淫羊藿苷对抑郁症模型小胶质细胞表型转化的调控作用

探索淫羊藿苷抗抑郁的作用机制,将SPF级KM小鼠分为空白组、模型组、盐酸氟西汀组(10 mg/kg)、淫羊藿苷高(50 mg/kg)、低(25 mg/kg)剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用56 d慢性不可预知温和应激建立抑郁症模型。造模第1 d开始灌胃给予各组小鼠相应药物,连续56 d。于给药后第53~56 d,进行行为学测试。末次给药后,取材。酶联免疫吸附剂实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测脑组织匀浆白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)、五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)检测脑组织中IL-6、IL-10、诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、分化簇206(cluster of differentiation 206,CD206)mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)检测脑组织iNOS、CD206蛋白表达。体外培养小鼠小胶质细胞(BV-2),采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测淫羊藿苷的细胞毒性。BV-2细胞暴露于100μg/mL脂多糖及15μg/mL、25μg/mL的淫羊藿苷24 h后,收集细胞。免疫荧光技术检测细胞iNOS、CD206蛋白表达。研究结果表明,慢性不可预知温和应激致抑郁症模型制备成功,淫羊藿苷可降低抑郁症小鼠脑组织IL-6水平及IL-6、iNOS mRNA表达,升高脑组织IL-10、5-HT、DA、NE水平及IL-10、CD206 mRNA表达;降低脑组织iNOS蛋白,升高CD206蛋白表达;改善模型小鼠抑郁症样行为。淫羊藿苷可降低LPS刺激的BV-2细胞iNOS蛋白表达,升高CD206蛋白表达。结果表明,淫羊藿苷抑制小胶质细胞M1表型转化,促进M2表型转化,从而改善模型小鼠抑郁样行为。

基于单细胞测序数据分析养阴活胃合剂下调AQP3对MC细胞表型的影响及机制

目的 观察养阴活胃合剂对MC细胞(MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1恶性转化)增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,探讨其下调AQP3抑制IL-10/JAK1/STAT3信号通路激活进而阻断或逆转慢性萎缩性胃炎(CAG)病变的作用机制。方法 选取GEO数据库中的CAG单细胞转录组测序数据,绘制数据的表达矩阵。采用R语言的Seurat 4.3.0包进行处理后分群绘制UMAP可视化图谱。将MC细胞分为养阴活胃合剂组(YYHWM组)、AQP3低表达慢病毒转染组(AQP3低表达组)、养阴活胃合剂+AQP3高表达慢病毒转染组(YYHWM+AQP3高表达组)并以MC细胞和正常人胃黏膜上皮细胞GES-1分别作为模型组(MC组)和空白对照组(Control组)。采用平板克隆、划痕实验、Transwell及流式细胞术检测细胞表型变化情况,采用ELISA检测细胞培养上清IL-10表达水平,Western blot检测酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达水平。结果 单细胞测序数据集分析显示AQP3在CAG样本及上皮细胞群中表达升高,AQP3可能通过IL-10抗炎性信号通路影响胃癌前病变病理进程。与MC组相比,AQP3低表达组和YYHWM组细胞侵袭、迁移、增殖能力减弱,凋亡率增加,细胞培养上清中的IL-10水平降低,细胞中JAK1、STAT3蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01),YYHWM+AQP3高表达组差异均不显著(P>0.05)。结论 养阴活胃合剂可通过下调AQP3表达抑制IL-10/JAK1/STAT3信号通路激活进而减弱MC细胞侵袭、迁移及增殖能力,促进细胞凋亡进而阻断或逆转CAG病理进程。

