列腺素E1均可以促进骨髓间充质干细胞在体外的增殖,以10μg/L的作用最强。10μg/L前列腺素E1在作用48 h后能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖(P<0.05),其作用呈一定程度的时间依赖性,72 h达最高。

同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响机制

目的旨在了解同型半胱氨酸(Hcy)的浓度对Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅵ型胶原的产生以及大鼠VSMCs增殖效应的影响。方法采用组织块贴壁法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,用不同浓度的Hcy刺激大鼠血管平滑肌细胞,在不同的时间点以四甲基偶氮唑盐法检测平滑肌细胞的活性细胞数量及细胞增殖情况。以5溴-2脱氧尿苷(BrdU)法检测Hcy对大鼠血管平滑肌细胞DNA的合成作用。流式细胞仪观察细胞周期的变化,酶联免疫吸附试验测定胶原含量。结果在0．025-0．05 mmol／L的Hcy刺激下,12-48 h VSMC增殖增加明显。24-48 h,在浓度为0．025-0．05 mmol／L的Hcy刺激下细胞合成DNA明显增加,其促增殖作用明显增强(P<0．05);随着浓度的增加,大鼠血管平滑肌细胞合成DNA开始下降,至5 mmol／L浓度时最低。24 h时在浓度为0．025-0．05 mmol／L的Hcy刺激下增殖的细胞S期的百分含量较对照组和Hcy其他浓度组明显增加(P值均<0．05)。细胞的Ⅰ型和Ⅳ型胶原分泌随着Hcy浓度的升高呈现剂量依赖性增高,Ⅲ型胶原有轻度的升高,但差异无统计学意义(P>0．05),高浓度的Hcy会减少Ⅵ型胶原的分泌,并呈剂量依赖性。结论较低浓度的Hcy刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖加速,并可能通过改变纤维斑块中的胶原构成类型导致斑块不稳定性和易损性,最终加速粥样斑块的发生和发展。

缓激肽在血管紧张素(1～7)抑制心脏成纤维细胞增殖中的作用

目的探讨缓激肽(BK)在血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)增殖中的作用及其可能机制。方法将差速贴壁法培养的新生大鼠CFs,随机分为5组:对照组、AngⅡ组、Ang(1～7)组、AngⅡ+Ang(1～7)组和AngⅡ+Ang(1～7)+HOE140组。以3H胸腺嘧啶掺入反映细胞增殖情况,通过硝酸还原酶法测定NO含量,放射免疫分析法测定cGMP含量。结果(1)与对照组比,AngⅡ10-7mol/L孵育细胞36h后可明显诱导CFs3H胸腺嘧啶掺入增加,[100%vs51.8%±1.8%,P<0.01]。(2)Ang(1～7)呈浓度依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs3H胸腺嘧啶掺入增加,其Ang(1～7)10-6mol/L可使3H胸腺嘧啶掺入下降至57.9%±2.1%(P<0.01)。(3)与对照组比,AngⅡ组的NO和cGMP含量显著降低(P<0.01),而Ang(1～7)10-6mol/L可显著增加NO和cGMP的含量,与AngⅡ组比,分别上升至177.2%±6.9%、242.3%±19.1%(P<0.01)。(4)缓激肽β2受体阻断剂HOE14010-8mol/L明显减弱了Ang(1～7)抑制CFs增殖和促进CFs释放NO与cGMP的作用,AngⅡ+Ang(1～7)组与AngⅡ+Ang(1～7)+HOE140组比,57.9%±2.1%、177.2%±6.9%、242.3%±19.1%分别转变为88.9%±4.2%、125.7%±8.2%、162.2%±14.7%(P<0.01)。结论Ang(1～7)可能通过与BK相互作用促进NO和cGMP的产生,从而抑制AngⅡ诱导的CFs的增殖。

胃泌素及其受体拮抗剂对人结肠癌 细胞的增殖调控

目的:探讨胃泌素类似物五肽胃泌素（PG）及胃泌素受体桔抗剂丙谷胺（PGL）对体外培养的人结肠癌细胞株HT29生长的影响。方法:采用MTT比色分析法检测细胞增殖情况,用流式细胞术（FCM）分析细胞周期变化。结果:高浓度的PG(10-5～10-7M)能明显促进HT29细胞的增殖（p【 O.05）,作用呈剂量依赖关系,最大作用浓度为10-6M。

豆楮方对人肝癌细胞株抑制作用的体外实验研究

目的:研究豆楮方对人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721的生长增殖抑制作用。方法:按文献方法制备豆楮方含药血清,用MTT法观察细胞增殖情况。结果:豆楮方含药血清在体外对人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721均有抑制作用,对HepG2的最高抑制率为91.48%,对SMMC7721的最高抑制率为89.42%,抑制肝癌细胞的效果优于含5Fu血清。

