接骨壮骨方加减辅助经皮穿刺椎体成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折对术后腰椎功能、康复进程及成骨与破骨细胞活性调节效应的影响

目的观察接骨壮骨方加减辅助经皮穿刺椎体成形术治疗骨质疏松性椎体压缩性骨折(OVCF)对术后腰椎功能、康复进程及成骨与破骨细胞活性调节效应的影响。方法将70例OVCF患者按照随机数字表法分为2组,对照组35例予经皮穿刺椎体成形术治疗,术后予常规西药治疗,治疗组35例在对照组基础上予接骨壮骨方加减治疗。比较2组治疗前后疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)、解剖影像学指标(椎体前缘高度、椎体中线高度、伤椎Cobb角)、康复进程(住院时间、术后下床活动时间、骨折愈合时间、恢复正常活动时间)、成骨与破骨细胞活性[骨钙素、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原氨基末端肽(PⅠNP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)、尿羟脯氨酸/尿肌酐(OHP/Cr)、骨密度],统计2组疗效及安全性。结果治疗组总有效率97.14%(34/35),对照组总有效率77.14%(27/35),治疗组临床疗效优于对照组(P<0.05)。2组治疗后疼痛VAS、ODI评分均较本组治疗前降低(P<0.05),且治疗组治疗后均低于对照组(P<0.05)。治疗组住院时间、术后下床活动时间与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗组骨折愈合时间、恢复正常活动时间均短于对照组(P<0.05)。2组治疗后骨钙素、PⅠNP、骨密度均较治疗前升高(P<0.05),BALP、TRACP、OHP/Cr均降低(P<0.05);治疗组治疗后骨钙素、PⅠNP、骨密度均高于对照组(P<0.05),BALP、TRACP、OHP/Cr均低于对照组(P<0.05)。2组治疗后椎体前缘高度、椎体中线高度均较治疗前升高(P<0.05),伤椎Cobb角均减小(P<0.05);治疗组治疗后椎体前缘高度、椎体中线高度均高于对照组(P<0.05),伤椎Cobb角低于对照组(P<0.05)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论接骨壮骨方加减辅助经皮穿刺椎体成形术治疗OVCF,能减轻患者疼痛,提高腰椎功能,促进骨形成,抑制骨吸收,提高骨密度,恢复伤椎解剖学结构,增强疗效,安全可靠。

基于CRISPR/Cas9技术构建猪KLF4基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析

【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9技术构建Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)基因敲除的猪小肠上皮细胞,并探究KLF4基因敲除对于细胞活性和细胞周期的影响。【方法】在猪KLF4基因转录本第1外显子区域设计3条sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2和sgRNA3),经退火形成的双链DNA与线性化pGK1.1载体连接,产物转化大肠杆菌Top10感受态细胞进行鉴定,并将重组载体转染至猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)。PCR扩增敲除位点附近序列,并通过测序判断sgRNA敲除效率;利用CruiserTMEnzyme酶切鉴定阳性细胞克隆,通过TA克隆测序鉴定敲除序列;利用Western blotting检测基因敲除细胞中KLF4蛋白表达情况。利用CCK-8和流式细胞术检测KLF4基因敲除后细胞活性和细胞周期的变化。【结果】重组载体测序结果显示,sgRNAs与pGK1.1成功连接。分析敲除效率发现,3个sgRNAs均可对靶序列进行敲除,其中sgRNA3有较高的敲除效率。PCR产物经CruiserTMEnzyme酶切筛选出2个阳性单克隆细胞。TA克隆测序分析发现,KLF4基因2个等位基因序列分别缺失116和137 bp。Western blotting结果表明,KLF4基因敲除细胞中未见KLF4蛋白表达。细胞活性及细胞周期分析显示,敲除KLF4基因极显著抑制了细胞活性(P<0.01),并导致G0/S细胞周期阻滞。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了KLF4基因敲除的IPEC-J2细胞,且KLF4基因敲除可抑制细胞活性,并引起G0/S细胞周期阻滞。KLF4基因敲除细胞可为进一步探究KLF4基因功能及分子机制提供材料。