基于平滑肌细胞表型转化角度探讨中医药治疗动脉粥样硬化进展

动脉粥样硬化是一种以纤维斑块和粥样斑块为主要病理特征的血管系统疾病。当纤维斑块或粥样斑块形成后,使动脉壁增厚、变硬,导致动脉管腔狭窄、弹性下降,甚至可导致急性冠状动脉综合征、缺血性脑卒中等并发症的发生,是多种心脑血管疾病的病理基础。血管平滑肌细胞主要环形分布于血管壁的中膜内,与血管的顺应性及弹性回缩密切相关,在生理情况下,血管平滑肌细胞具有收缩力强的特性,保持着低增殖、低迁移功能,在不同的环境条件影响下,血管平滑肌细胞会发生表型转化,从收缩表型向合成表型转化,促使平滑肌细胞由中膜迁移至内膜,随后在内膜中大量积聚并刺激结缔组织的形成,进而导致斑块失稳、管腔狭窄甚至斑块破裂等病理过程的发生。该文阐述了血管平滑肌与动脉粥样硬化发生发展的关系,并总结近十年中医药通过调控血管平滑肌细胞防治动脉粥样硬化的进展,旨在为中医药防治动脉粥样硬化提供更为可靠的理论依据。

不同中医证型非酒精性脂肪性肝病与外周血巨噬细胞表型的相关性研究

目的 探究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者中医证型与外周血巨噬细胞M1和M2表型的相关性。方法 选取2021年12月—2022年12月在黑龙江省中医医院肝胆脾胃二科门诊就诊并临床诊断为NAFLD的患者140例,根据中医辨证分型将患者分为湿浊内停组27例、肝郁脾虚组40例、湿热蕴结组32例、脾肾两虚组13例、痰瘀互结组28例。另从该院健康体检中心招募健康受试者15例作为健康受试组。检测各组受试者肝功能指标[血清谷丙转肽酶(ALT)、谷草转肽酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)]、血脂指标[三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]、血清炎症因子指标[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-4(IL-4)]、巨噬细胞表型、肝脏受控衰减参数(CAP),并经Pearson相关分析各组患者巨噬细胞表型与NAFLD病情的相关性。结果 与健康受试组相比,各中医证型组患者血清ALT、AST、GGT、ALP、TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-8水平及M1型巨噬细胞百分比、M1/M2比值、CAP均显著增高(P均<0.05),血清HDL-C、IL-10、IL-4水平和M2型巨噬细胞百分比均显著降低(P均<0.05)。不同中医证型患者血清ALT、AST、GGT、ALP、TG、IL-6、IL-8水平及M1型巨噬细胞百分比、CAP由低到高分别为肝郁脾虚组、脾肾两虚组、湿浊内停组、痰瘀互结组、湿热蕴结组,血清HDL-C、IL-10、IL-4水平及M2型巨噬细胞百分比由高到低分别为肝郁脾虚组、脾肾两虚组、湿浊内停组、痰瘀互结组、湿热蕴结组,血清TC和LDL-C水平由低到高依次为肝郁脾虚组、湿浊内停组、湿热蕴结组、脾肾两虚组、痰瘀互结组。相关性分析发现,血清ALT、AST、GGT、ALP、TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-8水平及CAP与M1型巨噬细胞百分比呈正相关(P均<0.05),与M2型巨噬细胞百分比呈负相关(P均<0.05);血清HDL-C、IL-10、IL-4水平与M1型巨噬细胞百分比呈负相关(P均<0.05),与M2型巨噬细胞百分比呈正相关(P均<0.05)。结论 NAFLD各中医证型中湿热蕴结型患者M1型巨噬细胞百分比最高,肝郁脾虚型患者M1型巨噬细胞百分比最低,而M2型巨噬细胞百分比规律与此相反,推测巨噬细胞极化参与NAFLD的发生和发展。

