基于网络药理学和细胞实验探讨橙皮素对LPS诱导的小胶质细胞炎症模型的改善作用

目的通过网络药理学和细胞实验研究橙皮素对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎症模型的改善作用。方法筛选橙皮素治疗神经炎症的关键成分,构建PPI网络,筛选核心节点网络,并进行GO及KEGG富集分析。细胞实验分为空白对照组、LPS(100 ng/mL)+ATP(5μmol/L)组、橙皮素组(20、40μmol/L),MTT法检测细胞存活率,Griess法检测NO水平,免疫荧光法检测ROS以及小胶质细胞标记物IBA1表达,RT-qPCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达,Western Blot法检测RAGE蛋白表达。结果PPI网络分析得到88个核心靶点。KEGG富集分析显示,橙皮素主要通过对细菌起源分子的反应、脂多糖反应调节、炎症反应调节等改善经炎症。细胞实验显示,橙皮素能抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应,降低细胞上清液NO水平、细胞ROS水平、IBA1表达以及TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达、RAGE蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论橙皮素具有改善小胶质细胞极化、抗神经炎症作用,其机制与下调AGE/RAGE介导的炎症信号通路有关。

医院干细胞实验室室内外环境压差影响因素分析

干细胞实验室是从事干细胞基础研究、制剂制备、技术开发和医疗服务的重要场所。目前,干细胞实验室的建设总体原则主要参照2010版《药品生产质量管理规范》、《医院洁净手术部建筑技术规范》(GB 50333-2002)等规范标准。在交付科室投人使用后,其压差梯度的控制对于临床细胞培养尤为重要。影响压差梯度的内外因素有很多,本文以某医院干细胞实验室项目为例,对影响干细胞实验室核心区室内外环境压差的主要影响因素进行分析。

基于网络药理学及体外细胞实验分析生姜泻心汤治疗溃疡性结肠炎的潜在作用

目的:基于网络药理学及体外细胞实验分析生姜泻心汤治疗溃疡性结肠炎(UC)的潜在作用。方法:运用中医系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)筛选生姜泻心汤的活性成分及相关靶点,利用GeneGards、在线人类孟德尔遗传(OMIM)、药物遗传学和药物基因组学知识库(PharmGkb)、治疗靶点数据库(TTD)和开放数据药物和药物靶标数据库(DrugBank)筛选UC疾病靶点,将药物靶点与疾病靶点匹配所得交集靶点导入互作基因/蛋白质检索工具(STRING)数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络,并构建药物-成分-靶点-疾病网络。采用分子对接分析核心靶点和活性成分结合力,并通过脂多糖(LPS)诱导人结直肠腺癌细胞(Caco2细胞)损伤模型,给予生姜泻心汤干预24 h后,采用qPCR和免疫荧光探索生姜泻心汤对核心靶点的作用。结果:生姜泻心汤治疗UC的有效成分共215个,靶点171个,其中潜在核心有效成分为姜烯酮A、槲皮素、山柰酚、汉黄芩素和柚皮素;核心靶点包括HIF1A、STAT3、CTNNB1、CASP3、AKT1、IL-1β、TP53、EGFR和JUN。分子对接结果显示,AKT1、TP53和IL-1β与姜烯酮A、槲皮素、山柰酚、汉黄芩素和柚皮素均有较强的结合能力。细胞实验发现,生姜泻心汤干预LPS刺激Caco2细胞模型,能显著地抑制AKT1、TP53和IL-1β基因和蛋白的表达。结论:生姜泻心汤能够调控AKT1、TP53和IL-1β等靶点,发挥治疗UC的作用。