用于细胞活性研究的高重频脉冲磁场装置

一定时间的脉冲磁场序列可刺激某些类型的细胞和组织产生有益的生物效应。由于磁体本质上是一个大感性负载,难以同时实现磁体电流的高di/dt和高精度调节。为此,该文提出一种两级联合调控拓扑,前级电路为同步降压电路,用于实现di/dt随磁场期望值同步调节,后级电路是桥式电路,用于实现脉冲磁场波形周期、振幅、稳定度、刺激间隔等参数的控制,为了实现电流从快速上升到稳定值的平滑过渡,引入一种由滞环控制器和PI控制器组成的混合型控制器。在此基础上,研制了频率范围为1 Hz~5 kHz、脉冲边沿小于50μs、可调精度为0.1 mT、峰值强度高达10 mT的便携式高频脉冲磁场发生装置样机,并应用于脉冲磁场对高龄小鼠的体外成熟卵母细胞受精和胚胎发育能力影响的研究。在脉冲磁场作用下囊胚形成率从15.15%提高至52.94%,表明脉冲磁场显著促进了高龄小鼠体外成熟卵母细胞的发育能力。

黄芪补肾活血汤对芳香化酶抑制剂诱导骨质疏松模型小鼠破骨细胞活性的影响

背景:芳香化酶抑制剂尽管显著提高了激素受体阳性乳腺癌患者的临床获益,但其相关的不良事件——骨质疏松严重影响了患者的生活质量,黄芪补肾活血汤能有效预防芳香化酶抑制剂所致骨质疏松的发生,但是其作用机制尚不清楚。目的:探究黄芪补肾活血汤对芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型小鼠破骨细胞活性的影响及机制。方法:选取60只8周龄C57BL/6J雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组、阳性对照组各10只,除假手术组外,其余组小鼠均切除双侧卵巢联合皮下注射来曲唑构建绝经后芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型,黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组分别给予19.24,9.62,4.81 g/(kg·d)黄芪补肾活血汤进行灌胃(1次/d),阳性对照组给予阿仑膦酸钠5 mg/kg灌胃(1次/周)。给药3个月后,Micro-CT检测胫骨骨密度和骨微结构,对股骨进行苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色及免疫组化检测核因子κB受体活化因子配体、骨保护素蛋白表达,ELISA检测血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平。结果与结论:①与假手术组相比,模型组小鼠骨密度显著下降、骨小梁形态疏松断裂、血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平显著上升,表明芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型构建成功;②与模型组相比,黄芪补肾活血汤高、中、低剂量组和阳性对照组小鼠骨密度、骨微结构显著改善,骨小梁形态增粗致密,血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽、抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平显著下降,破骨细胞数量减少,核因子κB受体活化因子配体蛋白表达下降,骨保护素蛋白表达升高。结果表明,黄芪补肾活血汤可能调控核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子/骨保护素信号通路抑制破骨细胞活性,改善骨小梁形态和骨微结构,提高骨密度,进而预防芳香化酶抑制剂所致骨质疏松模型的发生发展。

车叶草苷调节RAS/RAF/MEK/ERK信号通路对肝细胞癌细胞活性及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨车叶草苷调节Ras蛋白(Ras protein,RAS)/Raf蛋白激酶(Raf protein kinase,RAF)/丝裂原激活蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞活性及裸鼠移植瘤生长的影响。方法体外培养人HCC-LM3以细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)法筛选车叶草苷体外最佳作用浓度。将HCC-LM3细胞随机分为对照组(细胞正常培养,不作其他干预)、车叶草苷组(3 mmol/L车叶草苷进行干预)、ML-098组(0.5μmol/L RAS激活剂ML-098进行干预)、车叶草苷+ML-098组(车叶草苷3 mmol/L和RAS激活剂ML-098终浓度0.5μmol/L联合干预)。以CCK-8法、流式细胞术分别检测各组HCC-LM3细胞活性、凋亡率;Western blot检测各组HCC-LM3细胞增殖、凋亡相关蛋白表达及RAS/RAF/MEK/ERK信号通路相关蛋白表达。制备HCC-LM3裸鼠原位癌模型并随机分为对照组(5 ml/kg生理盐水)、车叶草苷低剂量组(25 mg/ml车叶草苷)、车叶草苷中剂量组(50 mg/ml车叶草苷)、车叶草苷高剂量组(100 mg/ml车叶草苷)。检测各组裸鼠肝体比、肿瘤长径。以Ki67免疫组织化学染色法检测各组裸鼠肿瘤细胞增殖指数;Western blot检测各组裸鼠肿瘤RAS/RAF/MEK/ERK信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,车叶草苷组HCC-LM3细胞凋亡率、裂解凋亡蛋白酶3(Cleaved caspase-3)与B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,caspase-9)蛋白表达均升高(P均<0.05),细胞活性、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)与RAS蛋白表达、p-RAF/RAF、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均降低(P均<0.05);ML-098对HCC-LM3细胞各指标的作用与车叶草苷相反(P<0.05)。与车叶草苷组相比,车叶草苷+ML-098组HCC-LM3细胞凋亡率、Cleaved caspase-3与Bax、caspase-9蛋白表达均降低(P均<0.05),细胞活性、PCNA与RAS蛋白表达、p-RAF/RAF、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均升高(P均<0.05)。与对照组相比,车叶草苷低、中、高剂量组裸鼠肝体比、肿瘤长径、肿瘤细胞增殖指数、RAS蛋白表达、p-RAF/RAF、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK均降低(P均<0.05),并呈一定剂量依赖性(P均<0.05)。结论车叶草苷可抑制RAS/RAF/MEK/ERK信号通路激活,降低HCC细胞体外细胞活性并促使其凋亡,延缓其裸鼠移植瘤生长。

