结缔组织生长因子及吞噬和细胞运动蛋白1基因多态性与2型糖尿病肾病病位、病性的相关性研究

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF) rs2648875位点、吞噬和细胞运动蛋白1(ELMO1) rs10951509位点基因多态性与2型糖尿病性肾病(T2DKD)病位、病性的相关性。方法 选取2017年1月—2018年6月于泉州市中医院内分泌科住院及门诊就诊的T2DKD患者195例作为T2DKD组,同时选取泉州市中医院体检中心体检的健康人群134例作为对照组。采集四诊信息,运用证素辨证分析2组病位、病性证素分布特点,采用imLDRTM多重SNP分型试剂盒检测2组CTGF和ELMO1基因中AA、GA、GG基因型的分布频率。采用无序多分类Logistic回归分析CTGF、ELMO1基因型与病位、病性的相关性。结果 T2DKD组主要病位证素为肾、肝、脾,主要实证病性证素为湿、热、痰,主要虚证病性证素为阴虚、气虚、血虚、阳虚。2组患者CTGF基因AA、GA、GG基因型及EL-MO1基因AA、GA、GG基因型分布比较,差异有统计学意义(P<0.01)。以GG基因型作为参照,与非血瘀比较,携带CTGF基因AA、GA基因型的血瘀患者明显减少(P<0.01)。以GG基因型作为参照,与非阳虚比较,携带EL-MO1基因AA、GA基因型的阳虚患者明显增多(P<0.05)。结论 T2DKD主要病位在肾、肝、脾,而病性为虚实夹杂。CTGF基因rs2648875多态性与病性血瘀形成相关,ELMO1基因rs10951509多态性与病性阳虚形成相关。

吞噬和细胞运动蛋白1在炎性关节病的作用

吞噬和细胞运动蛋白1(ELMO1)是进化保守的一种蛋白,通过与胞质分裂作用因子(DOCK)结合激活Rac影响肌动蛋白细胞骨架的重塑,促进细胞吞噬、迁移和侵袭,其在恶性肿瘤中的临床意义已被证实,但在自身免疫性疾病中的作用尚未被广泛探索。近年来,有研究表明ELMO1调节免疫细胞功能、炎症反应以及破骨细胞活性,参与类风湿关节炎、强直性脊柱炎等炎性关节病的发生发展,本文就相关文献做一综述。

FAK表达水平对人肝癌细胞运动、增殖、凋亡等的影响

构建了FAK基因siRNA质粒表达载体并用磷酸钙法转染人肝癌细胞SMMC—7721,采用半定量RT-PCR、Western Blot检测FAK siRNA转染后SMMC—7721细胞FAK mRNA和蛋白表达的变化.以损伤修复法检测FAK siRNA对SMMC—7721细胞迁移的影响,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测FAK siRNA转染对SMMC—7721细胞生长的抑制作用,以Hoechst染色法检测FAK siRNA对SMMC—7721细胞凋亡的影响.结果显示,特异性的FAK siRNA片段能有效降低SMMC—7721细胞FAK mRNA和蛋白的表达水平;转染FAK siRNA后,SMMC—7721细胞生长和迁移均受到抑制,凋亡细胞的数目也显著增多.表明靶向FAK基因的siRNA可以明显抑制SMMC—7721细胞的运动和增殖等生物学行为.

Rho蛋白与细胞骨架调节的细胞运动

细胞迁移是肿瘤细胞浸润和转移的关键环节,细胞骨架的重组过程是细胞发生移动的基础,受多种信号分子的调节。肿瘤细胞可以表现出多种类型的运动方式,而每种细胞运动方式可由不同的分子机制调节,其中细胞骨架蛋白actin的重组在肿瘤细胞的运动中至关重要。Rho蛋白家族的小GTP酶蛋白在肿瘤细胞中被活化,可以通过调节细胞骨架actin的重组,引起细胞侵袭、转移。其活化方式包括:Rho蛋白及其调节子的活化突变、灭活突变和Rho家族蛋白和作用分子表达水平的改变等,通过自身活化将细胞外的趋化信号传递给细胞内的下游效应分子,导致细胞骨架依赖性的反应,影响细胞的移动功能。因而,对Rho家族的小GTP酶蛋白信号进行有效的抑制可以有效的抑制肿瘤细胞的侵袭和转移过程,是肿瘤治疗的新方法。

