表观转录元件溴结构域蛋白4抑制剂减轻心肌梗死后心脏损伤

目的:探究溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)在心肌梗死后心脏损伤中的作用。方法:通过分析公共数据,明确心肌梗死小鼠心脏组织中BRD4在整体和以及各细胞群中的表达变化。构建心肌梗死小鼠模型,设立空白对照组(WT组),心肌梗死组(MI组),药物组(JQ1组,ABBV-744组),术后第6天腹腔注射BRD4抑制剂JQ1或灌胃二代抑制剂ABBV-744,持续22天。MI术后4周,小动物超声影像系统检测小鼠心功能,检测小鼠质量、心脏质量与胫骨长度,天狼星红染色评估梗死区纤维化程度,WGA染色检测心肌细胞横截面积。结果:与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组能够显著改善术后心功能障碍(P<0.01)。转录组学数据表明,BRD4在心肌梗死损伤区域持续高表达。单细胞数据显示,心肌梗死后,成纤维细胞中BRD4阳性细胞比例显著增加,并且在心肌梗死后7、14、30d的成纤维细胞中,BRD4表达持续上调。与心肌梗死组相比,BRD4抑制剂组显著减轻心脏纤维化(P <0.01)。与一代药物组相比,二代药物组心脏纤维化程度显著降低(P<0.01)。结论:抑制表观转录因子BRD4可减轻心肌梗死后心脏损伤,抑制心脏纤维化,并改善心功能。

含溴结构域蛋白4在心血管疾病发病机制中的研究进展

心血管疾病(cardiovascular diseases)一直以来都是我国乃至全球疾病负担的主要原因,其生存率低,发病率一直呈现上升趋势[1]。据推测,我国目前心血管疾病患者高达3亿,导致的死亡人数约占全国死亡人数的40%,有数据显示,我国每年因心血管疾病产生的费用高达1700亿元,给医疗卫生保健资源带来了极大的负担[2-3]。心血管疾病涉及冠心病、心律失常、高血压、心肌病和心力衰竭等,虽然临床表现存在差异,但在发病机制中仍有许多相似之处。溴结构域和额外终端域(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族蛋白是一种表观遗传调控蛋白,由含溴结构域蛋白2(bromodomain-containing protein 2,BRD2)、BRD3、BRD4和睾丸特异性含溴结构域蛋白(testis-specific bromodomain-containing protein,BRDT)组成[4]。

溴结构域蛋白4及其抑制剂在炎症性疾病中的研究进展

溴结构域(bromodomain,BD)是一种高度保守的蛋白质结构域,具有特异性识别结合乙酰化赖氨酸残基的生物学功能。溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)是溴结构域和超末端结构(bromodomain and extra-terminal domain,BET)家族成员之一,因对基因转录具有强大的调控能力而受到较多关注。目前,靶向BRD4的小分子抑制剂在抗炎和抗癌领域展现出巨大的潜力。本文介绍了BRD4的生物学功能和在人体组织中的表达分布,结合BRD4抑制剂的药物研发现状重点阐述BRD4抑制剂在炎症性疾病中的作用。