基于Caspase3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制

目的 基于胱天蛋白酶(Caspase)3探讨余甘子叶提取物对慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)大鼠气道高反应、肺泡上皮细胞活性的影响及作用机制。方法 选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(A)组、模型(B)组、乙酰半胱氨酸颗粒(富露施,C)组、余甘子叶提取物(D)组、Caspase3抑制剂(Z-DEVD-FMK,E)组、余甘子叶提取物+Caspase3抑制剂(F)组,每组10只,对B、C、D、E、F组采用香烟发生器+脂多糖法建立慢阻肺模型,A组不建立该模型,建模成功后,C组灌胃50 g/kg富露施,D组灌胃50 mg/kg余甘子叶提取物,E组灌胃10μg/kg Z-DEVD-FMK,F组给予余甘子叶提取物联合Z-DEVD-FMK,A、B组同期给予灌胃同体积生理盐水,无创肺功能仪检测气道高反应,干湿重法测定肺体脂数(LBF)、肺含水量(LWC),苏木素-伊红(HE)染色法检测肺组织病理形态,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,免疫组化法检测肺组织中Caspase3蛋白表达。结果 与A组比较,B组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达显著升高(P<0.05),肺组织病理形态遭到破坏;与B组比较,C、D、E、F组气道阻力、LBF、LWC含量、肺泡上皮细胞凋亡、肺组织Caspase3蛋白表达明显降低(P<0.05),肺组织病理形态明显改善,且D组较C组变化更显著(P<0.05),E组与D组相比无明显差异(P>0.05),F组较E组变化显著(P<0.05)。结论 余甘子叶提取物可有效改善慢阻肺大鼠气道高反应及肺泡上皮细胞活性,其作用机制可能与抑制Caspase3表达有关。

miR-217靶向调控ERK2表达对非小细胞肺癌细胞活性和免疫逃逸的影响及机制研究

目的:研究miR-217靶向调控细胞外信号调节激酶2(ERK2)表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞活性和免疫逃逸的影响及作用机制。方法:qRT-PCR检测miR-217与ERK2 mRNA在NSCLC组织、癌旁组织及HLF-1、A549、HCC827细胞株中的表达量,分析不同miR-217表达量NSCLC患者的预后生存状态。使用生物信息学、双荧光素酶基因报告实验分析miR-217与ERK2的靶向关系。培养NSCLC A549细胞,分为NC组、miR-217 inhibitor组、miR-217 mimic组、miR-217 mimic+ERK2NC组、miR-217 mimic+ERK2组,除NC组不做任何处理外,其余各组均转染对应质粒,分析各组A549细胞增殖活性、免疫逃逸状况,并明确作用机制。结果:与癌旁组织比较,NSCLC组织miR-217表达量降低,ERK2 mRNA表达量升高(P<0.05)。与肺成纤维细胞HLF-1细胞株比较,NSCLC细胞A549、HCC827细胞株miR-217表达量降低,ERK2 mRNA表达量升高(P<0.05)。基于Kaplan-Meier Plotter数据库分析miR-217与NSCLC患者预后的关系,结果表明miR-217低表达与患者预后不良有关(HR=0.90,P=0.033)。双荧光素报告基因显示miR-217与ERK2之间的3'UTR区域间存在匹配序列,miR-217 mimic片段可抑制ERK2-WT信号,但对ERK2-MUT无影响。与NC组比较,miR-217 inhibitor组细胞增殖活性、PD-L1、PD-L2 mRNA表达量升高,CD8+T细胞活力降低,miR-217 mimic组细胞增殖活性、PD-L1、PD-L2 mRNA表达量降低,CD8+T细胞活力升高(P<0.05)。与miR-217 mimic组比较,miR-217 mimic+ERK2 NC组细胞增殖活性、CD8+T细胞活力、PD-L1、PD-L2 mRNA表达量无明显改变(P>0.05),miR-217 mimic+ERK2组细胞增殖活性、PD-L1、PD-L2 mRNA表达量升高,CD8+T细胞活力降低(P<0.05)。结论:miR-217过表达可降低NSCLC细胞A549活性,抑制PD-L1表达,激活肿瘤微环境中的CD8+T细胞,进而抑制免疫逃逸,其可能通过靶向调控ERK2发挥作用。