益气通络方对大鼠血管内膜增生、平滑肌细胞表型转化和增殖的影响

目的:探讨益气通络方对大鼠颈总动脉血管内膜增生(IH)、血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化和增殖的影响。方法:将36只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气通络方高、中、低剂量组和阿托伐他汀组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用球囊导管术建立大鼠左侧颈总动脉内膜增生模型,各组灌胃相应药物及蒸馏水14 d。采用HE染色法观察各组大鼠颈总动脉病理变化及血管内膜增生程度;采用免疫组化法和Western blot法检测各组大鼠颈总动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、骨桥蛋白(OPN)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组颈总动脉内膜增生明显,血管内膜面积(IA)、内膜厚度(IT)、内膜面积增生率(HRIA)和内膜厚度增生率(HRIT)均显著增加(P<0.01);颈总动脉VSMCs收缩表型α-SMA表达显著降低(P<0.05),合成表型标志物OPN和细胞增殖标志物PCNA表达显著增加(P<0.01)。与模型组比较,益气通络方高剂量组及阿托伐他汀钙片组IA、IT、HRIA、HRIT均显著降低(P<0.01);阿托伐他汀组OPN表达显著降低;益气通络方中、高剂量组ɑ-SMA表达显著升高(P<0.01),PCNA表达显著降低(P<0.05)。结论:益气通络方能够有效改善SD大鼠血管内膜增生,可能与调控VSMCs表型转化及增殖有关。

频繁发作慢性阻塞性肺疾病患者Treg/Th17变化及炎症细胞表型特征差异分析

目的探讨频繁发作慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者调节性T淋巴细胞(Treg)/T辅助性T细胞17(Th17)变化及炎症细胞表型特征差异。方法选择2021年11月—2024年2月本院收治的80例COPD患者作为研究对象,根据1年内急性加重发作次数将患者分为频繁加重(FE)组(34例)和非频繁发作(iFE)组(46例)两组。比较两组患者临床资料;比较两组患者Treg、Th17细胞百分比和Treg/Th17比值;pearson相关性分析COPD患者Treg、Th17细胞百分比与COPD急性加重频率的关系;比较两组患者炎症细胞表型比例。结果FE组FEV1和FEV1/FVC明显低于iFE组,急性加重频率明显高于iFE组(P<0.05);FE组COPD患者Treg细胞百分比和Treg/Th17比值均明显低于iFE组,Th17细胞百分比则明显高于iFE组(P<0.05);pearson相关性分析,COPD患者Treg细胞百分比和Treg/Th17比值与COPD急性加重频率呈正相关,Th17细胞百分比与COPD急性加重频率呈负相关(P<0.05);FE组COPD患者EC炎症细胞表型比例为44.12%,显著高于iFE组的19.57%(P<0.05)。结论频繁发作COPD患者普遍存在机体Treg和Th17平衡失衡,EC炎症细胞表型患者COPD频繁发作风险更高。

益智对TREM2调控小胶质细胞表型转化的调节作用

目的 研究益智对小胶质细胞表型转化的调节作用。方法 采用LPS诱导建立M1型小胶质细胞模型,通过检测M1和M2型小胶质细胞标记物表达,初步证实益智提取物可抑制LPS诱导的M1型小胶质细胞的过度活化并促进其向M2型的转化。TREM2-siRNA转染实验敲低BV2细胞中TREM2蛋白表达,通过RT-qPCR法检测M1、M2型细胞标志物的mRNA表达,免疫荧光和Western blot法进一步验证M1、M2型细胞标志物的表达以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,LPS处理的BV2细胞M2型标记物IL-10、Arg-1 mRNA与蛋白表达降低(P<0.01);与LPS组比较,益智组IL-10、Arg-1 mRNA表达与蛋白升高(P<0.01)。抑制TREM2蛋白表达后,与转染对照组比较,转染实验组BV2细胞IL-10、Arg-1 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),TNF-α mRNA与蛋白表达升高(P<0.01)。在无转染TREM2中,给予益智提取物共培养后,PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达升高(P<0.01),而在抑制TREM2蛋白表达后,PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论 益智可以通过TREM2受体蛋白激活PI3K/Akt信号通路,调节M1和M2型小胶质的表型转化,改善神经炎症。