房颤患者血清溴结构域蛋白4的表达及临床意义

目的探讨房颤(AF)患者血清溴结构域蛋白4(BRD4)的表达及临床意义。方法选取AF患者和阵发性室上性心动过速患者分别作为AF组[n=74,分为阵发性AF(阵发)组和持续性AF(持续)组]和对照(PSVT)组(n=73),取所有患者清晨空腹静脉血,采用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)法检测血清BRD4水平,采用胸超声心动图测量AF组和PSVT组患者术前左心房前后径(LAAPD)及左心室射血分数(LVEF);采用食道超声心动图检测AF组患者术前24 h的左心耳最大排空流速(LAA-PEV);采用左心房高密度基质标测检测AF组患者术中左心房局部双极电压,据双极电压大小分为左心房低电压(LAVs)组(双极电压<0.5 mV)和正常电压(NLAVs)组(双极电压≥0.5 mV),其中LAVs组AF患者根据LAVs数量多少分为轻度组(1个LAVs)及中度组(2个及以上LAVs);随访AF组患者术后第3~12个月AF的复发情况,据术后随访复发情况分为复发组(reAF组)和未复发组(SR组);采用Spearman分析AF组患者血清BRD4与LAAPD、LVEF、LAA-PEV、左心房低电压、术后复发等指标的相关性。结果AF组患者血清BRD4、LAAPD均高于PSVT组(P<0.05),LVEF低于PSVT组(P<0.05);持续组AF患者术后复发例数、左房低电压例数、BRD4水平及LAAPD高于阵发组(P<0.05),LVEF及LAA-PEV低于阵发组(P<0.05);LAVs组AF患者外周静脉血BRD4水平、LAAPD高于NLAVs组(P<0.05),LVEF、LAA-PEV低于NLAVs组(P<0.05);中度组LAVs患者外周静脉血BRD4水平高于轻度组(P<0.05),LVEF低于轻度组(P<0.05);reAF组AF患者左房低电压例数、BRD4水平、LAAPD均高于SR组(P<0.05),LVEF、LAA-PEV低于SR组(P<0.05)。结论AF患者血清BRD4表达升高,可能对AF严重程度及术后复发具有一定的预测价值。

甲状腺乳头状癌患者组织中表皮生长因子受体、维生素D受体、溴结构域蛋白4表达水平及其临床意义

目的:探究甲状腺乳头状癌(PTC)患者组织中表皮生长因子受体(EGFR)、维生素D受体(VDR)、溴结构域蛋白4(BRD4)的表达水平和其临床意义。方法:选取2022年2月—2024年3月广州医科大学附属妇女儿童医疗中心增城院区收治的PTC患者54例作为研究对象,取患者的癌组织及癌旁正常组织,采用免疫组织化学技术检测组织中EGFR、VDR和BRD4蛋白表达水平,并分析EGFR、VDR、BRD4阳性表达与临床病理特征的关系。结果:PTC患者癌组织中EGFR、VDR及BRD4蛋白表达阳性率均高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.001)。不同临床病理特征的EGFR阳性表达情况比较,差异无统计学意义(P>0.05);瘤体>1 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者VDR阳性率高于瘤体≤1 cm、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者,差异有统计学意义(P<0.05);瘤体>1 cm、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期者BRD4阳性率高于瘤体≤1 cm、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期者,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR蛋白表达与VDR、BRD4蛋白表达呈正相关(r=0.462、0.513,P<0.001);VDR蛋白与BRD4蛋白表达呈正相关(r=0.407,P<0.001)。结论:EGFR、VDR和BRD4在PTC患者组织中呈显著高表达,与PTC的形成及临床病理特征有一定相关性,可作为治疗PTC的监测指标。

溴结构域蛋白4经PTEN/PI3K/AKT通路对甲状腺乳头状癌细胞摄碘相关指标影响的研究

目的研究溴结构域蛋白4(BRD4)在甲状腺乳头状癌(PCT)中的表达水平及其抑制剂JQ1对PCT细胞增殖、迁移能力的影响,进一步探索影响摄碘能力的调控机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术及蛋白质印迹法分别检测BRD4在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及人PCT细胞TPC-1、K1的表达水平。采用CCK-8及划痕实验分别检测JQ1对TPC-1、K1细胞增殖及迁移能力的影响。采用高内涵细胞成像与分析系统观察TPC-1、K1细胞在JQ1作用下的形态及数目变化。采用qRT-PCR技术检测影响PCT摄碘能力相关基因的表达。结果BRD4在PCT细胞及癌组织中高表达。JQ1对TPC-1、K1细胞增殖能力呈时间及浓度依赖性抑制。TPC-1、K1细胞的48 h半抑制浓度分别为(9.045±0.772)、(14.169±1.406)μmol/L。JQ1可以抑制TPC-1、K1细胞的迁移,且具有统计学意义(P<0.05)。JQ1分别作用于TPC-1、K1细胞48 h后,实验组BRD4、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的mRNA表达水平降低。第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、钠-碘转运蛋白的mRNA表达升高。结论BRD4在PCT中呈现高表达状态。JQ1可有效抑制BRD4的表达,并影响PTEN/PI3K/AKT通路从而抑制PCT细胞的增殖及迁移,使得其摄碘能力增加。