补中益气汤含药血清抑制肺癌细胞活性及血管生成拟态的机制研究

目的探讨补中益气汤含药血清对肺癌细胞活性及血管生成拟态(VM)的影响及机制。方法通过SD大鼠灌胃法制备低剂量(BZ-L组)、中等剂量(BZ-M组)、高剂量(BZ-H组)补中益气汤含药血清,进行肺癌细胞干预。通过CCK-8实验、Edu细胞增殖实验、细胞克隆形成实验及细胞划痕实验、Transwell实验检测补中益气汤对肺癌A549、HCC827细胞增殖及迁移的影响。采用流式细胞术检测补中益气汤对肺癌细胞凋亡和细胞周期的影响,通过体外VM实验检测补中益气汤对肺癌细胞血管生成的影响。通过RNA-seq测序检测对照组细胞与药物干预细胞的差异表达基因。构建小鼠皮下移植瘤,检测补中益气汤灌胃治疗对肺癌细胞体内生长的抑制作用。结果补中益气汤可呈剂量依赖性地抑制A549、HCC827细胞的活力和增殖活性,并可呈剂量依赖性地促进肺癌细胞凋亡,诱导细胞发生G_2/M期阻滞。经补中益气汤干预后,A549、HCC827细胞的迁移能力显著减弱。随着补中益气汤干预浓度的提高,A549细胞及HCC827细胞的VM逐渐减少。与对照组细胞相比,补中益气汤组细胞有765个差异表达基因,其中p-JNK和p-ERK1/2基因表达显著下调。Western blot检测结果显示,随着补中益气汤浓度的升高,A549、HCC827细胞中JNK/ERK1/2信号通路的磷酸化水平被逐渐抑制。补中益气汤可使小鼠肿瘤的体积和质量均显著减小,使肿瘤组织中细胞凋亡率升高,并使肿瘤组织中p-JNK、p-ERK1、p-ERK2表达降低和E-cadherin表达升高。结论补中益气汤可能通过抑制JNK/ERK1/2信号通路活性,抑制肺癌细胞活性和血管生成。

氯胺酮对肝损伤大鼠脑认知功能、肝细胞活性及NO、cGMP水平的作用机制

目的探究氯胺酮对肝损伤大鼠脑认知功能、肝细胞活性及一氧化氮(NO)、尿液环磷酸鸟苷(cGMP)水平的作用机制。方法选取正常大鼠40只分成正常组、模型组、氯胺酮组,丙泊酚组各10只,除正常组外其余组别均建立肝损伤大鼠模型,建模成功后,丙泊酚组使用丙泊酚(1.0 ml/次,1次/d)进行注射,氯胺酮组采用氯胺酮(0.5 mg/次,1次/d)注射,正常组及模型组采用等剂量的生理盐水处理,采用Morris水迷宫检测各组大鼠认知功能,采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组肝组织形态,TUNEL检测各组细胞凋亡,Western印迹检测NO、cGMP蛋白表达。结果与正常组比较,模型组逃避潜伏期明显升高,原平台穿越次数、原平台穿越时间明显降低(P<0.05);与模型组比较,氯胺酮组逃避潜伏期明显升高,原平台穿越次数、原平台穿越时间明显降低(P<0.05);与氯胺酮组比较,丙泊酚组逃避潜伏期降低,原平台穿越次数、原平台穿越时间明显升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组肝组织匀浆Ⅳ型胶原(CⅣ)、血清NO、cGMP水平明显较高(P<0.05);与模型组比较,氯胺酮组以上指标明显降低(P<0.05);与氯胺酮组比较,丙泊酚组以上指标明显升高(P<0.05)。正常组肝板纹理清晰,肝细胞排列整齐有序、索状结构清晰;模型组炎细胞浸润明显,核固缩严重,脂肪滴较多索状结构不清,肝窦间狭窄肝细胞排列紊乱;氯胺酮组肝板纹理较清楚,有少量炎性细胞,肝细胞排列较整齐,索状结构趋于清晰;丙泊酚组肝板纹理稍显清晰,肝细胞仍有肿胀现象、炎性细胞及中央静脉扩张仍有脂肪滴产生。与正常组比较,模型组肝细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,氯胺酮组肝细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与氯胺酮组比较,丙泊酚组上述指标升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组NO、cGMP蛋白水平较高(P<0.05),与模型组比较,氯胺酮组以上指标明显降低(P<0.05);与氯胺酮组比较,丙泊酚组以上指标明显升高(P<0.05)。结论氯胺酮对于降低肝损伤肝组织匀浆CⅣ、血清NO、cGMP水平,抑制肝细胞凋亡等具有一定作用,但是氯胺酮对于肝损伤大鼠的认知功能的改善并无显著作用,并能够损害大鼠的学习和记忆功能。