肌动蛋白、肌动蛋白结合蛋白质和细胞运动的研究进展

运动是生命细胞的基本特征之一。肌动蛋白、肌球蛋白和调节蛋白质参与细胞运动和肌肉收缩，籍以完成不同的生理功能。蛋白质的结构生物学、分子遗传学和体外运动分析的应用，阐明了肌动蛋白、肌球蛋白和一些结合蛋白质的氨基酸序列、结合功能域和原子结构，使运动和能量转换可在分子水平上进行探索，促进了运动蛋白质体系的运动及其调节机制和能量转换机制研究的发展。

渗透浓度变化和电刺激诱发离体耳蜗外毛细胞运动的初步观察

观察细胞外环境改变对外毛细胞功能的影响，对揭示神经性耳聋的机理很有意义。用显微机械法分离豚鼠耳蜗外毛细胞，观察到细胞外环境渗透浓度降低（２８０Ｏｓｍｍｏｌ／Ｌ）１ｍｉｎ即可诱发离体外毛细胞短缩３．１４±０．７０％（ｔ检验，以下同，Ｐ＜０．０１），伴直径增加。外环境渗透浓度升高（３２０Ｏｓｍｍｏｌ／Ｌ）５ｍｉｎ可使离体外毛细胞伸长３．３４±１．０９％（Ｐ＜０．０５），伴直径缩小；交变电场（刺激电流Ｉ＜０．１ｍＡ，刺激频率ｆ＝１～１０Ｈｚ）的变化可使外毛细胞产生伸缩运动，在Ｋ￣＋１００ｍｍｏｌ／Ｌ，渗透浓度３２０Ｏｓｍｍｏｌ／Ｌ环境下外毛细胞随交变电场变化而产生的运动幅度，负相时减少４３．１４％（Ｐ＜０．０５），正相时减少４６．１７％（Ｐ＜０．０５）。外环境恢复正常后外毛细胞形状亦可恢复。讨论了外毛细胞的运动机制和生物学基础。

细胞运动抑制剂4-甲基-3-硝基-苯甲酸的基础研究

目的:检测小分子化合物4-甲基-3-硝基-苯甲酸的药物毒性作用、对多种恶性肿瘤细胞运动能力的影响以及在小鼠体内对肿瘤生长的抑制作用。方法:将4-甲基-3-硝基-苯甲酸给药剂量按等比数列排列,从而测定它在小鼠体内的半数致死量;体外采用趋化实验检测4-甲基-3-硝基-苯甲酸对肺癌细胞A549、肝癌细胞SSMC-7721、恶性黑色素瘤细胞LiBr及胃癌细胞MGC-803趋化运动能力的影响;体内实验,将BL6-B16细胞接种到C57小鼠,经灌胃给药后,观察4-甲基-3-硝基-苯甲酸对小鼠移植瘤生长的影响,并以生理盐水作对照,同时以体重变化为指标衡量4-甲基-3-硝基-苯甲酸的毒性作用。结果:4-甲基-3-硝基-苯甲酸在小鼠体内的半数致死量LD50为771.73mg/kg;趋化实验表明4-甲基-3-硝基-苯甲酸对多种肿瘤细胞的细胞运动都有明显的抑制作用,并且最适浓度为2.0μM;4-甲基-3-硝基-苯甲酸抑制小鼠黑色素移植瘤生长,肿瘤体积(P<0.05)和重量(P<0.01)显著低于对照组,4-甲基-3-硝基-苯甲酸对小鼠体重变化无影响。结论:4-甲基-3-硝基苯甲酸有望成为治疗恶性肿瘤的新药。