含溴结构域蛋白4加重高糖诱导的内皮细胞损伤机制探讨

目的 探讨含溴结构域蛋白4(BRD4)对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法 培养脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、高糖刺激组(HG)、BRD4沉默组(BRD4 siRNA组)、BRD4沉默的HG组(BRD4 siRNA+HG组)。采用ELISA法检测各组炎症细胞因子水平,采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平,采用试剂盒检测各组超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)活性以及丙二醛(MDA)水平,采用一氧化氮(NO)检测试剂盒检测NO含量,采用免疫荧光染色检测核因子E2相关因子2(NRF2)的表达以及核转位情况。结果 对照组和BRD4 siRNA组细胞促炎症因子、ROS、MDA、NO水平、SOD2和Gpx活性、细胞活性、细胞凋亡数量、NRF2表达及核转位水平差异无统计学意义(P>0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平高于对照组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、NRF2表达以及核转位水平低于对照组,且BRD4 siRNA+HG组细胞促炎症因子、ROS、MDA水平低于HG组,SOD2、Gpx、NO水平、细胞活性、细胞NRF2表达以及核转位水平高于HG组(P<0.05)。HG组及BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量多于对照组,与HG组相比,BRD4 siRNA+HG组细胞凋亡数量减少(P<0.05)。结论 BRD4通过抑制NRF2的核转位加重高糖诱导的内皮细胞损伤,BRD4可能参与糖尿病并发症的发生发展。

溴结构域蛋白4在糖尿病及其并发症中的作用研究进展

糖尿病是一组由多病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病,是由于胰岛素分泌不足和(或)利用缺陷所引起的。体内长期碳水化合物、脂肪、蛋白质代谢紊乱,可引起多系统损害,导致眼、肾、神经、心脏、血管等组织器官出现慢性进行性病变、功能减退及衰竭。研究发现,溴结构域蛋白4(Bromodomain-containing protein 4,BRD4)在糖尿病及其并发症中发挥重要作用,它可识别并结合于靶基因的启动子区域,促进目的基因表达,从而调控糖尿病及其并发症的发生发展。因此,靶向抑制BRD4的表达,可能为治疗糖尿病提供了一种新的治疗途径。本文对BRD4在糖尿病及其并发症中的作用进行总结,强调针对BRD4的表观遗传学治疗策略在糖尿病及其并发症治疗中的潜力。