基于TLR4炎症信号通路探讨针灸对颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性及血管活性物质的影响

目的基于Toll样受体(TLR)4炎症信号通路探讨针灸对颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性及血管活性物质的影响。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(N)组、模型(M)组、针灸(A)组、西比灵(W)组,每组10只,M、A、W组采用颈椎失稳法建立颈性眩晕模型,N组不建立该模型,建模成功后,对A组给与针灸治疗,对W组灌胃盐酸氟桂利嗪(西比灵)0.5 mg/kg,N、M组灌胃同体积生理盐水,记录各组一般情况,平衡木实验测定行为学,TUNEL法测定缝背核神经元细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管活性物质,Western印迹检测TLR4蛋白表达。结果N组皮毛光泽,活动自如,一般情况均正常,对外界刺激也反应灵敏,M组皮毛光泽可见降低,且活动明显受限,颈部活动受限最为明显,进食、进水量明显减少,对外界刺激反应可见明显降低,而与M组相比,A、W组一般情况明显改善,饮食逐渐恢复正常,颈部活动也明显恢复;与N组相比,M组平衡木得分显著降低(P<0.05);与M组比较,A、W两组平衡木得分显著升高(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组中缝背核神经元细胞凋亡显著升高(P<0.05);与M组比较,A、W两组中缝背核神经元细胞凋亡显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组血浆中降钙素基因相关肽(CGRP)水平显著降低,内皮素(ET)-1、血栓素(TXB)2、神经肽(NP)Y水平显著升高(P<0.05);与M组比较,S、W两组血浆中CGRP水平显著升高,ET-1、TXB2、NPY水平显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组脑组织中TLR4蛋白表达显著升高(P<0.05);与M组比较,A、W两组脑组织中TLR4蛋白表达显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);T组与W组相比无明显差异(P>0.05);U组比T组明显降低(P<0.05)。结论针灸可显著抑制颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性并有效调控血管活性物质水平,其作用机制可能与抑制TLR4炎症信号通路有关。

芒硝外敷联合乌司他丁对胰腺炎大鼠肠屏障功能、胰腺细胞活性及PI3K/Akt/mTOR信号的影响

目的探讨芒硝外敷联合乌司他丁对胰腺炎大鼠肠屏障功能、胰腺细胞活性及PI3K/Akt/mTOR信号的影响。方法选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常(N)组,模型(M)组,芒硝外敷(G)组,乌司他丁(U)组,芒硝外敷+乌司他丁(O)组,每组10只,对M组、G组、U组、O组采用开腹经胰胆管逆行性注射5%牛黄胆酸钠法建立胰腺炎模型,N组不建立该模型,建模成功后,对G组腹部给予芒硝外敷,对U组腹腔注射乌司他丁5万U/kg,对O组腹部给予芒硝外敷和腹腔注射乌司他丁5万U/kg,N组、M组同期给予腹腔注射同体积生理盐水,HE法检测胰腺组织病理形态,电镜检测肠屏障功能,TUNEL法检测胰腺细胞凋亡,免疫印迹法检测PI3K/Akt/mTOR信号相关蛋白表达。结果与N组相比,M组可见胰腺组织明显病理变化及肠屏障功能损伤,与M组比较,G组、U组、O组病理形态及肠屏障功能明显改善,且O组改善最为明显;与N组相比,M组大鼠肠粘膜损伤程度、胰腺组织中PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著升高,胰腺细胞凋亡水平显著降低(均P<0.05),与M组比较,G组、U组、O组大鼠肠粘膜损伤程度、胰腺组织中PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著降低(均P<0.05),胰腺细胞凋亡水平显著升高(P<0.05),且U组与G组相比差异无统计学意义(P>0.05),O组比U组变化明显(P<0.05)。结论芒硝外敷联合乌司他丁可显著改善胰腺炎大鼠肠屏障功能及胰腺细胞活性,并显著抑制PI3K/Akt/mTOR信号。

