丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶通路在动静脉内瘘术后内膜增生部位血管组织和细胞中的表达及意义

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路在动静脉内瘘术后内膜增生部位血管组织中的表达及意义,初步探索抑制MAPK/ERK通路对肌成纤维细胞自噬及增殖过程的影响。方法选取2023年1月至3月期间在海南医学院第一附属医院肾内科行动静脉内瘘重建术的患者6例,观察组收集动静脉内瘘重建术患者内膜增生严重部位的静脉血管组织,对照组为重建术中需结扎的侧支正常静脉组织。术前收集患者的一般资料,超声测量拟切取部位血管内径及内膜厚度,蛋白质印迹法检测血管组织中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylation-extracellular regulat-ed protein kinases 1/2,p-ERK1/2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白相互作用蛋白1(myosin-like B cell lymphoma/lewkmia-2 interacting protein1,Beclin^(-1))、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的表达水平,并分析其与静脉内膜厚度的相关性。以肌成纤维细胞为研究对象,尿毒症血清培养,并予ERK1/2抑制剂去氢钩藤碱(Corynoxeine)干预,提取细胞总蛋白及RNA,蛋白质印迹法及实时定量PCR检测Beclin^(-1)及PCNA的表达变化。结果入组患者透析过程中均存在血流量不足,灰阶超声提示动静脉内瘘狭窄处静脉内膜明显增厚[(0.143±0.014)cm比(0.097±0.016)cm],血管腔内径为(0.166±0.028)cm。蛋白质印迹法结果显示,与正常侧支部位血管组织相比较,内膜严重增生部位血管组织中p-ERK1/2、Beclin^(-1)、PCNA蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(均P<0.05)。观察组静脉内膜厚度与p-ERK1/2、Beclin^(-1)、PCNA蛋白的表达水平均呈正相关(R2=0.929、0.702、0.789,均P<0.05)。在细胞模型上,与正常对照组相比较,尿毒症血清组自噬相关指标Beclin^(-1)及增殖相关指标PCNA的表达明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。而加入ERK特异性抑制剂Corynoxeine后,Beclin^(-1)及PCNA的表达均明显减低,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论MAPK/ERK通路参与了动静脉内瘘内膜增生过程,促进细胞自噬及增殖过程,抑制该通路活性,或可减低细胞自噬及增殖,从而减轻内膜增生。

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的:观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法:将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后,模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水,miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分,测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量,检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率,caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果:miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组,miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组;miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白表达明显低于模型组,Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达高于模型组;miR-17-5p inhibitor组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax、p-ERK1/2蛋白表达显著高于其他2组,Bcl-2蛋白表达低于其他2组。结论:miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的脑损伤具有一定的保护作用,miR-17-5p可抑制ERK1/2信号通路激活。

促凋亡蛋白Bad和细胞外调节蛋白激酶对膀胱癌多重耐药细胞的作用机制研究

目的检测人膀胱癌耐药细胞T24/Ifex和亲本细胞T24中细胞外调节蛋白激酶(ERK)1、ERK2、ERK5和Bad的表达,探讨其对膀胱癌细胞多药耐药(MDR)的影响。方法人膀胱癌耐药细胞株T24/Ifex用小剂量缓慢诱导法诱导;CCK-8法检测T24/Ifex对多种化疗药物的敏感性;Western blot检测MRP-1、P-gp、ERK1、ERK2、ERK5和Bad蛋白的表达;荧光定量PCR检测Bad m RNA的表达。结果成功建立膀胱癌耐药细胞株T24/Ifex,其对Ifex、DOC和CDDP的耐药指数分别为7.359、3.892和4.297,且高表达MRP-1和P-gp蛋白。与亲本细胞T24比较,T24/Ifex中ERK1、ERK2和ERK5的表达升高,ERK1蛋白磷酸化水平无显著变化,ERK2磷酸化水平下降,且p-ERK1/2与ERK1/2的比值下降。Bad的m RNA和蛋白表达下降。结论 ERKs和Bcl-2家族促凋亡蛋白Bad表达与人膀胱癌MDR的发生密切相关。