基于网络药理学和细胞实验探讨雷公藤红素抗鼻咽癌的作用机制

目的基于网络药理学和细胞实验探讨雷公藤红素抗鼻咽癌的作用机制。方法采用PubChem数据库获得雷公藤红素3D结构,导入Swisstarget获得前十潜在靶点。通过GeneCards数据库获得鼻咽癌疾靶点。将雷公藤红素与鼻咽癌交集靶点进行基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。采用Cytoscape软件构建“雷公藤红素-靶点-鼻咽癌-通路”关系网络图,取度值前五的核心靶点进行分子对接验证。MTT法、流式细胞术探究雷公藤红素对鼻咽癌CNE-1细胞的增殖凋亡影响。Western blot法检测IKBKB、Phospho-NF-κB P65蛋白表达。结果共获得2143个鼻咽癌基因靶点和101个药物靶点,筛选出共同靶点38个,GO富集分析得到生物过程442条、细胞组成18条、分子功能35条,KEGG通路富集分析得到77条通路。雷公藤红素诱导CNE-1凋亡,并呈剂量依赖性,同时降低IKBKB、Phospho-NF-κB P65蛋白表达(P<0.05)。结论雷公藤红素能抑制CNE-1增殖,其抗鼻咽癌的机制可能是通过抑制IKBKB蛋白,从而抑制NF-κB信号通路激活。

基于网络药理学和细胞实验探讨玉屏风散治疗慢性阻塞性肺病的作用机制

目的基于网络药理学和细胞实验探讨玉屏风散治疗慢性阻塞性肺病的分子机制。方法利用TCMSP数据库收集玉屏风散的活性成分和作用靶点,CTD、GenCLip3、DisGeNET、GeneCards数据库获取慢性阻塞性肺病的相关靶点,STRING网站构建蛋白互作网络,DAVID进行GO、KEGG通路分析,Cytoscape软件构建“成分-靶点-通路”网络。将BEAS-2B细胞分为对照组、模型组和槲皮素低、中、高剂量组,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-6、CRP、PICP、ICTP水平,RT-qPCR法检测细胞Akt1、CASP3、CCL2、CXCL8、CCND1、EGFRmRNA表达,Westernblot检测细胞TGF-β、Akt、MAPK1蛋白表达。结果共获取活性成分41种、相关靶点215个,玉屏风散与慢性阻塞性肺病共有靶点74个,核心靶点为Akt1、CASP3、CCL2、CXCL8、CCND1、EGFR等。KEGG通路分析筛选了152条信号通路,IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路、HIF-1信号通路、Toll样受体信号通路等可能在治疗慢性阻塞性肺病的过程中发挥关键作用。细胞实验表明,槲皮素能促进慢性阻塞性肺病细胞增殖,抑制细胞凋亡,降低炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和细胞外基质损伤相关因子CRP、PICP、ICTP水平,核心靶点Akt1、CASP3、CCL2、CXCL8、CCND1、EGFRmRNA表达,以及TGF-β、Akt、MAPK1mRNA和蛋白表达。结论玉屏风散可能通过多成分、多靶点、多通路治疗慢性阻塞性肺病。

基于网络药理学与细胞实验探索藏药十一味草果丸治疗结直肠癌机制

目的通过生物信息学挖掘结直肠癌相关基因,基于网络药理学对十一味草果丸治疗结直肠癌的机制进行探索研究,利用HCT116结直肠癌细胞进行实验对网络药理学预测结果进行验证。方法结直肠癌疾病相关基因,通过GEO数据库、孟德尔人类遗传基因库、GeneCard数据库获取;基于知网、TCMSP数据库对藏药十一味草果丸主要成分进行检索,探索其相关靶点蛋白通过Uniport数据库与DrugeBank数据库获取蛋白质对应基因;使用GeneCards数据库对结直肠癌疾病相关的所有基因与筛选得到的十一味草果丸作用的靶基因进行比对选取相关性高的基因用以探索二者间的相关关系;使用DAVID数据库对得到的相关基因进行富集分析,得到相关的生物过程与信号通路;使用分子对接技术对活性成分进行研究。最后利用HCT116结直肠癌细胞对网络药理学预测的十一味草果丸作用于结直肠癌的效果进行检验。结果GEO数据库筛选后获得差异基因与GeneCard对比后与疾病相关度大于30分的相关基因288个。数据库检索得到药物有效化学成分169个,对化学成分进行预测靶点蛋白进行检索,去重后得到508个靶基因。508个药物基因与288个疾病相关基因取交集后64个共同基因。KEGG富集结果主要有癌症通路、PI3K-Akt信号通路、P53信号通路等。通过使用水和乙酸乙酯提取十一味草果丸中的药物成分,利用水和二甲基亚砜(DMSO)进行溶解并控制其浓度后,对结直肠癌HCT116细胞进行干预,其中5氟尿嘧啶(5-FU)作阳性对照而提取药物设置不同浓度剂量组干预结果显示,乙酸乙酯提取的药物作用效果优于水提取药物和5-FU。结论藏药十一味草果丸可以通过多个靶点和多条通路对结直肠癌细胞起到抑制和促进凋亡作用。