微管与肿瘤细胞运动——免疫细胞化学研究

运用免疫细胞化学方法对三种不等恶性程度人结肠腺癌细胞株 HT- 2 9分化较好 ,呈上皮样 ,细胞排列紧密 ,呈聚集性生长 ;免疫细胞化学显示 :微管不甚明显。 SW480及 SW6 2 0细胞呈梭形 ,细胞间松散 ,常呈单个生长 ,免疫细胞化学显示微管十分丰富。该种形态特征与原发肿瘤恶性程度一致 ,前者为高分化结肠腺癌 ,后者为高恶性度结肠腺癌 ,具较强转移潜能。加入 TGFβ1 后 ,三株细胞均呈生长加速 ,多见分裂相 ,但微管未见明显改变。说明细胞快速分裂并非肿瘤浸润的唯一原因。加入道诺红菌素作用后 ,SW480及 SW6 2 0微管结构出现明显改变 ,表现为断裂 ,卷曲或呈颗粒状 ,提示道诺红菌素能破坏细胞微管成分 。

细胞运动、细胞迁移与细胞骨架研究进展

细胞定向运动与细胞骨架的动态循环密切相关。运动细胞在其伪足前沿依靠细胞骨架的不断聚合推动细胞膜的前进,在基部靠近细胞体部位通过细胞骨架的不断解聚收缩拖拉细胞体向前运动,细胞骨架的聚合与解聚通过伪足与支撑表面的吸附与解吸附而偶连。肌动蛋白组成的微丝骨架是大多数运动细胞的主要成分。外界刺激引起微丝细胞骨架动态变化的信号通路已逐步明了。线虫精子细胞的运动行为与阿米巴变形运动相似,但是在线虫精子细胞中没有肌动蛋白,而是以精子主要蛋白为基础形成细胞骨架驱动精子细胞的运动。与肌动蛋白不同,精子主要蛋白没有分子极性、ATP结合位点和马达蛋白。通过比较研究以上两种运动体系将有助于在分子水平上进一步阐明细胞运动的机理。

褪黑素通过调节Numb/Notch1/Snail/E-cadherin信号通路抑制子宫内膜异位症患者内膜上皮细胞运动和上皮间质转化

目的探讨褪黑素对子宫内膜上皮细胞运动性和上皮间质转化(EMT)的影响,及其对Numb/Notch1/Snail/E-cadherin信号通路的调控作用。方法采用免疫组化法检测20份正常子宫内膜和20份异位子宫内膜中Notch1、Numb、E-cadherin和Snail的表达。使用20nmol/L 17β-雌二醇和5 mmol/L褪黑素处理子宫内膜上皮细胞。使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)评估细胞增殖。使用Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测相关蛋白表达。结果与正常子宫内膜相比,子宫内膜异位症子宫内膜中的Notch1和Snail的阳性染色评分显著升高,而Numb和E-cadherin显著降低(P<0.05)。培养72 h后,与对照组相比,17β-雌二醇处理组的子宫内膜上皮细胞的增殖能力显著升高(P<0.05)。与17β-雌二醇组相比,褪黑素处理组的细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。与对照组相比,17β-雌二醇组的迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。与17β-雌二醇组相比,褪黑素组的迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与对照组相比,17β-雌二醇组的Numb和E-cadherin的蛋白表达水平显著降低,而Notch1和Snail显著升高(P<0.05)。与17β-雌二醇组相比,褪黑素组的Numb和E-cadherin蛋白表达水平显著升高,而Notch1和Snail蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论子宫内膜异位症患者的子宫内膜中存在异常的EMT。褪黑素可通过调节Numb/Notch1/Snail/E-cadherin信号通路有效抑制17β-雌二醇诱导的子宫内膜上皮细胞的运动性和EMT。

脑信号蛋白与细胞运动及肿瘤

脑信号蛋白(semaphorin)是分泌的或膜相关糖蛋白,其通过与相应的受体结合后刺激激酶、调节RhoGTP酶,通过调节R-Ras调控整合素、细胞骨架,从而调控细胞运动。脑信号蛋白信号系统也调节肿瘤细胞的运动,调控肿瘤血管生成,并和肝细胞生长因子HGF/Met相偶联,控制肿瘤的侵袭转移。