大肠癌患者手术前后淋巴细胞表型CD8 CD28的表达及其临床意义

目的:探讨大肠癌患者外周血淋巴细胞(PBL)表型CD8、CD28变化及其临床意义。方法:应用CD8、CD28单克隆抗体,采用流式细胞术,对35例大肠癌患者PBL表型CD8、CD28进行测定。结果:肿瘤组淋巴细胞CD8的表达显著高于对照组(P<0.01);而CD28、CD8+/CD28+的表达则低于对照组(P<0.01);DukesD期大肠癌组CD8+/CD28+的表达明显低于DukesB期组(P<0.05);淋巴结转移组CD28、CD8+/CD28+的表达低于无淋巴结转移组(P<0.01);浸润浆膜层组CD8的表达高于未浸润浆膜层组,而CD28,CD8+/CD28+的表达则低于未浸润浆膜层组(P<0.01,P<0.05)。结论:大肠癌患者淋巴细胞CD8、CD28的表达与肿瘤的生物学行为密切相关。观察淋巴细胞表型CD8、CD28变化,对大肠癌患者的免疫状态及预后监测具有一定的参考价值。

血管平滑肌细胞表型改变与肿瘤抑制基因p21^(WAF1)和p53的关系

目的:增殖表型血管平滑肌细胞中肿瘤抑制基因p21WAF1基因和p53基因表达可能具有对抗血管平滑肌细胞的增殖能力,观察血管平滑肌细胞表型变化与肿瘤抑制基因p21WAF1和p53的关系。方法:实验于2003-09/10哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。应用胶原酶消化法建立大鼠原代培养血管平滑肌细胞,去血清诱导体外培养血管平滑肌细胞分化。流式细胞分析检测不同表型血管平滑肌细胞增殖能力,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹分析方法检测血管平滑肌细胞分化相关基因平滑肌特异性α-肌动蛋白和calponin表达变化,反转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹杂交方法检测p21WAF1和p53基因表达变化。结果:去血清培养后,原代培养大鼠血管平滑肌细胞增殖能力下降,DNA合成前期细胞明显增加(48.38±2.35)%,细胞分化基因平滑肌特异性α-肌动蛋白和calponin明显表达。肿瘤抑制基因p21WAF1和p53表达下降。在200g/L血清培养后,大鼠血管平滑肌细胞增殖旺盛,DNA合成前期细胞相对较少(28.80±1.58)%,细胞分化相关基因平滑肌特异性肌动蛋白和calponin表达明显下调,肿瘤抑制基因p21WAF1和p53表达显著增加。结论:肿瘤抑制基因表达与血管平滑肌细胞表型状态密切相关。

糖尿病大鼠肾小球系膜细胞表型转化及菟箭合剂的作用

目的 :研究糖尿病大鼠是否存在肾小球系膜细胞表型转化及中药菟箭合剂的作用。方法 :SD大鼠分为正常对照组 (NC组 ,n =8)、单肾切除对照组 (QC组 ,n =8)、单肾切除链脲佐菌素 (STZ)糖尿病组(DM组 ,n =8)、缬沙坦治疗组 (VT组 ,n =8)和中药菟箭合剂治疗组 (ZY组 ,n =9) ,缬沙坦治疗组和菟箭合剂治疗组分别在单肾切除STZ糖尿病模型成模后灌喂缬沙坦〔2 0mg/ (kg·d)〕和菟箭合剂〔2 0g/ (kg·d)〕12周 ,用免疫组化的方法观察大鼠肾小球内α 平滑肌肌动蛋白 (alphasmoothmuscleactin ,α SMA)和转移生长因子 β1(TGF β1)的表达情况 ,用计算机病理图像分析软件检测肾小球α SMA和TGF β1染色阳性面积 /肾小球毛细血管袢面积比。结果 :NC组和QC组大鼠仅个别肾小球内有少量α SMA阳性显色 ,DM组大鼠肾小球内可见显著的α SMA阳性显色 ,肾小球内α SMA阳性面积 /肾小球毛细血管袢面积比和TGF β1阳性面积 /肾小球毛细血管袢面积比显著增加 (P <0 0 1) ,2 4h尿蛋白排泄量较NC组和QC组大鼠显著增多(P <0 0 1) ;VT组和ZY组大鼠 2 4h尿蛋白排泄量较DM组显著减少 ,肾小球内α SMA阳性面积 /肾小球毛细血管袢面积比和TGF β1阳性面积 /肾小球毛细血管袢面积比较DM组显著降低 (P <0 0 1) ;ZY组 2