肝素对大鼠肝星状细胞中转化生长因子β1和Ⅰ型胶原的影响

目的：研究肝素与大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cells，HSC）作用后转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和I型胶原表达的变化及意义。方法：大鼠肝星状细胞以1×10^8／L浓度接种于96孔培养板，每孔100uL。实验分组为肝素I组、肝素Ⅱ组、肝素Ⅲ组，加入肝素使各组培养液中肝素浓度分别是10，100，1000mg／L，加生理盐水为对照组（每组6孔重复3次）培养48h。培养终止后吸取上清液-20℃冰冻保存，ELISA法检测其上清液TGF-β1和I型胶原水平，MTT法观察细胞增殖情况。结果：肝素Ⅱ组和Ⅲ组HSC培养上清液TGF-β1水平均显著低于对照组（4.59±1.27ng／L，3.34±1.13ng／L VS 5.95±1.72ng／L，P〈0．01），肝素各组I型胶原水平均低于对照组（87．20±9．30ng／L．73．17±12．04ng/L VS 95．61±12．55ng／L，63．31±10．93ng／L VS 95．61±12．55ng／L，P均〈0．05），肝素Ⅲ组平均吸光度低于肝素I组和对照组（0．29±0．07 VS 0．42±0．12，0．46±0．17，P均〈0．05）。结论：大鼠肝星状细胞在肝素作用TTGF-β1和I型胶原分泌受抑制，其增殖减少。

鬼臼乙叉甙对星形胶质细胞瘤表达β1,4-半乳糖基转移酶的影响

目的 研究鬼臼乙叉甙(Etoposide ,又称VP16)影响人星形胶质细胞瘤SHG 44细胞周期过程中,与N 糖链合成有关的β1,4 半乳糖基转移酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ(β- 1,4 -galactosyltransferaseⅠ、Ⅱ、Ⅴ,β- 1,4- GalT- Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ)表达变化。方法 首先应用流式细胞仪技术分析VP16处理SHG 44细胞过程中细胞增殖情况的变化,再采用NorthernBlot方法分析处理过程中的SHG 44细胞中β- 1,4 -GalT- Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的表达变化。结果 流式细胞仪检测表明,细胞培养基加入12 0 μmol/LVP161～6h后能引起SHG 44细胞的S期阻滞。NorthernBlot显示,VP16作用1～6h过程中,β- 1,4 GalT -Ⅰ、Ⅴ表达无显著变化。而β- 1,4- GalT -Ⅱ表达在此过程中则有升高趋势。结论 VP16能够引起星形胶质细胞瘤细胞SHG 44细胞周期改变过程中,β- 1,4 -GalT- Ⅰ、Ⅴ的表达无变化,而β- 1,4 -GalT- Ⅱ的表达明显升高。提示VP16引起肿瘤细胞周期改变,可能通过影响β- 1,4- GalT- Ⅱ的表达,引起有关蛋白质的糖基修饰而实现的。

脐静脉内皮细胞与双向羟基磷灰石联合培养的初步研究

目的:研究脐静脉内皮细胞在双向羟基磷灰石(BPM)的生长情况,为组织工程材料研究提供实验基础。方法:人脐静脉内皮细胞来源于永生细胞系,BPM紫外线照射30min ,70 0ml/L乙醇洗涤6 0min ,无菌滤纸吸干,用磷酸缓冲盐水洗涤3遍,每次30min ,而后用无菌滤纸吸干,将处理过的BPM材料泡入DMEM培养基(DMEM ) +2 0ml/L胎牛血清中过夜,使用前用无菌滤纸吸干。应用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和BPM进行混合培养,应用光学显微镜、荧光显微镜及扫描电子显微镜对其进行观察,并应用MTT测定细胞增殖情况。结果:人脐静脉内皮细胞在BPM表面生长、增殖良好,并可观察到细胞长入基质材料微孔内的改变。在培养的第3天,采用MTT法测定对照组与双向羟基磷灰石组的光吸收值,对照组为0 . 6 16±0. 0 17,双向羟基磷灰石组为0 . 6 38±0 . 0 18,两组比较无统计学差异(P >0 . 0 5 )。结论:双向羟基磷灰石(BPM )可作为细胞移植的载体。

