流式细胞仪检测高等植物细胞核DNA含量的方法

相对于动物和微生物而言,流式细胞术在植物科学上的应用会因植物组织与细胞(如细胞壁、中央液泡、特殊细胞器等)的特殊结构以及次生代谢产物等特殊成分,造成样品在前期处理、染色及测试等方面的困难,甚至导致检测失败或结果不准确。笔者在长期运用流式细胞仪测试工作中,积累了大量的植物样本检测经验,并参考国内外相关文献,总结出从植物取材、样品制备到植物细胞核DNA流式检测的方法和技巧,可为植物科学研究者及从事流式细胞检测的技术人员提供实验参考。

利用流式细胞术鉴定甜樱桃砧木细胞核DNA含量和染色体倍性

【目的】研究建立甜樱桃砧木DNA倍性的快速鉴定方法。【方法】以甜樱桃砧木试管苗本溪山樱、‘Colt’、‘兰丁1号’、‘吉塞拉6号’和‘ZY-1’为试材,利用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测甜樱桃砧木细胞染色体的倍性,并通过传统的染色体制片的方法对其结果进行验证。【结果】不同砧木品种间细胞核DNA含量差异显著,且随着倍性水平的增加,细胞核DNA相对含量随之成倍增加。流式细胞术检测结果与染色体制片检测结果一致。【结论】利用流式细胞仪测定甜樱桃砧木的细胞核DNA含量,具有样品制备简单,测量快速,准确度高等优点,是进行倍性鉴定的理想方法。

维生素K_(3)对人大肠癌细胞核DNA指数(倍体)的计算机图像分析

本文应用光镜,计算机与显微图像形态定量分析软件相结合的方法,观察到人大肠癌培养细胞经Vit K_3不同剂量(2.5、5、10和20μg/ml)作用后,细胞核DNA指数(DI)明显下降。从DI(倍体)分布直方图中,观察到Vit K_3使癌细胞的DNA主峰由DI=3转向1.5,核的倍体由高异倍体向低异倍体转化〔1〕,表明Vit K_3的抗肿瘤作用与抑制DNA合成和减轻肿瘤恶性度有关。本文提供了一种快速、简便、高精度定量测定DNA含量(IOD)的先进方法和手段。可望对肿瘤诊断、预后估计有一定的参考意义,亦可用于对细胞倍体性改变与肿瘤恶性度关系的分析。

刀额新对虾和日本囊对虾细胞核DNA含量的测定与比较

以刀额新对虾(Metapenaeus ensis)、日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)的血淋巴为材料,以小鸡血细胞核DNA含量(2.50 pg/2c)为参照样,使用Partec PA-I型倍性分析仪并结合外标定法,分别测定了刀额新对虾与日本囊对虾细胞的DNA含量.结果表明,这两种虾的细胞DNA含量分别为小鸡血细胞的1.77倍和1.95倍,换算成绝对含量分别为4.340 pg/2c和4.878 pg/2c.本文讨论了刀额新对虾与日本囊对虾以形态学为特征的分类系统与细胞DNA含量之间的关系,并推测在系统演化上日本囊对虾应比刀额新对虾更为高等.

海嘧啶对人胃癌BGC-823细胞形态、细胞核DNA及细胞间通讯的影响

目的研究海嘧啶对人胃癌细胞BGC-283细胞形态、细胞核DNA及细胞间通讯的影响。方法采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞及细胞核DNA的影响。采用划痕标记染料示踪技术观察海嘧啶对细胞间通讯的影响。结果海嘧啶可改变细胞形态,使细胞DNA缺损,可促进肿瘤细胞间通讯的恢复。结论通过影响细胞DNA和恢复细胞间通讯是海嘧啶抗肿瘤的作用机理。

黄芩苷对ConA致肝损伤小鼠肝细胞核DNA的影响

目的:观察黄芩苷对模型小鼠血清ALT、AST和肝细胞核DNA的影响。方法:将95只小鼠随机分为7组。正常对照组10只,病理对照组15只,联苯双酯组14只,黄芩苷大剂量、中剂量、小剂量组及黄芩苷注射剂组各14只。正常对照组和病理对照组灌服生理盐水,联苯双酯组以蒸馏水配制成含药150mg·mL-1的溶液灌胃;黄芩苷大剂量、中剂量、小剂量组以蒸馏水配制成含药分别为200mg·mL-1、100mg·mL-1、50mg·mL-1的溶液灌胃。末次给药后4～6小时各组动物1次性尾静脉注射 ConA 20mg·kg-1。观察血清ALT、AST和肝细胞核DNA的变化。结果:黄芩苷大、中、小剂量组以及黄芩苷注射剂组均能显著降低小鼠血清ALT、AST,与正常对照组、病理对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0．01)。DNA片段化条带的观察表明, 黄芩苷大、中、小剂量组和黄芩苷注射剂组能有效降低ConA引起的肝细胞核DNA片段化的增加,减少ConA诱导的DNA梯状条带的出现。结论:黄芩苷可降低血清ALT、AST和保护肝细胞核,且优于联苯双酯,推测通过降低血清ALT和AST、保护肝细胞核DNA可能是其抗ConA肝损伤机理的重要机理。

