基于LPS诱导RAW 264.7巨噬细胞炎症模型的榴莲壳多酚抗炎作用及其分子机制

采用80%甲醇溶剂提取榴莲壳中多酚组分,并测定其总酚和总黄酮含量,基于体外化学方法和LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症模型,探究榴莲壳的抗氧化和抗炎活性及其分子机制。结果表明,榴莲壳提取物富含多酚类化合物,具有较强的体外抗氧化活性,且在LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞炎症模型中能降低一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的表达,减少NO和ROS的产生,并降低炎症细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)在基因和蛋白水平上的表达,从而展现较强的抗炎活性。其内在的分子机制可能是通过抑制IκB-α和p65蛋白磷酸化,降低NF-κB信号通路的表达,减少机体的炎症损伤。

黄芩苷黄芩素小檗碱对LLC-PK1细胞炎症模型中TNF-α IL-1β及IL-6表达的影响

研究中药黄芩苷、黄芩素、小檗碱对细菌脂多糖(LPS)诱导的猪肾小管上皮细胞(LLC-PK1)中肿瘤坏死因子-α(TNG-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。用噻唑蓝比色法(MTT法)筛选LPS、黄芩苷、黄芩素和小檗碱对细胞作用的最佳浓度,用RT-PCR检测TNF-α、IL-1βmRNA表达,以确定细胞炎症模型是否建立成功;炎症模型建立后,用最佳浓度的黄芩苷、黄芩素和小檗碱分别作用细胞24h,用qPCR检测TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA的表达量。结果LPS刺激组细胞TNF-α、IL-1βmRNA表达量极显著高于正常对照组(P<0.01),黄芩苷、黄芩素和小檗碱作用组细胞TNF-α、IL-1β及IL-6mRNA表达量比LPS刺激组显著降低(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05)。上述结果表明,黄芩苷、黄芩素和小檗碱通过抑制炎症细胞TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达,从而发挥抗炎作用。

壮骨健膝方对脂多糖诱导兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响

目的探讨壮骨健膝方对兔滑膜成纤维细胞炎症模型的影响及作用机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激兔滑膜成纤维细胞(FLS)建立炎症模型,筛选壮骨健膝方干预炎症模型的最佳条件(浓度10%,时间48h)后,采用随机数字表法随机分为空白组、模型组和壮骨健膝方组,分别给予相应条件干预后采用ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量,qPCR法检测各组细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、增殖细胞核抗原(PCNA)、IκBα、NF-κB p65 mRNA表达,Western blot法检测各组细胞中PCNA、核因子κB抑制因子α(IκBα)及核内核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达。结果与空白组比较,模型组IL-1β、TNF-α、IL-6含量,IL-1β、TNF-α、IL-6、PCNA、NF-κB p65 mRNA及核内NF-κB p65蛋白表达均显著升高(P均<0.05),IκBαmRNA及蛋白表达显著降低(P均<0.05);与模型组比较,壮骨健膝方组IL-1β、TNF-α、IL-6含量,IL-1β、TNF-α、IL-6、PCNA、NF-κB p65 mRNA及核内NF-κB p65蛋白表达均显著降低(P均<0.05),IκBαmRNA及蛋白表达显著升高(P均<0.05)。结论壮骨健膝方可减轻LPS诱导的兔FLS炎症反应并能抑制FLS的过度增殖,从而发挥“除痹”功效,其部分作用机制与抑制兔FLS细胞中NF-κB信号通路激活有关。

