反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

新西兰雌-雄兔皮肤移植模型体内细胞毒性实验

背景:建立一种有效的评估模式来监测移植后受者免疫状态是当前的难点。目的:建立兔体内细胞毒性实验方法,验证体内细胞毒性实验能否检测出受体的免疫排斥状况。方法:建立新西兰白兔雌-雄兔皮肤移植模型,另设未作移植的雌、雄兔为对照组。取雌兔及雄兔脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羟基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色后制备1:1混合细胞悬液。雄兔输注混合细胞后分别于1,2,4,8h抽取外周血,流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:雌-雄兔皮肤移植排斥模型在皮肤移植2周后可建立,混合细胞悬液输注后在模型组和对照组外周血中的比例变化不同,雄兔输注混合细胞后1,2,4,8h的杀伤率模型组高于对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。提示体内细胞毒性实验可用于免疫状态监测,可以直观地反映皮肤移植模型的体内特异性免疫环境及移植物所受的免疫攻击强度。

纯钛种植体表面不同化学组成的TiO_2涂层细胞毒性实验研究

目的:对纯钛表面不同化学组成的Ti O2涂层可能存在的潜在细胞毒性进行研究,为该材料应用于临床提供实验依据。方法:参照GB/T16886和国家医药管理局颁布的行业标准YY/T 0127的评价标准和要求,采用规定的L929细胞,经材料浸提液与细胞共培养方式对纯钛表面不同化学组成的Ti O2涂层进行细胞毒性测试,采用MTT比色法,测定各组1、3、5天L929细胞的相对增殖率来判别材料对细胞的毒性程度,并进行统计学分析比较。结果:各实验组与阴性对照组两两比较对L929细胞的增殖差异均无显著性意义(P>0.05);各实验组与阳性对照组进行两两比较差异有显著性意义(P<0.05);细胞毒性为1级。结论:该Ti O2涂层与L929细胞相容性好,参照GB/T16886和YY/T 0127标准属于安全范围。

血管内速溶支架的细胞毒性和植入实验研究

目的:检测一种新型的血管内速溶支架的生物相容性。方法:分别对血管内速溶支架进行细胞毒性实验和皮下植入实验。细胞毒性实验:速溶支架粉末与L929细胞接触培养,倒置显微镜观察形态,采用MTT(四唑盐)比色法量化细胞毒性,并进行毒性分级。皮下植入实验:在12只新西兰白兔右侧背部皮下植入血管内速溶支架,左侧作为空白对照,分别于植于支架后3、7、14、28 d,肉眼和镜下观察植入点炎症反应情况。结果:血管内速溶支架细胞毒性为0级。皮下植入后无炎症反应,局部组织无刺激。结论:该课题组黏合吻合血管用血管内速溶支架材料满足ISO 10993要求,具有良好的生物相容性。

稀土粉尘的细胞毒性实验研究

稀土粉尘的细胞毒性实验研究涂英娥，扬吉增，胡招娣，张天园，高孟清采用体外细胞培养技术，对重、中、轻３种类型稀土粉尘的细胞毒性进行了研究。一、材料和方法１．粉尘：选用江西省赣南３个分别生产重、中、轻稀土的稀土矿。各取原矿和成品两类样品，原矿直接浮选，成...

仿生型α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠复合人工骨材料的细胞毒性实验

目的:通过进行体外细胞毒性实验研究,探讨α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠(α-CSH/OCP/SH)复合人工材料的体外细胞毒性作用情况。方法:提取并纯化兔骨髓间充质干细胞(BMSCs);制备α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠复合人工骨材料的浸提液;分别以培养基、0. 64%苯酚溶液为阴性/阳性对照组,25%、50%、100%浓度的材料浸提液为实验组;分别于第1、3、5、7天观察BMSCs生长状况、检测各组的吸光度(A)、计算细胞相对增殖率(RGR),并对材料的细胞毒性进行分级。结果:各实验组及阴性对照组中兔BMSCs均生长良好,呈典型长梭形;MTT实验结果表明各实验组阳性对照组之间吸光度(A)值的差异均有统计学意义(P<0. 05),且在相应时间节点上25%浓度实验组与50%、100%浓度实验组之间的A值也具有明显统计学差异(P<0. 05)。结论:仿生型α-半水硫酸钙/磷酸八钙/透明质酸钠对兔BMSCs无细胞毒性,且低浓度的材料浸提液对兔BMSCs增殖有利。