LncRNA HAGLR靶向miR-143/Hedgehog信号通路对HPV16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制

目的 研究LncRNA HAGLR靶向miR-143/刺猬因子(Hedgehog)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制。方法 CaSki细胞购自美国标准生物品收藏中心。选取宫颈癌患者的癌组织(符合宫颈癌确诊标准)与癌旁5 cm宫颈组织标本各10例。将LncRNA HAGLR转染到宫颈癌细胞中后分为宫颈癌组、NC组及转染组。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-143水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western印迹检测音猬因子重组蛋白(Shh)、神经胶质瘤相关基因同源蛋白(Gli)1蛋白水平。双荧光素酶报告检测LncRNA HAGLR、miR-143、Shh、Gli1靶向。结果 宫颈癌组织中LncRNA HAGLR表达明显高于在癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌组与NC组各指标对比无明显差异(P>0.05)。与NC组相比,转染组LncRNA HAGLR、增殖能力、Shh、Gli1水平明显降低,miR-143、凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 LncRNA HAGLR靶向升高miR-143及抑制Hedgehog信号通路可降低HPV16/18感染的宫颈癌细胞的增殖并诱导凋亡。

神经干细胞活性因子红景天苷复合物纳米微脂囊的备制及其特性

文旨在探讨利用薄膜分散技术获得高效、稳定、可控的红景天苷复合物(HGF-SA-CS-NPs)。方法 利用粒度、粒径分散系数、Zeta电位和包裹率等技术参数,构建出具有良好功能和稳定结构的hgf-sa-cs-nps壳聚糖胶囊,从而实现对hgf-sd在神经系统内的有效应用。经过正交试验,我们发现,在研究中,将卵磷脂、胆酸钠的质量比调整到6:1,以及将卵磷脂、神经干细胞活性因子、红景天苷的质量比调整到10:1:1,以及将探头的超声时间调整到15min,都是获得优良效果的关键因素。结果 研究表明,HGF-Sd柔性纳米脂质体的包装密度在84.54±1.73之间,载药量在25.19±1.19之间,其外观呈现出类似圆柱的颗粒,其平均直径约为175nm,而其zeta电位则在-78.9mV左右。结论 该产品的设计与生产技术十分成熟,其良好的反馈机理及良好的抑菌效果,使其成为一种理想的新型药物载体,以期达到更佳的治疗效果。

基于改进模糊神经网络的细胞活性预测

针对细胞活性的预测问题,提出了一种利用自适应差分进化算法优化的模糊神经网络(ADE-FNN)预测模型。首先,通过模糊化处理细胞培养过程中的多种影响因素(如培养基成分、温度、pH值等),将这些因素作为模糊神经网络的输入。然后,利用已有的细胞活性数据对模型进行训练,优化网络参数。经过多次迭代和调整,模型逐渐学习到输入与输出之间的复杂映射关系。最后,利用细胞活性仿真实验验证所提ADE-FNN算法的性能。结果表明,基于模糊神经网络的细胞活性预测模型具有较高的预测精度和泛化能力。与传统的统计方法相比,该模型能够更好地处理数据中的不确定性和噪声,从而提供更准确的预测结果。此外,该模型还具有较好的可解释性,有助于深入理解细胞活性的影响因素及其作用机制。