溴结构域蛋白4与口腔鳞癌HN4细胞系增殖与迁移能力的关系

目的研究溴结构域蛋白4(BRD4)与口腔鳞癌细胞增殖与迁移能力的关系。方法回顾性选取2019年3月至2020年8月锦州医科大学附属第二医院收治的4例口腔鳞状细胞癌患者,收集患者的口腔颌面部肿瘤组织样本。培养口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞和人口腔黏膜正常上皮细胞株HOK细胞,采用蛋白质印迹法检测BRD4蛋白在OSCC组织、邻近的非肿瘤组织中、正常上皮细胞株及OSCC细胞株中的表达水平。采用免疫荧光法检测BRD4在正常上皮细胞株及OSCC细胞株中的表达水平。采用免疫荧光法检测BRD4在HN4细胞中的表达水平。BRD4 siRNA转染HN4细胞干扰BRD4表达,然后Ki67和CCK-8实验检测HN4细胞增殖活力;采用Transwell实验和划痕实验检测BRD4 siRNA处理后的HN4细胞的迁移能力。采用蛋白质印迹法测定上皮间充质转化(EMT)标志蛋白的表达水平。实验中根据研究内容设置对照组和实验组。结果蛋白质印迹法检测结果显示,BRD4在OSCC组织中的相对表达水平为1.330±0.453,远高于其在邻近的非肿瘤组织中的相对表达水平(0.732±0.242),差异有统计学意义(P<0.005)。与HOK细胞相比,BRD4在OSCC细胞系中具有较高的表达水平。qRT-PCR结果显示,BRD4在HOK中的表达水平为1.000±0.321,在OSCC细胞系包括HN4、CAL27、KB、SCC9和SCC25细胞中的相对表达水平分别为7.917±0.784、7.442±0.693、4.852±0.488、7.317±0.534、7.451±0.642,BRD4在HOK中的表达水平均显著低于其在OSCC细胞系中的表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光结果显示,BRD4可表达于HN4细胞的细胞核和细胞质中。经BRD4 siRNA转染后,HN4细胞中BRD4的相对表达水平为0.352±0.041,显著低于NC siRNA转染后HN4细胞中BRD4表达水平(0.746±0.002),差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞48、72 h后,与对照组相比,细胞的增殖活力差异均无统计学意义(P>0.05);CKK8实验结果也显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞24、48和72 h后,与对照组相比,细胞的增殖活力差异均无统计学意义(P>0.05)。划痕实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞12、24和36 h后,与对照组比较,划痕面积差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,BRD4 siRNA处理HN4细胞12、24 h后,实验组细胞迁移数分别为9.883±0.792、20.110±2.981,显著低于对照组(15.487±1.729、37.389±3.288),差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,BRD4 siRNA处理HN4细胞后,E-cadheirn表达水平增加,而N-cadheirn、Vimentin和BRD4蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BRD4在口腔鳞癌细胞中表达水平高于正常细胞,BRD4基因沉默后,不会影响肿瘤细胞的增殖,但仍然会促进口腔癌细胞迁移和EMT进程。

结直肠癌组织中溴结构域蛋白4表达水平与病人临床病理特征及预后的相关性

目的分析结直肠癌(CRC)组织中溴结构域蛋白4(BRD4)的表达,探讨其与病人临床病理特征及预后的关系。方法选取2014年11月~2017年5月本院收治的CRC病人,从病人根治切除术中切取CRC组织及癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法、免疫组化法分别检测CRC组织及癌旁组织中BRD4 mRNA及BRD4蛋白表达情况;采用Kaplan-Meier生存曲线分析BRD4表达与病人预后的关系;采用Cox回归分析影响CRC病人预后的危险因素。结果与癌旁组织相比,CRC组织BRD4 mRNA表达水平及BRD4蛋白阳性表达率均升高(P<0.05)。BRD4 mRNA表达水平与CRC病人区域淋巴结转移(N)、远处转移(M)相关(P<0.05),BRD4蛋白表达与CRC病人组织分化程度、N、M相关(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析显示,BRD4 mRNA高表达、BRD4蛋白阳性表达病人5年无进展生存率分别显著低于BRD4 mRNA低表达(P<0.05)、BRD4蛋白阴性表达(P<0.05)病人;BRD4 mRNA高表达、BRD4蛋白阳性表达病人5年累积生存率分别显著低于BRD4 mRNA低表达(P<0.05)、BRD4蛋白阴性表达(P<0.05)病人。多因素Cox回归分析表明,N_(1)~N_(2)、M_(1)、BRD4 mRNA高表达、BRD4阳性表达是影响CRC病人预后的危险因素(P<0.05)。结论CRC组织中BRD4高表达,与病人N、M及预后具有一定的相关性,可作为CRC病人预后的判定指标之一。

