IQGAP1在调节足细胞细胞骨架重组中的作用

目的 :探讨IQ结构域GTP酶活化蛋白1(IQ domain GTPase-activating protein 1,IQGAP1)对足细胞细胞骨架重组的调节作用。方法:嘌呤霉素(PAN)刺激小鼠足细胞后,运用实时定量PCR和Western blot印迹法分别检测细胞内IQGAP1m RNA和蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜观察足细胞骨架F-actin的分布,F-actin肌动蛋白评分系统(CFS)对骨架重组进行分析,并进一步观察上调和下调足细胞IQGAP1表达对PAN诱导的足细胞骨架重组的影响。结果:(1)与对照组相比,PAN刺激组足细胞内IQGAP1 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),足细胞F-actin排列紊乱,CFS明显升高;(2)IQGAP1 si RNA进一步抑制IQGAP1表达后,PAN引起的上述足细胞F-actin重组更加明显(P<0.05);(3)转染p Cantag-myc-IQGAP1质粒促进IQGAP1表达后,PAN诱导的足细胞F-actin排列紊乱显著减轻,CFS明显下降(P<0.05)。结论:IQGAP1能抑制嘌呤霉素诱导的足细胞骨架重组,对维持足细胞正常骨架结构起着重要作用。

弓形虫与疟原虫入侵引起宿主细胞骨架重组相关GTP酶不同定位的观察

目的方法,结果,结论弓形虫与疟原虫均是顶复门(Phylum Apicomplexa),孢子纲(Class Sporozoea),真球虫目(Order Eucoccidiida)的细胞内寄生原虫,入侵宿主细胞后均寄生于纳虫泡内进行发育增殖。细胞内寄生原虫的入侵均需要宿主细胞的细胞骨架发生重组,RhoGTP酶是哺乳动物细胞(有核细胞及红细胞)调节细胞骨架重组的重要酶类。我们在研究中发现宿主细胞的RhoA及Rac1GTP酶在弓形虫速殖子侵染后被纳入了纳虫泡膜(Parasitophorous Vacuole Membrane,PVM)上并高丰度聚集,然而在疟原虫裂殖子侵染的红细胞内却没有发现这两种GTP酶在纳虫泡膜上聚集的现象。宿主细胞RhoA及Rac1GTP酶在弓形虫及疟原虫感染宿主细胞后的不同分布,显示这两种原虫感染引起宿主细胞骨架重组的途径是不同的。

E-选择素调控白细胞跨内皮转运中内皮细胞骨架重组动力学

目的以血管稳态及重建为切入点,研究E-选择素(E-selectin)通过调节微丝骨架网络的动态重组来调控内皮细胞低阻抗区的形成,从而导致白细胞跨膜迁移增强的信号调控网络和关键分子机制。方法采用Lifeact_GFP转染人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),可使内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)可视化,并实时动态观察白细胞跨内皮迁移过程内皮细胞骨架重组动力学。采用荧光漂白后恢复技术(Fluorescence Recovery After Photobleaching,FRAP)量化E-选择素及其配体交联下,内皮细胞不同区域的细胞骨架重组能力。采用RNA干扰技术降低HUVEC上E-selectin表达,并利用AFM检测E-selectin干扰前后HUVEC各区域硬度分布,结合小分子抑制剂考察E-selectin调控细胞骨架重组从而介导白细胞跨内皮迁移的分子机制。结果白细胞跨内皮迁移过程,内皮细胞上可形成孔洞、且白细胞倾向于旁细胞迁移。FRAP结果表明内皮细胞胞体上微丝蛋白恢复速度更快,E-selectin与其配体交联可改变微丝蛋白骨架重组能力。干扰HUVEC内E-selectin表达可降低胞间连接的硬度,并增加胞间间隙的面积,有利于白细胞跨内皮迁移。采用Cyto D破坏细胞骨架、CK666抑制Arp2/3活性均可增加白细胞在对照组内皮细胞上的迁移,但是干扰E-selectin后,这些小分子抑制剂的作用消失。结论 E-选择素通过Arp2/3调节内皮细胞骨架的重组,降低胞间连接的硬度,增加胞间间隙的面积,并最终在胞间连接处形成低阻抗区,进而促进白细胞迁移。