不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶和细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的观察不同灸量隔姜灸对脾虚证大鼠胃组织丝裂原细胞外激酶(MEK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2表达的影响,探讨隔姜灸治疗脾虚证的可能作用机制及量效特征。方法将75只SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、隔姜灸3壮组、隔姜灸6壮组、隔姜灸9壮组,每组15只。200%大黄浓缩液4℃灌胃制作脾虚证大鼠模型。造模成功后,隔姜灸组选取"足三里""中脘"予不同灸量治疗,连续8 d。HE染色镜下观察大鼠胃组织病理学改变,免疫组化检测大鼠胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠胃黏膜损伤明显,可见较大的破损、脱落;与模型组比较,隔姜灸3壮组大鼠胃黏膜表面有部分脱落、破损情况改善,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组大鼠胃黏膜表面较完整、脱落及破损明显改善。与空白对照组比较,模型组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,隔姜灸各组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白明显表达升高(P<0.01);与隔姜灸3壮组比较,隔姜灸6壮组和隔姜灸9壮组胃组织MEK1/2及ERK1/2蛋白表达明显升高(P<0.01),但二者作用效果相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论隔姜灸通过提高胃组织MEK1/2及ERK1/2的蛋白表达,激活MEK/ERK信号转导通路,进而促进脾虚证大鼠胃黏膜的修复。

细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控

目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞(A549)表达高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中的作用。方法肺泡上皮细胞A549分为A、B、C3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h。分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Westernblotting检测ERK激酶的活性。结果A549细胞施加14%牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高(P<0.05);该诱导激活作用可被PD98059阻断。结论机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达。

磷脂酰肌醇3激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖的协同调控作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气管平滑肌细胞（ASMC）增殖的协同调控作用。方法 6~8周龄SPF级雄性SD大鼠,复制大鼠慢性哮喘模型,离体培养大鼠气管ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、TGF-β1＋PD98059组、TGF-β1＋渥曼青霉素（wortmannin）组、TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况及Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）表达情况。结果 CCK-8法检测各组大鼠ASMC OD值,TGF-β1组高于正常组和哮喘组,TGF-β1＋PD98059组、TGF-β1＋wortmannin组和TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组低于TGF-β1组,TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组低于TGF-β1＋PD98059组和TGF-β1＋wortmannin组（P〈0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-Akt的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1＋wortmannin组低于TGF-β1组（P〈0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-ERK1/2的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1＋PD98059组低于TGF-β1组（P〈0.01）。结论 PI3K和ERK信号通路协同调控了TGF-β1刺激哮喘大鼠ASMC增殖过程。

细胞外调节蛋白激酶与端粒酶对肝癌和白血病细胞系凋亡的调控作用(英文)

为了观察化疗药物三尖杉酯碱(HRT)、长春新碱(VCR)和依托泊苷(VP-16)抑制肝癌细胞系SMMC7721和白血病细胞系K562细胞增殖、促进细胞凋亡过程中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化蛋白表达水平的变化,应用MTT、流式细胞术、端粒重复序列扩增法(TRAP)、生物发光分析及Western印迹等方法进行了检测和分析。研究结果发现,一定浓度的化疗药物作用24小时后,可以抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;在同样作用条件下,端粒酶活性和磷酸化ERK1/2的表达也受到一定程度的抑制,其中以HRT的作用最明显。结论:HRT,VCR和VP-16可能是通过抑制Ras/Raf/MEK/ERK1/2信号传导通路、降低ERK活性、减少ERK1/2靶基因的转录活化、间接下调端粒酶活性这一共同的作用机制而发挥作用的;细胞凋亡是端粒持续缺失的的结果。

抑制水通道蛋白4可降低脊髓后角胶质细胞细胞外调节蛋白激酶信号的活化改善坐骨神经损伤导致的神经病理性疼痛

目的探讨腰椎间盘突出引起的坐骨神经痛中,抑制水通道蛋白4(AQP4)对脊髓胶质细胞以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的影响。方法取8周龄雄性SD大鼠90只,分为假手术组18只,坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)+DMSO组36只,CCI+TGN-020组(AQP4抑制剂) 36只。CCI模型应用动物行为学,Western blotting方法,免疫荧光(双重染色)等方法检测。结果 Western blotting显示,细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38MAPK信号通路及星形胶质细胞在神经损伤之后活化;免疫荧光在AQP4的表达被TGN-020抑制之后,胶质细胞及ERK、JNK、p38MAPK信号通路的活化被削弱,p-ERK和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共定位的细胞数量在损伤后明显增多,而TGN-020可减少之。结论抑制AQP4可抑制坐骨神经损伤引发的脊髓后角星形胶质细胞活化及MAPK信号通路活化,且可以通过抑制脊髓后角ERK通路的活化来抑制星形胶质细胞的活化,从而改善坐骨神经损伤所致神经病理性疼痛。