野菊花水提物对RAW264.7炎症细胞模型的抗炎作用及其机制

目的建立以脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7巨噬细胞为模型,探讨野菊花提取液(CID)通过核转录因子(NF-κB)信号通路发挥抗炎活性的作用及其分子机制。方法以噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度CID对RAW 264.7巨噬细胞活性的影响以筛选适宜的实验浓度;分别采用Griess法和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定50、100、200μg·mL^(-1) CID干预后各组细胞中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析各组中环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的相对表达水平;免疫印迹实验(WB)观察各组中nuclear factor-kappa B p65(NF-κB p65)、inhibitor kappa B(IκB-α)和磷酸化IκB-α(p-IκB-α)的蛋白表达。结果50~200μg·mL^(-1)的CID可显著降低LPS诱导RAW264.7巨噬细胞中NO、TNF-α和IL-6的生成量(P<0.01),并能下调COX-2和iNOX mRNA的相对表达(P<0.01)、下调p-IκB-α、总的NF-κB p65、细胞核NF-κB p65的蛋白相对含量(P<0.01),并上调IκB-α、细胞质NF-κB p65的相对含量(P<0.01)。结论CID可有效降低LPS诱导RAW 264.7巨噬细胞的炎症因子释放,其机制可能与通过减少TNF-α等关键蛋白表达以及通过抑制NF-κB等炎症信号通路激活来抑制炎症发生有关。

淫羊藿苷对抑郁症模型小胶质细胞表型转化的调控作用

探索淫羊藿苷抗抑郁的作用机制,将SPF级KM小鼠分为空白组、模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)、淫羊藿苷高(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用56 d慢性不可预知温和应激建立抑郁症模型。造模第1 d开始灌胃给予各组小鼠相应药物,连续56 d。于给药后第53~56 d,进行行为学测试。末次给药后,取材。酶联免疫吸附剂实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测脑组织匀浆白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)检测脑组织中IL-6、IL-10、诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、分化簇206(cluster of differentiation 206,CD206)mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测脑组织iNOS、CD206蛋白表达。体外培养小鼠小胶质细胞(BV-2),采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测淫羊藿苷的细胞毒性。BV-2细胞暴露于100μg/mL脂多糖及15μg/mL、25μg/mL的淫羊藿苷24 h后,收集细胞。免疫荧光技术检测细胞iNOS、CD206蛋白表达。研究结果表明,慢性不可预知温和应激致抑郁症模型制备成功,淫羊藿苷可降低抑郁症小鼠脑组织IL-6水平及IL-6、iNOS mRNA表达,升高脑组织IL-10、5-HT、DA、NE水平及IL-10、CD206 mRNA表达;降低脑组织iNOS蛋白,升高CD206蛋白表达;改善模型小鼠抑郁症样行为。淫羊藿苷可降低LPS刺激的BV-2细胞iNOS蛋白表达,升高CD206蛋白表达。结果表明,淫羊藿苷抑制小胶质细胞M1表型转化,促进M2表型转化,从而改善模型小鼠抑郁样行为。

槐定碱、苦参碱和苦豆碱对LPS诱发结肠上皮细胞炎症模型中细胞因子IL-6和TNF-α水平的影响

目的:构建结肠上皮细胞炎症模型,探讨槐定碱、苦参碱和苦豆碱对细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法:将细胞接种12孔板中,每孔接种肠上皮细胞株IEC-6 2×105个细胞。细菌脂多糖(LPS,1mg·L-1)干预生长良好的IEC-6细胞12 h,建立细胞炎症模型。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测3种生物碱不同浓度对炎症细胞增殖的影响;ELISA法检测给药后细胞上清中IL-6,TNF-α的变化;免疫印迹法检测细胞内IL-6及TNF-α蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞上清中IL-6,TNF-α水平显著升高,LPS(1 mg·L-1)干预12 h后,IL-6,TNF-α含量分别为(1 899.68±45.80),(148.67±5.93)ng·L-1。苦豆碱、槐定碱和苦参碱均可有效减弱LPS诱导的结肠上皮细胞损伤。当生物碱浓度为100μmol·L-1时,槐定碱、苦参碱和苦豆碱均可提高LPS损伤细胞的活性,细胞存活率分别从80.47%提高为91.96%,92.40%,97.23%。此外,这3种生物碱可降低IL-6和TNF-α的含量及其在细胞内的表达。结论:槐定碱、苦参碱和苦豆碱3种生物碱均可通过降低IL-6和TNF-α活性发挥抗炎作用。其中,苦豆碱的抗炎作用最佳。