红花对肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用

目的目的观察红花对结扎单侧输尿管诱导的肾间质纤维化实验大鼠肾小管上皮细胞表型转化的抑制作用。方法结扎单侧输尿管方式复制肾间质纤维化实验动物模型,分别给以红花4.0g·kg-1·d-1、缬沙坦10mg·kg-1·d-1经口灌服,采用免疫组化、原位杂交方法检测大鼠肾脏肾小管上皮细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅲ型胶原的表达。结果单侧输尿管结扎大鼠肾脏α-SMA动蛋白和Ⅲ型胶原的阳性面积及积分光密度较假手术组明显增强,红花及缬沙坦可显著性抑制其表达。结论红花可以通过抑制肾小管上皮细胞的表型转化拮抗肾间质纤维化。

培美曲塞联合顺铂化疗方案对老年非小细胞肺癌患者外周血淋巴细胞表型变化的影响

目的探讨培美曲塞联合顺铂(CDDP)化疗方案对老年非小细胞肺癌(NSCLC)外周血淋巴细胞亚群的影响。方法选择年龄≥60岁的NSCLC患者64例,给予培美曲塞500 mg/m2,第1天静脉滴注,顺铂25 mg/m2,第1~3天静脉滴注,21 d为1个周期,每例患者至少治疗治疗两个周期。另以同期健康查体者作为对照组,流式细胞仪检测外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD16+56+及CD19+细胞百分率和CD4+/CD8+比值。结果老年NSCLC患者化疗前CD4+、CD16+56+细胞百分率及CD4+/CD8+比值显著低于健康对照组(P<0.05),CD3+、CD8+及CD19+细胞百分率变化与对照组比差异较无统计学意义(P>0.05);化疗后CD4+、CD16+56+细胞百分率及CD4+/CD8+比值较化疗前明显升高(P<0.05),CD3+、CD8+及CD19+细胞百分率较化疗前后无显著差异(P>0.05)。结论培美曲塞联合顺铂化疗可改善老年NSCLC患者的免疫功能。

供体年龄影响融合生长内皮祖细胞对平滑肌细胞表型转换及增殖迁移的作用

目的：探讨老龄和年轻个体来源融合生长状态内皮祖细胞（EPCs）对血管平滑肌细胞（SMCs）表型转换以及增殖和迁移的调节作用。方法：脱臼处死1～2月龄、19～26月龄SD大鼠，应用含15％ FBS的DMEM／F12培养基（含内皮细胞生长添加剂100 mg／L、肝素100 mg／L、青霉素、链霉素各1×105 U／L）培养EPCs，取1～2月龄大鼠腹主动脉，组织块法培养血管SMCs，应用DiI-Ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染以及α-SM-actin免疫荧光分别对EPCs和SMCs进行鉴定。建立细胞共培养体系，上室为融合生长状态的EPCs，下室为SMCs，实验分4组：（1）第3代SMCs（P3）组；（2）第4代SMCs（P4）组；（3）第4代SMCs与年轻大鼠来源EPCs共培养（P4YE）组；（4）第4代SMCs与老龄大鼠来源EPCs共培养（ P4AE）组。 Western blotting检测α-SM-actin和osteopontin蛋白的表达；[3 H ]-TdR掺入法检测SMCs增殖；细胞划痕实验检测SMCs的迁移能力。结果：与P3组相比， P4组的SMCsα-SM-actin表达显著下调，而osteopontin表达显著增强；P4YE组SMCs的α-SM-actin及osteopontin表达与P3组比较未见有显著差别；与P4组相比，年轻和老龄大鼠来源的EPCs均显著促进第4代SMCs的α-SM-actin和下调osteopontin的表达，抑制第4代SMCs的增殖和迁移；与老龄大鼠来源的EPCs相比，年轻大鼠来源的EPCs更能够显著延迟SMCs表型由收缩型向合成型转换，抑制SMCs增殖和迁移。结论：共培养融合生长状态的EPCs使血管SMCs表型转换延迟、抑制SMCs增殖和迁移，年轻大鼠来源的EPCs较老龄大鼠来源的EPC更显著延迟血管SMCs表型由收缩型向合成型转换，并具有更强的抑制血管SMCs增殖和迁移的能力。