细胞外调节蛋白激酶通路对胃癌细胞化疗效果的影响

目的:观察细胞外调节蛋白激酶(extracelluar regulated protein kinase,ERK)信号通路对胃癌细胞化疗效果的影响并探讨其机制.方法:足叶乙甙作用于胃癌SGC7901和BGC823细胞,采用MTT比色法检测细胞的生存率,采用流式细胞仪和Hoechst33258荧光染色检测细胞周期分布和凋亡,Western杂交法检测ERK1/2的磷酸化以及c-Myc和P53蛋白表达水平.同时采用PD98059抑制ERK信号通路后观察足叶乙甙对细胞增殖、凋亡、c-Myc和P53表达的影响.结果:足叶乙甙呈时间-剂量依赖性抑制SGC7901和BGC823细胞的生长并明显诱导细胞的凋亡,同时上调ERK1/2的活性(磷酸化水平),并增强c-Myc和P53的表达,与对照组比较,足叶乙甙组凋亡率明显增高(19.48%±1.57%vs5.67%±0.81%,17.38%±1.49%vs4.97%±0.73%,均P<0.01),PD98059可明显增强足叶乙甙的细胞生长抑制作用并提高细胞的凋亡水平,与足叶乙甙组比较,足叶乙甙组+PD98059组凋亡率(34.35%±2.84%,32.11%±3.25%)明显增加(P<0.01);同时上调足叶乙甙诱导的P53表达,并抑制c-Myc表达的上升趋势.结论:足叶乙甙可活化胃癌细胞ERK信号通路而影响胃癌细胞的化疗效果,其机制可能是通过抑制P53并上调c-Myc的表达,从而抑制细胞的凋亡实现.

白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性的变化(英文)

本研究观察白血病和卵巢癌亲代及耐药细胞系中端粒酶活性及细胞外调节蛋白激酶 (extracelluarregula tedproteinkinasesERK)磷酸化蛋白表达水平的变化 ,探讨端粒酶与ERK在白血病及卵巢癌耐药中的作用。采用MTT法评价白血病和卵巢癌亲代和耐药细胞系对HRT或DDP的敏感性 ,用流式细胞术分析这两种细胞系间细胞周期分布的差别 ,用端粒酶重复扩增技术 (TRAP)、生物发光分析法定量和定性检测端粒酶活性及用Westernblot检测法检测磷酸化ERK1 和ERK2 蛋白的表达水平。结果表明 :白血病和卵巢癌耐药细胞系处于G0 G1 期的细胞比例增加 ,端粒酶活性和磷酸化ERK1 2 蛋白表达水平耐药细胞系较亲代细胞系高。结论 :耐药细胞系G0 G1期细胞比例增加可能是细胞产生耐药的一种标志。白血病和卵巢癌细胞系耐药的产生可能与端粒酶活性和磷酸化ERK1 2 蛋白表达水平的增高有关。

Urantide对动脉粥样硬化大鼠肝细胞外调节蛋白激酶1/2的作用及机制

目的:观察Urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠肝中细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)表达的影响,探讨AS大鼠脂肪肝中调控ERK1/2的分子机制。方法:维生素D3(VD3)腹腔注射及特制高脂饲料饮食建立大鼠AS模型,随机分为正常组、AS组、辛伐他汀组、Urantide组。H-E染色观察大鼠胸主动脉、肝的形态学改变;生化检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的含量;免疫印迹法检测各组大鼠肝组织中尾加压素Ⅱ(UⅡ)、G蛋白偶联受体14(GPR14)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2蛋白质表达水平;免疫荧光法检测各组大鼠肝细胞中p-ERK1/2的表达水平。结果:与正常组相比,AS组大鼠胸主动脉出现典型的AS病理学改变,肝出现典型的脂肪变性;AS组大鼠血清中TC、TG、LDL含量显著升高,HDL含量显著降低;大鼠肝中UⅡ、GPR14、p-ERK1/2、ERK1/2的蛋白表达水平显著升高。与AS组相比,辛伐他汀组及Urantide组大鼠肝的脂肪变性明显减轻;肝中UⅡ、GPR14、p-ERK1/2蛋白表达显著降低,ERK1/2蛋白表达水平无显著变化。结论:Urantide可通过抑制UⅡ/GPR14的生物学效应抑制ERK1/2的活化进而达到治疗脂肪肝的作用。

抑制细胞外调节蛋白激酶增强Jurkat淋巴瘤细胞对三尖杉酯碱的敏感性

目的 研究细胞外调节蛋白激酶 ( ERK)在三尖杉酯碱 ( HRT)诱导 Jurkat淋巴瘤细胞凋亡中的作用。方法 用四甲基偶氮唑盐 ( MTT)法、流式细胞术和 Western印迹检测法分别检测细胞增殖抑制率、细胞凋亡和磷酸化ERK蛋白的表达。结果 研究发现下调磷酸化状态的细胞外调节蛋白激酶的表达可以增强淋巴瘤细胞系 Jurkat对三尖杉酯碱的敏感性。结论 ERK通路对维系 Jurkat淋巴瘤细胞生存有重要作用 。