基于网络药理学和细胞实验探究盐酸药根碱抗酒精性肝炎的作用机制

目的基于网络药理学技术和体外细胞实验探究盐酸药根碱(jatrorrhizine hydrochloride,JH)治疗酒精性肝炎(alcoholic hepatitis,AH)的作用机制,为后续研究提供参考。方法基于PubMed数据库查询JH药物成分,借助SWISS数据库预测药物作用目标,在GeneCards和OMIM数据库中找出AH的目标点。通过DAVID数据库实现基因本体(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,利用STRING数据库和Cytoscape软件建立蛋白质互作网络(protein-protein interaction network,PPI),并通过体外细胞实验验证。利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞构建体外炎症模型,将细胞分为五组,采用MTT法测定不同浓度JH对细胞活性的作用,采用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定JH对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等炎症因子产生和释放的影响。结果利用网络药理学分析得到25个JH与AH的关键靶点,结合GO和KEGG富集分析及PPI网络构建结果,确定ESRI、NT5E、PGR等基因为后续实验靶点。根据ELISA实验结果进一步证实,相较于对照组,LPS组RAW264.7的M1型巨噬细胞中与炎症相关的因子TNF-α和IL-6的分泌显著增加;相较于LPS组,含有JH的组别细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌有降低的趋势,尤其是随着JH浓度增加,其降低效果更加显著。结论在炎症模型细胞中,JH可以调控M1极化,表明JH可能是治疗AH的潜在分子。

基于网络药理学及细胞实验探讨扶正透邪解毒方治疗铜绿假单胞菌肺炎作用机制

目的:筛选扶正透邪解毒方抑制铜绿假单胞菌肺炎的中药活性化合物,并通过体外细胞实验研究扶正透邪解毒方治疗铜绿假单胞菌肺炎的作用机制。方法:在GeneCard、OMIM等数据库筛选铜绿假单胞菌肺炎疾病靶点;明确扶正透邪解毒方活性成分与铜绿假单胞菌肺炎的共同潜在靶标;利用String数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,利用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;体外细胞实验中采用CD4^(+)T细胞与多重耐药铜绿假单胞菌共培养,以扶正透邪解毒方含药血清干预后,采用RT-PCR检测CD4^(+)T细胞中肿瘤蛋白P53(TP53)mRNA、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)mRNA、白介素-6(IL-6)mRNA、白介素-10(IL-10)mRNA、白介素-1β(IL-1β)mRNA、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达,采用Western blotting检测CD4^(+)T细胞中IL-6、TNF-α、AKT1、IL-1β、TP53、IL-10蛋白表达。结果:筛选出226种潜在活性成分及93个潜在靶点;TP53、AKT1、IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α等是扶正透邪解毒方治疗铜绿假单胞菌肺炎的关键靶点;扶正透邪解毒方主要通过炎症因子、趋化因子、免疫调控等信号通路来发挥治疗铜绿假单胞菌肺炎的作用。扶正透邪解毒方含药血清能降低CD4^(+)T细胞IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、AKT1 mRNA、IL-1βmRNA表达(P<0.01),促进CD4+T细胞TP53 mRNA、IL-10 mRNA表达(P<0.01);扶正透邪解毒方含药血清能降低CD4^(+)T细胞IL-6、TNF-α、AKT1、IL-1β蛋白表达(P<0.05),促进CD4^(+)T细胞TP53、IL-10蛋白表达(P<0.05)。结论:扶正透邪解毒方可能是通过调控TNF-α、AKT1、TP53、IL-10等关键因子的表达抑制肺部感染而治疗铜绿假单胞菌肺炎。