细胞核DNA复制与种子质量的关系

流式细胞技术能够快速准确地估计植物细胞核内DNA含量,可用于探测种子不同组织,如胚、胚乳中细胞分裂活性分布,从而了解种子的生理状态及变化。本文综述了种子发育成熟及发芽阶段DNA复制模式与预测最佳收获期和种子田间表现的关系,同时阐述了流式细胞技术在种子纯度控制上的应用,并展望了种子内DNA复制在种子质量控制上的应用前景。

细胞核DNA含量在胃粘膜癌变过程中的变化及意义

目的分析不同病变胃粘膜细胞核DNA含量 ,进行DNA倍体检测 ,探讨DNA倍体与胃粘膜癌变的关系。方法采用流式细胞术分别对正常胃粘膜 15例 ;慢性浅表性胃炎 36例 ;慢性萎缩性胃炎 5 7例 ,其中不伴肠化 2 0例、伴肠化 37例 ;慢性萎缩性胃炎 4 8例 ,其中伴轻度不典型增生 16例、伴中度不典型增生2 3例、伴重度不典型增生 9例 ;胃溃疡 2 5例和胃癌 36例的细胞核DNA含量进行检测。结果正常胃粘膜 ,慢性浅表性胃炎 ,慢性萎缩性胃炎不伴肠化、伴肠化 ,慢性萎缩性胃炎伴轻度不典型增生、伴中度不典型增生、伴重度不典型增生 ,胃溃疡 ,胃癌细胞核DNA异倍体检出率分别为 0 ,0 ,0 ,10 .81% ,0 ,8.70 % ,5 5 .5 6 % ,4 .0 0 % ,4 4 .4 4 %。慢性萎缩性胃炎伴重度不典型增生及胃癌细胞核DNA异倍体检出率最高 ,但两者相比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论DNA异倍体的出现可能是胃癌前病变发生癌变的一个重要标志物。

细胞核DNA含量和S期细胞比例与鼻咽癌浸润转移

目的探讨细胞核DNA含量和S期细胞比例(S-phase fraction,SPF)与鼻咽癌浸润转移的关系。方法对42例垦咽癌组织、20例相应癌旁组织,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞核DNA含量和SPF值。结果 在鼻咽癌、癌旁组织中,DNA含量分别为1.43±0.17、1.41±0.18;SPF值分别为19.32±5.68、4.74±2.12:鼻咽癌组织中的DI值、SPF值显著高于癌旁组织。DNA含量和SPF值与鼻咽癌分化程度、浸润程度、淋巴结转移、淋巴结固定、远处转移、TNM分期和生存期密切相关。结论DNA含量和SPF值可作为判断鼻咽癌浸润、转移及预后的一个可靠参考指标。

对单细胞凝胶电泳法检测细胞核DNA损伤的影响因素

目的 :探讨对单细胞凝胶电泳法 (SCGE)检测细胞核DNA损伤的影响因素。方法 :结合一氧化氮对食管癌细胞系EC10 9细胞核DNA的损伤作用模型 ,对SCGE实验中的影响因素等进行分析讨论和综合评价。结果 :受试物的浓度及其对细胞的作用时间、细胞周期等是SCGE实验中的主要影响因素。结论 :SCGE中的一些因素对实验结果有显著影响。

拟穴青蟹细胞核DNA含量的测定

以拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的血淋巴细胞为材料,刀额新对虾(Metapenaeus ensis)的血淋巴细胞为参照系,利用倍性分析仪结合外标定法测定其细胞核DNA含量.拟穴青蟹的血淋巴的细胞核DNA含量是2.677 pg/2c.此外,本文作者还发现拟穴青蟹血淋巴与肌肉组织细胞核DNA含量存在差异.报道了我国拟穴青蟹细胞核DNA含量,并且提供了拟穴青蟹的细胞遗传学特征,为蟹类系统重建与演化过程分析提供新资料.

大鼠死后肝细胞核DNA的组织化学定量研究

推断死亡时间是法医学尸体检验须解决的重要问题之一。本实验用显微分光光度计定量测定了不同环境温度下（１０℃、２０℃、３０℃）大鼠死后不同时间肝细胞核ＤＮＡ平均含量，发现１０℃、２０℃、３０℃下大鼠死后肝细胞核ＤＮＡ含量与死亡时间呈负线性相关，其相关系数分别为—０．９９０５、—０．９８６３、—０．９７０２，且随环境温度升高ＤＮＡ含量的下降速度明显加快。作者认为ＤＮＡ组织化学定量技术可望成为推断死亡时间的新方法。

天青Ⅰ显示细胞核DNA组织化学新技术及其应用

天青Ⅰ显示细胞核ＤＮＡ组织化学新技术及其应用田玉旺邢惠清邓永江黄晓南（北京军区总医院病理科北京１００７００）细胞核ＤＮＡ含量的测定是直接反映肿瘤增殖能力的重要生物学指标。目前肿瘤细胞核ＤＮＡ图像定量分析已成为一门新兴的检测技术并广泛应用于临床，常采用...