Ngn2调节Nrf2/HO-1对脑缺血模型大鼠脑微结构、角质细胞活性的影响

背景:研究显示,血红素氧化酶1(heme oxidase-1,HO-1)在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用;核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid2-related factor2,Nrf2)能减轻脑缺血再灌注损伤,其作用是通过调控下游抗氧化蛋白实现的;推测Nrf2/HO-1在脑部疾病中均有一定的调控作用。目的:探究神经源素2(neurogenin 2,Ngn2)通过调节Nrf2/HO-1对脑缺血大鼠脑微结构、角质细胞活性的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠55只,随机取10只为健康组不进行干预;其余大鼠建立脑缺血模型,将建模成功的40只大鼠随机分为4组:其中模型组大鼠脑内注射生理盐水;Ngn2组大鼠脑内注射Ngn210 mg/kg;Nrf2/HO-1组脑内注射HO-1及Nrf2激动剂莱菔硫烷各10 mg/kg;联合调节组脑内注射Ngn2并联合Nrf2/HO-1组用药,均连续给药3 d。分数各向异性图像观察脑微结构,苏木精-伊红染色观察脑组织的病理形态,TUNEL法检测神经胶质细胞凋亡,免疫印迹和PCR分别检测Nrf2、HO-1的蛋白及mRNA表达。结果与结论:(1)与健康组比较,模型组大鼠脑组织中梗死灶周围皮质、梗死核心相对分数各向异性值表达较低(P<0.05);与模型组比较,Ngn2组及Nrf2/HO-1组上述表达升高(P<0.05);联合调节组上述表达高于Ngn2组及Nrf2/HO-1组(P<0.05);(2)模型组大鼠大量损伤神经元,细胞稀疏,排列紊乱,大量浸润;Ngn2组与Nrf2/HO-1组损伤侧神经元好转,仍见神经细胞缺失紊乱及细胞黏附;联合调节组脑组织神经细胞坏死减轻,浸润改善;(3)与健康组比较,模型组大鼠神经胶质细胞凋亡较高(P<0.05);与模型组比较,Ngn2组及Nrf2/HO-1组神经胶质细胞凋亡降低(P<0.05);联合调节组神经胶质细胞凋亡低于Ngn2组及Nrf2/HO-1组(P<0.05);(4)与健康组比较,模型组大鼠脑组织Ngn2mRNA及Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达较低(P<0.05);与模型组比较,Ngn2组、Nrf2/HO-1组Ngn2 mRNA及Nrf2、HO-1的蛋白和mRNA表达升高(P<0.05);联合调节组Ngn2 mRNA及Nrf2、HO-1的蛋白和m RNA表达高于Ngn2组及Nrf2/HO-1组(P<0.05);(5)结果说明,Ngn2通过调节Nrf2/HO-1对脑缺血大鼠产生保护作用,其机制可能与改善脑微结构、角质细胞活性以及增强Nrf2、HO-1表达等具有一定相关性。

依那普利叶酸干预下肢静脉栓塞模型大鼠血管内皮细胞活性及血管紧张素Ⅱ、血管紧张素转换酶的表达

背景:下肢静脉栓塞易引发静脉血栓、肺栓塞等并发症,如不及时治疗可致患者猝死,因此探寻一种有效的治疗手段就显得尤为重要。目的:探究依那普利叶酸对下肢静脉栓塞大鼠血管内皮细胞活性及血管紧张素Ⅱ、血管紧张素转换酶水平的影响。方法:选取40只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、利伐沙班组及依那普利叶酸组,每组10只,后3组采用改良Reyers法建立下肢静脉栓塞模型,建模成功后,利伐沙班组给予30 mg/kg的利伐沙班灌胃,依那普利叶酸组给予20 mg/kg的马来酸依那普利叶酸片灌胃,正常组、模型组同期灌胃同体积生理盐水,持续30 d。给药过程中应用Tarlov评分评价大鼠下肢运动功能;给药结束后采用苏木精-伊红染色法检测血管组织病理形态,Hladovec法和ELISA法检测内皮细胞活性相关指标,均相竞争放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ水平,马尿酸法检测血管紧张素转换酶水平。结果与结论:(1)与正常组比较,模型组大鼠Tarlov评分、血清一氧化氮浓度明显降低(P<0.05),血清中循环内皮细胞个数、内皮素1、肝细胞生长因子、血管紧张素转换酶、血浆中血管紧张素Ⅱ水平显著升高(P<0.05);(2)与模型组比较,利伐沙班组、依那普利叶酸组大鼠Tarlov评分、血清一氧化氮浓度明显升高(P<0.05),血清中循环内皮细胞个数、内皮素1、肝细胞生长因子、血管紧张素转换酶、血浆中血管紧张素Ⅱ水平显著降低(P<0.05),且依那普利叶酸组效果更显著(P<0.05);(3)正常组大鼠血管结构清晰完整,内膜完整;模型组血管壁组织疏松,水肿增厚,可见大量血栓形成,机化明显;与模型组相比,利伐沙班组、依那普利叶酸组血管形态有所改善,血管壁结构基本完整,可见部分血管内皮细胞再生,且依那普利叶酸组比利伐沙班组改善明显;(4)提示依那普利叶酸对下肢静脉栓塞大鼠具有显著治疗效果,可有效改善血管内皮细胞活性,降低血管紧张素Ⅱ、血管紧张素转换酶表达水平。