细胞外调节蛋白激酶信号通路在体外诱导神经干细胞向施万细胞分化中的作用

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号转导通路在体外诱导大鼠海马神经干细胞向施万细胞分化中的作用。方法：体外培养大鼠海马神经干细胞，向培养液中添加混和诱导剂诱导神经干细胞向施万细胞分化。将培养细胞分为2组，对照组采用含诱导剂的培养液进行培养，免疫印迹法检测ERK磷酸化水平，实验组中在此基础上添加ERK通路抑制剂U0126，免疫荧光双标染色计数胶质细胞特异性标记物S100及P75阳性细胞比例。结果：加入诱导剂后，磷酸化ERKl／2水平上升；3周后，可见P75、S100阳性的施万细胞。加入通路抑制剂后，实验组的ERK磷酸化水平逐渐降低。与对照组相比，实验组的施万细胞所占百分比明显减少。结论：ERK通路在神经干细胞向施万细胞的诱导分化中起重要作用。

阿尔茨海默病大鼠海马细胞外调节蛋白激酶的变化

目的 :探讨细胞外调节蛋白激酶 (ERK)与阿尔茨海默病 (AD)发病机制的关系。方法 :应用穹窿海马伞切断AD大鼠模型 ,分别用同位素方法和蛋白质印迹检测ERK的水平。结果 :同位素方法检测穹窿海马伞切断AD大鼠海马ERK的活性 ,发现手术组手术侧为 (13.4 6± 3.2 3) pmol·mg-1·min-1,明显高于正常对照组 (10 .80± 1.5 0 )pmol·mg-1·min-1、假手术组 (10 .74± 1.6 2 )pmol·mg-1·min-1和手术组非手术侧 (10 .79± 2 .2 3)pmol·mg-1·min-1;Westernblot显示ERK水平在手术组高于正常对照组。结论 :穹窿海马伞切断AD大鼠海马ERK升高 ,说明ERK信号转导途径在AD发病早期有改变。

脑通复方制剂对血管性痴呆模型大鼠海马神经元细胞外调节蛋白激酶表达的影响

目的：探讨脑通复方带0剂对拟血管陛痴呆CVaD）模型大鼠海-B神经元中分裂激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导系统细胞外调节蛋白激酶（E豫K1／2）及其磷酸化（p-ERKl／2）。表达的影响。方法i采用改良Pulsinelli四血管阻断法复带0大鼠血管性痴呆模型。脑通复方制剂治疗后观察学习记忆能力，Western-blotting法测定海马神经元总ER K1／2及p-ER KI／27蛋白表达。结果；脑通复方制剂可缩短试验大鼠逃避潜伏期，增力日跨越平台次数；假手术组、VaD模型组、脑通复方制剂组及多哌．齐特（安立申）组的EItK1／2蛋白水平分别为（1．20±0．19）、（1．11±0．14）、（1.18±0．13）、（1．25±O.14）,任意两组之间比较，差异均无统计学意义（p〉0．05）假手术组VaD模型组、脑通复方制剂组及多哌齐特（安立申）组p-ERK1／2蛋白水平分别为（0.75±0.07）、（0.38±0．08）、（0.58±0.10）、（0．65±0.8）,模型组与假手术组相比p-ERK1／2蛋白表达降低,差异有统计学意义（P＜0．01）；脑通复方制剂和多哌齐特（安立申）组p-ER Kl／2蛋白表达较模型组升高，差异有统计学意义（P＜O．05、P〈0.01）。大鼠海马组织p-ER K1／2与空间探索实验第1次到达平台区域时间呈负相关l（r=-0．664，P＜O：05）,与穿越平台区域次数呈负相关（r=-O．579，P＜0。05）o）结论：脑通复方制剂汉于VaD大鼠学习记忆减退有明显防治作用,具有提高Van大鼠海马组织中的p-ER K1／2的表达作用。

细胞外调节蛋白激酶在体外培养下大鼠大脑皮质星形胶质细胞的表达

目的：研究大鼠大脑皮质星形胶质细胞细胞外调节蛋白激酶（ERK）表达。方法：用生后2～3dSD大鼠，在无菌条件下取大脑皮质，制备细胞悬液，以GFAP鉴定星形胶质细胞；用免疫细胞化学方法研究星形胶质细胞ERK1表达。结果：星形胶质细胞的纯度达95％以上，ERK1免疫阳性物质呈棕黄色，分布于星形胶质细胞胞体与突起中。结论：培养的大鼠星形胶质细胞表达ERK1，其可能与星形胶质细胞信号转导有关。