胰岛素样生长因子Ⅰ与透明质酸对人胚关节软骨细胞表型的影响

【目的】研究胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )和透明质酸 (HA)联合培养对人关节软骨细胞生物学行为的影响 ,判断其稳定软骨细胞表型的效果。【方法】分离培养人关节软骨细胞 ,从第 4代开始 ,用hIGF Ⅰ和HA联合培养 ,通过电镜观察、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原和aggrecan免疫组化及RT PCR判断联合培养第 8代软骨细胞表型的变化。自然传代的第 6代细胞为对照组。【结果】IGF Ⅰ和HA联合培养的第 8代细胞胞浆内含有丰富的粗面内质网和分泌小泡 ;RT PCR显示Ⅱ型胶原mRNA表达阳性而Ⅰ型胶原mRNA表达阴性 ;甲苯胺蓝染色显示细胞浆内有大量的紫色异染颗粒 ;Ⅱ型胶原和aggrecan免疫组化见 80 %～ 92 %的细胞染色呈阳性或强阳性 ,平均灰度分别为 85 92和 116 2 3,均显著低于对照组 ,说明处理组染色较对照组增强。【结论】IGF Ⅰ和HA联合培养的第 8代细胞仍能保持透明软骨细胞的表型 ,为体外获得高数量级别的有正常功能的人关节软骨细胞提供一种新方法。

胃癌患者外周血DCs细胞表型变化研究

目的 研究胃癌患者外周血树突状细胞 (DCs)细胞表型表达水平 ,与正常人DCs细胞表型表达进行比较并分析其临床意义。方法 分离培养胃癌患者及正常人外周血DCs ,流式细胞仪检测细胞表型表达变化。结果 培养第 3天 ,DCs细胞表型表达均较低 ,两组之间差异不显著 ;培养第 7天 ,两组培养DCs细胞表型表达均较第 3天显著升高 ,且两组之间差异非常显著 ;培养第 12天 ,DCs表型表达较培养第 3天差异非常显著 ,较培养第 7天差异不显著 ,两组之间差异显著。结论 外周血培养DCs的细胞表型表达随培养时间推移而升高 ,至细胞成熟时趋于稳定 ;胃癌患者DCs细胞表型表达较正常人显著降低 ,了解胃癌患者体内DCs细胞表型表达水平 ,对评判患者预后及生物治疗疗效有一定的参考价值。

大剂量γ射线对树突状细胞表型及功能的影响

目的探讨大剂量电离辐射对树突状细胞(DC)表型及免疫功能的影响和辐射致免疫抑制的机制。方法以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)诱导造血干细胞产生DC,给予0、10、20、30 Gyγ射线照射,并于照后24 h进行脂多糖(LPS)处理(1μg/ml)使之成熟。用Transwell法研究DC的迁移能力,流式细胞术检测DC表面分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ和CCR7)的表达,ELISA检测细胞因子(IL-6、IL-10和PGE2)的分泌。结果大剂量γ射线对DC的表型无影响,却能抑制DC向CCL19的迁移,同时下调CCR7的表达,减少IL-6、IL-10和PGE2等细胞因子的分泌。结论大剂量γ射线可以通过下调CCR7和诱导凋亡抑制DC的迁移,减少细胞因子的分泌,导致免疫抑制。

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响。方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平。结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47％(P<0.01),VSMC α-SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深。而matrixGla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05)。并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布。结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α-SM actin表达量明显低于收缩表型。提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用。胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布。