大肠癌及癌前病变细胞核DNA的测量及其影响因素分析

[目的]测量大肠肿瘤细胞核的DNA含量和倍体,计算异多倍体(AN)出现率,探讨其辅助诊断和预测癌变危险度的意义.[方法]应用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统,测量60例大肠高分化腺癌、35例绒毛状腺瘤和45例腺管状腺瘤的细胞核DNA含量和倍体计算,AN出现率.[结果]高分化腺癌、绒毛状腺瘤和腺管状腺瘤的细胞核DNA含量、倍体(U值)及AN出现率两两比较,均有统计学显著性差异.[结论]在临床病理诊断过程中,DNA含量和倍体的测量对诊断良恶性肿瘤、预测癌变危险度均具有重要的参考价值.

鼻咽原发癌与其颈淋巴结转移癌细胞核DNA含量的比较

应用ＬｅｉｔＺ─ＭＰＶ Ⅲ型显微分光光度计测定１０例鼻咽原发癌及其颈淋巴结转移癌细胞核ＤＮＡ含量，结果发现：①转移癌细胞核ＤＩ、ＵＤＩ及超过５Ｃ细胞的百分数明显低于原发癌；②转移癌细胞核ＤＮＡ含量分布形式较原发癌可以出现左移、右移、不变等三种形式，并对鼻咽癌转移的发展方向及其转移机制进行了探讨。

不同浓度的一氧化氮对食管癌细胞核DNA的损伤作用

目的 :研究不同浓度的一氧化氮 (nitricoxide,NO)对食管癌细胞核DNA损伤作用的特征性规律。方法 :以硝普钠 (sodi umnitroprusside ,SNP)作为NO的体外供体 ,以食营癌细胞系EC10 9作为细胞模型 ,采用单细胞凝胶电泳法检测不同浓度的SNP作用一定时间后 ,食管癌细胞核DNA被损伤的情况。结果 :无论SNP的作用时间是 8h ,还是 16h ,彗星状细胞核所占的百分率均越来越高 ,经 χ2 检验差异有显著性意义 (P <0 .0 1)。曲线回归分析结果表明 ,食管癌细胞彗星状细胞核生成的百分率与SNP的浓度之间明显相关。结论 :在一定的条件下 。

胃癌及癌前病变细胞核DNA含量图像分析

目的应用图像分析技术测量正常胃粘膜不典型增生及胃癌。方法分析３例标本的细胞核ＤＮＡ含量和倍体类型。结果随着病变进展ＤＮＡ含量逐渐增加，且二倍体逐渐减少，多倍体细胞不断增多。重度不典型增生中有与胃癌相似的高异倍体细胞出现。结论高异倍体的出现可能为重要的癌变标志。

细胞核DNA含量测定与肺癌影像学关系的研究

流式细胞术是八十年代以来迅速发展起来的一种快速定量分析细胞的新技术,对肿瘤细胞DNA含量作定量分析,解析细胞周期,结合临床分期和病理学分析,对恶性肿瘤恶性度及预后的预测进行深刻的揭示,国外有的实验室已将FCM作为对某些肿瘤的常规研究手段,为此,本文就流式细胞术与肿瘤研究及影像学关系作一综述。 1 流式细胞术的基本工作原理及其特点

下咽癌细胞核DNA含量及核形态定量分析

利用自动化图像分析技术对３６例下咽鳞癌保留标本进行细胞核ＤＮＡ含量、核形态定量测定。结果发现下咽癌ＤＮＡ含量高者易于发生颈淋巴结转移，ＤＮＡ含量愈高，其细胞分化愈差；随着下咽癌细胞核的增大和核异型程度的升高，ＤＮＡ含量增加；而ＤＮＡ含量与下咽癌Ｔ分期及预后无显著相关性。

细胞核DNA含量测定和AgNOR颗粒计数对预测卵巢囊腺癌患者预后的意义

背景与目的:以往认为,细胞核DNA含量和核仁组成区嗜银蛋白(silver-stainingnucleolarorganizerregion,AgNOR)计数在某些肿瘤中有重要的预后意义,但对卵巢囊腺癌患者的预后意义尚不清楚。为此,本研究探讨该两项细胞增殖参数对预测卵巢囊腺癌患者预后的价值。方法:对42例卵巢囊腺癌切除术的组织标本采用图像分析仪测定核DNA含量和AgNOR颗粒计数,将结果与预后情况进行分析。结果:单因素生存率分析显示,差异有统计学意义的临床变量为FIGO分级、分化程度、残余肿瘤大小、肿瘤转移灶、淋巴结转移情况和年龄、异倍体、DNA指数、AgNOR颗粒计数(P<0.05)。多因素生存率分析显示,DNA指数>1.4、FIGO分级、分化程度和残余肿瘤大小是卵巢囊腺癌的具有统计学意义的预后预测因子。结论:对于卵巢囊腺癌患者来说,细胞核DNA指数可能是有用的预后独立预测因子。