基于核因子-κB通路研究复方柴芩退热颗粒对脂多糖介导细胞炎症模型的作用

目的:研究复方柴芩退热颗粒对脂多糖介导炎症细胞模型的作用。方法:建立脂多糖介导RAW264.7细胞炎症模型,分为空白组,模型组,复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组,分别使用复方柴芩退热颗粒高、中、低剂量(21.12、10.56、5.28mg/m L)进行药物干预培养。酶联免疫法检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-10的含量。蛋白印迹法检测核转录因子(NF)-κB P-IκB表达水平。结果:复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组TNF-α、IL-1β及IL-6水平均显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且呈浓度依赖性降低;IL-10水平均显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),但无浓度依赖性,其中复方柴芩退热颗粒高、中浓度组IL-10水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。复方柴芩退热颗粒高、中、低浓度组P-IκB表达水平均显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),且呈浓度依赖性降低。结论:复方柴芩退热颗粒具有显著抗炎作用,不仅能够显著降低LPS诱导细胞炎症模型P-IκB及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,同时还能升高IL-10的水平,其作用机制可能通过抑制IκB的磷酸化而阻断NF-κB信号通路有关。

基于NF-κB信号通路的高通量药物筛选细胞炎症模型的建立

目的建立均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度。观察不同细胞密度(每孔5,25,50,100,150 k)、不同刺激因子(TNF-α、LPS)、不同作用时间(10,30,60 min)等条件对支气管平滑肌细胞(BSMC)、支气管上皮细胞(HBE) NF-κB磷酸化的影响,建立炎症细胞模型及HTRF测定NF-κB的方法。结果采用HBE细胞,细胞密度为每孔10 k,刺激因子TNF-α(10 ng·mL^(-1))刺激细胞,刺激10 min建立炎症细胞模型,可使细胞中NF-κB磷酸化水平达到52.6%,与正常对照组(14.2%)相比,有明显升高。结论成功建立了快速、特异性高、操作简便的HTRF测定细胞炎症模型中NF-κB磷酸化程度的方法,为气道炎症药物筛选研究提供了依据。

RAW 264.7细胞炎症模型优化及异喹啉类生物碱抗炎活性研究

目的对RAW 264.7细胞炎症模型进行优化,并考察异喹啉类生物碱的抗炎活性。方法采用内毒素脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应,以细胞上清液中炎症因子分泌水平为指标,优化LPS诱导浓度、时间及阳性药地塞米松(DEX)孵育时间,并考察异喹啉类生物碱的抗炎活性。结果RAW 264.7细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌水平随LPS诱导浓度、时间增加而升高,但当LPS质量浓度超过100 ng/mL、诱导时间超过12 h后,TNF-α分泌水平趋于平缓;LPS为20 ng/mL、诱导12 h的TNF-α分泌水平明显升高。DEX对TNF-α分泌抑制作用随孵育时间延长而增强,但孵育4 h后,TNF-α分泌抑制作用趋于平缓。异喹啉类生物碱呈现不同程度TNF-α分泌抑制作用,其抑制活性与其季胺型母核结构及R基团烷氧基取代等密切相关。结论LPS为20 ng/mL、诱导12 h能较好诱导RAW 264.7细胞炎症反应;异喹啉类生物碱的TNF-α分泌抑制作用与其季胺型母核结构、R基团取代等密切相关。

榆黄菇多糖对体外诱导炎症模型细胞因子的分泌及一氧化氮合酶(NOS)的影响

以榆黄菇为原料,采用水提醇沉法提取榆黄菇粗多糖,Sevage法去除蛋白,利用DEAE-Cellulose离子交换和Superdex-75凝胶层析方法纯化获得PSI和PSII两个组分;通过脂多糖(LPS)刺激建立炎症模型;利用MTT法筛选出两个多糖的优势浓度,采用吸光度分析法测定一氧化氮合酶(NOS)的活力、酶联免疫吸附试剂盒测定细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平来评价多糖对RAW264.7细胞的抗炎作用。研究结果显示,LPS浓度为5μg/mL时,细胞炎症水平达到最高,在模型的基础上筛选出PSI的优势浓度为500μg/mL、PSII的优势浓度为200μg/mL;与LPS模型组相比较,PSI对NOS活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平抑制率分别为37.54%、28.84%、28.27%和30.25%,PSII对NOS活性、IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平抑制率分别为51.24%、37.56%、31.35%和32.67%。研究证实,榆黄菇多糖PSI和PSII对LPS诱导RAW264.7炎症细胞具有缓解作用,主要表现在抑制炎症细胞因子的分泌水平、促进细胞增殖、降低巨噬细胞的吞噬能力等方面,而对比PSI来说,PSII对于一氧化氮合酶(NOS)以及细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平的抑制力要更强,具有更好的抗炎效果。