细胞运动的研究

以细胞运动为主线 ,讨论细胞内部的生命活动 ,着重讨论细胞内部物质输运、能量转换、细胞通讯等重要生物学过程。

皮动蛋白及微丝相关蛋白2/3复合物介导的细胞运动的分子机制

皮动蛋白(cortactin)是一种含有特殊重复序列结构域的微丝肌动蛋白结合蛋白,它直接参与了细胞皮层(cortex)微丝细胞骨架的组建。它又是细胞内Src类酪氨酸蛋白激酶的主要底物之一,代表了一类高度保守的胞内皮层信号蛋白质家族。近几年来,对于细胞运动分子机制的研究取得很大进展,利用组织培养细胞进行的体外实验证明,皮动蛋白能够活化微丝相关蛋白2/3复合物(actinrelatedprotein2/3complex,Arp2/3complex),调控皮层微丝细胞骨架的组装,在细胞运动过程中具有重要作用。

NIH3T3细胞核内过表达的M-CSF对细胞运动的影响

目的构建M-CSF细胞核内定位表达载体pCMV/M-CSF,探讨核内M-CSF对NIH3T3细胞运动的影响。方法采用PCR的方法扩增人M-CSF活性片段,将其插入核内真核表达载体pCMV/myc/nuc,构建重组体pCMV/M-CSF,经脂质体介导转染NIH3T3细胞,G418筛选后,用免疫细胞化学及Western blot鉴定其在真核细胞中的表达及定位分布,用细胞划痕实验测定M-CSF进入细胞核后对细胞运动能力的影响。结果限制性双酶切及DNA测序分析结果显示插入pCMV/M-CSF的片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当。Western blot结果显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞能稳定表达M-CSF蛋白;免疫细胞化学结果显示表达的M-CSF定位于NIH3T3细胞核。细胞划痕实验显示转染pCMV/M-CSF的NIH3T3细胞有较强的运动能力。结论成功构建M-CSF核内定位表达载体pCMV/M-CSF,核内M-CSF可加强NIH3T3细胞运动。

活体细胞运动变形参数的计算机图象分析的研究

在生物学研究中,通常提供的图象信息是静止的,但在实际工作中分析活体样品是十分重要的,运动图象的分析更接近于生物体的客观情况,为此,我们建立了运动图象的计算机图象分析方法和应用软件。该研究主要解决运动信息的抽取、检出和运动向量的测算。

周期性张应变激活整合素β_1-FAK信号途径调控皮肤成纤维细胞运动

目的探讨周期性张应变对皮肤成纤维细胞的影响,寻找引起细胞运动的最佳张应变幅度及其信号转导机制。方法成纤维细胞培养于预敷胶原蛋白基质的6孔柔性培养板,对柔性培养孔施加10次/min的负压(-135mmHg),每孔柔性板由中心到周边张应变幅度介于0%～24%。倒置显微镜观察细胞旋转角度,细胞免疫染色和激光共聚焦显微镜观察细胞整合素β1在细胞内的改变,免疫印迹观察细胞整合素β1表达和黏着斑激酶(FAK)磷酸化。结果发现15%的张应变幅度是诱导皮肤成纤维细胞运动的最低张应变幅度。机械张应变诱导成纤维细胞整合素β1在细胞再分布和FAK磷酸化,整合素抗体β1部分抑制了FAK磷酸化和细胞运动。结论机械张应变通过整合素β1-FAK途径引起皮肤成纤维细胞运动。