事件相关电位P300和血清神经元PAS结构域蛋白4水平与脑小血管病患者认知障碍的相关性

目的探讨事件相关电位P300、血清神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)水平与脑小血管病(CSVD)患者认知功能障碍的相关性。方法选择2017年2月至2019年6月新乡医学院第二附属医院收治的98例CSVD患者为研究对象。采用简明精神状态量表(MMSE)评分评估患者认知功能,根据MMSE评分将患者分为轻度组(n=52,MMSE评分21~26分)和中重度组(n=46,MMSE评分<21分),同期选择健康体检者50例作为对照组(MMSE评分27~30分)。采用诱发电位仪检测3组受试者P300潜伏期和波幅,采用酶联免疫吸附法检测3组受试者血清NPAS4水平,采用Spearman相关分析患者P300电位、NPAS4水平与MMSE评分的相关性。结果中重度组患者血清NPAS4水平高于对照组和轻度组(P<0.05);轻度组患者血清NPAS4水平高于对照组(P<0.05)。轻度组和中重度组患者P300潜伏期长于对照组,P300波幅低于对照组(P<0.05);中重度组患者P300潜伏期长于轻度组,P300波幅低于轻度组(P<0.05)。MMSE评分与P300潜伏期、NPAS4水平呈负相关(r=-0.706、-0.425,P<0.05),与P300波幅呈正相关(r=0.758,P<0.05)。结论P300电位、血清NPAS4水平变化与CSVD患者认知障碍严重程度有关,P300电位和血清NPAS4水平可用于CSVD患者认知功能的早期评估。

miR-204-5p靶向溴结构域蛋白4对舌鳞状细胞癌细胞SCC25增殖和迁移侵袭的影响研究

目的探讨miR-204-5p对溴结构域蛋白(BRD)4的靶向作用机制以及对舌鳞状细胞癌SCC25细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测舌鳞状细胞癌组织以及不同细胞株系间的miR-204-5p和BRD4 mRNA的表达水平;miR-204-5p转染SCC25细胞后,细胞计数试剂盒(CCK)8法检测其对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测miR-204-5p对SCC25迁移和侵袭的影响;使用TargetScan和荧光素酶实验分析并验证miR-204-5p与BRD4的靶向调控关系;RT-qPCR和Western blot检测miR-204-5p模拟物和抑制剂对BRD4表达水平的影响;Transwell小室法和CCK8法检测miR-204-5p调控BRD4对SCC25增殖和迁移侵袭的影响。结果miR-204-5p在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达下调,BRD4在舌鳞状细胞癌组织和SCC25细胞中表达上调;提高miR-204-5p表达量抑制SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭;TargetScan和荧光素酶实验证实miR-204-5p与BRD4具有靶向负调控关系;miR-204-5p模拟物抑制BRD4表达,miR-204-5p抑制剂促进BRD4表达上调;当在SCC25细胞中同时过表达miR-204-5p和BRD4时,BRD4能够回补miR-204-5p对SCC25细胞的抑制作用。结论miR-204-5p能够通过靶向负调控BRD4抑制舌鳞状细胞癌SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭。

血清脑源性神经生长因子、神经元PAS结构域蛋白4和神经元特异性烯醇化酶水平与急性缺血性脑卒中患者认知障碍的关系

目的探讨血清脑源性神经生长因子(BDNF)、神经元PAS结构域蛋白4(NPAS4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与急性缺血性脑卒中(AIS)患者认知障碍的关系。方法选择2018年6月至2020年6月重庆市丰都县人民医院收治的AIS患者128例为研究对象。根据患者入院治疗7~10 d时的简易精神状态量表(MMSE)评分结果将患者分为认知正常组(n=60,MMSE评分≥27分)和认知障碍组(n=68,MMSE评分<27分)。入院后1周,抽取2组患者晨起空腹外周静脉血5 mL,采用酶联免疫吸附试验检测血清中BDNF、NPAS4、NSE水平。采用Pearson相关分析BDNF、NPAS4、NSE水平与MMSE评分的关系,采用单因素分析和多因素logistic回归分析AIS患者发生认知障碍的危险因素。结果认知障碍组与认知正常组患者的年龄、性别、起病至入院时间、脑梗死部位及合并高血压、冠状动脉性心脏病、房颤的比例比较差异均无统计学意义(P>0.05);认知障碍组患者的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、受教育年限、梗死病灶大小、合并糖尿病情况及血清BDNF、NPAS4、NSE水平与认知正常组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AIS患者血清NPAS4、NSE水平与MMSE评分呈正相关(r=0.442、0.486,P<0.05),血清BDNF水平与MMSE评分呈负相关(r=-0.395,P<0.05)。血清NPAS4、NSE水平及NIHSS、GCS评分和梗死病灶大小是AIS患者发生认知障碍的独立危险因素(P<0.05);血清BDNF水平和受教育年限是AIS患者发生认知障碍的保护因素(P<0.05)。结论AIS患者发生认知障碍受到多种因素的影响。血清NPAS4、NSE水平升高是AIS患者发生认知障碍的独立危险因素,血清中BDNF水平升高是AIS患者发生认知障碍的保护因素。