金银花、连翘对成纤维上皮细胞炎症反应模型的作用

目的研究金银花和连翘抗炎症反应作用。方法将金银花和连翘水煎液过滤除菌,与金黄色葡萄球菌滤过液混合添加到培养的上皮细胞培养基中复合培养,观察细胞的形态变化。结果加有金银花的炎性反应细胞模型细胞形态规整,生长旺盛,与对照组基本相同;加有连翘的炎症反应细胞模型细胞表现出炎症反应,随后出现大量的炎性细胞;加有金银花和连翘的炎症组细胞形态也规整,但较金银花组形态较差。结论金银花在体外具有很强的抗炎性反应作用,连翘在体外的抗炎性反应作用很弱。利用上皮细胞炎症模型研究中药的抗炎症反应是可行的,并为中药作用原理的研究奠定了基础。

基于炎症细胞模型的草珊瑚抗炎活性部位筛选

目的探讨草珊瑚不同萃取部位的抗炎作用。方法采用系统溶剂法按极性由低到高分离得到草珊瑚石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水提取物4个部位,建立RAW264.7细胞炎症模型,对各部位抑制细胞炎症因子NO表达进行研究,通过MTT法测定各部位对RAW264.7细胞增殖的影响及评价细胞毒性分极。结果通过RAW264.7炎症模型的筛选,草珊瑚乙酸乙酯部位(100～200μg/mL)和多糖部位(100～400μg/mL)均可显著抑制模型细胞NO的表达(P<0.01),并可显著抑制RAW264.7细胞增殖水平,且其细胞毒性分级均为1级或以下。结论草珊瑚多糖和乙酸乙酯部位是草珊瑚抗炎作用的主要活性部位。

基于炎症细胞模型的灰毡毛忍冬抗炎活性研究

目的探讨灰毡毛忍冬不同极性萃取部位的抗炎活性。方法采用系统溶剂法按极性由低到高分离得到灰毡毛忍冬石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇、水等5个极性萃取部位;建立LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,对各部位抑制细胞炎症因子NO表达进行研究;根据2010版药典山银花中绿原酸含量的测定方法,测定各个部位绿原酸的含量。结果随着萃取部位样品浓度的增加,抗炎活性也随之增加;在同一浓度下,随着各个部位极性从大到小,五个萃取部位的抗炎活性逐渐增加;此外,随着绿原酸含量的逐渐减小,抗炎活性逐渐增加。结论灰毡毛忍冬各极性萃取部位对于炎症模型NO的表达均有显著的抑制作用。

家兔小肠上皮细胞LPS炎症细胞模型的构建

试验采用Ⅰ型胶原酶(collagenaseⅠ)消化法分离培养刚出生未哺乳仔兔原代IEC细胞,并进行纯化和鉴定,以及使用LPS诱导构建纯化后的F3代IEC炎症细胞模型。结果表明:采用胶原酶Ⅰ(0.2%)消化法可以成功分离培养原代IEC,经纯化和CK-18单克隆抗体鉴定纯度可达95%以上。终浓度1000ng/mL的LPS作用IEC培养体系24h,可使IL-1β、TNF-α的含量显著高于对照组(P<0.01)。试验结论:1000ng/mL的LPS诱导家兔IEC细胞24h,可成功构建IEC炎症细胞模型,为研究肠道和IEC免疫调控机制,提供了合适的细胞模型。