NADPH氧化酶源性活性氧介导epinodosin诱导HL-60细胞分化及细胞骨架重组

该文分析研究了对映-贝壳杉烷二萜epinodosin通过调节NADPH氧化酶源活性氧诱导急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60向成熟粒细胞分化的特征。结果显示,epinodosin在4.0~8.0μmol/L浓度时抑制HL-60细胞生长,导致其S期阻滞,诱导HL-60细胞形成肾形核和多叶核细胞,使细胞吞噬能力和对硝基四氮唑蓝（nitrotetrazolium blue chloride,NBT）的还原力显著增强、细胞表面抗原CD11b表达上调,表明epinodosin可诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化;epinodosin还诱导HL-60细胞骨架重组,显著促进微管的成束组装以及提高波形纤维含量,上述分化特征与临床诱导分化治疗剂全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）对HL-60细胞的分化诱导特性极为相似。进一步检测显示,抗氧化剂NAC（N-acetyl-L-cysteine）以及NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素（apocynin,APO）和联苯基三价碘（diphenyleneiodonium,DPI）均可抑制epinodosin对HL-60细胞的分化诱导作用,表明epinodosin导致HL-60细胞活性氧浓度的升高与NADPH氧化酶活性关联,提示epinodosin通过调节NADPH氧化酶源性活性氧诱导HL-60向粒细胞分化。

对映-贝壳杉烷二萜wangzaozin A诱导A549细胞骨架重组和迁移抑制的机制研究

目的研究对映-贝壳杉烷二萜wangzaozin A诱导A549细胞骨架重组与迁移抑制的机制。方法采用MTT、显微观察、免疫荧光染色、Western blotting、划痕实验等方法考察wangzaozin A对A549细胞毒性、细胞形态、细胞骨架、蛋白表达和细胞迁移的影响。结果 Wangzaozin A(0.2~0.8μmol/L)处理A549细胞24、48、72 h后,细胞形态显著改变,细胞伪足增多并拉伸延长;细胞核扁化呈肾形改变;微管和角蛋白纤维网络的排布方式显著改变,表明细胞骨架经历了持续的重组过程。Wangzaozin A可显著上调细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、微管相关蛋白4(microtubule-associated protein 4,MAP4)和角蛋白8(keratin 8,K8)的磷酸化水平(P<0.05、0.01),ERK抑制剂U0126可显著抑制wangzaozin A诱导的ERK、MAP4和K8的磷酸化水平上调(P<0.05、0.01)。Wangzaozin A可显著抑制A549细胞的迁移,呈剂量和时间相关性。结论 Wangzaozin A可以通过激活ERK信号通路,上调MAP4和K8磷酸化水平,增加微管和角蛋白纤维的动态性,干扰细胞微管动力学过程,从而抑制A549细胞迁移。

充血性心力衰竭时的肺内皮细胞功能障碍:Ca^(2+)信号转导损害和细胞骨架重组的病理作用

充血性心力衰竭（congestive heart failure,CHF）常导致肺阻力血管重塑和张力增加,而这种适应性反应归因于肺内皮功能障碍,进而加重肺动脉高压,进一步促进右心室衰竭的发生。