基于网络药理学和细胞实验探讨柚皮苷抗动脉粥样硬化的作用机制

目的基于网络药理学和体外细胞实验探究柚皮苷治疗动脉粥样硬化的作用机制。方法利用P ub Che m和Phar m m apper在线分析平台获取柚皮苷的作用靶点,在Genecards、Phar m Gkb、TTD、Disgenet和Drugbank数据库中获取动脉粥样硬化疾病相关靶点。构建蛋白质-蛋白质相互作用网络筛选核心靶点,通过基因本体(gene ontology,GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析筛选出主要作用靶点和相关通路,利用分子对接技术确定柚皮苷与核心靶点相互作用的分子基础。通过人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)进行体外实验验证相关预测结果。结果共筛选出柚皮苷潜在作用靶点220个,动脉粥样硬化疾病相关靶点5253个,共同作用靶点94个。GO功能注释共得到281个条目,其中生物学过程215个,细胞组分25个,分子功能41个;K EG G富集共得到36条与动脉粥样硬化治疗有关的通路。分子对接结果证明柚皮苷与5个核心靶点之间具有良好的结合能力。细胞实验结果表明,柚皮苷能够降低HUVEC的迁移和粘附能力。结论柚皮苷可能是通过血管内皮生长因子-2、基质金属蛋白酶-2和神经源性位点Notch同源蛋白1等关键靶点调节脂质与动脉粥样硬化、癌症蛋白多糖和MAPK等信号通路参与调节内皮细胞功能、血管生成、细胞增殖和凋亡等生物学过程发挥抗动脉粥样硬化作用。

基于网络药理学和细胞实验验证黄芪抗肝癌的作用机制

目的:从细胞实验和网络药理学探讨黄芪对肝癌的作用机制。方法:通过国家知识基础设施数据库(CNKI)、PubMed、中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、GeneCards数据库、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)检索黄芪和肝癌的相关基因靶点及活性成分。通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)和黄芪-肝癌作用网络。以DAVID数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,并以CB-DOCK平台进行分子对接。细胞实验采用MTT法和蛋白质印迹法检测细胞增殖和蛋白表达。结果:筛选出黄芪19个有效成分,250个靶点。GO和KEGG富集分析得549个条目,145条信号通路,主要涉及调节DNA的转录,对细胞增殖和凋亡的调控等。作用通路主要涉及肿瘤相关的通路,如癌症通路、脂质和动脉粥样硬化、卡波西肉瘤、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示黄芪抗肝癌核心成分芒柄花黄素,毛蕊异黄酮,黄芪甲苷与PI3K-AKT信号通路蛋白有较好的结合力。网络药理学分析结果基础上,进一步细胞实验证实黄芪水提液能有效抑制HepG2细胞增殖,下调AKT1、PI3K p110,p-AKT1的蛋白表达水平。结论:黄芪能抑制PI3K-AKT信号通路,发挥对肝癌细胞的抑制作用,为其应用于肝癌临床治疗提供理论支持。