基于NLRP3/Caspase-1通路探讨薏苡仁多糖对溃疡性结肠炎体外炎症模型的干预作用及机制

目的:从炎症理论角度出发,探讨薏苡仁多糖(Coixan)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)体外炎症模型的干预作用及其机制。方法:体外培养NCM460细胞,采用不同剂量(0、2.5、5、10、20和40μg/mL)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导NCM460细胞,筛选出最佳诱导剂量(20μg/mL);用不同浓度(0、5、10、20、40和80μg/mL)的Coixan诱导NCM460,筛选出最佳促增殖浓度(10、20、40μg/mL)。实验随机设为空白组、模型组(LPS诱导)、LPS+Coixan低、中、高剂量(10、20、40μmol/L)组,LPS+柳氮磺吡啶(sulfasalazine,SASP)(200μg/mL)组,除空白组外用LPS(20μg/mL)刺激48 h建立UC体外细胞炎症模型后,分别以薏苡仁多糖及SASP进行48 h干预治疗后,ELISA法检测细胞上清液中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;免疫荧光检测焦亡相关蛋白Caspase-1荧光的表达量;采用qRT-PCR技术检测各组NCM460中NLRP3/Caspase-1通路中焦亡相关NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达水平的影响;Western blot技术检测各组焦亡相关NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平的影响。结果:与0μg/mL比较(20μg/mL)LPS诱导48 h对NCM460细胞生长抑制较为适中(P<0.01),同时,干预48 h时,炎症因子IL-1β、TNF-α含量明显升高(P<0.01),因此,选择(20μg/mL)LPS诱导48 h作为造模方式。与0μmol/L的Coixan相比,当Coixan浓度为10、20,40μmol/L时,细胞存活率增高,特别是Coixan浓度为10、20μmol/L(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组中炎症因子IL-1β、TNF-α的含量,NLRP3、Caspase-1β、IL-1β蛋白和NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中细胞IL-1β、TNF-α分泌量减少,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白Caspase-1表达水平明显下调(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,低、中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中NLRP3、Caspase-1蛋白和基因表达明显降低(P<0.05或P<0.01),药物干预组中,高剂量组、柳氮磺吡啶组中GSDMD-N、IL-1β基因表达均显著降低(P<0.01);与模型组比较,药物干预组中,中、高剂量组和柳氮磺吡啶组中焦亡相关蛋白(NLRP3,Caspase-1,IL-1β)表达水平明显下调(P<0.01)。结论:薏苡仁多糖可能通过下调焦亡相关因子NLRP3、Caspase-1、GSDMD-N、IL-1β的表达水平,从而抑制人结肠上皮细胞的细胞焦亡,发挥人结肠上皮细胞保护作用。

康复新在巨噬细胞炎症反应中的抗炎作用及其机制

目的观察康复新在巨噬细胞炎症反应中的抗炎作用,并探讨其可能的作用机制。方法将培养好的小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为6组:A组(加入DMSO)、B组(加入DMSO)、C组(加入炎症抑制药物BAY11-7082)、D组(加入1%康复新)、E组(加入0.1%康复新)、F组(加入0.01%康复新),药物干预后继续培养1 h,A组加DMEM培养液,其余各组加入LPS(100μg/L)诱导细胞产生炎症反应。造模后4、8 h收集细胞,用qRT-PCR法检测细胞中白细胞介素(IL)6、肿瘤坏死因子(TNF)α、前列腺素内过氧化物合酶(PTGS)2的mRNA表达。结果造模后4、8 h,与A组比较,B组IL-6、TNF-α、PTGS2的mRNA表达水平均升高(P均<0.05);与B组比较,C组IL-6、TNF-α、PTGS2的mRNA表达均降低(P均<0.05)。D组在收集细胞时即观察到细胞全部死亡。与B组比较,E、F组IL-6、TNF-α的mRNA表达升高,PTGS2的mRNA表达降低(P均<0.05);与C组比较,E、F组IL-6、TNF-α的mRNA表达差异有统计学意义(P均<0.05),而PTGS2的mRNA表达差异无统计学意义(P均>0.05)。康复新的浓度、作用时间对IL-6、TNF-α、PTGS2的mRNA表达无影响。结论康复新对巨噬细胞炎症反应有抑制作用,该作用不是通过抑制IL-6、TNF-α等致炎因子的表达,而是与降低PTGS2的表达有关。