补肾益智方对AD细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响

目的 :观察补肾益智方含药血清对AD(Alzheimer’sDisease)细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响。方法 :在神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交的NG10 8 15细胞培养液中加入预先老化 4d的Aβ2 5 35片段共同孵育 ,建立AD细胞模型。分别加入正常老年大鼠血清、补肾益智方高剂量含药血清和补肾益智方低剂量含药血清培养 4 8h后 ;应用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度 (Ca2 + )的变化情况 ;荧光显微镜观察细胞骨架的重组情况 ,流式细胞仪检测细胞的凋亡细胞。结果 :与正常大鼠血清加Aβ2 5 3 5组比较 ,高剂量补肾方含药血清组、低剂量补肾方含药血清组细胞内Ca2 + 浓度的相对荧光值明显降低 (P <0 0 1) ,而他们间两两比较则差异显著 (P >0 0 5 )。正常大鼠血清加Aβ2 5 3 5的NG10 8 15细胞组可以看到 ,细胞骨架严重解聚并向边缘扩散 ,细胞形态变性 ,还有细胞死亡现象 ;而高、低剂量补肾方含药血清组细胞骨架呈现微弱解聚现象 ,细胞形态正常 ,无变性和死亡现象。与正常大鼠血清加Aβ2 5 3 5组比较 ,高、低剂量补肾方含药血清组NG10 8 15细胞凋亡率明显减少 (P <0 0 1)。结论 :补肾益智方含药血清可以抑制细胞Ca2 + 内流 ,平衡控制细胞内Ca2 + 浓度 ;对Aβ引起NG10 8 15细胞骨架解聚、细胞变性等?

Nogo-B通过Rac1 GTPase激活途径调控巨噬细胞的胞葬功能

目的巨噬细胞的胞葬功能对维持机体生长发育及内环境稳定至关重要。本研究拟探讨,Nogo-B是否对巨噬细胞的胞葬功能具有调控作用及其可能机制。方法将J774A.1小鼠巨噬细胞株分为siRNA阴性对照组与Nogo-B siRNA干扰组,采用紫外线法诱导HL60细胞凋亡。分别以绿色与红色荧光celltracker对巨噬细胞与凋亡细胞进行染色并共同孵育,免疫荧光显微镜下观察巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬指数变化;对巨噬细胞给予凋亡细胞刺激,于刺激5、10及15min采集巨噬细胞提取蛋白,谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验法检测Rac1GTPase活性变化。结果采用siRNA转染下调Nogo-B表达后巨噬细胞的胞葬功能明显受损,其对凋亡细胞的吞噬指数由对照组的(48.9±3.5)%显著降低至Nogo-B siRNA组的(17.8±2.1)%(P<0.01);下调Nogo-B表达后的巨噬细胞,在凋亡细胞刺激下Rac1GTPase活性无显著变化,即出现Rac1GTPase激活障碍,而对照组巨噬细胞在凋亡细胞刺激下Rac1GTPase被逐渐激活。结论 Nogo-B对巨噬细胞的胞葬功能具有调控作用。下调Nogo-B表达后巨噬细胞的胞葬功能明显受损;Nogo-B可能通过Rac1GTPase激活途径,影响细胞骨架重组,发挥对胞葬功能的调节作用。

CKLF1对中枢神经系统神经细胞迁移过程调节作用的初探

CKLF1（Chemokine-like factor 1）是新发现的CC类趋化因子超家族成员，已有研究表明CKLF1能诱导炎症细胞迁移以及骨骼肌细胞增殖，而对于神经细胞的作用目前尚无报道。本研究发现CKLF1对神经细胞具有趋化活性，并且能促使原代皮层神经细胞和NG108．15细胞的肌动蛋白单体多聚化，细胞骨架重组，构成了迁移细胞前端突出的物质基础。瞬时转染CKLF1质粒后，

酸性调宁蛋白的研究进展

酸性调宁蛋白是一种肌动蛋白结合蛋白,它在平滑肌细胞和非肌细胞中均有表达,并且参与树突棘重塑、细胞骨架重组、平滑肌细胞收缩调控、骨骼肌发育调节、胎盘形成与胚胎发育、细胞的信号传导等。酸性调宁蛋白表达的改变与耐药性癫痫、大肠癌、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、卵巢癌的发生进展相关,研究该蛋白表达量的改变有利于这些疾病的诊断及预后的判断。

HMGB-1在MODS中的作用及临床干预展望

HMGB-1在细胞外的作用：内毒素刺激单核细胞释放HMGB-1。随后HMGB-1诱导内皮细胞，使其释放化学因子及细胞因子并上调粘附分子，从而增加嗜中性粒细胞及单核细胞与激活的内皮细胞的粘附，导致了胃肠道上皮细胞屏障的破坏。HMGB-1也调节单核细胞的迁移并作用于平滑肌细胞，导致其趋化及细胞骨架重组。HMGB-1的促炎作用主要源于B—box，A—box只起很小的作用。晚期糖基化终末产物受体（RAGE）已经被证实是HMGB-1的主要受体。RAGE抗体及可溶性RAGE，作为竞争性抑制物降低HMGB-1的促炎作用。