四种临床常用烤瓷合金对人正常肾细胞的毒性实验研究

目的:针对四种临床常用烤瓷合金进行细胞毒性检测,探讨临床常用烤瓷合金对人肾细胞(293细胞株)的毒性对比实验研究,选择适宜人体安全性能高的烤瓷合金,为临床应用提供相应的理论参考数据。方法:用含20%胎牛血清的1640培养基培养人正常肾细胞293细胞株,制备四种烤瓷合金的浸提液(根据IS010993)。用1d 3d 5d四种烤瓷合金浸提液分别干预293细胞2d 4d 6d。对细胞生长状态进行观察,记录形态变化。并分时段分别进行MTT实验检测细胞相对增值率。结果:细胞毒性影响,镍铬合金>含钛合金>银钯合金>钴铬合金。结论:根据患者础条件和需要,合理选择烤瓷合金修复体。

新型碳纤维增强复合材料的细胞毒性评价

目的体外评价新型碳纤维增强复合材料的细胞毒性。方法选用建系的 L929成纤维细胞进行体外细胞毒性实验,评价新型碳纤维增强复合材料对细胞增殖的影响。结果材料浸提液与 L929成纤维细胞作用后的细胞增殖度为第2d 104%,第4d 104%,第7d 77%,毒性判定为1级,有良好的细胞相容性。结论新型碳纤维增强复合材料未见明显的细胞毒性作用。

新型脂质创面敷料透皮液和溶出液中三溴苯酚及铋元素的分析测定及其细胞毒性研究

本文通过体外实验(溶出、透皮)、细胞毒性实验建立脂质创面敷料的安全性评价。建立基于电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)和气相色谱质谱联用(GC-MS)测量溶出液、透皮液中新型脂质创面敷料残留物(三溴苯酚和铋)的分析方法。同时,使用四唑盐(MTT)比色法判断新型脂质创面敷料的材料毒性。结果表明,溶出液在2天、4天、7天内三溴苯酚的单位面积溶出量分别为(6.91±1.34)μg/cm^2、(6.71±0.81)μg/cm^2、(6.41±1.40)μg/cm^2,铋的单位面积溶出量分别为(0.0086±0.0005)ng/cm^2、(0.0097±0.0018)ng/cm^2、(0.0556±0.0068)ng/cm^2。透皮液在1天、2天内三溴苯酚的单位面积透过量分别为(0.16±0.01)μg/cm^2、(1.11±0.01)μg/cm^2,铋的单位面积透过量分别为(0.0036±0.0001)ng/cm^2、(0.0117±0.0015)ng/cm^2。细胞毒性实验结果证明本实验所用的脂质创面敷料对Hacat、HSF两种细胞毒性较小,等级为0或1。本实验所用新型脂质创面敷料的残留物在溶出液和透皮液中含量较低,细胞毒性等级较低,足以说明脂质创面敷料的安全性。

四种牙科陶瓷材料细胞毒性研究

目的:初步评价牙科陶瓷材料的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同材料和浸提时间的浸提液对L929小鼠结缔组织成纤维细胞的影响,从而对全瓷材料的生物相容性进行初筛。结果:各组A490nm值均与阴性对照无显著性差异(P>0.05),材料毒性级别除培养48h后金属烤瓷粉浸提液组的细胞毒性为1级外,其他各浸提液组均为0级。结论:四种材料体外细胞毒性实验阴性,初步认为材料具有较好的生物相容性。

MTT法评价4种医用材料的细胞毒性

目的研究4种医用材料的细胞毒性。方法按照GB/T16886.5-2003/ISO10993-5:1999的体外细胞毒性评价方法要求,用MTT比色法评价4种医用材料的细胞毒性。结果 4种医用材料均表现出较高的细胞相对增殖率,其细胞毒性为1级。结论 4种医用材料对细胞形态、生长和增殖不构成损害,无明显细胞毒性,具有良好的细胞相容性。

氮化硅/氧化钇/氧化镁复合陶瓷对大鼠胚胎神经细胞增殖分化的影响

目的研究氮化硅/氧化钇/氧化镁复合陶瓷粉末浸提液对体外培养大鼠胚胎神经细胞毒性的影响。方法利用大鼠胚胎神经细胞进行原代培养,将不同浓度氮化硅/氧化钇/氧化镁复合陶瓷材料粉末浸提液(50、100、200、400μg/mL)分别设置为复合陶瓷实验组1、2、3、4,另设正常对照组、阳性对照组(醋酸铅浓度50μg/mL)。采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学法对神经细胞进行鉴定,并利用图像分析细胞形态的变化。通过四唑盐比色试验(MTT)测定大鼠胚胎神经细胞相对增殖率(RGR)、考马斯亮蓝G-250测定蛋白质相对含量。结果50~400μg/mL氮化硅/氧化钇/氧化镁复合陶瓷浸提液能促进体外培养中脑神经细胞突起生长,集落数增多。阳性染色分布于神经元的胞质及突起中颗粒状。与正常对照组比较,各实验组神经细胞集落数生长分化明显升高、第7天神经细胞相对蛋白质含量明显升高(P<0.01);而阳性对照组(醋酸铅)较各实验组神经细胞集落数生长分化明显抑制、蛋白质含量明显降低(P<0.01)。4个实验组RGR分别为82.3%、90.8%、92.8%、83.6%。细胞毒性为1级,阳性对照组(醋酸铅)细胞RGR为46.9%,细胞毒性为4级。结论氮化硅/氧化钇/氧化镁复合陶瓷粉末浸提液浓度50~400μg/mL为适宜。氮化硅/氧化钇/氧化镁复合陶瓷对体外培养胚胎中脑神经细胞分化、增殖具有一定的促进作用,具有双重性影响0x0E0xFF0xF00xFF倎0x030x0F其生物学作用性质与剂量有关,该材料具有较好的生物相溶性,生物效应是无毒。

NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及意义

背景与目的:NKG2D及其配体的相互作用在肿瘤免疫监视中起着非常重要的作用。本研究探讨NKG2D配体在13种肿瘤细胞系中的表达及其意义。方法:采用半定量RT-PCR法检测肿瘤细胞系中NKG2D配体的mRNA表达。应用MTT法检测人NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,免疫组织化学技术和Western blot法检测肿瘤细胞中MHCⅠ类相关蛋白A(MHC classⅠchain-related A)蛋白表达情况。结果:13种肿瘤细胞系表达不同水平的NKG2D配体mRNA。其中Hep2细胞中MICA强阳性表达,HeLa、HepG2、MDA231、HT29、SGC7901、M21、K562、Jurkat细胞MICA表达阳性,而Caski、PG、HL-60和Raji细胞中MICA mRNA阴性。MICA和MICB的表达水平与NK细胞杀伤活性具有高度相关性(r=0.851,P<0.001;r=0.652,P<0.05)。除ULBP3外,其余ULBP成员的表达水平与NK细胞杀伤均无相关性。结论:在6种人NKG2D配体中,MICA的表达水平与肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性关系最为密切,肿瘤细胞MICA的表达水平可能决定着机体NK细胞抗肿瘤免疫应答的强弱。

AS_2O_3对CD34^+白血病细胞NKG2D配体表达及NK杀伤活性的影响

目的:观察AS2O3对CD34+早期急性髓系白血病细胞NKG2D配体表达及NK细胞杀伤活性的影响。方法:流式细胞仪检测KG1a细胞表面CD34抗原表达率,MTT法确定AS2O3的基本工作浓度,以不同浓度的AS2O3处理KG1a细胞,流式细胞仪测定处理前后KG1a细胞NKG2D配体的表达情况;MACS法分离5例健康个体的NK细胞,LDH释放法检测NK细胞对AS2O3处理前后KG1a细胞的杀伤活性。结果:10nmol/ml的AS2O3作用KG1a细胞后,能使KG1a细胞表面ULBP1的表达水平显著上调(P<0.05),同时也激发了NK细胞对KG1a细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:AS2O3能上调CD34+白血病细胞表面NKG2D配体的表达水平,诱导NK细胞对其的杀伤活性,启示AS2O3可与NK细胞组成过继性免疫化疗方案,提高急性白血病的疗效。

苦参碱提高白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤敏感性及其机制

目的研究苦参碱(Matrine)作用前后白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法应用CCK-8法检测苦参碱对KG1a细胞50%抑制量IC50值,以此量的苦参碱作用于KG1a细胞,LDH释放法检测作用前后对NK细胞的杀伤敏感性。RT-PCR检测KG1a细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)五种基因的表达,流式细胞仪检测作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达变化。结果苦参碱作用前后在效靶比为5:1、10:1、20:1时对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P<0.05)。KG1a细胞在mRNA水平五种基因均表达,苦参碱作用前KG1a细胞表面NKG2D各配体几乎不表达,作用后各配体显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论苦参碱能提高KG1a细胞对NK细胞的杀伤敏感性,其机制可能与苦参碱提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。

戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质生物学性质的影响

目的:探讨戊二醛交联时间对人脱细胞真皮基质(ADM)生物学性质的影响。方法:用低浓度戊二醛交联高渗盐-NaOH消蚀法制备的人ADM,根据交联时间的不同分为交联10、15、20、30min组,大体观察各组的物理性状;免疫组织化学检测各组Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达;MTT细胞毒性实验评价4组ADM的细胞毒性反应;将NIH3T3细胞接种于各组ADM上,比较24h细胞贴壁数并观察细胞生长情况;将人成纤维细胞与交联10、15min组ADM体外复合培养,观察细胞生长和增殖情况。结果:随着交联时间延长,ADM的韧性逐渐增加;各组ADMⅠ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达阳性;ADM细胞毒性反应交联10和15min组0～1级、20min组1～2级、30min组1～3级;交联10、15min组分别与20min组24h3T3细胞贴壁数比较有统计学意义;而交联10、15min两组间无统计学意义;3T3细胞能够在交联10、15min组ADM表面贴附、增殖;免疫荧光法显示鼠抗人波形蛋白抗体呈阳性,有较多的人成纤维细胞黏附于交联10和15min组ADM上,生长和增殖良好。结论:戊二醛化学交联10～15min的人ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料。