miRNAs及血清神经元PAS结构域蛋白4、NSE、S100β蛋白水平对急性脑血管病患者认知障碍的影响

目的探讨miRNAs及血清神经元PAS结构域蛋白4(NPASDP-4)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S100β蛋白水平对急性脑血管病(ACVD)患者认知障碍的影响。方法选取延安大学附属医院神经内科2016年1月-2019年1月收治的167例ACVD合并认知功能患者进行临床实验,按其认知功能障碍严重程度将其分成A、B、C组(轻度组、中度组和重度组),各81例、51例和35例,将三组患者的各项临床指标均纳入SPSS21.0软件处理,分别比较三组miRNAs(miRNA-34、21、135)、NPASDP-4、NSE、S100-β蛋白水平差异,以上指标与ACVD患者MMSE评分关系用Spearman秩和分析,以上指标与ACVD患者认知障碍严重程度的关系采用ROC曲线评估。结果①A组miRNAs(34、21、135)低于B组、B组低于C组(P<0.05),A组NPASDP-4低于B组、B组低于C组,NSE、S100-β蛋白水平高于B组,B组高于C组(P<0.05);②Spearman秩和分析发现,除NPASDP-4与MMSE评分呈负相关(r=-0.442,P<0.01)外,miRNAs-135相对表达量及NSE、S100-β蛋白水平与MMSE评分均呈正相关(r=0.412、0.472、0.453,P<0.05),而miRNAs-34、21相对表达量与MMSE评分无相关性(P>0.05);③ROC曲线结果表明,ACVD合并认知障碍患者miRNAs-135、NPASDP-4、NSE、S100-β蛋白的AUC值分别为0.749、0.731、0.750、0.758,最佳截断值分别为0.70、2.04ml·L^-1、13.78U·mL^-1和0.23ug·L^-1。结论在ACVD合并认知障碍患者的认知功能判定中miRNAs-135、NPASDP-4、NSE、S100-β蛋白与其认知障碍严重程度相关,而miRNAs-34、21则与其认知障碍严重程度无关。

溴结构域蛋白4特异性抑制剂JQ-1对人增生性瘢痕的影响

目的·探究溴结构域蛋白4(BRD4)特异性抑制剂JQ-1对人增生性瘢痕的影响及其可能机制。方法·收集人皮肤增生性瘢痕标本,原代培养皮肤瘢痕成纤维细胞,并进行传代培养,予以0.1、0.5、1.0、2.0、2.5、12.5μmol/L不同浓度的JQ-1干预48 h,CCK-8试剂盒、细胞划痕试验和ELISA法分别检测JQ-1对成纤维细胞增殖、迁移、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)分泌量及TGF-β1的蛋白水平。36只裸鼠构建瘢痕动物模型,将临床上获得的瘢痕组织(1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm)移植于裸鼠背部皮下。继续饲养4周后,将裸鼠分成2组,JQ-1组和DMSO组,分别每日予以0.5μmol/L JQ-1及0.1%DMSO的瘢痕内多点注射,1 mL/只。天狼猩红染色和免疫组织化学法分别观察瘢痕中COLⅠ/Ⅲ及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化情况。结果·细胞实验表明:(1)0.5μmol/L及以上浓度JQ-1对成纤维细胞增殖有明显抑制作用(均P<0.01)。(2)JQ-1可抑制成纤维细胞的迁移活性(均P<0.01)。(3)JQ-1可抑制成纤维细胞COLⅠ的分泌及TGF-β1的产生(均P<0.01)。动物实验表明:(1)JQ-1组COLⅠ/Ⅲ总含量较DMSO组显著下降,且COLⅠ/Ⅲ比值下降(均P<0.05)。(2)JQ-1组α-SMA的含量较对照组明显下降(均P<0.05)。结论·JQ-1可抑制体外人瘢痕成纤维细胞的增殖、迁移、COLⅠ的分泌及TGF-β1的产生;其对裸鼠体内的人瘢痕组织中COLⅠ/Ⅲ的分泌及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化亦有抑制作用。