真核细胞运动接触抑制行为的力学-化学耦合模拟

某些真核细胞可通过运动的接触抑制特性显著调控细胞散布、群体细胞迁移及癌细胞转移等生理、病理进程.本文基于“多层次”信号级联转导调控细胞定向迁移,考察细胞间接触调控细胞骨架重组的动力学过程,由此构建模拟运动细胞接触抑制行为的力学-化学耦合模型.细胞考虑为包含网格状微丝骨架的圆环结构,细胞接触引起微丝骨架全局应变及局部黏附共同调控Rho GTPase家族成员Rac及RhoA活性.整体数学模型由非线性反应-扩散方程组及平衡微分方程构成,对其采取自行发展LBM-D1Q3法数值求解.数值模拟通过改变FilGAP-FLNa与N-cadherin通路对细胞接触的反馈强度,重现了双细胞接触抑制实验观测现象.模拟表明,FilGAP对Rac发挥适当抑制作用有利于细胞维持理想极性,从而在N-cadherin调控下反转极性,展现出接触抑制行为;缺乏FilGAP抑制会使得细胞高度极化,此时N-cadherin调控作用不足以反转细胞已有极性,产生接触后绕行通过行为;缺乏N-cadherin调控作用会使得细胞在接触后无法反转极性,最终呈现静态黏附行为.上述模拟结果对认识细胞接触抑制信号对细胞迁移行为的影响提供了理论基础.

胆道探查致十二指肠对穿伤、腹膜后结石遗留一例

目的 研究缺氧对人肝癌细胞HepG2细胞骨架重组的影响及Netrin-1在细胞骨架重组中的作用.方法 通过1%O_2 低氧培养建立人肝癌细胞HepG2物理缺氧模型,观测缺氧对细胞形态的改变.构建针对Netrin-1 mRNA的干扰质粒pshRNA-Netrin-1及阴性对照质粒pGensil-1,并将其转染HepG2细胞,筛选稳定转染细胞株.观测转染pshRNA-Netrin-1质粒前后,鬼笔环肽检测缺氧对肝癌细胞对HepG2细胞骨架重组的影响,细胞迁移实验检测缺氧条件下干扰Netrin-1对细胞迁移能力的影响.同时构建Netrin-1真核表达质粒pGNET1转染HepG2细胞,观测Netrin-1对肝癌细胞骨架重组的作用.结果 低氧培养HepG2细胞胞体变得狭长,细胞连接松散.Netrin-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）.HepG2细胞稳定转染pshRNA-Netrin-1后,Netrin-1 mRNA表达显著下降.抑制率达73.32%±4.12%（P＜0.01）.鬼笔环肽检测F-actin结果 显示,缺氧促进HepG2细胞骨架重组,转染pshRNA-Netrin-1后,缺氧促进HepG2细胞骨架重组受到显著抑制.细胞迁移实验结果 显示,缺氧条件下干扰Netrin-1的表达显著抑制HepG细胞迁移能力（P＜0.05）.转染 pGNET1后,HepG2细胞骨架发生重组.结论 缺氧促进HepG2细胞骨架重组与Netrin-1表达水平升高相关,Netrin-1表达的上调可能是缺氧促进肝癌细胞骨架重组进而促进侵袭转移的机制之一.

p21-激活激酶1诱导结直肠癌转移机制的研究

我们前期的研究表明，上调p21-激活激酶1（Pakl）基因的表达能促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭。其机制在于，Pakl以激酶依赖性的方式激活细胞外信号调节激酶（ERK）-黏着斑激酶（FAK）-丝氨酸（Ser）-910通路，导致有利于细胞移动的细胞骨架重组[1]。我们拟从Pakl基因调控m管形成和基质金属蛋白酶（MMPs）表达／活性两个方面探讨其诱导结直肠癌转移的机制。