基于生物信息学和细胞实验探讨肝豆扶木汤调控铁死亡治疗肝豆状核变性的作用

目的探究肝豆扶木汤对Erastin诱导的肝癌细胞HepG2铁死亡的影响,以及对溶质载体家族7成员11(SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)轴的调控作用。方法利用BATMAN-TCM数据库获取肝豆扶木汤的活性成分及潜在靶点,GeneCards数据库检索铁死亡相关靶点,将所得的肝豆扶木汤活性成分的潜在靶点与铁死亡相关靶点进行交集筛选后,再借助CB-Docking软件进行分子对接,最后对结合度较好的靶点进行细胞实验初步验证。体外细胞实验构建Erastin诱导的HepG2细胞铁死亡模型,设置空白组、模型组和肝豆扶木汤低、中、高剂量组,检测细胞还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,RT-qPCR和Western blot法验证细胞P53、SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达。结果肝豆扶木汤中有效成分共215种,潜在靶点1741个,铁死亡相关靶点275个,其中Relevance score≥3的共23个。取交集后,肝豆扶木汤中活性成分为19种,铁死亡相关靶点为11种。肝豆扶木汤关键有效成分与靶点SLC7A11、P53、VDAC2/3、ACSL4、HMOX1、ALOX15、PRKAA1等均有一定的结合活性,其中与SLC7A11蛋白靶点结合能力最强。肝豆扶木汤能提高细胞GSH、ROS、MDA水平(P<001),上调SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达(P<001),下调P53 mRNA和蛋白表达(P<001)。结论肝豆扶木汤可能是通过调控SLC7A11/GPX4轴来抑制Erastin诱导肝癌细胞HepG2铁死亡的发生,从而起到保护肝细胞的作用。

基于网络药理和细胞实验探索芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的机制

目的采用网络药理学和细胞实验探究芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的潜在作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台和中医药整合数据库检索芪玉三龙方成分筛选靶点,通过美国肿瘤基因组图谱数据库获得肺癌靶点基因。构建蛋白相互作用网络,并采用基因本体数据库和京都基因和基因组百科全书数据库进行富集分析。对核心靶蛋白与化合物进行分子对接分析,并以A549细胞进行实验验证。结果芪玉三龙方对于非小细胞肺癌的潜在有效靶点162个,蛋白相互作用网络分析得到核心靶点基因20个,主要的生物学过程为对缺氧的反应、MAPK级联、炎症反应,主要的功能通路为钙信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、细胞周期。分子对接结果表明,MMP9-槲皮素、PPARG-异鼠李素、PTGS2-刺芒柄花素、JUN-刺芒柄花素之间存在有效的结合亲和力。在A549细胞实验中,PCR和Western blot分析结果表明,芪玉三龙方含药血清能够促进PPAR-γmRNA和蛋白表达(P<0.05),抑制c-JUN、COX-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论芪玉三龙方通过影响A549肺癌细胞的凋亡、侵袭和肿瘤血管生成及炎症进程达到干预肺癌的作用。

基于网络药理学及体外细胞实验探讨复方菝葜丹参擦剂抗白癜风作用机制

目的基于网络药理学研究复方菝葜丹参擦剂治疗白癜风的作用机制,通过分子对接与体外实验进行验证。方法通过TCMSP数据库搜索复方菝葜丹参中药材的有效成分及其对应作用靶点,利用GEO、OMIM以及GeneCards等数据平台,获得白癜风疾病相关靶点,通过映射药材成分对应靶点与疾病相关靶点获得治疗疾病的潜在靶点。利用Cytoscape 3.8.0软件构建菝葜丹参与白癜风的“有效成分-潜在靶点”作用网络;通过STRING数据库建立潜在靶点间的蛋白相互作用(PPI)网络;利用R语言及其相关依赖包对潜在靶点进行GO富集分析和信号通路富集分析。通过CytoNCA拓扑分析筛选出主要活性成分与核心潜在靶点进行分子对接,验证复方菝葜丹参活性成分与疾病靶点的结合效能,通过体外药理实验探究复方提取液对黑色素细胞的作用。结果复方菝葜丹参擦剂中有106个有效成分作用于STAT3、AKT1、RELA等8个核心靶点,GO富集结果显示潜在靶点参与了氧化应激、活性氧代谢过程等反应。信号通路富集结果表明,靶点涉及AGE-RAGE通路、Th17细胞分化等多条信号通路。分子对接结果显示,复方主要活性成分与核心靶点结合紧密。复方菝葜丹参对黑色素细胞有较好的促增殖作用,其中有效成分木樨草素对酪氨酸酶激活作用较强,芒柄花素可提高黑素含量。结论复方菝葜丹参擦剂是多种成分通过多种途径作用到多靶点对白癜风产生的治疗作用,其中丹参与鸡血藤为君药,木樨草素与芒柄花素为重要活性成分。