脂肪干细胞HLA分子表达与体外抑制淋巴细胞增殖的实验研究

目的研究脂肪干细胞(adiposederivedstemcells,ADSCs)表面免疫分子的表达以及体外调节淋巴细胞反应的功能,以期为组织工程提供同种异体种子细胞来源。方法从临床脂肪抽吸术丢弃脂肪组织中分离获取脂肪干细胞(共3例),体外培养至第2代,流式细胞仪检测免疫分子HLAI、HLAII的表达。1×105个/孔ADSC细胞刺激异体淋巴细胞,观察细胞增殖情况。以植物血凝素(PHA,2μg/ml)刺激淋巴细胞后,分别以(1×102、1×103、1×104、1×105)细胞/孔数量的异体脂肪干细胞加入反应体系中,观察淋巴细胞增殖情况;另一组在刺激同时加入白介素2(IL2,0.5ng/ml),检测脂肪干细胞抑制作用的逆转。分别以1×102～5细胞/孔数量的“第三者”脂肪干细胞或经IFNγ作用后脂肪干细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖抑制情况。结果脂肪干细胞表达HLAI类分子,但未检测到HLAII类分子阳性表达。人IFNγ刺激48h后,HLAI表达未见明显增高,HLAII类分子表达明显增高。异体或经IFNγ作用的脂肪干细胞均未能刺激淋巴细胞体外增殖。脂肪干细胞可明显抑制PHA刺激的淋巴细胞增殖,IL2可逆转脂肪干细胞的抑制作用。脂肪干细胞可明显抑制双相混合淋巴细胞反应,抑制作用呈脂肪干细胞细胞数量依赖性;经IFNγ作用后抑制作用未见明显减弱。结论ADSC可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,具有一定的调节淋巴细胞反应的能力,有可能成为组织工程或细胞治疗中同种异体细胞来源。

创面愈合的评价指标

为建立客观、准确地评价创面愈合的标准,该文对近年来国内外有关文献进行检索,总结和筛选了创面愈合率、创面愈合时间、组织病理学分析、巨噬细胞定量分析、羟脯氨酶含量测定、细胞增殖情况、细胞DNA含量和细胞周期分析、转化生长因子-α水平、白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子水平、角质细胞胶原酶-1含量测定、成纤维细胞生长因子受体-1水平、单核细胞化学诱导蛋白-1水平和角质细胞纤溶酶原活化抑制剂-2水平等13种创面愈合评价指标。其中创面愈合率、创面愈合时间及组织病理学分析仍是最直接而有效的创面愈合评价指标。

血管紧张素-(1-7)抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠系膜细胞增殖

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠系膜细胞(GMC)增殖的影响。方法在AngⅡ诱导培养的GMC中,应用Ang-(1-7),通过[3H]-Thymidine及[3H]-Leucine掺入分别测定GMC的DNA、蛋白质合成;结晶紫染色检测细胞数目,观察系膜细胞增殖情况;分别用特异性AngⅡ受体1(AT1受体)拮抗剂[Sar1,Ile8]-AngⅡ和血管紧张素II受体2(AT2受体)拮抗剂PD123319与Ang-(1-7)共同培养,探讨Ang-(1-7)是否通过AngⅡ受体发挥作用。结果Ang-(1-7)呈剂量依赖性抑制AngⅡ诱导GMC的DNA、蛋白质合成及细胞数目增加;[Sar1,Ile8]-AngⅡ和PD123319不影响Ang-(1-7)的上述作用。结论Ang-(1-7)能抑制基础和AngⅡ诱导的GMC增殖,其作用的发挥不通过AngⅡ的AT1和AT2受体介导。

乳腺癌4或6周期新辅助化疗前后ER PR Cerb-B2 Ki-67的表达与化疗疗效的关系

新辅助化疗不仅可以有效治疗局部晚期乳腺癌或者是炎性乳腺癌,而且可以很好地提高保乳手术的概率、降低对肿瘤的分期和判断药物与肿瘤的相关性等。我院一般采取4、6个周期的新辅助化疗。雌激素（ER）、孕激素（PR）为乳腺癌分泌治疗疗效的预测物,而研究发现Cerb-B2与乳腺癌患者的预后不良有关系。Ki-67是了解肿瘤细胞增殖情况的标记物。本文通过对4、6个周期新辅助化疗疗效的对比和化疗前后ER、PR、Cerb-B2、

高同型半胱氨酸血症对血管损伤后新生内膜形成的作用及机制

目的研究饮食诱导的高同型半胱氨酸血症(Hcy)对血管损伤后新生内膜形成的作用及机制。方法采用1g(kg·d)L蛋氨酸灌胃制备Hcy大鼠模型。4周后行左颈动脉拉伤,第14天、第28天取材,检测新生内膜的形成、内皮覆盖和平滑肌细胞增殖情况。结果第14天、第28天高蛋氨酸饮食(HHCY)组比对照组新生内膜增生厚度分别增加36%和33%,新生内膜面积分别增加41%和30%,新生内膜面积与中膜面积之比分别增加36%和21%,管腔面积分别减少47%和61%,中膜面积无明显差别。第14天HHCY组内膜、中膜增殖细胞核抗体阳性颗粒百分比是对照组的1.7倍和2.3倍。第14天、第28天HHCY组血管内皮覆盖率比对照组减少52%和31%。结论高同型半胱氨酸血症促使血管损伤后新生内膜形成,促进平滑肌细胞增殖和抑制内皮修复是其致病机制,提示高同型半胱氨酸血症可能是血管成形术后再狭窄发生的重要的危险因素之一。