ZM447439对乳腺癌细胞运动能力及凋亡的影响

目的研究ZM447439对三阴性乳腺癌(TNBC)MDA-MB-231细胞运动能力和凋亡的影响及其作用机制。方法用不同浓度ZM447439处理MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞24,48 h增殖抑制率。PI染色流式细胞术检测多倍体细胞形成,免疫荧光检测细胞多核形成。AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术观察不同浓度下ZM447439诱导MDA-MB-231细胞凋亡情况。Western blotting检测CyclinB1和Aurora激酶,Histone H3,Cofilin-1,cdc25c,cdc2及其磷酸化水平的改变,凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,PARP的表达变化。划痕实验及趋化实验观察细胞迁移和趋化能力。结果不同浓度Aurora激酶抑制剂ZM447439(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)处理MDA-MB-231细胞24 h后,细胞增殖抑制率分别为(1.21±0.01)%,(3.11±0.11)%,(19.27±0.17)%,(22.72±0.24)%和(62.23±0.03)%;不同浓度ZM447439(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖抑制率分别为(3.45±0.02)%,(15.61±0.14)%,(39.35±0.25)%,(43.46±0.13)%和(84.17±0.01)%。流式细胞术结果显示,1μmol/L ZM447439作用于乳腺癌细胞48 h可观察到多倍体细胞,并且免疫荧光显示多核形成。0.1,1,10μmol/L ZM447439作用处理MDA-MB-231细胞后,与对照组(0μmol/L)相比,细胞凋亡率均明显升高[(17.4±2.2)%,(28.5±3.1)%,(51.8±5.4)%vs(0.6±0.2)%,P<0.05]。0,0.01,0.1,1,10μmol/L ZM447439处理细胞,随着药物浓度增加,磷酸化cdc25c,cdc2的表达逐渐增加,CyclinB1、Aurora激酶及Cofilin-1的磷酸化表达逐渐减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐减少,促凋亡蛋白Bax、PARP蛋白剪切逐渐增加。与0μmol/L相比,0.01,0.1,1,10μmol/L ZM447439可显著延长划痕愈合时间,减少趋化穿膜细胞个数,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论ZM447439可通过抑制Aurora激酶及Cofilin-1磷酸化水平而抑制TNBC细胞增殖、运动,从而抑制侵袭及转移,诱导凋亡。

二烯丙基三硫下调肉毒素底物1和细胞分裂周期蛋白42的表达对Hela细胞运动的影响

目的研究二烯丙基三硫(DATS)对Hela细胞迁移运动能力的影响及其作用机制。方法用100μmol/L的DATS处理Hela细胞24 h(以等量的PBS为对照),Transwell小室观察细胞体外迁移能力的变化,Western blot检测Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况。结果 DATS处理组的迁移运动能力比对照组明显减弱(P<0.01),且Rac1和Cdc42蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 DATS可以抑制Hela细胞的迁移运动能力,下调Rac1和Cdc42蛋白的表达是其作用机制之一。

丁胺卡那霉素对耳蜗外毛细胞运动及胞内游离钙的影响

本文运用连续录像手段和荧光测钙技术研究丁胺卡那霉素对离体耳蜗外毛细胞运动及胞内游离钙浓度的影响。结果显示：（１）正常状态下外毛细胞内游离钙的荧光比值为１．３９±０．０９（ｘ±ｓｘ，ｎ＝１５）；从等渗环境进入低渗环境外毛细胞变短变粗（Ｐ＜０．０５，ｎ＝７。（２）丁胺卡那霉素（６．６７ｍｇ／ｍｌ）可使外毛细胞胞膜皱缩内陷，局部直径明显变细（Ｐ＜０．０１，ｎ＝１９），即使在低渗环境中也难以恢复原状。（３）丁胺卡那霉素（３．２３ｍｇ／ｍｌ）可瞬间降低细胞内钙离子浓度，使荧光比值降低１４．６８±２．０５％（Ｐ＜０．０１，ｎ＝１２）。提示丁胺卡那霉素的耳毒性作用机制可能通过降低细胞内游离钙浓度，进而影响外毛细胞钙依赖性的“慢能动性”

p38在机械张应力诱导皮肤成纤维细胞运动中的作用

目的：观察p38在周期性张应力诱导皮肤成纤维细胞运动中的作用，探讨机械张应力诱导成纤维细胞运动的信号转导机制。方法：将成纤维细胞培养于预敷胶原蛋白基质的6孔柔性培养板，对柔性培养孔施加10次／min的负压（一135mmHg）。以倒置显微镜观察细胞旋转角度以及p38抑制荆SB203580处理后的细胞运动，免疫印迹观察细胞内p38磷酸化。结果：机械张应力刺激成纤维细胞4h后，80％的细胞垂直于张应力方向旋转60～ 90。。张应力刺激5min后，细胞内p38磷酸化达到峰值，p38抑制剂SB203580部分抑制成纤维细胞运动。结论：机械张应力通过诱导p38磷酸化调控皮肤成纤维细胞运动。