枸杞多糖降血糖作用的细胞实验研究

目的:研究枸杞多糖的降血糖作用。方法:采用NIT-L1胰岛β细胞、小肠刷状缘、3T3-L1脂肪细胞、α-葡萄糖苷酶等体外实验模型,研究枸杞多糖的作用。结果:枸杞多糖能够保护链脲佐菌素损伤的NIT-L1胰岛β细胞,抑制消化道内α-葡萄糖苷酶的活性,降低小肠刷状缘对葡萄糖的吸收,对于抑制肝糖产生以及增强3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的摄取也有明显作用。结论:枸杞多糖具有较好的体外降血糖作用。

基于网络药理学、分子对接和细胞实验探讨枸杞子防治老年性痴呆的作用机制

目的 基于网络药理学、分子对接和细胞实验探讨枸杞子防治老年性痴呆的作用机制。方法 通过化学成分数据库联合检索,结合药动学参数筛选枸杞子的候选活性成分,采用PharmMapper反向药效团匹配的靶标识别平台预测其靶点,TTD等数据库筛选与老年性痴呆相关的潜在靶点,DAVID数据库对靶点基因进行GO功能富集及KEGG通路富集分析,String数据库和Cytoscape软件构建蛋白相互作用(PPI)网络和“成分-靶点-通路”网络,SYBYL软件对关键活性成分与靶点进行分子对接,RT-qPCR检测枸杞子水提物对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞GSK3B、MAPK14、ESR1、NOS2、CASP3 mRNA表达的影响,Western blot检测枸杞子水提物对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞CASP3蛋白表达的影响。结果 枸杞子中50种活性成分通过调控HSD11B1、RARB、NR3C1、RARA、IGF1、MAPK14、CASP3、ESR2、GSK3B等31个潜在靶点,参与多种癌症通路、Rap1信号通路、Ras信号通路、PI3K-Akt信号通路、神经营养因子信号通路、多巴胺能突触等信号通路,起到防治老年性痴呆作用。新黄质、花色素苷、胡萝卜素、隐黄素、玉米黄质等成分与关键靶点HSD11B1、INSR、NR3C1、RARA、CASP3、MAPK14、GSK3B、NOS2具有良好的结合能力。枸杞子水提物可抑制Aβ_(25-35)诱导PC12细胞GSK3B、MAPK14、NOS2、CASP3 mRNA表达,上调ESR1 mRNA表达,下调CASP3蛋白表达。结论 本研究揭示了枸杞子防治老年性痴呆“活性成分-靶点-通路”的关系,可为该药材临床应用提供依据。

基于网络药理学和细胞实验探讨Hispolon抗结肠癌的作用机制

目的运用网络药理学预测和细胞实验探讨Hispolon抗结肠癌的作用机制。方法Swiss Target Prediction网站获取Hispolon的潜在靶点,与疾病数据库GeneCards、OMIM中结肠癌靶点取交集;利用STRING11.0数据库构建靶点相互作用网络,使用Cytoscape3.7.2软件挖掘Hispolon作用于结肠癌的核心靶点,通过Metascape数据库进行GO和KEGG富集分析,最后采用Western blot验证Hispolon对结肠癌细胞SW480中部分关键靶点的调控作用。结果筛选出Hispolon抗结肠癌作用靶点69个,核心靶点包括BCL-2L1、EP300、CDK1、AR、MTOR、EGFR;富集分析发现Hispolon通过调节癌症相关通路、PI3K-Akt信号通路、前列腺癌相关通路等发挥抗结肠癌作用,并且通路中关键靶点涉及BCL-2L1、EP300、CDK1、MTOR和EGFR核心靶点。通过细胞实验证实Hispolon可下调靶点蛋白BCL-2L1和mTOR的表达,促进SW480细胞凋亡。结论Hispolon治疗结肠癌,具有多靶点、多通路协同作用的特点,该研究为进一步阐明Hispolon抗结肠癌作用机制及临床应用提供科学依据。