氟西汀通过上调海马内溴结构域蛋白4的表达改善慢性束缚应激所致小鼠的抑郁样行为

目的探讨氟西汀(FLX)对慢性束缚应激(CRS)所致小鼠抑郁样行为及海马内溴结构域蛋白4(BRD4)表达的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为生理盐水对照(NS)组、抑郁模型(CRS)组、氟西汀干预(CRS+FLX)组。慢性束缚应激3周建立小鼠抑郁模型,应激的第8天至第21天CRS+FLX组于应激前30 min腹腔注射氟西汀(10 mg/kg),NS组及CRS组注射等体积生理盐水。采用糖水偏好实验、喷糖实验、强迫游泳实验、新旧事物识别实验和旷场实验检测各组小鼠行为变化;采用Western blotting及Real-time PCR法检测小鼠海马BRD4蛋白和mRNA的表达情况。结果与NS组相比,CRS组小鼠表现出明显的抑郁样行为,包括糖水偏好百分比显著降低(P<0.01),喷糖实验舔糖时间缩短(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),新事物辨别指数降低(P<0.0001),抗抑郁药FLX干预可逆转CRS所诱导的上述抑郁样行为表现(P<0.05);与NS组相比,CRS组小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达明显下调(1.0000±0.04577比0.08337±0.01658; 1.0000±0.04379比0.6672±0.03193,P<0.05),而FLX可上调抑郁小鼠海马BRD4蛋白及mRNA的表达(0.08337±0.01658比0.4983±0.08574; 0.6672±0.03193比0.8572±0.03181,P<0.05)。结论氟西汀可能通过上调海马BRD4的表达改善小鼠抑郁样行为。

原发性肝癌组织中溴结构域蛋白4的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的探讨原发性肝癌(PHC)组织中溴结构域蛋白4(BRD4)的表达及与患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2015年7月—2018年7月青海省人民医院收治的PHC患者83例作为研究对象,均行手术切除,术后随访3年。采用免疫组织化学法检测BRD4蛋白的表达,对比癌组织、癌旁组织中BRD4蛋白的表达,分析PHC癌组织中BRD4蛋白表达与患者临床病理特征的关系,影响PHC患者预后的因素,癌组织中BRD4蛋白表达与PHC患者预后的关系。结果PHC患者癌组织中BRD4阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。有微血管侵犯、肿瘤包膜不完整、临床分期Ⅲ期、低分化癌组织BRD4蛋白阳性表达率较高(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,微血管侵犯[RR=5.379(95%CI:3.487,13.005)]、肿瘤包膜[RR=5.614(95%CI:3.986,16.115)]、临床分期[RR=5.312(95%CI:3.307,12.413)]、分化程度[RR=4.187(95%CI:2.893,10.006)]、BRD4蛋白表达[RR=5.799(95%CI:4.156,17.235)]是PHC患者复发的独立影响因素(P<0.05);肿瘤包膜[RR=3.152(95%CI:2.150,8.795)]、临床分期[RR=4.998(95%CI:2.695,11.003)]、分化程度[RR=5.650(95%CI:3.803,17.001)]、BRD4蛋白表达[RR=5.987(95%CI:4.384,18.828)]是PHC患者生存的独立影响因素(P<0.05)。BRD4蛋白阳性表达患者与阴性表达患者的无病生存率、总生存率比较,差异有统计学意义(P<0.05),BRD4蛋白阴性表达患者的无病生存率、总生存率均高于BRD4蛋白阳性表达患者。结论PHC患者癌组织中BRD4蛋白表达与临床病理特征及预后有关,BRD4蛋白阳性表达者预后不良风险高。