沉默miR-146a对颈动脉狭窄模型大鼠血管平滑肌细胞活性的影响及机制

目的 探究沉默微小RNA-146a(miR-146a)对颈动脉狭窄模型大鼠血管平滑肌细胞活性的影响及机制。方法 48只SPF级SD大鼠平均分为4组,其中空白组不做任何处理,模型组、过表达组、沉默组构建颈动脉狭窄模型,做miR-146a慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-146a基因表达量,采用流式细胞仪检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)、同型半胱氨酸(Hcy),四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测血管平滑肌细胞增殖水平,采用细胞划痕实验检测血管平滑肌细胞迁移能力,采用Western印迹法检测L型钙通道蛋白(CaV1.2)、CaV1.3及Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路蛋白表达量。结果 与过表达组相比,沉默组miR-146a基因表达量、增殖数、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达量明显降低(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组CaV1.2、CaV1.3、NMDA、Hcy表达水平、迁移数明显升高(P<0.05)。结论 沉默miR-146a可能作用于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,调控TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量,显著提升颈动脉狭窄模型大鼠血管平滑肌细胞活性。

糖尿病合并颈动脉狭窄患者中AngⅡ调节T细胞活性的相关研究

目的 本研究主要探究在2型糖尿病合并颈动脉狭窄患者中T细胞活性与AngⅡ水平的相关性。方法选择我院200例患者和30例健康体检者作为研究对象,分为CA组,100例2型糖尿病合并颈动脉狭窄患者;T2DM组,100例2型糖尿病患者;对照组,30例健康体检者。收集病例资料并整理记录,检测T细胞比例,检测其转录因子T-bet、GATA3和RORγt以及其特征因子IFN-γ、IL-4和IL-17的变化;检测健康体检者外周血单核细胞中T细胞的变化。加用AngⅡ刺激剂和AngⅡ拮抗剂后观察T细胞的变化。结果 Th1和Th17阳性细胞数,其转录因子以及其表达因子在CA组明显高于T2DM组和对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。健康体检者的外周血细胞在AngⅡ刺激剂作用下,效应性T细胞活性和T细胞的特征因子以及转录因子的表达明显增多,差异有统计学意义(P <0.05),而在AngⅡ拮抗剂作用下效应性T细胞活性和相关的表达因子表达明显减少,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 通过调整T细胞活性和其表达因子,可能促进2型糖尿病的颈动脉狭窄形成和发展。AngⅡ可以调节T细活性及相关因子的表达,会导致合并高AngⅡ水平的T2DM患者发生颈动脉粥硬化。

基于蛋白质组学研究冷冻干燥对副干酪乳杆菌PC-01细胞活性的影响

目的:从蛋白组学的角度剖析冷冻干燥对副干酪乳杆菌PC-01菌体细胞存活的影响。方法:设定培养温度分别为32.5℃与37℃,对副干酪乳杆菌PC-01高密度发酵并冷冻干燥。取冻干前与冻干后的样品,利用TMT技术测定蛋白质含量,对鉴定出的差异蛋白进行KEGG功能注释与富集分析,研究蛋白的差异表达对两个试验组菌体存活的影响。结果:32.5℃试验组冷冻干燥前、后的活菌数均显著高于37℃试验组,上调蛋白都集中于碳水化合物代谢与膜运输途径上,且冻干前、后差异倍数偏大的蛋白有醛酮还原酶、4-草酰巴豆酸互变异构酶、二肽酶、GNAT家族N-乙酰转移酶、磷酸核糖甘氨酰胺甲酰转移酶等蛋白。结论:冷冻干燥前、后副干酪乳杆菌PC-01内部分子发生变化,据关键差异蛋白的功能,冷冻干燥主要是从抗冷冻性、膜运输能力以及细胞代谢能力等方面影响副干酪乳杆菌PC-01菌株细胞存活。研究结果为副干酪乳杆菌PC-01的工业化生产提供了参考。

采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞活性及瞬时外向钾电流观察

目的通过观察采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞形态、活性及瞬时外向钾电流,以验证胶原酶Ⅱ循环灌流消化法对心肌细胞急性分离的效果。方法利用自制Langerdorff灌流装置进行主动脉逆行灌流,胶原酶Ⅱ循环灌流消化,分离成年大鼠单个心肌细胞;利用逐步梯度复钙法选出耐钙心肌细胞;在共聚焦显微镜下观察单个心肌细胞的形态、舒缩能力,并用全细胞膜片钳记录心肌细胞瞬时外向钾电流。结果胶原酶Ⅱ循环灌流消化法分离大鼠心肌细胞可获取90%质量良好的细胞,分离出来的心肌细胞边缘锐利、横纹清晰,折光性强,舒缩规律;复钙后仍有60%质量良好的活细胞;用全细胞膜片钳可记录到标准的瞬时外向钾电流。结论采用胶原酶Ⅱ循环灌流消化法急性分离的成年大鼠心肌细胞活性较好且耐钙,可记录到标准的瞬时外向钾电流。