细胞实验系统评价/Meta分析检索策略制定和报告现状调查

目的全面分析细胞实验系统评价/Meta分析(SRs/MAs)检索策略的制定和报告现状,为后续相关研究的开展提供参考依据。方法计算机检索PubMed、CNKI和Wanfang Data,检索时限均为建库截至2017年10月。结果最终纳入细胞实验SRs/MAs共82篇,其中英文79篇,中文3篇。64.63%(53/82)的研究报告了文献筛选流程图,6.10%(5/82)报告了检索人员的资质,45.13%(37/82)报告了至少一个完整的检索策略。有18.29%(15/82)的细胞实验SRs/MAs仅检索了1个数据库,检索5个以上数据库的研究仅9.76%(8/82)。此外,有53.66%(44/82)和8.54%(7/82)的研究中分别进行了其他方法的补充检索和灰色文献检索。在检索方式上,以DI(疾病+干预措施)的方式最为常见。结论目前已发表的细胞实验SRs/MAs在检索策略制定和报告方面均存在一定局限性,并无共识标准或规范的方法。因此,今后的研究有必要:①在数据库的选择上,除检索PubMed、EMBASE外,应对Web of Science、Scoups等数据库也进行检索。此外,对于灰色文献的收集,包括会议资料等阴性结果或未发表研究的收集需要更加关注;②在细胞实验SRs/MAs检索词的选择方面,除涉及的细胞及其干预措施外,涉及到测量指标的检索词亦是重要的参考依据;③研发细胞实验SRs/MAs的报告规范,以提高其报告质量,包括提供至少一个数据库完整的检索策略、提高检索人员的资质等相关信息的报告度。

培养原代小鼠组织细胞检验细胞实验室技术操作规程

目的通过培养小鼠原代组织细胞,检验本科室己建立的一套细胞实验室技术操作规程能否满足细胞培养要求。方法培养小鼠原代成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞和胚胎成纤维细胞。计算原代培养成活率、传代成活率、冷冻及复苏成活率。结果成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞、肺部细胞、脑部细胞、骨髓间充质细胞、胚胎成纤维细胞原代培养成活率分别为89%、96%、100%、100%、100%、80%、100%和90%;传代成活率分别为76%、93%、100%、92%、100%、66%、80%和92%;冷冻及复苏成活率分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。结论通过计算KM小鼠8种组织细胞原代培养、传代、冷冻与复苏的成活率,证明现有的细胞室技术操作规程基本上能够保证成功培养出常规原代细胞,并能传代、冷冻和复苏。

我院干细胞实验室的标准化设计和建设

目的随着国内外干细胞学科临床研究的进展,为了提高我院干细胞临床研究水平,建立了标准化的干细胞临床研究实验室。方法基于《药品生产质量管理规范》《实验室生物安全通用要求》(GB19489)、《医院洁净手术部建筑技术规范的规定》(GB50333),结合我院的实际情况设计建设了该实验室,并进行了实验室的仪器和信息系统的配置。结果该实验室建设后运行近两年,成功实现了干细胞的制备、培养、质控及存储等功能,并利用信息系统实现了干细胞的检索和统计分析及可追溯性等功能,并成功通过了国家的干细胞基地现场验收。结论我院干细胞实验室的标准化建设,极大地促进了我院干细胞的临床研究水平,并为下一步我院干细胞临床项目顺利开展奠定了基础。

细胞实验系统评价制作流程的构建

针对原始细胞实验面临的结果不一致、可重复性差、报告不规范等问题,细胞实验系统评价/Meta分析(SRs/MAs)可较好地解决这些问题,是提升细胞实验结果对动物实验及临床研究指导价值的重要手段。但目前国内外尚无细胞实验SRs/MAs报告规范的相关研究,已发表的细胞实验SRs/MAs在设计和实施过程中均存在较多问题。因此,一个经过严谨设计、规范实施的系统评价制作标准流程对提升细胞实验SRs/MAs的质量具有重要意义。本文将详细介绍细胞实验系统评价制作流程和基本原理,以期推动国内高质量细胞实验系统评价的开展和应用。