溴结构域蛋白4在哮喘上皮-间质转化中作用的研究进展

气道炎症和气道重塑是支气管哮喘的重要特征,慢性气道炎症可以通过诱导上皮-间质转化(EMT)参与支气管哮喘气道重塑过程。溴结构域蛋白4(BRD4)是哺乳动物体内一种重要转录调节因子,近年越来越多证据表明,其可能是通过核因子-κB/Rel A信号通路调控哮喘气道重塑过程。本文总结了BRD4调控哮喘EMT的研究进展,旨在进一步探讨哮喘的分子机制,为哮喘的防治提供新的策略。

慢性根尖周炎模型大鼠表观遗传分子:溴结构域蛋白4的表达变化

背景:根尖周炎是一种由感染牙髓内的细菌引起的根尖周组织的炎性疾病。溴结构域蛋白4在表观遗传的传递中起核心作用,研究表明溴结构域蛋白4在炎症及骨破坏中起到了重要的作用,但是其在慢性根尖周炎中的作用尚未见报道。目的:通过建立根尖周炎大鼠模型,探究溴结构域蛋白4在根尖周炎发展中的作用。方法:选取30只SD大鼠,随机分为5组,分别为0周组、1周组、2周组、3周组以及4周组,每组各6只。于左侧下颌第一磨牙行开髓术,暴露牙髓,分别于术后0,1,2,3,4周麻醉处死。多聚甲醛固定后取下颌骨,拍摄Micro-CT鉴定根尖周炎动物模型是否构建成功。脱钙1个月后制作冰冻切片,免疫组化法检测溴结构域蛋白4在慢性根尖周炎发展中的作用。结果与结论:①Micro-CT结果显示,大鼠根尖周炎动物模型在术后一两周出现牙周膜增宽及根尖阴影,根尖阴影面积随时间推移而增加;3周组和4周组阴影面积增加明显,差异有显著性意义(P<0.05);1周组、2周组、3周组以及4周组根尖阴影面积均高于0周组,差异有显著性意义(P<0.05),3周组及4周组相比差异无显著性意义(P>0.05);②免疫组化结果显示,1周组、2周组、3周组以及4周组的溴结构域蛋白4表达水平均高于0周组,差异有显著性意义(P<0.05);溴结构域蛋白4在2周组表达最高,差异有显著性意义(P<0.05);溴结构域蛋白4在1周组和4周组表达无明显差异(P>0.05);③提示溴结构域蛋白4在根尖周炎发生发展中起到了一定的作用,溴结构域蛋白4参与了慢性根尖炎的发展。

抑制剂8Q9和8QC与bromodomain结构域蛋白4作用机理的分子动力学研究

Bromodomain结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)已成为治疗多种疾病药物设计的重要靶标.最近在实验上发现了几种有效的靶向BRD4的抑制剂,但具体的抑制机理尚不清楚.此工作采用分子动力学模拟,动态相关性分析和结合自由能计算研究抑制剂8Q9和8QC与BRD4(1)的结合模式.分子动力学分析表明抑制剂结合对BRD4(1)的结构柔性产生重大影响.同时动态相关性分析进一步表明抑制剂结合极大地改变了BRD4(1)的运动模式.结合自由能计算结果表明范德华相互作用是抑制剂与BRD4(1)结合的主要驱动力.采用基于残基的自由能分解方法评估了分离残基对抑制剂结合的贡献,数据表明氢键相互作用和疏水相互作用是影响抑制剂与BRD4(1)结合的关键因素.本研究有望为设计和开发靶向BRD4的抑制剂提供有意义的理论指导.