拉坦前列素滴眼液对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响

目的研究拉坦前列素滴眼液对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖有无促进作用。方法体外培养人眼球筋膜囊成纤维细胞。按1∶10比例逐级稀释拉坦前列素滴眼液(0.005%),使药物浓度依次为5.00、0.50、0.05μg/ml直至5×10-8μg/ml。采用噻唑蓝比色法检测在不同浓度药物作用下的细胞增殖情况,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果较高浓度组(5.00μg/ml)拉坦前列素滴眼液对人眼球筋膜囊成纤维细胞存在明显的杀伤作用,细胞几乎全部死亡,吸光度(A)值与对照组相比明显下降(P<0.01);低浓度组(<0.05μg/ml)A值较对照组无明显变化(P>0.05)。比较拉坦前列素滴眼液在不同作用时间下的剂量效应曲线,24、48及72h差异均无统计学意义(P>0.05)。结论拉坦前列素滴眼液不能促进体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的增殖,在较高浓度时具有细胞毒性,在较低浓度时则对细胞增殖无明显影响。

维甲酸纳米粒滴眼液抑制后发性白内障的实验研究

目的:研究维甲酸(RA)纳米粒滴眼液对兔后发性白内障形成的影响及对兔眼的毒性作用。方法:18只新西兰白兔被随机分为A、B、C 3组,进行晶状体囊外摘除术。A组为空白对照组,B组术后滴3 0 0 μg·ml-1的RA纳米粒滴眼液,C组术后滴70 0 μg·ml-1的RA纳米粒滴眼液。术后观察12周,行后囊膜混浊(PCO)评分及照相,比较各组晶状体PCO情况;光镜观察晶状体上皮细胞增殖情况并观察药物的毒性作用。结果:术后12周A、B、C组发生PCO的眼数分别为10、6、4眼。B组和C组PCO发生率低于A组,差异有显著性(均为P <0 .0 5 ) ,两用药组之间PCO发生率无显著差异(P >0 .0 5 )。组织病理学检查显示,A组的晶状体上皮细胞增殖较B组和C组明显,各组虹膜及睫状体均未出现慢性炎症反应。结论:RA纳米粒滴眼液能有效抑制晶状体上皮细胞的增殖,预防兔后发性白内障的形成,无明显毒性,并且使用方便,具有临床应用价值。

2005年高考生物学综合能力测试

一、单项选择题(每小题3分,共45分) 1.将植物细胞在3H标记的尿苷存在下温育数小时,然后收集细胞,经适当处理后获得各种细胞器.放射性将主要存在于 ( )

人类免疫缺陷病毒-1感染者外周血单个核细胞体外培养的免疫学及病毒学特点

目的观察人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养过程中免疫学及病毒学的动态变化特点,并评价培养的细胞体系抗病毒活性。方法采集14例HIV感染者和6名健康人的PBMC,体外经多种细胞因子诱导培养,每3天观察细胞增殖情况,同时检测细胞表型、上清中细胞因子浓度和病毒载量。结果培养的健康人PBMC在(35±5)d最大增殖(61±8)倍;7例培养成功的HIV感染者PBMC在(21±6)d最大增殖(17±13)倍,另7例HIV感染者PBMC培养失败;同时发现HIV感染者PBMC体外培养最大增殖时间与其培养前外周血基础CD4/CD8比值呈明显正相关(P<0.05)。表型分析发现,培养的PBMC为优先CD8细胞增殖的异质T细胞群,主要由CD4、CD8及CD3CD56细胞组成;部分HIV感染者PBMC培养期间分泌白细胞介素(IL)1α、IL12、肿瘤坏死因子(TNF)α和IL10等细胞因子能力较高;而11/12例HIV感染者PBMC体外培养初期可扩增出大量病毒,但随着培养时间的延长,病毒载量逐渐降低甚至低于检测限。结论体外大量扩增基础CD4/CD8比值较高的HIV感染者外周血PBMC是可行的,扩增的细胞具备较强的Th1细胞免疫反应能力,为进一步开展艾滋病的免疫细胞治疗提供必要的实验数据。