泥鳅和大鳞副泥鳅性腺细胞H－Y抗原的检测

以雄性小鼠脾细胞为抗原，免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，获得了高滴度的抗Ｈ－Ｙ抗原抗体．在此基础上，利用细胞毒性实验，对泥鳅和大鳞副泥鳅的性腺细胞进行了Ｈ－Ｙ抗原的检测．结果表明，泥鳅中雌雄性腺细胞均含有Ｈ－Ｙ抗原；大鳞副泥鳅中，Ｈ－Ｙ抗原仅存在于雌性性腺细胞中，提示其为ＺＺ／ＺＷ型性别决定．

姜黄素提高白血病KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性及其分子机制探讨

目的:研究姜黄素作用前后白血病KG1a细胞对同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤的敏感性变化,并初步探讨其分子机制。方法:以对同种异体NK细胞杀伤高度敏感的白血病K562细胞为对照,乳酸脱氢酶释放法检测KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达,逆转录PCR法检测细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因mRNA的表达水平。CCK-8法检测姜黄素对KG1a细胞半数抑制量(IC50),以此含量作用KG1a细胞,再次乳酸脱氢酶释放法检测姜黄素作用后的KG1a对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,流式细胞仪检测姜黄素作用后的KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子蛋白表达水平。结果:与K562细胞比较,KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤呈低度敏感,KG1a细胞表面NKG2D各配体蛋白表达阳性率均明显低于K562细胞(P<0.01),HLA-Ⅰ蛋白表达阳性率则明显高于K562细胞(P<0.01);在mRNA水平两种白血病细胞表面均有NKG2D配体和HLA-Ⅰ基因表达。当效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,姜黄素作用后NK细胞对KG1a细胞杀伤率明显高于作用前(P<0.01);作用后KG1a细胞各NKG2D配体表达率均明显升高(P<0.05或0.01),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论:姜黄素能提高KG1a细胞对同种异体NK细胞杀伤的敏感性,其机制可能与姜黄素提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。

小檗碱对U251胶质瘤干细胞的诱导分化作用

目的研究小檗碱对胶质瘤干细胞(GSC)分化的影响。方法用CD133免疫磁珠法由U251胶质瘤细胞中分选培养GSC,并用流式细胞术进行验证;细胞毒性实验评价小檗碱对GSC生长的抑制作用,采用不同浓度小檗碱(0.001、0.01、0.1、1μmol/L)作用于GSC,测量其吸光度值(OD);用RT-PCR、免疫荧光法检测干细胞标记物CD133、Nestin及细胞分化标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达水平。结果免疫磁珠法分选后CD133+细胞比例超过98%,无血清培养条件下能形成干细胞球。细胞毒性实验显示:小檗碱对GSC生长的抑制作用随剂量和时间的增加而增强。RT-PCR检测显示:随时间延长,小檗碱可使干细胞标记物CD133、Nestin基因的mRNA表达水平逐步降低,而细胞分化标记物GFAP、MAP2基因的mRNA表达水平逐渐升高。免疫荧光法检测显示:小檗碱能抑制CD133、Nestin蛋白的表达,上调GFAP、MAP2蛋白的表达。结论小檗碱能有效抑制GSC生长,并诱导其分化。

NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性研究

目的探讨自然杀伤NK细胞杀瘤活性与肿瘤细胞表面MICA/B表达的相关性。方法采用流式细胞术检测人红白血病细胞K562、乳腺癌细胞Bcap37、肾癌细胞769P及肺癌细胞A549表面MICA/B的表达,RosetteSep誖改进法分离人外周血NK细胞,MTT法检测不同效靶比时NK细胞对几种肿瘤细胞的杀伤活性。结果K562、Bcap37、769P及A549细胞表面MICA/B的表达阳性率分别是(60.35±0.50)%、(90.72±0.64)%、(55.59±0.55)%、(3.84±0.10)%;RosetteSep誖改进法分选出的NK细胞纯度为(96.52±2.42)%,在同一效靶比时,NK细胞对K562、Bcap37及769P的杀伤活性较强,与A549相比有显著性差异(P<0.01),其中K562与Bcap37之间无显著性差异(P>0.05);效靶比为5∶1、10∶1、20∶1时,NK细胞的杀伤活性与4种肿瘤细胞表面MICA/B表达均呈正相关关系(P<0.01),随着效靶比增加,相关性增强。结论NK细胞的杀伤敏感性与肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平相关,肿瘤细胞表面MICA/B的表达水平影响NK细胞的杀伤活性。