低功率激光照射诱导的细胞外调节蛋白激酶的激活促进一氧化氮的产生

低功率激光(632.8 nm)照射(Low-power laser irradiation,LPLI)生物组织作为一种无损伤的物理疗法,可以加速细胞生长、血管再生及伤口愈合等过程。一氧化氮(Nitric oxide,NO)是伤口愈合的关键因素之一,其促进炎性细胞的趋化,增强胶原的合成和沉积,刺激细胞增殖和新生血管生成。我们研究发现LPLI可以促进NO的产生,并且抑制细胞外调节蛋白激酶(Extracellular signal-regulated protein kinases,ERK)的活性阻碍了NO的产生,证明LPLI通过活化ERK调控NO的生成。这一研究将为低功率激光照射加速伤口愈合在临床上的应用奠定基础。

鼻腔黏膜恶性黑色素瘤活化细胞外调节蛋白激酶表达及临床特征分析

目的观察鼻腔黏膜恶性黑色素瘤活化细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)的表达,分析ERK活化与临床特征之间的关系。方法从20例鼻腔黏膜恶性黑色素瘤患者的肿瘤新鲜冻存组织中提取总蛋白,并采用蛋白印迹方法检测活化ERK的表达。对20例患者进行随访,观察肿瘤复发及颈淋巴结转移情况。结果 20例鼻腔黏膜恶性黑色素瘤组织中,活化ERK表达阳性12例,其中9例术后复发,3例发生颈淋巴结转移;在8例活化ERK表达阴性患者中,2例术后复发,1例发生颈淋巴结转移。活化ERK表达阳性患者的复发情况高于ERK表达阴性的患者,差异有统计学意义(P<0.05);而两者间颈淋巴结转移差异无统计学意义(P>0.05)。结论鼻腔黏膜恶性黑色素瘤活化ERK表达阳性患者更易复发。

阿尔茨海默病大鼠海马细胞外调节蛋白激酶的变化

目的探讨细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase，ERK）与阿尔茨海默病（Alzheimer’Sdisease，AD）发病机制的关系。方法建立穹窿海马伞切断AD大鼠模型．应用Y型迷宫对大鼠进行行为学测试，分别用同位素方法和蛋白质印迹检测了ERK的水平、并用RT-PCR方法检测了ERK2 mRNA的表达。结果Y型迷宫测试发现穹窿海马伞切断AD大鼠学习和记忆的获得和再现均受损；同位素方法检测穹窿海马伞切断大鼠海马ERK的活性，手术组手术侧为（13．46士3．23）pmol·mg^-1·mm^-1，明显高于正常对照组（10．80±1．50）pmol·mg^-1·min^-1、假手术组（10．74土1．62）pmol·mg-^-1·min^-1和手术组非手术侧（10．79±2．23）pmol·mg^-l·min^-1；蛋白质印迹分析显示手术组条带深于正常对照组；RT-PCR显示ERK2 mRNA表达手术组条带亮于正常对照组。结论穹窿海马伞切断AD大鼠海马ERK升高，ERK信号转导途径在AD发病早期起作用。

细胞外调节蛋白激酶介导的脂蛋白(a)促血管平滑肌细胞迁移作用

目的：研究细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）在脂蛋白（a）[Lp（a）]诱导的人血管平滑肌细胞（VSMC）迁移及细胞骨架构建中的作用。方法：用不同浓度的ERK激酶抑制剂PD98059抑制人VSMC内ERK的活化,再用Lp（a）诱导处理后的细胞,Western blot检测P-ERK的表达,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架构建变化,迁移试验观察VSMC迁移数量的变化。结果：Western blot检测显示PD98059的终浓度在10μmol/L时,P-ERK表达无明显变化（P〉0.05）,从20～40μmol/L,随其终浓度的逐渐升高,P-ERK的表达逐渐降低（P〈0.01）,达到40μmol/L后,其抑制作用达到高峰。PD98059预处理人VSMC,Lp（a）诱导20 min后,细胞内未见明显的张力纤维、粘着斑及丝状伪足。对照组VSMC迁移细胞数为（78.87±7.43）个,PD98059处理组为（49.20±6.47）个,PD98059处理组较正常对照组明显减少（P〈0.01）。结论：Lp（a）诱导的VSMC细胞骨架构建及细胞迁移依赖于ERK的活化。