结节病患者肺功能检测和BALF淋巴细胞表型关系的研究

目的 :通过测定结节病患者的肺通气功能、弥散功能、血气分析以及支气管肺泡灌洗液 (BALF)的细胞学 ,并就其之间的相关性进行分析 ,以探究肺功能测定指标与BALF检测之间的相关性。方法 :结节病患者及正常对照组各 18例 ,行肺通气功能和弥散功能及动脉血气分析检测 ,所有受试者均行支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞学检查。结果 :(1)与正常对照组相比 ,结节病组静息状态肺通气功能基本正常 (P >0 .0 5 ) ,单口呼吸法肺弥散功能(DLCO % )减低 (P <0 .0 5 ) ,并有小气道功能障碍 ,尤以FEF50 %减低明显 (P <0 .0 5 )。 (2 )结节病患者BALF中淋巴细胞 %明显增高 (P <0 .0 1) ,CD+4 /CD+8亦明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。 (3)结节病患者DLCO %减低与BALF中淋巴细胞 %增加及CD+4 /CD+8比增加均呈负相关 (分别为 r=- 0 .6 7,P <0 .0 1和 r=- 0 .5 5 ,P <0 .0 5 ) ,且小气道功能中FEF50 %减低与BALF中淋巴细胞 %增加呈明显负相关 (r =- 0 .5 4,P <0 .0 5 )。结论 :肺弥散功能以及小气道功能的检查与BALF细胞学检测指标存在较明显的相关性 ,可作为早期结节病病情活动性判定的一项重要参考指标。

鼠输尿管完全梗阻后肾脏病理及足细胞表型改变的研究

目的观察鼠输尿管完全梗阻后肾脏病理和足细胞表型改变的时序变化,寻找输尿管梗阻后肾脏发生不可逆损伤的时相。方法建立单侧输尿管完全梗阻动物模型,梗阻后不同时间点取出肾脏,经HE染色和免疫荧光双标方法,观察肾脏病理及足细胞表型的改变。结果大体观察,梗阻24h后出现肾盂扩张,梗阻3d后出现肾皮质变薄。组织学观察,梗阻12h后出现一部分近曲小管扩张,小管上皮细胞呈水样变性肿胀,在梗阻3d后出现大量小管上皮细胞变形肿胀。免疫荧光双标法,梗阻24h后有少量足细胞、巨噬细胞同时被2种抗体标记,2d后足细胞呈减少趋势,而巨噬细胞逐渐增多。结论输尿管梗阻后在肾脏病理改变早于肾脏发生形态学改变的发生,输尿管梗阻后24h发生足细胞表型的改变,与肾脏肾盂出现明显扩张的时间相近,随着梗阻时间的延长,肾脏病理改变逐渐加重,足细胞转化逐渐增多。

人胎儿胸腺细胞表型分析

利用流式细胞计分析了人中期妊娠引产胎儿胸腺细胞的某些表面分子的表达,结果表明从胎儿发育的第17周直到儿童期,胸腺细胞 CD1、CD2、CD3、CD4、CD8、CD38、TCR 以及 HLA 抗原的表达无明显变化.在这一发育阶段,胸腺细胞表型呈现以下特征:1.CD3/TCRαβ分子的表达呈现从弱到强的连续性分布,可以分为三个亚群,从弱到强依次称为 L-CD3/TCRαβ、M-CD3/TCRαβ和 H-CD3/TCRαβ.个体之间三个亚群含量差异很大.2.大部分单阳性成熟型胸腺细胞也表达 CD1抗原.3.HLA Ⅰ类抗原在胸腺细胞上表达呈现密度不等的变化.大部分胸腺细胞为弱阳性,少部分为强阳性.HLA Ⅰ类抗原表达量和胸腺细胞成熟度相关.4.根据胸腺细胞比重将胸腺细胞分为 Thy-L 和 Thy-H2个亚群.Thy-L 亚群中成熟型和早期胸腺细胞含量较多,而 Thy-H 主要由中间发育阶段的胸腺细胞构成.