连翘有效成分对炎症模型的作用

目的:研究连翘提取物对细胞炎症模型的抗炎作用。方法:将连翘提取物按不同浓度作用于细胞炎症模型,观察细胞的形态变化,利用MTT法测定各孔的光吸收值。结果:连翘苷和连翘黄酮对照组细胞形态镜检观察未见明显变化,OD值略比空白对照组低;黄酮对照组细胞几乎全部破碎;不同浓度的大肠杆菌对照组细胞破裂、聚集成团,作用显著(P<0.05),且随着浓度的升高,对细胞形态的改变愈加显著。结论:连翘提取物对炎性细胞有不同程度保护,与同浓度菌液对照组相比,保护作用显著(P<0.05),在100μL浓度菌液中保护作用尤甚,具有一定的抗炎作用。

灰毡毛忍冬对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症因子的影响

采用LPS刺激巨噬细胞RAW264.7建立体外的炎症模型,探讨灰毡毛忍冬不同极性萃取部位抗炎活性和作用机制。用MTT法检测灰毡毛忍冬不同极性萃取部位对RAW264.7细胞的毒性作用;ELISA法检测灰毡毛忍冬不同极性萃取部位对IL-6和TNF-α表达情况的影响;结果显示:灰毡毛忍冬不同极性萃取部位在一定的剂量范围内均能抑制炎症因子IL-6和TNF-α表达,其中石油醚部位(100μg/m L)对IL-6表达量以及水部位(100μg/m L)对TNF-α表达量没有显著性的抑制作用,而乙酸乙酯部位对IL-6表达量和TNF-α表达量的抑制作用都最为明显。灰毡毛忍冬不同极性萃取部位都有抗炎活性,并且各个部位均有浓度依赖性。

脾多肽对幽门螺旋杆菌脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17的作用

目的研究脾多肽对幽门螺旋杆菌脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞炎症模型肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-17的作用。方法选取小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究载体,分为空白组、模型组、脾多肽高、中和低浓度组,共五组,每组设3个复孔。采用幽门螺旋杆菌LPS诱导建立炎症细胞模型,予脾多肽给药干预,以37℃及5%CO2的条件下培养3 h,取上清样品备测TNF-α;再培养3 h,取上清样品备测IL-1β、IL-6与IL-17。采用酶联免疫法检测TNF-α、IL-1β、IL-6与IL-17。结果幽门螺旋杆菌脂多糖可以诱导RAW264.7巨噬细胞炎症模型。药物干预3 h后,各组TNF-α水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),脾多肽高、中、低浓度组TNF-α水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。高浓度组TNF-α水平均明显低于中、低浓度组,差异有统计学意义(P<0.05)。药物干预6 h后,各组IL-1β、IL-6和IL-17水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。脾多肽高、中剂量组IL-1β、IL-6和IL-17水平均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脾多肽能够减少幽门螺旋杆菌LPS介导的RAW264.7炎症细胞模型分泌促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17,其不仅以浓度依赖降低TNF-α含量水平,还能在炎症早期抑制TNF-α,从而减轻炎症反应的发展。

基于网络药理学和实验验证研究柠檬精油缓解焦虑症的作用机制

基于网络药理学方法探讨柠檬精油(lemon essential oil,LEO)干预焦虑症的作用机制并进行实验验证。GC-MS测定LEO组成,从TCMSP平台挖掘LEO的作用靶点;利用OMIM、GeneCards数据库获得焦虑症靶点;利用Venny获得LEO-焦虑症的交集靶点,进行GO和KEGG富集;利用Cytoscape构建“成分-靶点-通路-疾病”网络,利用1-Click Docking对关键成分与靶点进行分子对接。利用细胞炎症模型进行验证。从构建的网络中得到LEO的19种活性成分如柠檬烯、α-松油醇、β-蒎烯、乙酸橙花酯、4-萜品醇等,通过作用于18个疾病靶点(占总靶点78.26%)如GABRA2、MAO、DRD1、GRIA2等,调控20条信号通路如神经活性配体-受体相互作用、羟色胺能突触、多巴胺能突触等。柠檬精油对DPPH、ABTS自由基有抑制作用,能降低由脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导HaCaT细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,降低炎症因子NO、TNF-α及IL-6水平。LEO通过多种有效成分多靶点调控多条信号通路降低细胞氧化应激、抑制炎症反应,从而干预焦虑症。